用作生物防治剂的粉红粘帚霉的分离株的制作方法
【专利说明】用作生物防治剂的粉红粘吾霉的分离株
[0001] 相关申请
[0002] 本申请要求于2013年9月11日提交的、序列号为61/876,469的美国临时专利申请 的优先权。该申请的全部内容W引用的方式整体结合至本文。
技术领域
[0003] 本申请设及真菌粉红粘靑霉的分离株，更具体地，设及可用作植物处理的生物防 治剂的粉红粘靑霉的分离株。
【背景技术】
[0004] 粉红粘靑霉(Clonostachys rosea f.rosea)是一种有益微真菌，在野外的多种植 物的组织和几乎所有种类的农作物中均有发现。该真菌常见于在世界各地的农场W及苗 圃、果园、葡萄园、牧场和花园中收集的植物的健康根、叶片、茎、花和果实。它已经在来自于 包括亚北极区、寒溫带和暖溫带、沙漠和湿热带的区域的植物和±壤中有报道。定殖有粉红 粘靑霉的植物不显示出任何呈现该真菌存在的可视标记，直到该组织自然衰老并死亡。在 那个时候，该真菌能形成抱子，并且可能在植物表面看到发白的生长，尤其是在手持透镜的 帮助下。不同于与疾病相关的致病生物，Clonostachys在植物中不引起损害、病斑、萎黨或 其它症状。粉红粘靑霉同样已知是一种有益生物防治剂，用于植物的处理，并帮助保护植物 抵抗疾病和环境胁迫W及促进植物生长和产率。
[0005] 8*郎日的等(美国专利号8,101,551)描述了粉红粘靑霉株88-710,并提及了该菌株 具有促进植物活力、健康、生长和产量的益处。
[0006] 本领域仍然需要可用作植物处理的生物防治剂的粉红粘靑霉的新菌株。
【发明内容】
[0007] 本申请发明人分离并表征了真菌粉红粘靑霉的新菌株。如在本文中所描述的，被 指定为"BVT化-7"的粉红粘靑霉的该新菌株具体用作为植物处理的生物防治剂。在本发明 的一个方面，粉红粘靑霉株BVT Cr-7的分离培养物已经于2013年9月4日保藏在位于加拿大 R3E 3R2曼尼托己省溫尼伯市阿林顿街1015号的加拿大公众健康机构国家微生物实验室的 加拿大国际微生物保藏单位，编号为040913-01。
[000引如在实施例1中所展示的，分离并表征了粉红粘靑霉的一系列不同株，W鉴定具有 用作生物防治剂的特别有益性质的菌株。相对于粉红粘靑霉的其它株，BVT Cr-7展示了用 作生物防治剂的许多改进性质和/或期望的性质的组合。例如，BVT化-7展示了与生长和抱 子生产丰度相关的改进的或期望的性质、它在不同植物的内部(包括在农作物的根部中和 试验植物的花和叶子中）内生性定植的能力W及它抑制或控制广谱范围的植物疾病和/或 病原体的能力。在一种实施方式中，与粉红粘靑霉的对照株(如88-710和/或EVla)相比，BVT 化-7显示出一种或多种改进的性质。
[0009]另外，如在实施例2-5中所展示的，在控制条件下将BVT Cr-7应用于田野实验中的 植物W及溫室中的植物证明，在不同条件下和对于多种植物而言，BVT Cr-7是一种广谱范 围的生物防治剂，具有针对多种不同疾病的高性能。如在实施例4中所示的，BVT Cr-7还用 于减少植物材料的腐败，例如通过降低收获的农作物中的腐烂或稱色的水平。
[0010] 因此，在一个方面，本发明提供了一种如在本文中所描述的粉红粘靑霉株BVT Cr-7的分离培养物。在一种实施方式中，所述株于2013年9月4日保藏在位于加拿大R3E 3R2曼 尼托己省溫尼伯市阿林顿街1015号的加拿大公众健康机构国家微生物实验室的加拿大国 际微生物保藏单位，编号为040913-01。
[0011] 本发明还提供了产生自粉红粘靑霉株BVT Cr-7的抱子，W及粉红粘靑霉株BVT Cr-7的后代，和包含BVT Cr-7的分离培养物、抱子和/或后代的制剂。本发明还提供了一种 能够无性繁殖的、粉红粘靑霉株BVT化-7的分离的细胞。在一种实施方式中，提供了一种抱 子，所述抱子通过在适于形成抱子的条件下、将BVT Cr-7的分离培养物在基质上培养而获 得。在一种实施方式中，提供了一种制剂，所述制剂包含与稳定剂（如，娃酸巧）结合的BVT 化-7的抱子。
[0012] 在一种实施方式中，本文描述的BVT Cr-7的分离培养物在植物中定殖成为内生 菌。在一种实施方式中，用BVT Cr-7接触植物来抑制或控制侵袭植物的叶子、花、果实和/或 根的疾病或病原体。在一种实施方式中，所述疾病是灰霉病、白霉病、褐腐病、根腐病和/或 拟茎点霉属病（phomopsis)。在一种实施方式中，所述疾病由灰葡萄抱菌（Botrytis cinerea)、核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum)引起和/或由腐霉属(P}fthium spp.)、丝核 菌属(化izoctonia)和/或镶刀菌属(化sari皿)的种引起。
[0013] 在一种实施方式中，还提供了已经被BVT化-7的接种物定殖的植物或植物材料。
[0014] 在一种实施方式中，粉红粘靑霉株BVT化-7可用作植物处理的生物防治剂。在一 种实施方式中，提供了一种处理植物的方法，包括用本文描述的粉红粘靑霉株BVT Cr-7接 触植物。例如，在一种实施方式中，与没有用BVT化-7处理的对照植物相比，BVT化-7用于 改善植物的健康、生长和/或产量。在一种实施方式中，BVT Cr-7用于预防或治疗植物中的 疾病和/或病原体。在一种实施方式中，BVT Cr-7用于促进排除其它真菌(包括病原真菌)定 殖植物。在一种实施方式中，BVT化-7用于在植物中引发对疾病和胁迫的自然抵抗，如对病 原体的感染做出反应。还提供了一种降低植物材料损耗的方法，包括用BVT Cr-7接触植物 材料。
[0015] 在一种实施方式中，BVT化-7用于处理植物，W预防或治疗可能影响植物的健康、 生长和/或产量的疾病和/或病原体。在一种实施方式中，所述病原体是微生物，如真菌或细 菌。可W被BVT &-7控制的、能影响植物健康、生长和/或产量的病原体的例子包括但不限 于灰葡萄抱菌（Bot;rytis cinerea)、核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum)、腐霉属 (Pythium spp.)、链格抱属(Alternaria)、念珠菌属(Monilia)、链核盘菌属(Monilinia)、 刺盘抱属（Colletohichum)、枝抱属（Cladosporium)、丝核菌属(I^iizoctonia)、链霉菌属 (Streptomyces)、亚隔抱壳属（Didymella)和/或镶刀菌属（Fusarium)。可W通过使用BVT Cr-7控制的、能影响植物健康、生长和/或产量的疾病的例子包括但不限于灰霉病、白霉病、 褐腐病和/或根腐病。其它例子包括在例如蓝替或葡萄中的拟茎点霉属病W及马铃馨疮挪 病。
[0016] 在一种实施方式中，所述植物是被粉红粘靑霉株BVT化-7内生性定殖的任何植物 或其部分。在一种实施方式中，所述植物是开花植物、谷类植物、豆类植物或蔬菜作物。例 如，在一种实施方式中，本文描述的方法和应用用于处理植物，如开花植物或农作物，如蔬 菜、水果、谷物W及它们的种子或幼苗。在一种实施方式中，本文描述的方法和应用用于处 理针叶树的幼苗/移植物。在一种实施方式中，所述植物是树，如松树、黑云杉或松树移植 物。在一种实施方式中，所述植物是小麦、大麦、向日葵、加拿大油菜(canola)、蓝替、草替、 木替、葡萄、马铃馨、胡椒、黄瓜、番茄、草坪草、西兰花、菜花、桃、苹果、加拿大油菜、观赏花， 如玫瑰、天竺葵、仙客来、金鱼草、藻百年属、秋海棠或百合。在一种实施方式中，所述植物在 室外种植。在一种实施方式中，所述植物在溫室中种植。
[0017] 在一种实施方式中，本文描述的方法和应用包括用BVT化-7,如BVT Cr-7培养物、 抱子或其制剂接触植物。在一种实施方式中，所述BVT Cr-7培养物、抱子或其制剂用作接种 物。在一些实施方式中，BVT Cr-7W喷雾、薄雾、浸液、粉末或营养液形式和/或通过昆虫媒 介(如，通过使用在申请号为PCT/CA2013/050179的PCT申请中所描述的蜂媒介，该申请的全 部内容通过引用的方式结合至本文)而施用于植物或植物的部分。
[0018] 本文还提供了生物防治剂的生产方法，所述方法包括用分离的BVT Cr-7培养物接 种基质并在适于真菌生长的条件下培养所述基质，W生产粉红粘靑霉株BVT化-7。可选地， 所述方法进一步包括在适于真菌抱子形成的条件下培养所述基质并从基质中移除抱子W 生产接种体。
[0019] 本发明公开内容的其它特征和有益之处将从W下的具体描述中变得显而易见。但 是，应当理解，运些详细描述和表示本发明的优选实施方式的具体实施例仅W描述的方式 给出，因为通过该详细描述，在本公开内容的精神和范围内的多种变化和修饰对于本领域 技术人员而旨是显而易见的。
【具体实施方式】
[0020] 定义
[0021] 如在本文中所使用的，"粉红粘靑霉株BVT吐-7"或"BVT Cr-r指的是于2013年9 月4日保藏在位于加拿大R3E 3R2曼尼托己省溫尼伯市阿林顿街1015号的加拿大公众健康 机构国家微生物实验室的加拿大国际微生物保藏单位、编号为040913-01的真菌菌株。术语 "粉红粘靑霉株BVT Cr-r、"BVT Cr-r或"粉红粘靑霉株IDAC 040913-〇r同样包括所述株 的分离物或从所述株产生的任何细胞、培养物、抱子和后代(如，通过无性繁殖产生）。
[0022] 本领域已知的不同方法可W用于培养BVT化-7或制备真菌抱子，运些方法包括但 不限于本文描述的方法^及在^下文献中描述的方法:5111：1：〇]1等％1；[0(31曰(1；[111]11'036111]1:曰 versatile adversary of Botrytis cinerea in crops .''Plant Dis 1997 ； 81: 316-28 ； Sutton等"Ability of Clonostachys rose曰 to establish and suppress sporul曰tion potential of Botrytis cinerea indeleafed stems of hydroponic greenh