金耳栽培种制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及食用真菌栽培技术领域，尤其是一种有伴生菌的大型真菌的金耳栽培种的制备方法。
【背景技术】
[0002]金耳(Tremella aurantialba Bandoni et Zang)为担子菌纲银耳目银耳科银耳属的食药两用真菌，主要分布于我国西南地区，金耳人工栽培已成功(包括段木、袋料栽培)。
[0003]由于金耳对木质素和纤维素的利用能力较差，在自然条件下需依靠与其伴生的毛韧革菌(Stereum hirsutum) (willd:Fr.)S.F.Gray)提供营养，才能生长。由于金耳菌丝较弱，在现有的栽培种制种过程中经常出现毛韧革菌生长迅速而金耳菌未长的情况，由此导致出耳率低产量低，虽然也有改进金耳栽培种制作方法的尝试但均未取得成功。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于克服现有的金耳栽培种存在的问题，提供一种针对段木栽培和袋料栽培、瓶栽培分别用固-液和液-液工艺制作的、金耳产量高的金耳栽培种的制备方法。
[0005]本发明通过分别制种的办法，将金耳和伴生菌毛韧革菌分别制成栽培种，通过混合技术解决原来制种中由于金耳菌生长不均和不旺盛导致的出耳率低和产量低的问题。
[0006]金耳伴生菌毛韧革菌(stereum hirsutum) (willd:Fr.)S.F.Gray)是通过原生质体技术分离得到的菌株，编号yaasm-08;金耳菌是通过孢子分离得到的酵母状(yeast-like)孢子，编号yaasm-17。
[0007]本发明的金耳栽培种的制备方法是:所用原料以重量百分比计:
[0008]1)菌种的培养:
[0009]a、金耳栽培种组分之一毛韧革菌的固体培养:将20?28°C培养5?10天的毛韧革菌试管种接种在固体培养基上培养，20?28°C培养30?45天。试管种培养基为Η)Α，固体培养基为栎木木肩70%，麦麸20%，黄豆粉5%，玉米粉5% ;
[0010]b、金耳栽培种组分之一毛韧革菌的液体培养:将20?28°C培养5?10天的毛韧革菌试管种接种在液体种子培养基中，20?28°C培养5?10天后，将培养种按培养基量的5?10%的比例接于摇床或发酵罐培养基中，摇床培养条件为20?28°C，100?200rpm，培养时间5?7天，发酵罐培养条件为通气0.5?2L/min，100?300rpm搅拌20?28°C培养5?8天;试管种培养基为PDA，液体种子培养基为5?10%黄豆粉，5?10%玉米粉，0.05?0.2%磷酸氢二钾，0.05?0.2 %硫酸镁，水余量;摇床或发酵罐培养地培养基为10?15 %黄豆粉，10?15 %玉米粉，栎木锯末5?10 %，0.05?0.2 %磷酸氢二钾，0.05?0.2 %硫酸镁，水余量；
[0011]c、金耳栽培种组分之二金耳酵母状孢子的试管种培养:将金耳酵母状孢子接种在改进行的PDA培养基斜面上，20?28°C培养7?10天，改进的PDA培养基为10 %马铃薯煮液加0.05?0.2%酵母粉或膏，0.05?0.2%蛋白胨，0.05?0.2%磷酸氢二钾，0.05?0.2%硫酸镁，2%葡萄糖或蔗糖；
[0012]d、金耳栽培种组分之二金耳酵母状孢子的液体种子培养:在5?10%黄豆粉、5?10%玉米粉、0.05?0.2%磷酸氢二钾、0.05?0.2%硫酸镁中加入水余量，搅拌均匀分装在三角瓶中灭菌后冷却，接入试管种，20?28°C100?300rpm摇床培养3?10天；
[0013]e、金耳栽培种组分之二的摇床培养:在5?15%黄豆粉、5?15%玉米粉、5?10%栎木锯末、0.05?0.2 %磷酸氢二钾、0.05?0.2 %硫酸镁中加入水余量，搅拌均匀分装在三角瓶中121°C灭菌30?60分钟，冷却至35°C，接入培养基量的5?10%的上一步所得种子，20?28°C、100?300rpm摇床培养5?8天；
[0014]f、金耳栽培种组分之二的发酵罐培养:在5?15%黄豆粉、5?15%玉米粉、5?10%栎木锯末、0.05?0.2 %磷酸氢二钾、0.05?0.2 %硫酸镁中加入水余量，搅拌均匀装在发酵罐中，121°C灭菌30?60分钟，冷却至35°C，接入培养基量的5?10%的上一步所得种子，通气0.5?2L/min，100?300rpm搅拌20?28°C培养5?8天；
[0015]2)金耳栽培种组分一和组分二的混合:
[0016]a、组分之一的固体培养物与组分之二的摇床或发酵罐培养物按2:1或1:2比例混合，室温条件下放置5?10天，得金耳栽培种之一金耳固液菌种，该菌种即可接种段木、瓶和袋；
[0017]b、组分之一的液体培养物与组分之二的摇床或发酵罐培养物按2:1?1: 2比例混合，室温下放置I?3天，得金耳栽培种之二金耳液液菌种，即可接种袋或瓶；
[0018]3)栽培
[0019]a、段木栽培:选好适宜的段木按现行的段木栽培方法打孔，接种金耳固液菌种，管理方法同一般的固体菌种；
[0020]b、袋料栽培或瓶栽培:按一般金耳袋料栽培或瓶栽培制好栽培料，每瓶或袋接种金耳液液菌种3?5 %，接种后在20?28°C培养，40?48天菌丝长满瓶或袋，此时按自然温差培养18?22天，当瓶或袋内见2cm以上的金耳子实体时移入出菇房管理。
[0021]本发明与现有技术比较具有以下积极效果:
[0022]I)由于将金耳栽培中的金耳菌和伴生菌毛韧革菌分别培养，金耳菌和伴生菌能充分均匀地混合，且在接种前放置5?10天，使得金耳的酵母状孢子能充分萌发，这样使用本发明的菌种不会出现金耳栽培中常出现的段木上生长大量的毛韧革菌子实体的情况，使用本发明的菌种段木栽培金耳时出菇率在95 %以上，产量增加15?20 % ;
[0023]2)使用本发明的金耳液液菌种，金耳菌与伴生菌混合均匀，瓶栽或袋栽金耳时发菌快、吃料快，污染率低，小于5 %，出菇率达100 %，转色快，生长周期缩短(5?1天)，产量增加15?20%。
【具体实施方式】
[0024]实施例1:(所用百分比为重量百分比)
[0025]1、菌种的培养
[0026]I)金耳栽培种组分之二金耳酵母状孢子的试管种培养:金耳酵母状孢子接种在改进的I3DA培养基斜面上20°C培养10天，改进TOA培养基为10%马铃薯煮液加0.05%酵母粉，0.05%蛋白胨，0.05%磷酸氢二钾(1(2册04)，0.05%硫酸镁(1%304)，2%葡萄糖；
[0027]2)金耳栽培种组分之二金耳酵母状孢子的液体种子培养:在5 %黄豆粉，5 %玉米粉，0.05 %磷酸氢二钾，0.05 %硫酸镁中加入100 %水，搅拌均匀分装在三角瓶中，121°C灭菌45分钟，冷却至35°C，接入试管种，20°C100rpm摇床培养10天；
[0028]3)金耳栽培种组分之二金耳酵母状孢子的摇床培养:在5 %黄豆粉、5 %玉米粉、5%栎木锯末、0.05 %磷酸氢二钾、0.05%硫酸镁中加入水余量，搅拌均匀分装在三角瓶中，121°C灭菌45分钟，冷却至35°C，接入培养基量的5?10%的上一步所得种子，20°C100rpm摇床培养8天；
[0029 ] 4)金耳栽培种组分之二金耳酵母状孢子的发酵罐培养:在5 %黄豆粉、5 %玉米粉、5%栎木锯末、0.05%磷酸氢二钾、0.05%硫酸镁中加入水余量，搅拌均匀装在发酵罐中，121°C灭菌45分钟，冷却至35°C，接入培养基量的5?10%的上一步所得种子，通气0.5L/min，lOOrpm 搅拌 20°C 培养 8 天；
[0030]5)金耳栽培种组分之一毛韧革菌的固体培养:将20°C培养7天的毛韧革菌试管种接种在固体培养基上培养，20°C培养40天。试管种培养基为PDA;固体培养基为栎木木肩70 %，麦麸20 %，黄豆粉5 %，玉米粉5 %。
[0031]6)金耳栽培种组分之一毛韧革菌的液体培养:将20°C培养10天的毛韧革菌试管种接种在液体种子培养基中，20°C培养7天后将培养种按培养基量的10 %的比例比例接于摇床或发酵罐培养基中，摇床培养条件为20°C、lOOrpm，培养时间7天，发酵罐培养条件为通气0.5L/min，lOOrpm搅拌20°C培养8天。试管种培养基为PDA；液体种子培养基为5 %黄豆粉，5 %玉米粉，0.05 %磷酸氢二钾，0.05 %硫酸镁加入水余量;摇床或发酵罐培养的培养基为10%黄豆粉，10%玉米粉，栎木锯末10% ,0.05%磷酸氢二钾，0.05%硫酸镁加入水余量。
[0032]2、金耳栽培种组分一和组分二的混合
[0033]1)段木栽培种:组分之一的固体培养物与组分之二的摇床或发酵罐培养物按2:1比例混合，室温条件下放置5天可接种段木；
[0034]2)袋料栽培种或瓶栽培种:组分之一的液体培养物与组分之二的摇床或发酵罐培养物按2:1的比例混合，室温下放置1天后可接种袋或瓶。
[0035]3、栽培
[0036]1)段木栽培:选好适宜的段木按现行的段木栽培方法打孔，接种本发明的金耳固液菌种，管理方法同一般的固体菌种。
[0037]2)袋料栽培种:按一般金耳袋料栽培种制好栽培料，每袋接种本发明的金耳液液菌种3%，接种后在20°C培养，48天菌丝长满瓶或袋，此时按自然温差培养18天，当瓶或袋内见2cm以上的金耳子实体时移入出菇房管理。
[0038]实施例2:
[0039]1、菌种的培养
[0040]1)金耳栽培种组分之二的试管种培养:金耳酵母状孢子接种在改进的TOA培养基斜面上25°C培养7天，改进PDA培养基为10 %马铃薯煮液加0.2 %酵母膏，0.2 %蛋白胨，
0.2%磷酸氢二钾，0.2%硫酸镁，2%葡萄糖；
[0041 ] 2)金耳栽培种组分之二的液体种子培养:在8 %黄豆粉，8 %玉米粉，0.1 %磷酸氢二钾，0.1%硫酸镁中加入水余量，搅拌均匀分装在三角瓶中，121°C灭菌30分钟，冷却至35°C，接入试管种，25°C300rpm摇床培养7天；
[0042]3)金耳栽培种组分之二的