一种猪皮小肽螯合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种猪皮小肽螯合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 猪皮始载于《汤液本草》，从古至今，猪皮一直应用于各种相关疾病的治疗，现代临 床多用于外科皮肤损伤的治疗。猪皮中的蛋白质含量高达33%，其中胶原蛋白含量为87.8%。 猪皮与人体皮肤结构相似，含有丰富的I型和m型胶原，且与人之间的同源性较牛、鼠好，潜 在疾病源少，加之我国是产猪大国，拥有丰富的质优价廉的猪皮资源，人们对从猪皮中提取 胶原的研究越来越深入，现以猪皮为原料制备胶原的研究越来越多。
[0003] 猪皮为常食之物，但作为药物，早有记载。猪皮药用名为猪肤，味甘性凉，有活血止 血、补益精血、滋润肌肤、光泽头发、减少皱纹、延缓衰老的作用，因为猪皮中含有大量的胶 原蛋白，能减慢机体细胞老化，尤其对阴虚内热，出现咽喉疼痛、低热等症的患者食用更佳。 猪肤可以加工煎炼成动物胶，如今市售的"新阿胶"就是用猪皮代替驴皮熬胶而成的"阿 胶"。我国最早用猪皮美容与治病的是东汉医圣张仲景，他在《伤寒论》中创制了 "猪肤汤"， 治少阴病，下利、咽痛、胸满、心烦:猪肤1斤，以水一斗，煮取五升，去滓，加白蜜一升，白粉五 合，熬香和合得，温分六服;并且指出，猪肤功能"和血脉，润肌肤"，并有养阴、生津、止渴的 功效。
[0004] 药理研究表明，由猪皮制取的新阿胶有促进骨髓造血功能的作用，另有报道，新阿 胶对6()C〇照射所致造血功能损害小鼠，使其外周血中血红素含量，白细胞数和骨髓有核细胞 数均显着高于对照组，其疗效优于阿胶；由新鲜猪皮制取的胶原，在小鼠烧伤后立即局部涂 抹，能够促进皮肤粘膜损伤愈合，创面愈合率明显高于对照组，光镜检查，新生上皮下纤维 组织的增生现象，成纤维细胞向纤维细胞分化及胶原化的趋势均明显强于对照组，对创而 愈合有明显促进作用。
[0005] 猪皮小肽是运用生物工程和酶解技术从猪皮中提取出来的小分子肽类，其相对分 子质量在3KD以下，易透皮吸收，活性更强，溶解性和消化利用率高，安全无副作用、无依赖 性。
[0006] 微量元素与人体健康息息相关，中国微量元素科学研究会会长陈祥友教授指出： "人是由元素组成的，人的生、老、病、死无不与元素平衡有关，当今世界威协人类健康长寿 的疑难杂症的突破，有待于元素平衡医学的发展"。微量元素已成功应用于疾病的治疗，研 究表明，缺铁会引起贫血，缺铜引起贫血、骨质疏松、冠心病，缺钻会引起巨细胞性贫血、白 血病、白内障、口腔溃疡等，缺铬会引起糖尿病、冠心病，缺钼会出现心血管疾病，如心肌坏 死冠心病、心绞痛等。
[0007] 锌是人体必需的微量元素之一，在人体生长发育、生殖遗传、免疫、内分泌等重要 生理过程中起着极其重要的作用，被人们冠以"生命之花"、"婚姻和谐素"的美称。锌存在于 众多的酶系中，如碳酸酐酶、呼吸酶、乳酸脱氢酸、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、DNA和RNA 聚中酶等中，是核酸、蛋白质、碳水化合物的合成和维生素 A利用的必需物质，具有促进生长 发育，改善味觉的作用。锌主要存在于动物性食品中，中国家庭中多以植物性食物为主，而 且植物性食品中的草酸、植酸、纤维素等严重干扰锌的吸收。近代科学研究证明，缺锌会引 发各种病症:比如，锌对生长发育有着促进作用，锌通过参与酶的形成而促进核酸蛋白质合 成，影响细胞的生长和分裂，所以，严重缺锌的儿童就会表现为发育迟缓，矮小症，营养不 良，瘦弱，贫血，头发黄。严重缺锌的孕妇由于染色体变形，会导致流产概率的增加，造成习 惯性流产;锌可以增强创伤组织再生能力，缺锌就会导致创伤表皮及愈合组织中胶原量减 少，创伤不易愈合，所以，锌可以辅助治疗口腔溃疡、胃溃疡、烧伤、创伤以及青春期痤疮、下 肢溃烂、褥疮等病症;锌是维持脑的正常生长和脑功能发育不可缺少的微量元素，缺锌影响 脑DNA、RND、蛋白质的形成，就会导致小脑发育迟缓，行为偏离，智力落后，所以，缺锌是导致 脑瘫的最主要原因，这一点对孕妇尤其重要；锌还是促进男性睾丸酮分泌及精子形成的重 要元素，所以，缺锌也是男性不孕症、性功能障碍的主要原因。以上种种表明，锌元素对人体 的重要，应引起各个人群的重视。
[0008] 铜元素是一种金属化学元素，也是人体所必须的一种微量元素。人体缺乏铜会引 起贫血，毛发异常，骨和动脉异常，以至脑障碍。铜与人体健康关系密切。人体每天都要摄入 各种微量元素，铜是人体不能缺少的金属元素之一。成年人体内，1千克体重中，铜含量大约 为1.4mg~2. lmg;血液中铜的含量约为1 .Omg~1.5mg。这一数量虽小，但它对于维持身体健 康和器官的正常运行却不可缺少。这是因为铜元素在机体运行中具有特殊的作用。铜是机 体内蛋白质和酶的重要组成部分，许多重要的酶需要微量铜的参与和活化。例如，铜可以催 化血红蛋白的合成。研究表明，缺铜会导致血浆胆固醇升高，增加动脉粥样硬化的危险，因 而是引发冠状动脉心脏病的重要因素。科学家还发现，营养性贫血、白癫风、骨质疏松症、胃 癌及食道癌等疾病的产生也都与人体缺铜有关。严重缺铜和长期边缘性缺铜，还会引发小 儿发育不良和一些地方病。铜是人体健康不可缺少的微量营养素，对于血液、中枢神经和免 疫系统，头发、皮肤和骨骼组织以及脑子和肝、心等内脏的发育和功能有重要影响。铜主要 从日常饮食中摄入。世界卫生组织建议，为了维持健康，成人每公斤体重每天应摄入0.03毫 克铜。孕妇和婴幼儿应加倍。缺铜会引起各种疾病，可以服用含铜补剂和药丸来加以补充。 铜对人体的潜在毒性很轻，只有当摄入量大大超过了正常值时，方会引起胃肠紊乱等不良 反应。研究结果表明，当成年男子和女子每天摄入量分别超过12mg和10mg时，会对人体生物 化学过程产生轻微的影响。鉴于铜的潜在毒性较低，相反地它却是人体健康不可缺少的元 素，世界卫生组织的专家组已作出结论，缺铜的危害远比铜的毒性大得多。除了某些罕见的 遗传外，人们主要防止的是缺铜。
[0009] 某些金属物质是胶原合成所必须得，如铜，当皮肤细胞内铜的含量升高时，胶原蛋 白合成增加。不过，铜是一种有毒的金属，而铜肽不仅没有了毒性，而且可促进胶原合成，伤 口愈合，有效的抚平皱纹。铜肽(GHK-Cu)，又名三胜肽、蓝铜胜肽、甘氨酰-L-组氨酰-L-赖氨 酸与铜的络合物，铜肽最初于1973年从人的血浆中分离得到，并于1985年发现其具有伤口 修复功能，1999年研究者认为铜肽及其铜复合物可以作为组织重塑的激活剂，其也是一个 信号肽，促进伤疤外部大量胶原蛋白集聚物的降解，皮肤正常胶原蛋白的合成、弹力蛋白、 蛋白聚糖和葡萄胺聚糖的生成、不同细胞类型的生长速度和迀移、抗炎、抗氧化反应。宾夕 法尼亚大学皮肤学教授和该校的强生皮肤研究中心研究表明，将铜肽用于皮肤护理和化妆 品中对改善皮肤老化现象很有帮助，含有铜肽的产品可以快速改善皮肤问题，包括减少细 纹、皱纹、粗糙、发黄、皮肤松弛和色素沉淀(褐斑）。
[0010] 猪皮小肽螯合物不仅能更进一步提高小肽的功效，还能提高锌、铜等微量元素的 吸收率，而且还能使人体摄入两类物质（小肽和微量元素），各自并协同发挥促进创口愈合 和美容保湿的作用。
【发明内容】
[0011] 本发明的第一目的在于提供一种猪皮小肽螯合物，本发明的第二目的是提供该猪 皮小肽螯合物在制备用于促创口愈合及美容祛皱的食品、保健食品、药品及化妆品中的应 用。
[0012] 本发明目的第一目的是这样实现的： 一种猪皮小肽螯合物，其特征在于采用以下工艺步骤制备： (1)猪皮小肽的制备:将鲜猪皮切块，加8-12倍量1-3%碳酸钠溶液浸泡6小时，弃去碱 液，以水冲洗至近中性，加8-12倍量水匀浆，加水煮沸，待冷至约35~45°C，调节pH值1.0~ 3.0，加入0.5~2%胃蛋白酶，保温1~3小时，调节pH值7.0~9.0，加入0.5~2%胰蛋白酶，保 温3~5小时，煮沸10~15分钟，离心，上清液通过相对分子质量为3KD的超滤膜超滤，透过液 加于DA2(U-C大孔吸附树脂柱上，以水洗脱，弃去水洗液，再以60~90%乙醇洗脱，收集乙醇 洗脱液，减压回收乙醇并继续浓缩至60°C相对密度为1.10~1.15的清膏，喷雾干燥(进风温 度为180~200°C，出风温度为90~100°C)，得到猪皮小肽提取物。猪皮小肽提取物中含有 Gln-Pr〇-Gly-Gly-Gly-Lys-Ala-Ser-Gly-Ala-Gly-Asn-Asp-Ala-Leu-Ser-Gly-Ile-Trp> Val-Ser-Gly-Gly-Leu-Pr〇-Gly-Leu-Pr〇-Gly-Ala-Asp-A