检测miR-3158-5p表达量的系统在预测阿司匹林对心血管疾病患者疗效中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域中检测miR-3158-5p表达量的系统在预测阿司匹林对心 血管疾病患者疗效中的应用。
【背景技术】
[0002] 阿司匹林(ASA)是冠心病患者二级预防常用的抗血小板药物，大量随机双盲临床 研究证实阿司匹林可以显著减少恶性心律失常、非致死性心肌梗死、心源性猝死等不良事 件的发生，是美国心脏病学会(ACC)和美国心脏学会(AHA)指南推荐的标准治疗药物之一。 阿司匹林抑制血小板聚集作用在人群中存在较大个体差异和不可预测性已被许多临床研 究所证实，部分患者尽管长期服用常规剂量的阿司匹林，临床上仍不能有效的预防动脉粥 样硬化血栓事件发生，此现象称为阿司匹林低反应性或阿司匹林治疗下血小板高反应性 (High on Aspirin Platelet Response，HAPR)，即阿司匹林的疗效不好。
[0003] 阿司匹林治疗反应性的影响因素包括环境因素、依从性、药物剂量、药物间相互作 用及基因因素等。现有的用于评估阿司匹林疗效的方法主要包括:光比浊法检测花生四烯 酸诱导的血小板聚集率，血清及尿中TXA2代谢产物水平检测，Ver if yNow检测血小板聚集 率，PFA-100,血栓弹力图等，但不同的检测方法之间一致性较差，且对于阿司匹林对心血管 疾病患者临床疗效及临床心血管事件风险的预测价值不足。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是如何预测阿司匹林对心血管疾病患者临床疗效。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了下述B1)或B2)的用途：
[0006] B1)检测miR-3158_5p表达量的系统在制备预测或辅助预测阿司匹林对心血管疾 病患者疗效产品中的应用；
[0007] B2)检测miR-3158-5p表达量的系统在预测或辅助预测阿司匹林对心血管疾病患 者疗效中的应用。
[0008] 上述用途中，所述检测miR-3158-5p表达量的系统可为利用定量PCR检测miR-3158-5p表达量的系统。
[0009] 上述用途中，所述检测miR-3158-5p表达量的系统可包括检测miR-3158-5p表达量 的试剂和/或试剂盒和/或仪器，如通过定量PCR反应检测miR-3158-5p表达量所需的试剂、 试剂盒和仪器。具体来说，检测miR-3158-5p表达量的系统可为检测miR-3158-5p表达量的 引物和进行定量PCR反应所需要的其它试剂和仪器，也可仅为检测miR-3158-5p表达量的引 物。所述检测miR-3158-5p表达量的引物可为核苷酸序列为序列2的引物。
[0010] 所述检测miR-3158-5p表达量的系统中，进行定量PCR反应所需要的其它试剂可为 北京全式金生物技术有限公司的货号为AQ202-01的试剂盒中试剂（如TransScript Green miRNA Two-Step qRT-PCR SuperMix(TransScript Green miRNA Two-Step qRT-PCR SuperMix中含有可以与序列2所示单链DNA配对使用进行PCR扩增的单链DNA))和/或 microRNA数据处理系统。所述microRNA数据处理系统可用于计算将来自待预测阿司匹林治 疗的心血管疾病患者的miR-30c-5p的表达量，根据所述miR-30c-5p的表达量预测阿司匹林 治疗对所述待预测心血管疾病患者的疗效。
[0011] 上述用途中，所述miR-3158-5p表达量为外周血中miR-3158-5p的表达量。
[0012] 上述用途中，所述miR-3158-5p表达量为miR-3158-5p相对于U6的相对表达量。
[0013] 为解决上述技术问题，本发明还提供了以miR-3158_5p作为标志物的预测或辅助 预测阿司匹林对心血管疾病患者疗效的系统在制备预测或辅助预测阿司匹林对心血管疾 病患者疗效产品中的应用。
[0014] 上述应用中，所述预测或辅助预测阿司匹林对心血管疾病患者疗效的系统可为所 述检测miR-3158-5p表达量的系统。
[0015] 为解决上述技术问题，本发明还提供了预测或辅助预测阿司匹林对心血管疾病患 者疗效的产品。
[0016] 本发明所提供的预测或辅助预测阿司匹林对心血管疾病患者疗效的产品，为所述 检测miR-3158-5p表达量的系统。
[0017] 为解决上述技术问题，本发明还提供了预测阿司匹林对心血管疾病患者疗效的方 法。
[0018] 本发明所提供的预测阿司匹林对心血管疾病患者疗效的方法，包括:检测来自待 预测心血管疾病患者的miR-30c-5p表达量;如果所述心血管疾病患者的静脉血中miR-30c-5p的表达量越高，所述心血管疾病患者为或候选为阿司匹林治疗下血小板高反应性(HAPR) 患者的风险越小，如果检测对象的静脉血中miR-30c-5p的表达量越低，所述心血管疾病患 者为或候选为阿司匹林治疗下血小板高反应性(HAPR)患者的风险越大。
[0019] 上述方法可利用所述系统进行。
[0020] 本发明中，所述心血管疾病患者可为具有以下至少一种心血管疾病危险因素的患 者：患有稳定性心绞痛、急性冠脉综合征、经皮冠状动脉介入治疗手术、冠状动脉搭桥手术 和缺血性脑血管。
[0021 ]本发明中，当以心血管高危患者入选标准的患者作为检测对象时，如果检测对象 的静脉血中miR-3158-5p的相对表达量在范围（-16.46~26.93)内且不足如-说?1?心血管高 危患者的〇. 3-0.047倍，该检测对象为阿司匹林治疗下血小板高反应性(HAPR)患者，如果检 测对象的静脉血中miR-3158-5p的相对表达量为No-HAPR心血管高危患者的0.3-0.047倍以 上，该检测对象为非阿司匹林治疗下血小板高反应性(No-HAPR)患者。
[0022] 实验证明，以非血小板高反应性（No-HAPR)患者为对照，对HPR组中患者的4个 microRNA(miR-30c-5p、miR-16-2-3p、miR-98-5p 和 miR-3158-5p)进行 R0C 曲线分析。miR-30c-5p的曲线下面积为0.720，灵敏度为54.84%，特异度为82.25%，miR-3158-5p曲线下面 积为0.726，灵敏度为83.87 %，特异度为51.52%，miR-30c-5p和miR-3158-5p的曲线下面积 在0.7-0.9之间，可用于对阿司匹林临床疗效的判定，这两个microRNA对阿司匹林临床疗效 的诊断具有诊断价值。表明，检测对象的静脉血中miR-30c-5p的表达量可用于判断心血管 疾病患者的阿司匹林临床疗效。
【附图说明】
[0023] 图1为miR-30c_5p对阿司匹林临床疗效评价的ROC曲线、特异性和敏感度。图中给 的斜向直线为参考线，具体表示：曲线下面积等于50 %时，可以诊断一半的阿司匹林疗效差 的患者。其中，Sens i t i v i ty表示敏感度，Specifici ty表示特异性。
[0024] 图2为miR-3158-5p对阿司匹林临床疗效评价的ROC曲线、特异性和敏感度。图中给 的斜向直线为参考线，具体表示：曲线下面积等于50 %时，可以诊断一半的阿司匹林疗效差 的患者。其中，Sens i t i v i ty表示敏感度，Specifici ty表示特异性。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0026] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0027] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0028] 下述实施例中的TransScript Green miRNA Two-Step qRT-PCR SuperMix为北京 全式金生物技术有限公司产品。
[0029] 实施例1、用于预测阿司匹林对心脑血管疾病患者的确定
[0030] 心血管高危患者350例，入选标准如下：年龄2 50岁；具有以下至少一种心血管疾 病危险因素的患者：患有稳定性心绞痛、急性冠脉综合征(ACS)、经皮冠状动脉介入治疗 (PCI)手术、冠状动脉搭桥(CABG)手术和缺血性脑血管。这350例心血管高危患者为在根据 排除标准排除一部分患者后得到的患者群体，排除标准为具有下述一种情况:血小板计数 小于100 X 109/L;血液系统疾病;应用GP Ilb/IIla拮抗剂、华法林或非留体类抗炎药;严重 肝肾功能不全;有阿司匹林使用禁忌证。
[0031] 收集入选