低温季节利用恒温水浴锅培养紫海胆幼体饵料微藻的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种低温季节利用恒温水浴锅培养紫海胆幼体饵料微藻的方法。
【背景技术】
[0002]海胆是一种食用价值、药用价值、科研与教学价值都较高海洋经济动物，部分种类生殖腺味道极鲜美，营养丰富。其壳可入药治疗胃溃疡，有的种类因繁殖期长、成熟卵易获得，被应用于生理学和胚胎学研究。海胆属棘皮动物门、游在亚门、海胆纲。全世界发现的海胆约有850种，其中经济种类不超过30种，主要产地有中国、日本、美国、加拿大、智利等。目前，我国已发现的海胆约有100种，但重要经济种类不足10种，主要有光棘球海胆、紫海胆、马粪海胆、海刺猬、白棘三列海胆。1989年我国从日本引进虾夷马粪海胆，它和光棘球海胆目前已成为中国北方最主要的养殖种类，而我国南方养殖品种以紫海胆为主。随着我国人民生活水平不断提高及国际市场的需求上升，近年来海胆养殖逐步引起了人们的重视，现已成为我国沿海水产增养殖业的一个新品种。大连紫海胆与马粪海胆都具有较高经济价值，其生殖腺营养极丰富，是加工名贵食品海胆酱(云丹)的原料，还可提取二十烷酸等贵重药物。过去海胆的获取主要依靠捕捞自然资源，随着生产发展，其自然资源已远不能满足人民生活需要。因此，如何进行其资源增殖已成为开发利用海胆的重要课题。
[0003]紫海胆Anthocidaris crassispina隶属棘皮动物门，海胆纲，拱齿目，长海胆科，紫海胆属，主要分布在我国浙江、福建、广东、广西和海南沿海，是我国东南沿海重要捕捞品种，营养价值和药用价值高。生活在水深3-7米、大型海藻类生长繁盛的岩礁区，喜栖息于岩礁背光处或石缝间，常在栖息处钻洞并藏于其中。借助管足和棘刺的运动在海底匍匐，每5分钟移动几厘米。再生能力强，棘刺和其它外部器官损伤后都能再生，壳的裂痕和断口也能很快恢复。畏光，昼伏夜出。适宜生长水温15-23°C，适宜生长盐度25-30%。。杂食性，幼体摄食角毛藻、单角刺藻等浮游藻类，稚海胆和幼海胆摄食底栖硅藻、幼嫩的大型海藻和有机碎肩等，成海胆主要摄食马尾藻、裙带菜、羊栖菜、石花菜等大型藻类(对海藻的吸收率为30%-40% )。以管足和钳棘搜集食物，以咀嚼器内的齿将食物磨碎后再吞咽下去。
[0004]关于海胆的养殖方法，过去苏延明等发明了一种可提高生长速度的海胆活体饵料及制备方法(申请号CN200810010564)。海胆活体饵料由附着在附着基上的石莼幼孢子和底栖硅藻组成，石莼幼孢子与底栖硅藻的数量比是1:40-80。具体制备方法如下:将石莼种菜投入到布有附着基的海水池中，培育至附着基上有密度为1500-2500个/mm2的附着物，将附着基倒入新池；向新池海水中加入营养盐NaN03 20g/m3、KH2P04 2g/m3，光照强度3800-470011?，水温18-23°(34册.8-8.5，充气培育附着物至生成石莼幼孢子;附着基上采底栖硅藻，石药幼孢子与底栖娃藻的数量比是1:2_6，向海水中加入NaN03 30g/m3、KH2P04 3.5g/m3、NaSi03 0.2g/m3，光照强度2800-36001ux，培育至石莼幼孢子与底栖硅藻的数量比是1:40-80。该法优点是迎合新的养殖模式，价格低廉，原料来源稳定，使用方便，缺点是制作工艺流程复杂，基建投资大。沈建明公开了一种海胆的养殖方法(申请号CN201410104574)，具体步骤包括:1)选择水流清澈，含有丰富的藻类，冬季无冰冻水层的海区；2)将幼海胆放入大型网箱中并放入所选海区进行饲养;3)对于幼海胆来说，一般喂其底栖硅藻、海带等藻类;4)随着幼海胆的慢慢长大，要逐步降低海胆的养殖密度，直至接近商品规格，这时每个网箱可减少海胆个数;5)对于成年海胆来说，一般喂其海带、裙带菜等大型藻类;6)投喂饵料要根据苗种大小、生长速度以及水温升降灵活掌握，每次投饵要适量，以免堵塞网衣，影响箱内水体交换。该发明采用科学的养殖技术，养殖出来的海胆具有生长速度快、肉质鲜美、出肉率高、不易发病、成本低等优点。缺点是操作麻烦，生产不稳定，易受季节影响和限制。
[0005]牟氏角毛藻Chaetocerosmueller1、三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum、波形马鞍藻Campylodiscus undulates是紫海胆幼虫最喜食的三种t耳料娃藻，其质量和数量直接影响紫海胆幼体体质和成活率。传统上硅藻的培养只能在春、夏等温度较高季节，冬季和早春因温度较低无法培养，直接限制了硅藻培养并严重影响了紫海胆育苗。为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种低温季节利用恒温水浴锅培养紫海胆幼体饵料微藻的方法，技术核心是先配制紫海胆幼体饵料微藻培养液，然后采用光照培养箱进行海胆饵料硅藻的一级培养，最后采用恒温水浴锅进行海胆饵料微藻的二级培养。研究和实验表明，本技术培养微藻生长速度快，成本低，易于操作，不易污染，易于掌控，灵活多样，工艺流程简单，用以投喂紫海胆幼虫生长快，体检健壮、活泼，不受季节限制，全年皆可生产。
【发明内容】
[0006]为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种低温季节利用恒温水浴锅培养紫海胆幼体饵料微藻的方法，具体技术方案如下:
[0007]步骤1紫海胆幼体饵料微藻培养液的配制，培养液配方如下:(NH4)2S040.8-1.2份，NH4H2PO4 0.5-0.8份，謂03 0.2-0.4份，柠檬酸铁铵0.02-0.05份，MgS04 0.4-0.8份，酒石酸钾钠0.06-0.09份，琥珀酸钠0.5-0.9份，D-葡萄糖0.1_0.3份，蔗糖0.2-0.3份，硫胺素
0.001-0.003份，Na2S203 0.1-0.3份，丙二酸钠0.04-0.08份，麦饭石粉0.05-0.08份，人尿
0.3-0.5份，钛溶液0.2-0.4份，煮沸冷却后磁化海水1000份。用来培养紫海胆的三种饵料微藻:牟氏角毛藻、三角褐指藻、波形马鞍藻。三种微藻的培养液成分相同。
[0008]步骤2紫海胆饵料微藻的一级培养，采用光照培养箱进行培养。取3个250毫升的三角烧瓶，洗刷干净后，各加入80毫升蒸馏水放在电炉上煮沸3分钟消毒，倒掉蒸馏水，每个瓶加入步骤1所述培养液120毫升，用处于指数生长期、无污染、纯种的牟氏角毛藻、三角褐指藻、波形马鞍藻分别接种，进行单种纯种培养，接种密度2.5万/毫升，摇匀，用干净的报纸和橡皮筋封口，放进光照培养箱中进行培养。共培养9天，前5天设置温度为18-20°C，光照强度800-12001ux，后4天温度设为22-24°C，光照强度1500-20001ux，每天手动摇瓶6次，每个瓶每次摇30秒钟。培养9天后，3种微藻密度可达60万/毫升以上，将此藻液作为下一级培养的藻种。
[0009]步骤3紫海胆饵料微藻的二级培养，采用恒温水浴锅进行培养。取3个1500毫升的三角烧瓶，洗刷干净后各加入300毫升蒸馏水放在电炉上煮沸3-5分钟消毒，倒掉蒸馏水，每个瓶加入步骤1所述微藻培养液750毫升，用步骤2所述培养后的藻液做种用进行接种，接种密度3-4万/毫升，进行单种纯种培养，用干净报纸和橡皮筋封口，摇匀，放在恒温水浴锅中培养，温度由水浴锅来调节，节能灯提供照明。共培养7天，前4天，水浴锅温度设为20°C，光照强度设为1500-18001uX，后3天水浴锅温度设为22°C，光照强度设为2000-24001uX，每天手动摇瓶5次，每次每个瓶摇动45秒钟，到第5天，每个瓶补充添加步骤1所述培养液120毫升，以补充营养盐的消耗，到第7天，微藻密度可达75万/毫升以上，停止培养，可用此藻液直接投喂紫海胆幼体。
[0010]所述的一种低温季节利用恒温水浴锅培养紫海胆幼体饵料微藻的方法，、步骤2可以替换为:步骤2紫海胆饵料微藻的一级培养，采用光照培养箱进行培养;取3个250毫升的三角烧瓶，洗刷干净后，各加入80毫升蒸馏水放在电炉上煮沸3分钟消毒，倒掉蒸馏水;然后使用中药复合物在此消毒后，再每个瓶加入步骤1所述培养液120毫升，用处于指数生长期、无污染、纯种的牟氏角毛藻、三角褐指藻、波形马鞍藻分别接种，进行单种纯种培养，接种密度2.5万/毫升，摇匀。用干净的报纸和橡皮筋封口，放进光照培养箱中进行培养;共培养9天，前5天设置温度为18-20°C，光照强度800-12001uX，后4天温度设为22-24°C，光照强度1500-20001ux，每天手动摇瓶6次，每个瓶每次摇30秒钟；培养9天后，3种微藻密度可达60万/毫升以上，将此藻液作为下一级培养的藻种;所述中药复合物为，由以下28味中草药重量份数组成:千屈菜5份、大黄3份、红背菜0.4份、红天葵5-10份、锦灯笼5-10份、鸦胆子5份、虫癭5份、泥炭藓5份、翠云草5份、荆芥穗5份、羌活3份、藁本3份、帝王花3份、黑及草2份、蛇床子2份、淫羊霍2份、吴茱萸2份。所述中药复合物是按照配比将所有原料混合后用粉碎机粉碎至20目的混合药粉，加入所述混合药粉的体积的3-5倍的去离子水，之后微波时间5-lOmin，微波功率800W-1000W，沉淀5-10分钟，取上清液即为所述中药复合物。
[0011]有益效果
[0012]牟氏角毛藻、三角褐指藻、波形马鞍藻是紫海胆幼虫最喜食的三种饵料硅藻，硅藻质量和数量直接影响紫海胆幼体体质和成活率。传统上硅藻培养只能在春、夏等温度较高季节，冬季和早春因温度较低无法培养，直接限制了硅藻培养并严重影响了紫海胆育苗生产。为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种低温季节利用恒温水浴锅培养紫海胆幼体饵料微藻的方法，技术核心是先配制微藻培养液，然后采用光照培养箱进行微藻的一级培养，最后采用恒温水浴锅进行微藻的二级培养。研究和实验表明，本技术培养微藻生长速度快，成本低，易于操作，不易污染，易于掌控，灵活多样，工艺流程简单，用以投喂紫海胆幼虫生长快，体检健壮、活泼，不受季节限制，全年皆可生产。
【附图说明】
[0013]图1利用恒温水浴锅培养紫海胆幼体饵料微藻的装置示意图。
[0014]附图标记1为利用恒温水浴锅培养紫海胆幼体饵料微藻的装置。
[0015]利用恒温水浴锅培养紫海胆幼体饵料微藻的装置1为长沙汇一仪器有限公司销售的分析仪器，属于常规设备。
【具体实施方式】
[0016]—种低温季节利用恒温水浴锅培养紫海胆幼体饵料微藻的方法，具体技术方案如下:
[0017]步骤1紫海胆幼体饵