一种委陵菜属植物提取物及从中分离四种单宁类化合物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及天然药物领域，具体设及从委陵菜属植物小叶金露梅提取物，W及从 该提取物中分离制备原花青素 B3、原花青素 B6、原花青素 B7和2,3,4,6-四-0-没食子酷葡萄 糖的方法。
【背景技术】
[0002] 现有研究表明，委陵菜属的多种植物均为药用植物，具有抗炎，抗糖尿病，抗肿瘤 等作用;且单宁类化合物为该属植物的重要成分。单宁类活性物质分为两类:即缩合型单宁 (其中包括原花青素)和水解型单宁，它们具有抗炎、抗氧化、促进伤口愈合、抗菌、抗病毒等 作用。
[0003] 小叶金露梅(Potentilla parvifolia Fisch.)是委陵菜属植物中的一种，具体是 菩薇科委陵菜属落叶灌木，又名小叶金老梅等。其作为一种传统的中藏药，W花、叶入药。 《中药大辞典》中记载小叶金老梅功能主治:利尿消水，治寒湿脚气，痒疹，乳腺炎。
[0004] 目前，未见有富集单宁类物质的小叶金露梅提取物W及从小叶金露梅中分离制备 得到单宁类化合物的报道。
【发明内容】
[0005] 为解决上述问题，本发明提供了一种委陵菜属植物小叶金露梅提取物，其含有不 低于6%w/w的原花青素 B7或/和不低于4%w/w的2,3,4,6-四-0-没食子酷葡萄糖。上述两种 物质均为首次从委陵菜属中发现。
[0006] 进一步地，所述提取物还含有不低于14%w/w原花青素 B3和不低于7%w/w的原花 青素 B6。
[0007] 原花青素 B3(I)、原花青素 B6(n)、原花青素 B7(虹）和2,3,4,6-四-0-没食子酷葡 萄糖(IV)的结构如下所示：
[000引
[0009] 进一步地，所述提取物含有15~16 % w/w的原花青素 B3,8~9 % w/w的原花青素 B6， 7~8 % w/w的原花青素 B7和5~6 % w/w的2,3,4,6-四-0-没食子酷葡萄糖。
[0010]进一步地，所述2，3，4，6-四-0-没食子酷葡萄糖中，a-型2，3，4，6-四-0-没食子酷 葡萄糖与e-型2，3，4，6-四-O-没食子酷葡萄糖的摩尔比为3:1。
[0011 ] 进一步地，所述提取物是小叶金露梅化tentilla parvifolia Fisch.地上部分的 提取物。所述地上部分为所有地上部分，包括茎、叶、花。
[0012] 本发明还提供了一种制备所述小叶金露梅提取物的方法，其特征在于:包括W下 步骤：
[0013] (1)制备小叶金露梅醇粗提物:取小叶金露梅，切割或粉碎，醇提取，浓缩得到小叶 金露梅醇粗提物；
[0014] (2)制备小叶金露梅醇粗提物的乙酸乙醋萃取部分：取步骤（1)制备得到醇粗提 物，石油酸萃取，取剩余液体，乙酸乙醋萃取，得到小叶金露梅醇粗提物的乙酸乙醋萃取部 分；
[0015] (3)制备富集所述四种单宁类化合物的浓缩物：W硅胶柱色谱分离步骤(2)制备得 到的乙酸乙醋萃取部分，W石油酸-乙酸乙醋体积比100:0~0:100梯度洗脱，收集石油酸-乙酸乙醋体积比1:1~0:100的流分，浓缩即得;优选0:100的流分，即纯乙酸乙醋洗脱下的 流分。
[0016] 进一步地，步骤（1)中，所述醇是60%-90%的乙醇，优选70%乙醇；所述提取的溫 度是60°C ;提取的次数是3次;每次提取时，醇与小叶金露梅的体积质量比为30:6.5L/Kg;
[0017] 进一步地，步骤(2)中，所述石油酸的萃取次数为2~10次，每次萃取时，与醇粗提 物的体积比为1:8;所述乙酸乙醋的萃取次数为2~10次，每次萃取时，与醇粗提物的体积比 为 1:10。
[0018] 进一步地，步骤(3)中，所述梯度洗脱是依次W石油酸-乙酸乙醋的体积比为100: 1、50:1、10:1、1:1、2:3的洗脱液和乙酸乙醋洗脱液（即石油酸-乙酸乙醋的体积比0:100)进 行的梯度洗脱。
[0019] 进一步地，步骤(3)中，所述石油酸-乙酸乙醋的体积比为100:1、50:1、10:1、1:1、 2:3的洗脱液和乙酸乙醋洗脱液与小叶金露梅的体积质量比依次为3 :6.5、4:6.5、6:6.5、 10:6.5、10.5:6.5和11.5:6.5171(邑。
[0020] 进一步地，前述小叶金露梅提取物是由前述的方法制备得到的。
[0021] 本发明还提供了从前述小叶金露梅提取物中分离制备四种单宁类化合物的方法， 所述四种单宁类化合物为原花青素 B3、原花青素 B6、原花青素 B7和2,3,4,6-四-0-没食子酷 葡萄糖，包括W下步骤：
[0022] 利用高速逆流色谱法分离制备四种单宁类化合物：
[0023] (a)取前述小叶金露梅提取物溶于进样溶剂中，制备得到进样溶液；
[0024] (b)将进样溶液注入高速逆流色谱仪，检测收集原花青素 B3、原花青素 B6、原花青 素 B7和2,3,4,6-四-0-没食子酷葡萄糖的流分，除去溶剂，即得原花青素 B3、原花青素 B6、原 花青素 B7和2，3，4，6-四-0-没食子酷葡萄糖的产品；
[0025] 所述高速逆流色谱法的固定相为两相溶剂体系的上相，流动相为两相溶剂体系的 下相;所述两相溶剂体系由正己烧-乙酸乙醋-甲醇-水=(0.8~1.2): (10.8~11.2): (1~ 1.4):(10.8~11.2)(乂八)组成，优选的比例为1:11:1.2:11(乂八）。
[0026] 进一步地，所述进样溶剂是由所述上相和下相按照1:1的体积比组成的溶剂;所述 进样溶剂与提取物的体积质量比为1:15~1:30mL/mg。
[0027] 进一步地，所述高速逆流色谱仪中分离管的转速为900 ±50rpm。
[0028] 进一步地，所述高速逆流色谱仪中分离管的溫度设置为30±5°C。
[00巧]进一步地，所述流动相的流速为1.2±0.3mL/min。
[0030] 进一步地，所述检测的波长为270 ±5nm。
[0031] 本发明还提供了一种分离制备原花青素 B3、原花青素 B6、原花青素 B7和2,3,4,6-四-0-没食子酷葡萄糖的方法，包括W下步骤：
[0032] 取含有原花青素 B3、原花青素 B6、原花青素 B7和2,3,4,6-四-0-没食子酷葡萄糖的 溶液或提取物，按照前述的高速逆流色谱法进行。
[0033] 本发明还提供了所述提取物在制备抗炎、抗氧化、促进伤口愈合、抗菌、抗病毒、利 尿、消水肿、治寒湿脚气、治疗痒疹或治疗乳腺炎药物中的用途。
[0034] 本发明还提供了一种药物组合物，它是所述的小叶金露梅提取物为活性成分，加 上药学上常用的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
[0035] 本发明首次发现了含有原花青素 B7与2,3,4,6-四-0-没食子酷葡萄糖的委陵菜属 植物提取物。
[0036] 本发明制备的小叶金露梅提取物，富集多种单宁类物质，该提取物中的原花青素 B3的含量高达15~16%w/w;原花青素 B6的含量高达8~9%w/w;原花青素 B7的含量高达7~ 8%w/w;2,3,4,6-四-0-没食子酷葡萄糖的含量高达5~6%w/w。该提取物可用于抗炎、抗氧 化、促进伤口愈合、抗菌、抗病毒、利尿、消水肿、治寒湿脚气、治疗痒疹或治疗乳腺炎。
[0037] 同时，本发明提供的方法，首次从小叶金露梅中分离制备得到了高纯度的原花青 素 B3、原花青素 B6、原花青素 B7和2,3,4,6-四-0-没食子酷葡萄糖，它们的纯度依次为 98.3 %，97.2 %，99.0 %和95.2 %。上述四个单宁类化合物为首次从小叶金露梅植物中发 现，且原花青素 B7与2,3,4,6-四-0-没食子酷葡萄糖为首次从委陵菜属中发现，极大地扩展 了运些化合物植物原料的选择范围。
[003引并且，本发明采用的高速逆流色谱法（high-speed couter-current C虹omatography，HSCCC)，是一种不使用固态支撑体或载体的液液分配色谱技术，其克服了 固相载体对样品的吸附而产生的损失、变性等缺点，具有在短时间内实现高效制备性分离 的优点。该方法具有重复性好、产品纯度高、制备量大的优点，适用于从各种含有上述四种 化合物的天然产物中制备高纯度单体，具有广泛的应用前景。
[0039] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可W做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0040] W下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于W下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】
[0041 ]图1为溶剂体系正己烧-乙酸乙醋-甲醇-水=1:11:1.2:11时，小叶金露梅提取物 的高速逆流色谱图。
[0042]图2中，（a)为本发明小叶金露梅提取物的高效液相色谱图，（b)~(e)依次为化合 物I~IV的高效液相色谱图。
[0043] 图3为原花青素 B3(I)、原花青素 B6(n)、原花青素 B7(in)和2,3,4,6-四-0-没食子 酷葡萄糖(IV)的紫外光谱。
[0044] 图4为实施例2中石油酸:乙酸乙醋= l:l(v/v)的洗脱液部分的高效液相色谱图。
[0045] 图5为实施例2石油酸:乙酸乙醋= 2:3(v/v)的洗脱液部分的高效液相色谱图。
[0046] 图6为溶剂体系正己烧-乙酸乙醋-甲醇-水=1:10:1:10时，小叶金露梅提取物的 高速逆流色谱图。
【具体实施方式】
[0047] 本发明所用药材为小叶金露梅(Potentilla parvifolia Fisch.)的干燥地上部 分，于2014年8月采于青海省海北州。植物物种由中国科学院西北高原生物研究所的张发起 博