Tmf1作为帕金森症诊断标志物的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子诊断领域，涉及一种用于帕金森症诊断的分子标志物，具体涉及 血液中的分子标志物-TMFl基因在制备诊断帕金森症的产品中的应用。
【背景技术】
[0002] 帕金森病（Parkinson' s disease，PD)是一种常见的神经系统变性疾病，老年人 多见，平均发病年龄为60岁左右，40岁以下起病的青年帕金森病较少见。我国65岁以上 人群ro的患病率大约是1. 7%。大部分帕金森病患者为散发病例，仅有不到10%的患者有 家族史。帕金森病最主要的病理改变是中脑黑质多巴胺（dopamine, DA)能神经元的变性死 亡，由此而引起纹状体DA含量显著性减少而致病。导致这一病理改变的确切病因目前仍不 清楚，遗传因素、环境因素、年龄老化、氧化应激等均可能参与ro多巴胺能神经元的变性死 亡过程·
[0003] 一般来说，确诊帕金森病主要靠临床症状和体征，即医生的询问、观察和检查。症 状的出现和发展可以非常缓慢，没有一定顺序，有些震颤或运动障碍甚至在几年后才引起 重视。主要症状和体征的特点：
[0004] 1、震颤（颤抖）。并不是所有的帕金森病患者都有震颤，但可能发生轻微或明显震 颤如手呈搓丸样动作，通常首发于一只手或手、臂、腿。震颤很可能发生于患者休息或行走 时，以及心情焦虑或兴奋时。一些患者可能为此感到难为情，但轻微震颤通常不影响正常的 动作行为。实际上，当手或手臂工作时，颤抖通常会暂时的减轻或消失。约有15%的患者始 终无震颤；另有15%的患者是发生在单纯性震颤的基础之上。
[0005] 2、肌肉僵硬。肌肉僵硬感常是帕金森病的早期症状之一。四肢呈〃铅管样〃或〃 齿轮样"强直；在转身、从座位上站起、解钮扣和其它的日常动作逐渐变得缓慢、越来越困 难。有时肌肉僵直会而疼痛、难以形容的不适。
[0006] 3、动作迟缓。动作迟缓是早期患者的另一个常见症状。表现为行走起步困难、走 路会越来越费力，有时行走中一旦停下，再次起步会非常困难。主动运动和伴随动作减少。
[0007] 4、姿势不稳定。姿势不稳定表现为患症者下意识调节身躯和四肢方位的能力障 碍。可发现患者保持直立姿势、弯腰摸脚、行走中摆动双臂、碰撞时保持身体平衡均有困难。 有特殊的姿势，如头前倾屈曲，肘及膝关节屈曲"三曲姿势"等，转弯时容易跌倒。
[0008] 5、书写困难和步态障碍。明显震颤会影响写字，连续写几行字，字体会逐渐变小或 潦草难以辨认。步态障碍表现如小碎步、步态慌张、前冲步态或单侧下肢拖曳。上述主要症 状存在着明显的个体差异，并且主要症状会相互影响将而导致一些其它症状，包括：表情减 少〃面具脸"、语言和声音异常、吞咽困难（流涎）、便秘、出汗异常、睡眠障碍、易疲劳等。
[0009] 现有技术中用于诊断帕金森的方法不能在疾病发生的早期即可作为判断，从而错 过了疾病的最佳治疗时期。基于现有技术中检测帕金森症的手段的局限性，寻找一种有效 的能够在早期即可诊断帕金森症发生的方法是亟待解决的问题。
【发明内容】
[0010] 为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于帕金森症早期诊断 的分子标志物。相比传统的帕金森症的诊断方法，使用基因标志物来诊断帕金森症的具有 及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取 相应的预防和治疗措施。
[0011] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0012] 本发明提供了检测TMFl基因表达的产品在制备诊断帕金森症的工具中的应用。
[0013] 进一步，上面所提到的检测TMFl基因表达的产品包括：通过RT-PCR、实时定量 PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测TMFl基因表达水平以诊断帕金森症 的产品。
[0014] 进一步，所述用RT-PCR诊断帕金森症的产品至少包括一对特异扩增TMFl基因的 引物；所述用实时定量PCR诊断帕金森症的产品至少包括一对特异扩增TMFl基因的引物； 所述用免疫检测诊断帕金森症的产品包括：与TMFl蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂 交诊断帕金森症的产品包括：与TMFl基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断帕金森 症的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与TMFl蛋白特异性结合的抗体， 基因芯片包括与TMFl基因的核酸序列杂交的探针。
[0015] 在本发明的具体实施方案中，所述用实时定量PCR诊断帕金森症的产品至少包括 一对特异扩增TMFl基因的引物的序列如SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4所示。
[0016] 优选地，所述诊断工具包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。其中，高通量测 序平台是一种特殊的诊断工具，检测TMFl基因表达的产品可以应用于该平台实现对TMFl 基因的表达情况的检测。随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成 为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的 异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知TMFl基因的异常与帕金森症相关也属于TMFl 基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。
[0017] 本发明还提供了一种诊断帕金森症的工具，所述诊断工具包括芯片、试剂盒、试 纸、或高通量测序平台。
[0018] 其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定 在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测TMFl基因转录水平的针对 TMFl基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的TMFl蛋 白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括TMFl基因在内的多个基因（例如，与帕金 森症相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括TMFl蛋白在内的多 个蛋白质（例如与帕金森症相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个与帕金森症的标 志物同时检测，可大大提高帕金森症诊断的准确率。
[0019] 其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试 剂盒包括用于检测TMFl基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括TMFl蛋白的 特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片 方法检测TMFl基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对TMFl基因的 引物和/或探针。根据TMFl基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测TMFl基因表 达水平的引物和探针。
[0020] 与TMFl基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它 衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合， 任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针 的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度 对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一 般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自 身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。
[0021] 所述高通量测序平台包括检测TMFl基因表达水平的试剂。
[0022] 所述试纸包括试纸载体和固定在试纸载体上的寡核苷酸，所述寡核苷酸能够检测 TMFl基因的转录水平。
[0023] 进一步，所述TMFl蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述TMFl 蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰（例如，，嵌合抗体、scFv、 Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与TMFl蛋白的结合能力即可。用于蛋白质 水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制备所述抗 体。
[0024] 在本发明的具体实施方案中，所述针对TMFl基因的引物序列如下：正向引物序列 如SEQ ID NO. 3所示，反向引物如SEQ ID NO. 4