一种己酸乙酯的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种己酸乙醋的制备方法。
【背景技术】
[0002] 己酸乙醋是具有强烈苹果香味的醋类物质，是浓香型白酒和日本吟釀清酒的主体 香味物质。除此之外，己酸乙醋还被广泛应用于食品添加剂、饮料、烟草、香皂、化妆品等行 业，年使用量非常可观。
[0003] 长期W来，己酸乙醋的制备基本上都是采用化学合成法，即在无机催化剂存在下 合成，如用硫酸或对甲苯横酸作催化剂，由己酸和乙醇在加热条件下直接醋化得到。但是化 学合成法存在诸多缺点，比如副反应多、后处理困难、污染环境、腐蚀设备等。
[0004] 近年来，随着人们对生产环境的关注、对高品质天然产品的日益需求，用微生物酶 法制备己酸乙醋开始受到人们的关注。利用酵母发酵法制备己酸乙醋，反应条件溫和、环境 友好;而且原料来源广泛，可使用葡萄糖、甘露糖、淀粉或纤维素等作为发酵原料，酵母将糖 发酵成乙醇后，再由酵母催化乙醇和己酸合成己酸乙醋，成本较低。
[0005] 然而，现有研究发现，酵母发酵制备己酸乙醋的产量低，工业应用价值不高，急需 改进。
[0006] 目前，关于酵母产己酸乙醋的研究主要集中于提高酿酒过程中的己酸乙醋生成。 然而，由于酿酒过程中缺乏合成己酸乙醋的前体物质一一己酸，因此提升己酸乙醋生成的 能力十分有限。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种操作简单、安全可靠、可有效提高己酸乙醋产量的制 备方法。
[000引本发明提供了一种己酸乙醋的制备方法，它包括如下步骤：
[0009] 取酿酒酵母发酵得到的菌体，蒸馈。
[0010] 本发明还提供了一种己酸乙醋的制备方法，它包括如下步骤：
[0011] 取酿酒酵母得到的发酵液，蒸馈。
[0012] 其中，所述酵母发酵的方法如下：取酵母菌，接种到含有碳源、蛋白腺和酵母提取 物的发酵培养基中，按终浓度50-500mg/L加入己酸，在25-30°C下静止培养6天，得到发酵 液;收集发酵液中菌体；
[0013] 所述蒸馈的方法为：向菌体中加入等体积的浓度为15% (g/ml)的乙醇溶液，混匀， 得酵母液;蒸馈酵母液。
[0014]进一步地，所述菌体的收集方法为:取发酵液，在5000巧m下离屯、lOmin，收集菌体。
[0015] 其中，收集菌体后，还包括对菌体洗涂的步骤。
[0016] 其中，所述洗涂的方法为：加入生理盐水洗涂两次，每次洗涂完成后于5000巧m下 离屯、lOmin，再次收集菌体。
[0017] 其中，所述酵母发酵的方法如下：
[0018] 取酵母菌，接种到含有碳源、蛋白腺和酵母提取物的发酵培养基中，按终浓度50-500mg/L加入己酸，在25-30°C下静止培养6天，得到发酵液。
[0019] 其中，所述酵母为酿酒酵母；
[0020] 每毫升发酵培养基中，酵母菌的接种量为107个；
[0021] 所述碳源为葡萄糖、甘露糖、薦糖、纤维素糖化液、淀粉糖化液的至少一种；
[0022] 所述蛋白腺、酵母提取物在发酵培养基中的浓度分别为20g/L、10g/L。
[0023] 进一步地，所述发酵培养基中，葡萄糖、甘露糖或薦糖的浓度为100-150g/L;
[0024] 纤维素糖化液为木质纤维素经预处理、纤维素酶糖化后得到的糖化液；
[0025] 淀粉糖化液为淀粉经α-淀粉酶和糖化酶水解得到的糖化液；
[0026] 所述纤维素糖化液、淀粉糖化液的浓度W葡萄糖计为100-150g/L。
[0027] 其中，所述蒸馈为常压蒸馈或减压蒸馈；
[0028] 所述蒸馈的停止时间为:当收集的馈出物体积为酵母液的40%时，停止蒸馈。
[0029] 根据目前研究的理论，酵母菌发酵产生己酸乙醋时，酵母菌发酵产生的己酸乙醋 主要存在于发酵液的上清中，而酵母菌体内很少【赵华等，酵母菌己酸乙醋生物合成与代谢 控制育种，酿酒科技，1998,04:24-25】，具体理论是:酵母菌发酵产生己酸乙醋有两种途径， AACTase(酷基CoA转移酶)催化和醋酶催化途径，只有胞膜上的醋酶催化产生的一小部分己 酸乙醋分泌到细胞内，而胞膜上的醋酶催化产生的大部分己酸乙醋、细胞外醋酶合成的全 部己酸乙醋、AACTase产生的全部己酸乙醋均分泌到细胞外。
[0030] 因此，从理论上推断，处理酵母菌体获得的己酸乙醋的量应当远远低于发酵上清 中乙酸乙醋的量。正因为如此，目前未见通过处理发酵菌体来获得己酸乙醋的报道。
[0031] 然而，本发明人却意外的发现，蒸馈菌体得到的乙酸乙醋的量远远高于发酵上清 中的己酸乙醋的量，取得了完全意料不到的技术效果:本发明蒸馈菌体获得的己酸乙醋的 量为2.55~32.74111旨（一批，己酸用量为25-25〇111旨），而发酵上清中己酸乙醋的量为1.28~ 8.24mg(-批，己酸用量为25-250mg)，前者是后者的1.99~3.97倍。
[0032] 本发明的己酸乙醋制备方法，通过对酵母发酵后的酵母细胞或发酵液蒸馈处理， 己酸乙醋的产量高，且处理方法简单，成本低廉，工业应用前景良好，具有良好的应用前景。
[0033] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可W做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0034] W下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于W下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【具体实施方式】
[0035] 下面W实施例作进一步说明，但本发明不局限于运些实施例。
[0036] 请提供本发明所用的试剂、仪器及其厂家信息：
[0037] 己酸、葡萄糖、淀粉、蛋白腺、酵母提取物:购买于成都科龙试剂公司；
[0038] 酵母菌（Saccharomyces cerevisiae):为日本酿酒协会1601号酵母，购买于日本 酿酒协会；
[0039] 常压蒸馈设备:购买于成都长粧化玻公司；
[0040] 减压蒸馈设备:购买于东京理化公司，型号为NVC-2200;
[0041] α-淀粉酶、糖化酶:购买于四川山野生物科技有限公司；
[0042] 纤维素酶:为诺维信提供的Cellic CTec2。
[0043] 实施例1本发明方法
[0044] -、实验方法
[0045] 1、制备酵母种子
[0046] 配制酵母种子培养基:取葡萄糖2g、蛋白腺2g、酵母提取物Ig、水lOOmL均匀，于121 °C灭菌lOmin后，冷却备用。
[0047] 将保存于斜面培养基上的酵母接种于酵母种子培养基中，于16化pm、30°C下培养 16h，得酵母种子。
[004引 2、己酸乙醋发酵
[00例配制发酵培养基:取葡萄糖50g、蛋白腺lOg、酵母提取物5g、己酸25mg、水500mL，于 121 C灭困lOmin后，冷却备用。
[0050]取酵母种子50mL，加入发酵培养基中，混合均匀后，于25°C静止培养6天，得己酸乙 醋发酵液。
[0化1] 3、收集菌体
[0化2] 取己酸乙醋发酵液，在5000巧m下离屯、lOmin，收集菌体。
[0053] 4、蒸馈
[0054] 向菌体中加入等量的浓度为15% (g/ml)的乙醇溶液，混匀，得酵母液；蒸馈酵母 液，既可。
[0化日]二、实验结果
[0056]利用气相色谱内标法，W乙酸正下醋为内标测定收集到的馈出物中己酸乙醋的浓 度，并计算得到己酸乙醋的产量:为2.55mg。
[0化7] 实施例2本发明方法
[005引一、实验方法
[0059] 1、纤维素原料的预处理及糖化
[0060] 预处理:取500g油菜賴杆，加入5000mLl %硫酸溶液，于150°C处理lOmin，过滤去除 液体，用水洗涂残渣至自然pH(即水的pH)，得预处理后賴杆，备用。预处后賴杆的湿重为 1466.5g，水分含量为82 %，賴杆干重为264g。
[0061 ]糖化：取预处理后賴杆416.5g(干重为75g)，加入8mL纤维素酶和150.5mL水，于 15化pm，50°C下保持72h，然后冷却至室溫备用。
[0062] 2、制备酵母种子
[0063] 同实施例1的