一种抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌菌株的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌菌 株。
【背景技术】
[0002] 抗生素作为饲料添加剂应用于畜禽养殖业，在防治畜禽疾病，促进畜禽生长等当 面发挥了巨大的作用。但是由于抗生素的过分使用，对畜禽养殖业的可持续发展和人类健 康造成了一定的威胁。本发明主要针对此问题，致力于研发可替代抗生素的新产品。
[0003] 芽孢杆菌在逆境条件下以内生孢子的形势存在，对酸碱，高温高压，胆盐都有一定 的耐受能力，而且芽孢杆菌还能产生木聚糖酶、纤维素酶等酶类，有人将芽孢杆菌称为"超 乳酸菌"。芽孢杆菌不属于动物肠道中的正常菌群，它的含量相对较少，却发挥着突出的作 用，其主要抑菌作用机理主要包括： 可产生对动物有益的活性物质：产生木聚糖酶、纤维素酶等多种酶类可以促进动物吸 收饲料中的养分。产生乳酸，乙酸，丙酸，脂肪酸能够降低胃肠道中的PH值，阻碍有害菌群 的生长，同时还能促进动物对微量元素铁、磷的吸收。
[0004] 生物拮抗作用：芽孢杆菌可对病源性的大肠杆菌，沙门氏菌有一定的拮抗作用，减 少动物疾病的产生。芽孢杆菌进入动物体后，通过大量繁殖，数量增多，粘附在消化道的上 皮细胞上，会形成一层保护膜，阻止病源菌在消化道内的定植，从而减少肠道内有害菌的数 量，达到预防疾病的作用。
[0005] 生物夺氧，抑制有害微生物：芽孢杆菌进入动物消化道后，芽孢会发育为营养细 胞，进行新陈代谢，消耗大量氧气，降低肠道内的氧化还原电位，从而使得体内的有害微生 物减少，肠道内的微生态保持相对的平衡。
[0006] 提高动物机体免疫力：芽孢杆菌进入机体后，还可以诱导免疫细胞产生大量的细 胞因子，刺激体内的淋巴循环，使机体的免疫能力提高。
[0007] 净化环境：芽孢杆菌可产生分解有害物质的酶类，包括分解硫化氢的酶，氨基氧化 酶，SOD酶以及过氧化氢等杀菌物质，可以帮助动物消除体内的毒害物质，促进机体健康。
[0008] 抑菌性产木聚糖酶的芽孢杆菌不仅能够提高畜禽机体的免疫能力，还能够提高饲 料的消化率，大大提高了饲料的品质，有利于畜禽养殖业的健康发展。因此，筛选性能稳定， 抑菌性强，产木聚糖酶高的芽孢杆菌菌株对提高饲料的品质促进畜禽养殖业健康发展有重 要意义。
【发明内容】
[0009] 为解决现有技术采用抗生素作为饲料添加剂应用于畜禽养殖业，对畜禽养殖业的 可持续发展和人类健康造成威胁的问题，本发明提供了一种筛选性能稳定、抑菌性强、产木 聚糖酶高的枯草芽孢杆菌菌株，该菌株作为添加至饲料中提高畜禽对饲料的消化率、极大 地提高了饲料的品质且加入该菌株利于畜禽养殖业的健康房展，同时对人类健康没有威 胁。
[0010] 本发明的技术方案为： 抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（你 CiWys DM-005菌株，该菌株已保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No :10915,其保 藏时间为：2015年05月27日。
[0011] 所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（WaciWys iih\s)DM-005菌株，其16S rDNA的部分基因序列为： gggccgtggc ggcgtgctat acatgcaagt cgagcggaca gatgggagct tgctccctga 60 tgttagcggc ggacgggtga gtaacacgtg ggtaacctgc ctgtaagact gggataactc 120 cgggaaaccg gggctaatac cggatgcttg tttgaaccgc atggttcaaa cataaaaggt 180 ggcttcggct accacttaca gatggacccg cggcgcatta gctagttggt gaggtaacgg 240 ctcaccaagg caacgatgcg tagccgacct gagagggtga tcggccacac tgggactgag 300 acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccgcaatg gacgaaagtc 360 tgacggagca acgccgcgtg agtgatgaag gttttcggat cgtaaagctc tgttgttagg 420 gaagaacaag taccgttcga atagggcggt accttgacgg tacctaacca gaaagccacg 480 gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttgtc cggaattatt 540 gggcgtaaag ggctcgcagg cggttcctta agtctgatgt gaaagccccc ggctcaaccg 600 gggagggtca ttggaaactg gggaacttga gtgcagaaga ggagagtgga attccacgtg 660 tagcggtgaa atgcgtagag atgtggagga acaccagtgg cgaaggcgac tctctggtct 720 gtaactgacg ctgaggagcg aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc 780 cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta 840 acgcattaag cactccgcct ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac 900 gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac 960 caggtcttga catcctctga caatcctaga gataggacgt ccccttcggg ggcagagtga 1020 cagtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 1080 gcgcaaccct gatctagtgc cagcatcagt gggcactcta gtgactgcgg tgacaaacga 1140 gagtgggatg acgtcaaatc atcatgtcct atgactgggc taacacacgt gctacattga 1200 cgaatagcag cgaatcgcaa gtaagcatcc cacaaatcct gttttcctca cagtttcggg 1260
[0012] 将菌株枯草芽抱杆菌DM-005 的 16S rDNA 序列进行 BLAST 分析，结果表明菌株枯草芽孢杆菌（你以以狀DM-005与GenBank库中的枯草芽 孢杆菌的同源性最高，相似比均为98%。
[0013] 通过使用美国生物工程信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI ) BLASTN 程序比对，发现本发明的 CGMCC No :10915 菌株 16S rRNA 的基因序列与NCBI注册的多株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis) 16S rRNA的基因序列 具有高度同源性，说明CGMCC No :10915菌株是一株枯草芽孢杆菌
[0014] 所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌sMiiJidDM-OOS菌株的获取 方法，其步骤为： 1) 土样中的微生物经培养、筛选获得出发菌株，即芽孢杆菌（SaciWiAs S-018菌株； 2) 将出发菌株接种于种子培养基培养，经筛选获得对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌 圈大、产木聚糖酶酶活力高的芽孢杆菌SD-006菌株； 3) 将菌株SD-006接种于种子培养基培养，经复筛获得遗传性质稳定、抑制大肠杆菌 和金黄色葡萄球菌性能稳定，木聚糖酶酶活力高的枯草芽孢杆菌（SaciWiAs 1 DM-005〇
[0015] 作为优选方案，所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌（SaciWiA? DM-005菌株的获取方法步骤1) 土样中的微生物经富集培养、平板划线，挑选单菌落进行革 兰氏染色及芽孢染色，筛选出革兰氏阳性和产芽孢的菌株S-018菌株；步骤2 )中，出发菌株 对数生长中期的菌体，做成菌悬液，进行金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌试验，初筛筛选出 抑菌圈大并产木聚糖酶酶活力高的菌株SD-006 ;步骤3)中SD-006对数生长中期的菌体， 做成菌悬液，依次做耐胆盐试验、人工胃液耐受试验、人工肠液耐受试验和高铜耐受试验， 并测定其木聚糖酶的酶活力，复筛筛选出遗传性质稳定、抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 性能稳定，木聚糖酶酶活力达46U/g以上的枯草芽孢杆菌（ifeciWiAs DM-005。
[0016] 所述抑菌性产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌sMiiJidDM-OOS菌株在制备 益生饲料添加剂中的应用。枯草芽孢杆菌s