一种黄酮衍生物的制备及其对神经氨酸酶抑制的应用
【技术领域】 [0001] ：本发明涉及携带芳杂环酯的新型黄酮衍生物，所述黄酮衍生物在对神 经氨酸酶抑制的应用及其制备方法；属于药物领域。
【背景技术】 [0002] ：流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的一种急性病毒性上呼吸道 传染病，具有传染性强、传播快、潜伏期短、发病率高的特点，对人类健康危害极大，已经成 为致死率最高的病毒性传染疾病。由于流感病毒变异迅速，新型的流感病毒层出不穷，如近 年来在全球范围内爆发的禽流感，就曾让全世界医疗工作者束手无策，严重威胁人类的健 康和生命安全，造成巨大经济损失。因此，不断寻找针对不同靶点的新型抗流感病毒药物， 是有效控制新型病毒株将迅速传播的唯一途径。
[0003] 目前，国际上预防与治疗流感的主要措施有：接种疫苗、金刚烷胺类药物、流感病 毒受体阻滞剂和反义核苷酸类抗流感药物、神经氨酸酶抑制剂。相对而言神经氨酸酶抑制 剂（NA)是目前探索抗流感化学治疗药物研究中取得的突破性进展，它可以有效地阻断流感 病毒的复制过程。与其它类型的抗流感病毒药物相比，NA抑制剂具有更高的疗效及更好的 安全性和耐受性，并对所有的流感病毒亚型均有效，也很少出现病毒的抗药性，已成为世界 各大医药公司竞相研究的热点。目前上市的NA抑制剂有两种：葛兰素公司的Zanamivir (GG167,商品名Relenza)和罗氏公司的Oseltamivir (054104，商品名Tamiflu)。前者为 吸入给药，国内尚无生产和进口；后者是目前国内普遍认为对甲型H1N1流感有效的药物， 但自2007年以来已出现耐药。
[0004] 近年来很多天然产物也报道具有一定抗流感病毒NA活性，其中大部分是黄酮类 化合物，包括黄烷酮、黄酮、查尔酮和二芳基类化合物。其构效关系研究发现电性因素和空 间因素是影响黄酮类NA抑制剂活性的关键，4-OH、7-OH、C4=0和C 2=C3是保持NA抑制活性 必须的药效团，并且此类NA抑制剂为非竞争性NA抑制剂，可能通过与NA活性中心外的区 域结合来抑制酶活性，有望解决NA耐药性的问题。但黄酮类化合物多水溶性差，难于吸收， 极大降低其生物利用度，至今并无高效黄酮类神经氨酸酶抑制剂的成功开发。因此如何增 强黄酮类成分对神经氨酸酶的抑制活性，并提高其生物利用度，是开发此类抑制剂的研究 重点。目前黄酮类成分对神经氨酸酶抑制活性的研究主要集中在天然来源黄酮的筛选，而 衍生物方面仅有糖苷取代、脂杂环取代和甲氧基、羟基等简单基团的取代产物的活性研究， 并未从中发现高效抑制剂，故在此方面仍有较大研究空间。我们对黄酮类化合物木犀草素 进行化学衍生，在分子中引入芳杂环，对其衍生物的活性研究发现：所得衍生物对神经氨酸 酶具有更好的抑制作用。
【发明内容】
[0005] ：本发明的目的之一是，寻找一类能抑制神经氨酸酶活性的新型黄酮类 衍生物。
[0006] 本发明的目的之二是，提供一种制备黄酮衍生物的方法。
[0007] 本发明的目的之三是，提供黄酮衍生物在医药或治疗上的用途。
[0008] 本发明所提供技术方案是： 具有如下通式的新型黄酮衍生物：
其中&和R4分别选自H、Cl-6烷基CO如优选Ac、任选取代的杂芳基C0,其中任选取代 的杂芳基C0为：
可以单取代或多取代；R为任选取代的C1-6烷基，卤素、羟基、巯基、氨基等，其中取代 基为卤素、羟基、巯基、氨基或羧基等；X是NH、S、0或CH2 ;X1是N或CH ; R2 和 R3 分别选自 OH、OAc、SH、NH2 或 Η ; R5为H、OH、C1-6烷基酰基(优选乙酰基)、卤素(优选氯、溴或氟)。
[0009] 本发明还提供了上述新型黄酮衍生物的制备方法，路线如下（sheme 1-3):
Scheme 1 7-杂环酯木犀草素衍生物制备
Scheme 2 4'-杂环酯木犀草素衍生物制备
Scheme 3 7, 4' -双杂环酯木犀草素衍生物的制备 本发明优选的制备方法如下： 1.7 -杂环酯木犀草素衍生物的制备 将木犀草素溶于苄醚中，与过量的二氯二苯基甲烷（Ph2CCl2)反应，得到 3'，4' -OH选择性保护产物。该产物与杂环羧酸在DCC、DMAP催化下在THF中反应数 小时，得7-杂环酯取代木犀草素衍生物。再经选择性脱保护、羟基乙酰化得到终产物7-杂 环酯取代-全乙酰化木犀草素衍生物。
[0010] 以烟酸为例，下面反应路线（Scheme 4)更清楚的表示出该反应过程。
[0011]
Scheme 4 7-烟酸酯木犀草素衍生物的制备 2. 4' -杂环酯木犀草素衍生物的制备 将木犀草素溶于将木犀草素溶于苄醚中，与过量的二氯二苯基甲烷 (Ph2CCl2)反应，得到3'，4' -OH选择性保护产物。该产物溶于THF中，K2C03催化下与 氯甲基甲醚（M0MC1)反应，得到7-0M0M保护产物。再经3'，4' -OH脱保护后，与杂环羧酸 在DCC、DMAP催化下在THF中反应数小时，得4' -杂环酯取代木犀草素衍生物。该衍生物 于酸性条件下脱除MOM保护、全乙酰化得到4' -杂环酯取代-全乙酰化木犀草素衍生物。
[0012] 以烟酸为例，下面反应路线（Scheme 5)更清楚的表示出该反应过程。
[0013]
Scheme 5 4' -烟酸酯木犀草素衍生物的制备 3. 7 -杂环酯木犀草素衍生物、4' -杂环酯木犀草素衍生物及7, 4' -双杂环酯木 犀草素衍生物的制备将木犀草素溶于THF中，于DCC、DMAP催化下与足量的杂环羧酸反 应数小时后，所得产物在于DMAP催化下与醋酐反应，得到7-杂环酯取代-全乙酰化木犀草 素衍生物和4' -杂环酯取代-全乙酰化木犀草素衍生物。
[0014] 以烟酸为例，下面反应路线（Scheme 6)更清楚的表示出该反应过程。
[0015]
Scheme 6 7, 4'-双烟酸酯木犀草素衍生物的制备 上述反应中合成化合物2b、3c、la和lb时，化合物2a、3b和1与杂环羧酸的摩尔比分 别为：1:1.广3，1:1.广3，1:2飞。
[0016] 合成化合物2, 3时，化合物2c、3d、la和lb与醋酐的摩尔比都为：1:4~20,保证过 量。
[0017] 本发明采用神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒对合成的新化合物进行了神经氨酸酶 抑制活性的筛选，发现所合成的化合物均具有一定神经氨酸酶抑制活性，其中有4种化合 物的神经氨酸酶抑制活性明显优于对照品木犀草素，可做来制备神经氨酸酶抑制剂，用于 抗病毒药物。
[0018] 具体实施方案： 以下结合具体的实施例对本发明的技术方案与应用做进一步说明： 实施例1 :7_烟酸酯-5, 3'，4' -三醋酸酯基木犀草素衍生物的合成 将木犀草素1 (500 mg, 1.74 mmol)置于50 ml圆底烧瓶中，用15 ml节醚溶解后，加 入二氯二苯基甲烷（1.23 g，5. 19mmol)，于175°C反应30min，减压蒸干溶剂，减压回收溶 剂后加10%HC1，酸化至pH~6,二氯甲烧（10 mlX3)萃取，合并萃取液，无水Na2S04干燥， 减压回收溶剂，得残留物2a。残余物2a溶于20 ml THF后，加 DMAP (488 mg，4 mmol)， 于 40°C搅拌 30 min 后滴加 DCC (537 mg，2.61 mmol)，再搅拌 30min 后加烟酸（250 mg， 2. 1 mmol)于40°C下继续反应6 h。加入NH4C1饱和溶液10 ml终止反应，分得THF层后， 继续用CH2C12 (10 ml X 2)萃取水层，合并THF层和CH2C12萃取液，无水Na2S0 4干燥，减压 回收溶剂，得残余物2b。残留物2b溶于20 ml THF-MeOH (1:1)中，于10%Pd/C催化下进 行氢化，室温反应48h，过滤，回收溶剂，得残留物la。残留物la溶于20 ml二氯甲烷中， 以DMAP (425 mg，3. 48 mmol)催化下，与3 ml醋酐（约32 mmol)室温反应7h，减压回收 二氯甲烷后加 NH4C1饱和溶液溶解，AcOEt (10 ml X 3)萃取，合并萃取液，无水Na2S04干燥， 减压回收溶剂，得残余物2。残留物2经硅胶（10 g)柱层析分离，氯仿-甲醇（220:1)洗 脱，得到化合物2 (淡黄色无定形粉末，270 mg，产率54%)。4 NMR (400MHZ，DMS0) :2.32, 2.33，2.34，（each 3H，s，3 XOAc); 6.68 (1H，d，/= 2Hz，H-6); 7.11 (1H，d，/ = 2Hz，H-8); 7.17(1? s，H-3); 7.52(1? d，/=9. 2Hz，H-5'）； 7.73(1? dd，乂= 8 Hz, /2= 4.8Hz，H-5''）； 8.25 (1H，hidden, H-6''）； 8.27 (2H，hidden, H-6'，H-2'）； 8.65(1? dd，/!= 4.8 Hz, /2= 1.2Hz, H-4''）； 9.15(1? s，H-2''）； 12.78 (1H，s， 5，-OH); 13CNMR (400MHZ，DMS0) :182. 7(C-4)，168.6(OAc), 168.4(0Ac), 162. 7(C=0)， 162. 5(C-2)，160.9(C-5)，156.4(C-7)，156.1 (C-9)，152.9(C-4，，），151. 7(C-2，，）， 145.3(C-4，），142.7(C-3，），138.8(C-6，，），129.2(01，），125.4(01，，）， 125. l(C-6，），124.8(05,，），124.8(C-5，），122.4(C-2，），108.4(010)，106.4(06)， 106. 3(C-3), 102. 0(C-8), 21. l(OAc), 20. 5 (OAc) , 20. 5(0Ac); ESIMS m/z 556 [M +K]+。
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[0019] 实施例2 :4' -烟酸酯-5, 7, 3' -三醋酸酯基木犀草素衍生物的合成 将木犀草素1 (500 mg, 1.74 mmol)置于50 ml圆底烧瓶中，用15 ml节醚溶解后， 加入二氯二苯基甲烷（1.23 g，5. 19mmol)，于175°C反应30min，减压蒸干溶剂，减压回收 溶剂后加10%HC1，