一种艾里莫芬烷型倍半萜类化合物及其医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从蜘蛛香的干燥根茎中分离得到的一种艾里 莫芬烷型倍半萜类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 蜘蛛香（Valeriana wallichii DC.或Valeriana jatamansi Jone)又名马蹄香、 土细辛、印度缬草等，系败酱草科缬草属植物，植株高20~70cm，根茎粗厚，块柱状，节密，有 浓烈香味。蜘蛛香为多年生草本植物，喜长于海拔2500m以下的山顶草地、灌木林中或溪边， 在我国主要分布于陕西、河南、湖北、四川、贵州、云南等地。蜘蛛香根茎具有丰富的药用价 值，传统中医药认为其具有理气止痛、消炎止泻、祛风除湿、镇静安神等功效，可用于治疗脘 腹胀痛、消化不良、腹泻、痢疾、风湿痹痛、蛇毒、失眠、肥胖等症。
[0003] 现代研究表明，蜘蛛香的主要化学成分有挥发油，环烯醚萜类和黄酮类等。蜘蛛香 的药用价值很大一部分归因于其根和茎所含的丰富挥发油，其化学成分比较复杂，主要包 括单萜烯类、倍半萜烯类及其含氧衍生物等。
[0004] 现代研究表明蜘蛛香具有抗肿瘤作用、镇静、镇痛、抗焦虑作用、及抗轮状病毒等 作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从蜘蛛香的干燥根茎中分离得到的一种艾里莫芬烷型 倍半萜类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I):
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将蜘蛛香的干燥根茎粉碎， 用70~80 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱 和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个柱 体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙醇洗脱浓缩 物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、50:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、10:1和 5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，步骤(a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗神经胶质瘤的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗神经胶质瘤的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。
[0019] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0020] 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0021 ]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] (a)蜘蛛香的干燥根茎（10kg)粉碎，用75 %乙醇热回流提取(30L X 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯（6L X 3次）和水饱和的正丁醇 (6LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(381g)和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用D101大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇 洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物（131g);(c)步骤(b)中 70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1 (8个柱体积）、50:1 (8个柱体 积）、25:1 (8个柱体积）、10:1 (10个柱体积)和1:1 (8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得 到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1(8个柱 体积）、10:1(8个柱体积)和5:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步 骤(d)中组分2(18g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇 水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I) (230mg)〇
[0023] 结构确证：白色固体;HR-T0F-MS给出的准分子离子峰m/z 231.1345[M+H] +，表明 化合物分子式为Ci5H18〇2，不饱和度为7,Η-匪R谱（CDC1 3，600MHz)中，H-1 (6.96，d，J = 9.8Hz)，H-2(6.18，d，J = 9.8Hz)，H-4(2.56，q，J = 6.7Hz)，H-6a(1.94，dd，J=12.8,4.6Hz)， H-6b(1.72，t，J=13.7Hz)，H-7(2.36，dd，J=13.8,4.5Hz)，H-9(6.02，s)，H-12a(4.96，d，J = 10.6Hz)，H-12b(4.78，d，J=10.7Hz)，H-13(1.78，s)，H-14(1.12，s)，H-15(1.15，d，J = 6.8Hz);13C-NMR谱（CDC13，150MHz)中，C-l(140.5，CH)，C-2(133.2，CH)，C-3(200.2，C)，C-4 (53.8，CH)，C-5(40.3，C)，C-6(36.8，CH2)，C-7(47.2，CH)，C-8(200.4，C)，C-9(130.3，CH)， C-10(157.8，C)，C-11(145.9，C)，C-12(111.4，CH2)，C-13(21.3，CH3)，C-14(19.4，CH 3)，C-15 (8.7，CH3)。核磁数据表明该化合物含有两组α，β-不饱和羰基结构[δΗ6.96 (1H，d，J = 9·8Ηζ，Η-1)，6.18(lH，d，J=9.8Hz，H-2)，6.02(lH，s，H-9);SC140.5(C-1)，133.2(C-2)， 200.2(03)，200.4(C-8)，130.3(C-9)和157.8(010)]，一个异丙烯基结构[δΗ4· 96(lH，d，J = 10.6Hz，H-12a)，4.78(lH，d，J=10.7Hz，H-12b)，1.78(3H，s，H-13) ;SC145.9(C-11)， 111.4(012)和21.3(013)]，两个甲基信号[5!11.12(3!1，8，!1-14)和1.15(3!1，(1，了 = 6.8抱， H-15)JC19.4(C-14)和 8.7(015)]。圓8(：谱中，H-7 与 C-6，C-8 和 C-ll 的相关性表明 C-7 与异 丙烯基的C-11位相连;Me-14与C-5相关性表明C-5位连有一个甲基;Me-15与C-4以及H-4与 C-15的相关性表明C-15的甲基与C-4位相连。R0ESY谱中，Me-14与Me-15，Me-14与H-7的相关 性表明Me-14、Me-15和H-7为β构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和R0ESY谱，以及文献关于相关 类型核磁数据，可基本确定该化合物如下式所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论 值与实验值基本一致。
[0025]实施例2:化合物（I)药理作用试验 [0026] -、材料和仪器
[0027]本实验采用人脑恶性胶质母细胞瘤U251细胞株，购自美国模式菌种收集中心。 DMEM高糖培养基购自美国Hyclone公司;氯化钠、氢氧化钠、氯化钾、氯化氧、氢氧化钠、磷酸 氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、甲醇购自南京化工厂。化合物（I)自制，HPLC归一化纯度 大于98%。甘氨酸、Tris、Tween20、二甲基亚讽(DMEM)购自美国Sigma公司;Aimexin-V/PI细 胞裯亡试剂盒购自美国Invitrogen公司；细胞裂解液、0 · 25%胰蛋白酶、Cell Counting Kit-8试剂盒、青霉素、链霉素、Hoechst33258、细胞核染料DAPI、PMSF、Western blot凝胶配 制试剂盒、细胞核蛋白提取试剂盒、考马斯亮蓝染色液、标准蛋白、5X蛋白质变性缓冲液盒、 ECL超敏发光液、显影定影试剂盒、X线胶片、硝酸纤维素膜、抗荧光淬灭封片液购自江苏碧 云天生物研宄所。胎牛血清购自杭州四季青生物科技公司；兔抗人P65抗体购自美国N0VUS 公司；兔抗人Hi stonH3抗体购自美国CST公司；山羊抗兔HRP二抗购自美国SantaCruz公司； 山羊抗兔焚光二抗购自美国EarthOx公司。
[0028] -20°C低温冰箱(海尔青岛），_80°C低温冰箱(海尔青岛），低温冰箱(海尔青岛），高 速离心机(飞鹤上海），培养皿/板(Coming美国），离心管(Coming美国），细胞培养箱(Thermo 美国），倒置显微镜(Olympus日本），荧光倒置相差显微镜(ZEISS德国），多用途恒温水浴箱 (跃进上海），电子天平仪(上海机密科学仪器），超净工作台（ARITECH日本），微量移液器 (Dragon芬兰），酶标仪(Bio-RAD德国），流式细胞仪(BDAccuriC6美国）。
[0029]二、试验方法
[0030] 1、细胞培养及传代
[0031] 人胶质母细胞瘤细胞系U251培养在含10%胎牛血清、1 %青霉素、1 %链霉素的 DMEM高糖培养基中，于37°C，5 %C02培养箱中常规培养，每隔2天予更换新鲜培养基。待细胞 融合至80%左右后，吸除培养基，并用预热的无菌磷酸酸盐缓冲液洗3次，然后向培养皿中 加入含0.25%族蛋白酶及0.02%EDTA的细胞消化液lmL消化约2分钟，光镜下观察细胞，可 见细胞逐渐回缩变圆，胞间间隙变宽，此时移除细胞消化液，加入完全培养基4mL终止消化， lmL枪头轻柔吹打制成细胞悬液，低速离心机lOOOr