罗布麻黄酮纯化树脂的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种罗布麻黄酮纯化树脂的制备方法及应用，尤其是一种可以制备得 到高纯度罗布麻黄酮的纯化树脂的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002] 罗布麻是夹竹桃科植物。作为一种传统中药材，罗布麻的叶子可以用于治疗高血 压、心脑缺血等疾病。罗布麻叶中含有黄酮，有机酸及鞣质成分。由于黄酮和鞣质结构相近， 通常的提取方法无法将二者分离开。
[0003] 现代化的分离纯化技术，如二氧化碳超临界萃取技术、高速逆流色谱技术、工业制 备色谱技术、大孔吸附树脂技术以及微波、超声等辅助设备的开发，使得高纯度有效成分提 取物的制备成为可能。
[0004] 在目前开发的分离方法中，适于大规模工业化制备的生产工艺的分离方法并不是 很多。大孔树脂吸附分离法由于其低成本、无污染、操作简便、易于工业化等优势在天然植 物提取分离中占据重要地位。但是，大孔吸附树脂具有广谱吸附作用，使它对某一吸附质或 者对某一类吸附质的吸附选择性并不好，这导致提取物的纯度不高。例如，CN1385188A公开 了一种罗布麻有效部位的提取分离方法，包含罗布麻上柱液的制备步骤、由分离柱进行分 离的步骤、用洗脱剂对分离柱进行洗脱的步骤以及对洗脱液进行浓缩的步骤，其中分离柱 为大孔吸附树脂柱，在洗脱步骤首先采用20-39%的乙醇水溶液洗脱，再用40-70%的乙醇 水溶液洗脱。该专利文献声称可以获得总黄酮含量达到50wt%以上的浸膏。但是该方法并 没有给出总黄酮含量的测试方法。CN1634325A公开了一种罗布麻提取物及其提取方法，声 称其提取物中总黄酮含量35-90%。上述总黄酮含量是通过紫外光谱测定的，该方法并不适 合于总黄酮含量的测定，误差非常大。本申请的发明人发现，液相色谱(HPLC)适合于总黄酮 含量的测定，测定的数据较为准确。本申请的发明人也发现，上述两篇专利文献的提取物中 总黄酮含量在50wt %以下。
[0005] 因此，迫切需要开发一种大孔吸附树脂，其可以将罗布麻叶中的黄酮化合物和鞣 质分离。这将为罗布麻中两类物质的分离提供更经济、可大规模操作的方法。
[0006] 目前，关于中药成分常用的除鞣质方法主要有热处理冷置法、明胶沉淀法、酸性醇 沉法、碱性醇沉法和铅盐沉淀法等，但是，大多方法的选择性差(廖学品等，中草药提取物中 单宁(鞣质）的选择性脱除，天然产物研究与开发，第16卷第1期，第10-15页，2004年）。除鞣 质方法还包括聚酰胺法，但是这种方法存在不能用于酸性环境、流速慢和混入低分子杂质 等问题。因此，需要寻找一种简单且易于工业化生产的方法，其可以将黄酮纯化、并将鞣质 分离出来。
【发明内容】
[0007] 为克服现有技术的缺陷，本申请的发明人进行了深入研究。本发明的一个目的是 提供一种罗布麻黄酮纯化树脂的制备方法。该方法可以显著提高罗布麻提取物中的总黄酮 含量，且可以将罗布麻粗提物中的一部分鞣质分离出来。
[0008] 本发明的另一个目的在于提供上述制备方法获得罗布麻黄酮纯化树脂。
[0009] 本发明的再一个目的在于提供上述罗布麻黄酮纯化树脂的应用。本发明的树脂可 以有效提高罗布麻叶中的总黄酮含量、并有效去除鞣质。
[0010] 本发明提供一种罗布麻黄酮纯化树脂的制备方法，包括如下步骤：
[0011] (1)将丙烯酸酯单体、二乙烯苯交联剂、引发剂和致孔剂混合均匀形成油相，然后 将该油相加入到分散介质中，调节搅拌速度以使得分散介质中形成的油珠尺寸控制在0.4 ~0.8mm之间；保持该搅拌速度，并以0.1~0.6°C/min的第一速度升温至65~80°C，保持3~ 6小时;继续以0.1~0.6°C/min的第二速度升温至85~90°C，并保持3~6小时以形成反应产 物，然后将所述的反应产物经过后处理，得到第一树脂；
[0012] 其中，所述的二乙烯苯交联剂用量为丙烯酸酯单体和二乙烯苯交联剂总量的 15wt%~45wt%，所述的引发剂用量为丙稀酸酯单体和二乙稀苯交联剂总量的1. lwt%~ 2.0wt%，所述的致孔剂用量为丙稀酸酯单体和二乙稀苯交联剂总量的lOlwt%~150wt% ;
[0013] (2)将步骤(1)得到的第一树脂烘干，然后采用溶胀试剂进行溶胀5~24小时，然后 与过量的胺解试剂在110~140°c下反应5~15小时，再用蒸馏水洗涤至中性，得到第二树 脂；
[0014] (3)将步骤(2)得到的第二树脂与过量的醋酸酐在80~90°C下反应5~15小时，得 到罗布麻黄酮纯化树脂。
[00? 5]根据本发明所述的制备方法，优选地，所述的油珠尺寸控制在〇. 5~0.7mm之间；所 述的第一速度为0.2~0.5°C/min;所述的第二速度为0.2~0.5°C/min。
[0016]根据本发明所述的制备方法，优选地，所述的丙烯酸酯单体选自丙烯酸甲酯、丙烯 酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸丁酯的一种或多种；所述的致孔剂选自正庚烷、正辛烷、正壬 烷、液体石蜡、甲苯、乙酸丁酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯中的一种或多种;所述的引发剂选自偶 氮二异丁腈ABIN、偶氮二异庚腈ABVN、过氧化苯甲酰ΒΡ0、过氧化二(2,4_二氯苯甲酰）、过氧 化二乙酰、过氧化二辛酰、过氧化二月桂酰、二异丙苯过氧化物DCP或二叔丁基过氧化物 DTBP中的一种或多种。
[0017]根据本发明所述的制备方法，优选地，所述的致孔剂选自正庚烷、质量比为1~2:1 的液体石蜡与甲苯的混合物、或者质量比为1~2:1的正庚烷与乙酸丁酯的混合物。
[0018] 根据本发明所述的制备方法，优选地，在步骤（1)中，所述的后处理为将所述的反 应产物冷却，再用50~80 °C的热水洗涤，然后依次用蒸馏水、无水乙醇、丙酮洗涤和抽滤，再 用石油醚作为溶剂抽提5~10小时。
[0019] 根据本发明所述的制备方法，优选地，在步骤（1)中，所述的分散介质选自浓度为 1.0-1.5wt%的聚乙烯醇水溶液或浓度为1.0-1.5wt%的明胶水溶液。
[0020] 根据本发明所述的制备方法，优选地，在步骤(2)中，所述的烘干在60~75°C下进 行;所述的溶胀试剂选自N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺;所述的胺解试剂选自二 乙烯三胺、乙二胺或三乙烯四胺，所述的胺解试剂的用量为第一树脂质量的1.5~3倍。
[0021] 根据本发明所述的制备方法，优选地，在步骤(3)中，醋酸酐的用量为第二树脂质 量的2~6倍。
[0022] 本发明还提供一种罗布麻黄酮纯化树脂，所述的罗布麻黄酮纯化树脂通过前述的 制备方法制备得到。
[0023] 本发明也提供上述罗布麻黄酮纯化树脂的应用，将罗布麻黄酮纯化树脂用于纯化 罗布麻粗提物，从而形成罗布麻提取物;其中，所述的罗布麻提取物的总黄酮含量在65wt% 以上，鞣质含量低于15wt%;所述的总黄酮含量采用液相色谱测定。
[0024] 根据本发明所述的应用，优选地，所述的应用包括如下具体步骤：
[0025] 0-)将罗布麻粗提物分散于第一乙醇水溶液中形成吸附液，所述吸附液中的罗布 麻粗提物浓度为5~10mg/ml;其中，所述罗布麻粗提物的总黄酮含量低于20wt%，縣质含量 在7wt%以上，所述的总黄酮含量采用液相色谱测定；
[0026] (2'）将上述罗布麻黄酮纯化树脂装入吸附柱；
[0027] (3'）将1~2BV的所述吸附液加入步骤(2'）获得的吸附柱中，以1~2BV/h的吸附速 率将所述吸附液通过所述吸附柱，吸附完毕后，用1~2BV的水洗涤所述吸附柱，再用第二乙 醇水溶液对所述吸附柱进行洗脱，收集解吸液，干燥后得到罗布麻提取物；
[0028] 其中，所述的BV表示柱体积单位。
[0029]根据本发明所述的应用，优选地，所述的第一乙醇水溶液含有5~20vt%的乙醇； 所述吸附柱的长径比为5~20:1;所述的第二乙醇水溶液含有60~85vt%的乙醇。
[0030] 采用传统方法获得酰胺基树脂并不能有效地提高罗布麻提取物中的总黄酮含量。 本发明的制备方法通过控制悬浮聚合过程中的油珠尺寸，调整升温速率，调节二乙烯苯交 联剂用量、引发剂用量以及致孔剂用量，从而获得可以有效改善纯化效果（即有效提高罗布 麻提取物中的总黄酮含量）、且有效去除鞣质的罗布麻黄酮纯化树脂。采用本发明的纯化树 月旨，可以将罗布麻提取物的总黄酮含量(采用液相色谱测定）提高至65wt%以上，鞣质含量 则低于15wt%。
【附图说明】
[0031] 图1为实施例3的酯基树脂和酰胺基树脂的红外光谱图。
[0032]图2为槲皮素和山奈酚标准品的HPLC谱图。
[0033]图3为应用例3的罗布麻粗提物水解后的HPLC谱图。
[0034]图4为应用例3的罗布麻提取物水解后的HPLC谱图。
【具体实施方式】
[0035]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于 此。
[0036] 本发明中，"％"表示重量百分比，除非特别声明或标注。
[0037] 在本发明中，"吸附柱"、"树脂吸附柱"、"树脂柱"具有相同的含义，均表示用于吸 附分尚的柱子。
[0038] 在本发明中，所述的BV表示柱体积单位。
[0039] 〈制备方法〉
[0040]