一种治疗骨破坏性疾病的二萜类化合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从干燥的猫爪草中分离得到的一种具有治疗 骨破坏性疾病作用的二祗类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 猫爪草Ranunculi Ternati Radix为毛良科植物小毛良Ranunculus ternatus 化unb.的干燥块根。本品呈纺键形，多5~6个簇生，形似猫爪，长3~10mm，直径2~3mm，顶端 有黄褐色残茎或茎痕。表面黄褐色或灰黄色，久存色泽变深，微有纵皱纹，并有点状须根痕 和残留须根。质坚实，断面类白色或黄白色，空屯、或实屯、，粉性。气微，味微甘。猫爪草别名= 散草(浙江）、猫爪儿草(河南）、猫爪子(河南）、鸭脚板(安徽）、金花草(广西）。猫爪草性溫， 味甘、辛，入肝、肺经，具有清热解毒、消肿散结、止咳桂疲等功效，临床用于治疗肺结核、淋 己结结核、咽喉炎、追疾等症。民间用猫爪草治疗淋己结核，不论结核大小或是否化脈均有 较好的疗效。近年来因其有较好的抗肿瘤效果而成为研究热点。
[0003] 近年来针对猫爪草化学成分的研究较少，其主要含有黄酬类及巧类、生物碱、挥发 油、有机酸等化合物。
[0004] 据报道，猫爪草煎剂治疗淋己结核180例，其有效率达100%，临床治愈率73.9% ; 其注射液对小鼠 S180、S37癌株有抑制作用其煎剂对频疾杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄 球菌、四联球菌等均有显著抑制作用。另有报道猫爪草能诱生肿瘤坏死因子(TNF)。肿瘤坏 死因子是一组具有抗肿瘤、抗病毒、参与多种免疫调节过程的球蛋白，由于它能特异性地杀 死肿瘤细胞，而对正常组织细胞无不良影响，从而起到肿瘤免疫和肿瘤治疗的作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从干燥的猫爪草中分离得到的一种具有治疗骨破坏性 疾病作用的二祗类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I)，
[000引
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：（a)干燥的猫爪草粉碎，用70~ 80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正 下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸乙 醋萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱12个柱体积， 收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱物浸膏；（C)步骤(b)中70%乙醇洗脱物浸 膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50:1、30:1、10:1和1:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗 脱得到5个组分；（d)步骤k)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、10:1和 5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得至Ij3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，步骤(a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] -种药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（I)和 药学上可接受的载体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗骨破坏性疾病的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗骨破坏性疾病的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0019] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0020] 试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0021] 制备方法：（a)将干燥的猫爪草(8kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取(2化X3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水饱和的正 下醇(化X3次)萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物(347g)和正下醇萃取物；（b) 步骤(a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱8个柱体积，再用 70%乙醇洗脱12个柱体积，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱物浸膏（129g); (C)步骤(b)中70%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(8个柱体积）、50:1 (8个柱体积）、30:1(6个柱体积）、10:1(8个柱体积)和1:1(5个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯 度洗脱得到5个组分；（d)步骤(C)中组分4(31g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 15:1(8个柱体积）、10:1(10个柱体积)和5:1(6个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3 个组分；（e)步骤(d)中组分2(14g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度 为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合 物（I)(328mg)。
[0022] 结构确证：白色粉末，皿-ESIMS显示[M+H]+为m/z 287.2337,结合核磁特征可得分 子式为C2讯3日0,不饱和度为6。核磁共振氨谱数据SH(ppm，CDCl3,500MHz) :H-2(1.65，m)，H-3 (1.59，m)，H-3(2.21，m)，H-4a.92，dd，J = 7.1，17.3Hz)，H-4(2.31，m)，H-7(2.21，m)，H-7 (2.26，m)，H-8(2.01，d，J=13.2Hz)，H-8(2.57，dt，J = 4.6，13.2Hz)，H-10(5.06，d，J = 7.8Hz)，H-ll(6.13，dd，J = 7.8，13.1Hz)，H-12(5.94，d，J=13.1Hz)，H-14(5.61，dd，J = 2.4，12.2Hz)，H-15(1.97，d，J=15.6Hz)，H-15(2.82，ddd，J = 6.6，12.2，15.6Hz)，H-16 (0.87，s)，H-17(0.97，s)，H-18(1.73，s)，H-19(3.97，d，J=11.6Hz)，H-19(4.22，d，J = 11.6Hz)，H-20( 1.63，s);核磁共振碳谱数据如(ppm,CDCba化MHz) :37.8(C，1-C)，42.5(CH， 2-C)，27.2(CH2,3-C)，31.6(Ol2,4-C)，127.5(C，5-C)，136.4(C，6-C)，26.5(ai2,7-C)，38.4 (CH2,8-C)，136.6(C，9-C)，130.4(CH，10-C)，126.8(CH，11-C)，129.5(CH，12-C)，132.3(C， 13-C)，142.7(CH，14-C)，33.7(CH2，15-C)，24.6(Ol3，16-C)，33.1(CH3，17-C)，22.2(CH3，18-C)，60.3(C出，19-C)，18.9(C曲，20-C)。红外波谱表明该化合物含有径基（3350cm-i)，幾基 (1755cm-i)和締控（1612cm-i)Di 3C-NMR、DEPT和HSQC谱中显示有20个碳信号，包括四个甲基5 C24.6,33.1,22.2,18.9;六个亚甲基（一个连氧碳）SC27.2,31.6,26.5,38.4,33.7,60.3;五 个次甲基（四个締控碳)SC42.5,130.4,126.8,129.5,142.7; W及五个季碳（四个締控碳)S 〔37.8，127.5，136.4，136.6，132.3。歷8村普中，出-7与〇6、护10与(：-9和(：-11、护11与(：-10和 C-12、H-12 与 C-U 和 C-13、H-14 与 C-12 和 013、曲-16 与 C-l，C-2，C-6 和 C-17、出-17 与 C-1，C-2，C-6和C-16,出-18与C-4，C-5和C-6、此-19与C-13和C-14、出-20与C-8，C-9和C-IO的相关 信号W及Ih-Ih COSY谱中H-14/此-15/H-2/出-3/此-4、此-7/出-8、H-10/H-11/H-12的相关信 号表明该化合物是由环己締与环十二碳S締通过C-l，C-2与C-6位连接形成的桥环化合物。 综合氨谱、碳谱、HMB幻普和NOESY谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物 如下式所示，立体构型进一步通过EC的式验确定，理论值