一种xrcc1基因多态性扩增检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型属于生物技术领域，涉及一种基因多态性扩增检测试剂盒，具体涉及 一种XRCCl基因多态性扩增检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 近年来结直肠癌在我国的发病率迅速上升，居常见恶性肿瘤发病率的第5位。流行 病学证实肿瘤的发生与个体遗传背景及环境的交互作用密切相关，90%结肠癌的发生是由 于遗传因素和环境因素交互作用的结果。DNA的损伤在肿瘤发生过程中起到非常重要的作 用，如不能成功修复会导致肿瘤的发生。XRCCl基因为DNA修复基因，位于人19号染色体长臂 区，编码的蛋白质通过与多聚ADP核糖聚合酶(PAPR)、APE 1、多聚核苷酸激酶/磷酸酶、DNA连 接酶ΙΠ 及DNA多聚酶β的相互作用参与DNA损伤的修复，而R399Q位于其功能结构序列内 (Berwick M1Vineis P.Markers of DNA repair and susceptibility to cancer in humans:anepidemiologic review.J Natl Cancer Inst 2000;92:874-897)。有研究显不 XRCC1R399Q基因多态性与结直肠癌具有遗传易感性的关系。因此在结直肠癌的诊疗中对 XRCCl基因 R399Q位点多态性检测显得尤为重要(Monaco R，Rosal R,Dolan MA,Pincus MR, Brandt-Rauf Pff.Conformational effects of a common codon 399 polymorphism on the BRCTl domain of the XRCCl protein.Protein J 2007；26:541-546)〇 【实用新型内容】
[0003] 本实用新型要解决的技术问题为目前市场上针对XRCCl基因多态性扩增检测特异 性不强，成本高且操作复杂的问题，本实用新型能较好的应用于XRCCl基因 R399Q多态性检 测，体积小，便于运输携带和使用。
[0004] 为实现上述目的，本实用新型采用以下技术方案：
[0005] -种XRCCl基因多态性扩增检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括盒体（1)、 海绵衬垫(2)，所述的海绵衬垫(2)置于盒体（1)内，海绵衬垫(2)上设有的容器孔装有多个 装有试剂的离心管，分别为装有XRCCl基因多态性扩增检测PCR反应液的离心管(3)、装有野 生型阳性对照的离心管(4)、装有突变型阳性对照的离心管(5)、装有杂合子阳性对照的离 心管(6)、装有阴性对照的离心管(7)。
[0006] 所述的容器孔较佳的为5个，容器孔在所述的衬垫上分两排排列，上述的装有 XRCCl基因多态性扩增检测PCR反应液的离心管为2ml离心管，装有野生型阳性对照、突变型 阳性对照、杂合子阳性对照、阴性对照的离心管均为0.5ml离心管。
[0007] 上述的XRCCl基因多态性扩增检测PCR反应液包括DNA聚合酶、尿嘧啶-N-糖基化酶 (UNG酶）、特异性引物和探针及Mg2+，所述的探针为TaqMan MGB探针（美国Applied Biosystems公司生产）。
[0008] 优选地，所述的阳性对照包括野生型阳性对照、突变型阳性对照、杂合子阳性对 照，所述的野生型阳性对照为含野生型纯合子XRCCl序列的质粒，突变型阳性对照为含突变 型纯合子XRCCl序列的质粒，杂合子阳性对照为等比例混合的野生型阳性对照和突变型阳 性对照。
[0009] 所述的XRCCl基因多态性检测引物包括：
[0010] 上游引物，其序列为:5'-6〇厶176〇0^6〇厶〇厶66厶丁厶厶6-3'；
[0011] 下游引物，其序列为:5 '-GTCCAGCACCCACTCCTTACG-3 '。
[0012 ] 所述的XRCCl基因多态性检测探针包括：
[0013] 野生型检测探针，其序列为:5 '-GCCTTACCTCCGGGAGGGCA-3 '，其5 '端标记物为VIC， 3'标记物为MGB;
[0014] 突变型检测探针，其序列为:5 '-GCCTTACCTCTGGGAGGGCA-3 '，其5 '端标记物为FAM， 3'标记物为MGB;
[0015]所述的阳性对照为本领域常规的阳性对照，本实用新型优选的为含有XRCCl基因 DNA序列且包含多态性检测上游和下游检测引物及引物之间的基因组DNA序列的质粒。
[0016] 本实用新型的保存温度为-20°C，尽量减少反复冻融。
[0017] 本实用新型较佳的应用方法为：
[0018] 1.试剂准备:将待检样本的基因组DNA取5yL加入45yL PCR反应液中待扩增；
[0019] 2.扩增检测:进行PCR扩增检测；
[0020] 3.检测结果分析:在同时满足四个对照组标准的情况下，对样本检测结果进行分 析；
[0021 ]优选地，所述的PCR扩增检测步骤包括：
[0022] 1.荧光通道选择:每个样品选择FAM和VIC 2个检测通道。参比荧光设置为none;
[0023] 2.反应条件设定:反应体积设定为50yL，UNG酶反应条件为37 °C加热5分钟，预变性 条件为95°C加热5分钟，变性条件为95°C，15秒，以及退火、延伸及检测荧光条件为60°C，1分 钟，共40个循环。
[0024] 应用本实用新型的有益效果为:本实用新型提供的XRCCl基因多态性扩增检测试 剂盒，通过使用优化设计的特异性检测引物和探针及PCR扩增检测反应条件，有效克服了普 通荧光定量PCR检测步骤繁琐，假阳性和假阴性易出现的缺点，大大提高XRCCl基因多态性 检测的特异性。
[0025]本实用新型提供的XRCCl基因多态性扩增检测试剂盒设计合理，内部结构及各离 心管排列有序，大小适宜，便于运输和使用。
【附图说明】
[0026] 图1为本发明的XRCCl基因多态性检测试剂盒结构示意图；
[0027] 图2为本发明的野生型纯合子样本检测结果图；
[0028] 图3为本发明的突变型纯合子样本检测结果图；
[0029]图4为杂合子样本检测结果图。
【具体实施方式】
[0030]为了能够更清楚地描述本发明的技术内容，下面结合具体实施例来进行进一步的 描述。
[0031]本发明所述的XRCCl基因多态性扩增检测试剂盒组包括XRCCl基因扩增检测PCR反 应液、野生型阳性对照、突变型阳性对照、杂合子阳性对照以及阴性对照。
[0032]所述的阳性对照为本领域常规的阳性对照，本实用新型优选的为含有XRCCl基因 DNA序列且包含多态性检测上游和下游检