初始pH=6,揽拌速度为13化/min时培养8d，聚丙締酷胺的降解率达到36%。
[0042] 实例3
[0043] (1)种子的制备：从冰箱保存的球红假单胞菌试管中挑取一环接入到富集培养基 中，菌株经活化和扩大培养后，再按体积百分比2 %接入到富集培养基中，在溫度为30°C，初 始抑=6,揽拌速度为13化/min时培养36h，可得用于驯化的降解菌；
[0044] (2)降解菌的驯化:取上述步骤一制得的种子按体积百分比2%接入到含50ml富集 培养基和20ml含聚丙締酷胺煤泥水的驯化培养基中，在溫度为30°C，初始pH = 6,揽拌速度 为13化/min时培养72h，倒出20ml的上清液，然后加入20ml含聚丙締酷胺煤泥水，持续培养 5d;取第一阶段驯化的菌液按体积百分比2%接入到含150ml含聚丙締酷胺煤泥水和50ml富 集培养基的驯化培养基中，在溫度为30°C，初始pH = 6，揽拌速度为13化/min时培养72h，倒 出50ml的上清液，然后加入50ml含聚丙締酷胺煤泥水，持续培养7d;
[0045] (3)单菌落的分离:取上述步骤二驯化后的菌株培养液，稀释后涂布于含lOOmg/L 聚丙締酷胺的基础固体培养基上，在溫度为30°C时培养72h，将长出的单菌落在固体培养基 上划线纯化两次；
[0046] (4)菌悬液的配制：取上述步骤Ξ纯化后的菌落，接种到富集培养基中，在溫度为 30°C，初始pH = 6，揽拌速度为13化/min时培养48h，再取培养液于3000转离屯、lOmin，倒出上 清液，用无菌生理盐水冲洗底部的细菌，采用血球计数器计数，最后配制成lOVml的菌悬 液，4°C冰箱保存备用；
[0047] (5)将上述步骤四保存的菌悬液，按体积百分比5%接入到基础培养基中，在溫度 为40°C，初始pH=7,揽拌速度为14化/min时培养6d，聚丙締酷胺的降解率达到30%。
[004引 实例4
[0049] (1)种子的制备：从冰箱保存的球红假单胞菌试管中挑取一环接入到富集培养基 中，菌株经活化和扩大培养后，再按体积百分比2 %接入到富集培养基中，在溫度为30°C，初 始抑=6,揽拌速度为13化/min时培养36h，可得用于驯化的降解菌；
[0050] (2)降解菌的驯化:取上述步骤一制得的种子按体积百分比2%接入到含50ml富集 培养基和20ml含聚丙締酷胺煤泥水的驯化培养基中，在溫度为30°C，初始pH = 6,揽拌速度 为13化/min时培养72h，倒出20ml的上清液，然后加入20ml含聚丙締酷胺煤泥水，持续培养 5d;取第一阶段驯化的菌液按体积百分比2%接入到含150ml含聚丙締酷胺煤泥水和50ml富 集培养基的驯化培养基中，在溫度为30°C，初始pH = 6，揽拌速度为13化/min时培养72h，倒 出50ml的上清液，然后加入50ml含聚丙締酷胺煤泥水，持续培养7d;
[0051] (3)单菌落的分离:取上述步骤二驯化后的菌株培养液，稀释后涂布于含lOOmg/L 聚丙締酷胺的基础固体培养基上，在溫度为30°C时培养72h，将长出的单菌落在固体培养基 上划线纯化两次；
[0052] (4)菌悬液的配制：取上述步骤Ξ纯化后的菌落，接种到富集培养基中，在溫度为 30°C，初始pH = 6，揽拌速度为13化/min时培养48h，再取培养液于3000转离屯、lOmin，倒出上 清液，用无菌生理盐水冲洗底部的细菌，采用血球计数器计数，最后配制成lOVml的菌悬 液，4°C冰箱保存备用；
[0053] (5)将上述步骤四保存的菌悬液，按体积百分比4%接入到基础培养基中，在溫度 为35°C，初始pH=7,揽拌速度为13化/min时培养7d，聚丙締酷胺的降解率达到33%。
[0054] 实例5
[0055] (1)种子的制备：从冰箱保存的球红假单胞菌试管中挑取一环接入到富集培养基 中，菌株经活化和扩大培养后，再按体积百分比2 %接入到富集培养基中，在溫度为30°C，初 始抑=6,揽拌速度为13化/min时培养36h，可得用于驯化的降解菌；
[0056] (2)降解菌的驯化:取上述步骤一制得的种子按体积百分比2%接入到含50ml富集 培养基和20ml含聚丙締酷胺煤泥水的驯化培养基中，在溫度为30°C，初始pH = 6,揽拌速度 为13化/min时培养72h，倒出20ml的上清液，然后加入20ml含聚丙締酷胺煤泥水，持续培养 5d;取第一阶段驯化的菌液按体积百分比2%接入到含150ml含聚丙締酷胺煤泥水和50ml富 集培养基的驯化培养基中，在溫度为30°C，初始pH = 6，揽拌速度为13化/min时培养72h，倒 出50ml的上清液，然后加入50ml含聚丙締酷胺煤泥水，持续培养7d;
[0057] (3)单菌落的分离:取上述步骤二驯化后的菌株培养液，稀释后涂布于含lOOmg/L 聚丙締酷胺的基础固体培养基上，在溫度为30°C时培养72h，将长出的单菌落在固体培养基 上划线纯化两次；
[0058] (4)菌悬液的配制：取上述步骤Ξ纯化后的菌落，接种到富集培养基中，在溫度为 30°C，初始pH = 6，揽拌速度为13化/min时培养48h，再取培养液于3000转离屯、lOmin，倒出上 清液，用无菌生理盐水冲洗底部的细菌，采用血球计数器计数，最后配制成lOVml的菌悬 液，4°C冰箱保存备用；
[0059] (5)将上述步骤四保存的菌悬液，按体积百分比3%接入到基础培养基中，在溫度 为30°C，初始pH=6,揽拌速度为13化/min时培养8d，聚丙締酷胺的降解率达到34%。
[0060] 本发明提供了一种煤泥水中残留聚丙締酷胺的生物降解方法，本方法中驯化的球 红假单胞菌能够W唯一氮源利用聚丙締酷胺进行降解，最大降解率为36%;目前尚未见用 生物方法对煤泥水中残留的聚丙締酷胺进行降解，本方法对煤泥水中残留聚丙締酷胺的生 物降解具有创造意义，且该方法不会对环境造成二次污染。
[0061] W上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范 围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方 案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
【主权项】
1. 一种煤泥水中残留聚丙烯酰胺的生物降解方法，其特征在于:包含以下步骤。 步骤一、种子的制备。从冰箱保存的球红假单胞菌试管中挑取一环接入到富集培养基 中，菌株经活化和扩大培养后，再按体积百分比2 %接入到富集培养基中，在温度为30°C，初 始pH=6,搅拌速度为130r/min时培养36h，可得用于驯化的降解菌； 步骤二、降解菌的驯化。取上述步骤一制得的种子按体积百分比1~5%接入到含40~ 80ml富集培养基和10~30ml含聚丙烯酰胺煤泥水的驯化培养基中，在温度为25~40°C，初 始pH=5~7,搅拌速度为100~140r/min时培养54~72h，倒出10~30ml的上清液，然后加入 10~30ml含聚丙烯酰胺煤泥水，持续培养4~7d;取第一阶段驯化的菌液按体积百分比1~ 5%接入到含100~150ml含聚丙烯酰胺煤泥水和30~50ml富集培养基的驯化培养基中，在 温度为25~40°C，初始pH=5~7,搅拌速度为100~140r/min时培养54~72h，倒出30~50ml 的上清液，然后加入30~50ml含聚丙烯酰胺煤泥水，持续培养7~10d; 步骤三、单菌落的分离。取上述步骤二驯化后的菌株培养液，稀释后涂布于含l〇〇mg/L 聚丙烯酰胺的基础固体培养基上，在温度为30°C时培养72h，将长出的单菌落在固体培养基 上划线纯化两次； 步骤四、菌悬液的配制。取上述步骤三纯化后的菌落，接种到富集培养基中，在温度为 30°C，初始pH = 6，搅拌速度为130r/min时培养48h，再取培养液于3000转离心10min，倒出上 清液，用无菌生理盐水冲洗底部的细菌，采用血球计数器计数，最后配制成l〇 9/ml的菌悬 液，4°C冰箱保存备用； 步骤五、将上述步骤四保存的菌悬液，按体积百分比1~5%接入到基础培养基中，在温 度为25~40°C，初始pH=5~7,搅拌速度为100~140r/min时培养5~8d，即可对聚丙烯酰胺 取得较好的降解效果。2. 如权利要求1所述的一种煤泥水中残留聚丙烯酰胺的生物降解方法，其特征在于:所 述富集培养基、基础培养基和基础固体培养基的配制方法如下： (1) 富集培养基的制备:将下述重量的原料混合而成即可制得富集培养基:NH4CL lg、 K2HPO4 0.2g、NaCL 0.5g、NaHC03 lg、CH3C00Na 2g、酵母膏lg、MnCL2.4H20 0.3g、微量元素 5ml、琼脂20g、1000ml 去离子水、PH=7; (2) 基础培养基的制备：将下述重量的原料混合而成即可制得基础培养基:NH4CL lg、 K2HPO4 0.2g、NaCL 0.5g、NaHC03 lg、CH3C00Na 2g、酵母膏lg、MnCL2.4H20 0.3g、微量元素 5ml、琼脂20g、0. lg聚丙稀酰胺、1000ml去离子水、PH=7; (3) 基础固体培养基的制备：将下述重量的原料混合而成即可制得基础固体培养基： NH4CL lg、K2HP〇4 0.2g、NaCL 0.5g、NaHC03 lg、CH3C00Na 2g、酵母膏lg、MnCL2*4H2〇 0.3g、 微量元素5ml、琼脂20g、0. lg聚丙稀酰胺、1000ml去离子水、琼脂20g、PH=7。3. 如权利要求1所述的一种煤泥水中残留聚丙烯酰胺的生物降解方法，其特征在于:所 述步骤二中的第一阶段驯化培养基是由40~80ml富集培养基和10~30ml含聚丙烯酰胺煤 泥水混合而成，第二阶段驯化培养基是由100~150ml含聚丙烯酰胺煤泥水和30~50ml富集 培养基混合而成。4. 如权利要求1所述的一种煤泥水中残留聚丙烯酰胺的生物降解方法，其特征在于:所 述煤泥水是选煤厂浓缩池经絮凝剂聚丙烯酰胺处理后的上清液，含聚丙烯酰胺10~50mg/ L〇
【专利摘要】本发明涉及一种煤泥水中残留聚丙烯酰胺的生物降解方法，尤其是涉及一种利用驯化后的球红假单胞菌降解煤泥水中残留聚丙烯酰胺的方法，其特征在于：包括以下步骤。种子的制备、降解菌的驯化、单菌落的分离、菌悬液的配制、将菌悬液按1～5％的量接种到含聚丙烯酰胺的降解培养基中，在温度为25～40℃，初始pH＝5～7，搅拌速度为100～140r/min时培养5～8d，即可取得较好的降解效果。采用上述方法驯化的球红假单胞菌能以聚丙烯酰胺为唯一氮源进行降解，并取得很好的降解效果，同时不会对环境造成二次污染。
【IPC分类】C12N1/20, C02F103/10, C02F3/34, C12R1/01, C02F101/38, C12N1/36
【公开号】CN105505850
【申请号】CN201610035642
【发明人】张东晨, 闫佳, 戴雯, 冀敏敏, 常飞, 范晓露, 陈占
【申请人】安徽理工大学
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2016年1月19日