一种石油降解固定化细菌混悬剂的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种石油降解固定化细菌混悬剂的制备方法，属于石油处理技术领域。
【背景技术】
[0002]随着海底及海岸带石油的不断开采，由钻井漏油、输油线漏油等问题造成的环境污染尤其是海水石油污染越来越突出，给海洋环境及人类的生存发展带来了极大的困扰，同时也造成了资源的极大浪费。石油污染的治理历经演变，目前主要是三种方法，物理法、化学法及生物法。传统的物理法，例如围油栏、吸油材料和撇油器等器材的使用，需要耗费大量的人力、物力和财力，虽然可以清除表面大部分的石油并且能够在较短时间内避免对海水、生物等造成进一步的伤害，但治理成本较高，难以彻底清除海水表面的浮油及溶于海水的一小部分石油;化学法主要是化学分散剂的使用，能够增加石油与海水的接触面积，加速石油的乳化，促进微生物的降解，但是化学分散剂本身就具有一定的毒性，除了对海洋中生物以及人类的健康造成影响外，还会对海洋环境造成二次污染，增加石油污染治理的难度。
[0003]现有治理海洋原油污染的方法主要是生物法，生物法是近年来重点研究及推广的治理措施，主要是利用微生物来降解海水中的石油，这样既降低了治理成本，又可以安全无二次污染的降解石油。但是现有生物法只能通过将其固定并置于海水中，容易被海水淡化和分散，无法有效地集中在油体附近，导致成本较高且单位时间清除率较低，所以需要一种高效的治理海洋原油污染的方法很有必要。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题:针对目前的治理海洋原油渗漏污染时，普通方法治理对环境和人体健康造成伤害，现有细菌固定化治理容易被海水淡化和分散，无法有效地集中，导致成本和效率大大降低的缺陷，提供了一种通过将细菌在原油培养基中驯化处理，通过制备可以分解原油的细菌，将其固定化并有效的提高其分散性和溶解度，使其与原油有效的结合并分解，大大加快原油分解的速率，减少治理成本。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是:
(1)称取10?15g胰蛋白胨，5?8g猪肉汤，5?8g氯化钠，15?20g琼脂和600?800mL蒸馏水，依次用冰醋酸溶液和质量浓度为10%氨水溶液调节pH至7.0，随后升温加热至115?120°C，搅拌混合15?20min，冷却，制备得固体培养基;按枯草芽孢杆菌与多食鞘氨醇杆菌接种比1:1，将其接种至固体培养基上，在120?150rpm的摇床上振荡培养2?3天，培养得混合菌丝；
(2)称取0.1g的原油，加入二氯甲烷定容至10mL的容量瓶中，制备得原油混合液，随后按原油混合液与固体培养基质量比1:5，搅拌混合，得原油培养基，按接种量的10%，将步骤
(I)培养的混合菌丝接种至原油培养基中，在30?35°C下，在150?160r/min下摇床振荡培养5?7天；
(3)待培养完成后，继续向上述接种完成的原油培养基中加入原油至浓度为2.0g/L，并置于30?32°C，在150?160r/min下摇床振荡培养5?7天，随后再控制上述条件不变，依次在原油培养基中增加原油浓度至5g/L、6.5g/L和10g/L，分别驯化培养5?7天；
(4)待驯化培养完成后，对其过滤并收集滤渣，在120?150r/min下离心分离10?15min后，收集下层沉淀并置于步骤(2)制备的原油混合液中，搅拌混合并在100?120W超声振荡分散10?15min，得原油降解混合菌液；
(5)量取0.2?0.5mL上述制备的原油降解混合菌液，将其置于25?50mL质量浓度为1%琥珀酸钠溶液中，在200?250W超声振荡处理10?15min，即可得一种石油降解固定化细菌混悬剂。
[0006]本发明的应用方法:按投加量为0.5?1.0g/T，将上述制备的石油降解固定化细菌混悬剂投加至还是污染区域，投加2?3周即可有效的分解原有污染区域，原有分解率可达55?58%0
[0007]本发明与其他方法相比，有益技术效果是:
(1)本发明制备的石油降解固定化细菌混悬剂投加量小，分解效率高，可在2?3周内，对原有污染区域进行有效治疗，分解率可达55?58%;
(2)本发明通过训化固定细菌混悬剂进行制备，操作简单，所需成本低。
【具体实施方式】
[0008]首先称取10?15g胰蛋白胨，5?8g猪肉汤，5?8g氯化钠，15?20g琼脂和600?SOOmL蒸馏水，依次用冰醋酸溶液和质量浓度为10%氨水溶液调节pH至7.0，随后升温加热至115?120°C，搅拌混合15?20min，冷却，制备得固体培养基;按枯草芽孢杆菌与多食鞘氨醇杆菌接种比1:1，将其接种至固体培养基上，在120?150rpm的摇床上振荡培养2?3天，培养得混合菌丝;称取0.1g的原油，加入二氯甲烷定容至10mL的容量瓶中，制备得原油混合液，随后按原油混合液与固体培养基质量比1:5，搅拌混合，得原油培养基，按接种量的10%，将步骤(I)培养的混合菌丝接种至原油培养基中，在30?35°C下，在150?160r/min下摇床振荡培养5?7天；待培养完成后，继续向上述接种完成的原油培养基中加入原油至浓度为
2.0g/L，并置于30?32°C，在150?160r/min下摇床振荡培养15?18h，随后再控制上述条件不变，依次在原油培养基中增加原油浓度至5g/L、6.5g/L和10g/L，分别驯化培养5?7天;待驯化培养完成后，对其过滤并收集滤渣，在120?150r/min下离心分离10?15min后，收集下层沉淀并置于步骤(2)制备的原油混合液中，搅拌混合并在100?120W超声振荡分散10?15min，得原油降解混合菌液;量取0.2?0.5mL上述制备的原油降解混合菌液，将其置于25?50mL质量浓度为1%琥珀酸钠溶液中，在200?250W超声振荡处理10?15min，即可得一种石油降解固定化细菌混悬剂。
[0009]实例I
首先称取1g胰蛋白胨，5g猪肉汤，5g氯化钠，15g琼脂和600mL蒸馏水，依次用冰醋酸溶液和质量浓度为10%氨水溶液调节pH至7.0，随后升温加热至115°C，搅拌混合15min，冷却，制备得固体培养基;按枯草芽孢杆菌与多食鞘氨醇杆菌接种比1:1，将其接种至固体培养基上，在120rpm的摇床上振荡培养2天，培养得混合菌丝;称取0.1g的原油，加入二氯甲烷定容至10mL的容量瓶中，制备得原油混合液，随后按原油混合液与固体培养基质量比1:5，搅拌混合，得原油培养基，按接种量的10%，将培养的混合菌丝接种至原油培养基中，在30°C下，在150r/min下摇床振荡培养5天;待培养完成后，继续向上述接种完成的原油