本发明公开了一种生态环保复合生物除藻剂的制备方法，属于除藻剂制备领域。
背景技术：
由于水体污染而导致的水体富营养化是世界各国面临的普遍问题，我国的水体富营养化近30年来快速发展，湖泊、河流、近海等水域富营养化现象日益严重。由此而出现的水华、赤潮现象也越来越频繁，造成的危害也越来越大，已成为水污染控制领域的研究热点和难题之一，其中有害藻类控制是其中的重要课题。引发水华的藻类有很多，根据藻种的不同，大致分为蓝藻水华、绿藻水华和硅藻水华等，其中，富营养化水体中蓝藻水华最为普遍，铜绿微囊藻则是最常见的优势种。此外，有些丝状藻，如水绵、刚毛藻等在有些水域某些季节大量繁殖，它们或缠绕在沉水植物体上，或漂浮在水表，或覆盖在浅水底部的底泥表面，对水体景观、沉水植物生长等造成严重影响，而且一般的杀藻剂针对的是浮游藻类，而对水绵等丝状藻类杀灭作用不大，是目前水体生态修复过程中令人头疼的问题之一。
基于此，我国在除藻方面的研究从未停止，除藻的方法也在不断的改进。目前的除藻方法主要分为物理法、生物法和化学法。其中除藻效率最高、效果最好、时效最短的是化学法。利用化学杀藻剂对爆发生长的藻类进行快速的杀灭，是现今进行环境治理和污染水体恢复的重要方式。如今国内市场上的化学杀藻剂虽种类繁多，但是使用效果却参差不齐。化学药剂并不能从根本上改善水质，相反，随着投加量的增多，药剂品种的不断更换，对环境的二次污染也在不断增加，从而使水质环境形成严重的恶性循环，如溶解氧下降、鱼类死亡、生物多样性降低等，严重影响生态系统的结构和功能，甚至可能导致整个水体生态系统的瘫痪，遗患无穷。
技术实现要素：
本发明主要解决的技术问题：针对传统化学药剂除藻并不能从根本上改善水质，相反，随着投加量的增多，药剂品种的不断更换，对环境的二次污染也在不断增加，从而使水质环境形成严重的恶性循环的问题，提供了一种生态环保复合生物除藻剂的制备方法，本发明先从猪殃殃和黄芩中微波提取得到活性液，浓缩后得浓缩液，向浓缩液中加入海藻酸钠，溶解后加入壳聚糖溶液，搅拌均匀后得粘稠液，将EM菌粉先用红糖水活化，将活化后菌液接种到发酵培养基中，发酵培养得发酵液，将干燥后的蚯蚓粪与发酵液混合，静置放置后与备用的粘稠液混合，混合后过滤，得滤渣，即为生物除藻剂，本发明制备得到的生物除藻剂，无毒、分散性好，除藻效果好，抑藻作用时间长，对水质不会产生副作用。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
（1）分别称取100～150g猪殃殃和80～120g黄芩，放入绞碎机中绞碎后与1～2L无水乙醇混合，混合后在200～250W功率下超声浸提1～2h，提取后抽滤得滤液，将滤液旋转蒸发至原体积20～30%，得浓缩液；
（2）向上述浓缩液中加入4～6g海藻酸钠，搅拌至海藻酸钠完全溶解后得海藻酸钠溶液，再称取3～5g壳聚糖加入60～80mL质量分数0.5%盐酸中溶解，得壳聚糖溶液，并与海藻酸钠溶液混合，搅拌均匀后得粘稠液，备用；
（3）称取80～90g红糖加入到500～600mL无菌水中，搅拌至红糖溶解，向红糖水中加入5～7gEM菌粉，在35～40℃温度下搅拌混合30～50min后保温培养20～30h，培养后得菌液；
（4）分别称取120～150g葡萄糖、5～10g蛋白胨、2～3g玉米粉、10～15g牛肉膏、1～2g磷酸氢二钾、0.5～1.8g磷酸二氢钾和700～800mL无菌水，混合均匀后放在紫外灯下杀菌10～15min，得发酵培养基，将上述菌液按接种量20～30%接种到发酵培养基中，在35～37℃温度下发酵5～7天，得发酵液；
（5）称取200～300g蚯蚓粪，放入烘箱中，在100～120℃温度下干燥8～10h，将干燥后的蚯蚓粪按质量比1:3与上述发酵液混合，混合20～30min后放入温度30～40℃，湿度为50～60%的环境下，静置放置3～5天；
（6）将上述放置后的固体按质量比1:5与步骤（2）备用的粘稠液混合，以800～1000r/min转速进行搅拌混合10～20min，搅拌后立即过滤，得滤渣，即可得到生物除藻剂。
本发明的应用方法：将本发明制备得到的生物除藻剂按质量比1:8000～9000加入铜绿微囊藻藻液、水华鱼腥藻藻液、蛋白核小球藻藻液和斜生栅藻藻液中，并用以1～2L/min间歇式曝空气，曝气8～10h后自然灭藻，灭藻5～10天后，对铜绿微囊藻灭藻率达到90%以上、水华鱼腥藻灭藻率达到95%以上、蛋白核小球藻灭藻率达到85%以上和斜生栅藻灭藻率达到88%以上，并且可以保持20～30天内不复发。
本发明的有益效果是：
（1）本发明制备得到的生物除藻剂，无毒、分散性好；
（2）本发明制备得到的生物除藻剂除藻效果好，抑藻作用时间长，可保持20～30天内不复发，对水质不会产生副作用。
具体实施方式
分别称取100～150g猪殃殃和80～120g黄芩，放入绞碎机中绞碎后与1～2L无水乙醇混合，混合后在200～250W功率下超声浸提1～2h，提取后抽滤得滤液，将滤液旋转蒸发至原体积20～30%，得浓缩液；向上述浓缩液中加入4～6g海藻酸钠，搅拌至海藻酸钠完全溶解后得海藻酸钠溶液，再称取3～5g壳聚糖加入60～80mL质量分数0.5%盐酸中溶解，得壳聚糖溶液，并与海藻酸钠溶液混合，搅拌均匀后得粘稠液，备用；称取80～90g红糖加入到500～600mL无菌水中，搅拌至红糖溶解，向红糖水中加入5～7gEM菌粉，在35～40℃温度下搅拌混合30～50min后保温培养20～30h，培养后得菌液；分别称取120～150g葡萄糖、5～10g蛋白胨、2～3g玉米粉、10～15g牛肉膏、1～2g磷酸氢二钾、0.5～1.8g磷酸二氢钾和700～800mL无菌水，混合均匀后放在紫外灯下杀菌10～15min，得发酵培养基，将上述菌液按接种量20～30%接种到发酵培养基中，在35～37℃温度下发酵5～7天，得发酵液；称取200～300g蚯蚓粪，放入烘箱中，在100～120℃温度下干燥8～10h，将干燥后的蚯蚓粪按质量比1:3与上述发酵液混合，混合20～30min后放入温度30～40℃，湿度为50～60%的环境下，静置放置3～5天；将上述放置后的固体按质量比1:5与备用的粘稠液混合，以800～1000r/min转速进行搅拌混合10～20min，搅拌后立即过滤，得滤渣，即可得到生物除藻剂。
实例1
分别称取100g猪殃殃和80g黄芩，放入绞碎机中绞碎后与1L无水乙醇混合，混合后在200W功率下超声浸提1h，提取后抽滤得滤液，将滤液旋转蒸发至原体积20%，得浓缩液；向上述浓缩液中加入4g海藻酸钠，搅拌至海藻酸钠完全溶解后得海藻酸钠溶液，再称取3g壳聚糖加入60mL质量分数0.5%盐酸中溶解，得壳聚糖溶液，并与海藻酸钠溶液混合，搅拌均匀后得粘稠液，备用；称取80g红糖加入到500mL无菌水中，搅拌至红糖溶解，向红糖水中加入5gEM菌粉，在35℃温度下搅拌混合30min后保温培养20h，培养后得菌液；分别称取120g葡萄糖、5g蛋白胨、2g玉米粉、10g牛肉膏、1g磷酸氢二钾、0.5g磷酸二氢钾和700mL无菌水，混合均匀后放在紫外灯下杀菌10min，得发酵培养基，将上述菌液按接种量20%接种到发酵培养基中，在35℃温度下发酵5天，得发酵液；称取200g蚯蚓粪，放入烘箱中，在100℃温度下干燥8h，将干燥后的蚯蚓粪按质量比1:3与上述发酵液混合，混合20～30min后放入温度30℃，湿度为50%的环境下，静置放置3天；将上述放置后的固体按质量比1:5与备用的粘稠液混合，以800r/min转速进行搅拌混合10min，搅拌后立即过滤，得滤渣，即可得到生物除藻剂。
本发明的应用方法：将本发明制备得到的生物除藻剂按质量比1:8000加入铜绿微囊藻藻液、水华鱼腥藻藻液、蛋白核小球藻藻液和斜生栅藻藻液中，并用以1L/min间歇式曝空气，曝气8h后自然灭藻，灭藻5天后，对铜绿微囊藻灭藻率达到91%、水华鱼腥藻灭藻率达到96%、蛋白核小球藻灭藻率达到88%和斜生栅藻灭藻率达到89%，并且可以保持20天内不复发。
实例2
分别称取125g猪殃殃和100g黄芩，放入绞碎机中绞碎后与1.5L无水乙醇混合，混合后在225W功率下超声浸提1.5h，提取后抽滤得滤液，将滤液旋转蒸发至原体积25%，得浓缩液；向上述浓缩液中加入5g海藻酸钠，搅拌至海藻酸钠完全溶解后得海藻酸钠溶液，再称取3～5g壳聚糖加入70mL质量分数0.5%盐酸中溶解，得壳聚糖溶液，并与海藻酸钠溶液混合，搅拌均匀后得粘稠液，备用；称取85g红糖加入到550mL无菌水中，搅拌至红糖溶解，向红糖水中加入6gEM菌粉，在37℃温度下搅拌混合40min后保温培养25h，培养后得菌液；分别称取135g葡萄糖、8g蛋白胨、2.5g玉米粉、13g牛肉膏、1.5g磷酸氢二钾、1.0g磷酸二氢钾和750mL无菌水，混合均匀后放在紫外灯下杀菌13min，得发酵培养基，将上述菌液按接种量25%接种到发酵培养基中，在36℃温度下发酵6天，得发酵液；称取250g蚯蚓粪，放入烘箱中，在110℃温度下干燥9h，将干燥后的蚯蚓粪按质量比1:3与上述发酵液混合，混合25min后放入温度35℃，湿度为55%的环境下，静置放置4天；将上述放置后的固体按质量比1:5与备用的粘稠液混合，以900r/min转速进行搅拌混合15min，搅拌后立即过滤，得滤渣，即可得到生物除藻剂。
本发明的应用方法：将本发明制备得到的生物除藻剂按质量比1:8500加入铜绿微囊藻藻液、水华鱼腥藻藻液、蛋白核小球藻藻液和斜生栅藻藻液中，并用以1.5L/min间歇式曝空气，曝气9h后自然灭藻，灭藻7天后，对铜绿微囊藻灭藻率达到92%、水华鱼腥藻灭藻率达到97%、蛋白核小球藻灭藻率达到86%和斜生栅藻灭藻率达到90%，并且可以保持25天内不复发。
实例3
分别称取150g猪殃殃和120g黄芩，放入绞碎机中绞碎后与2L无水乙醇混合，混合后在250W功率下超声浸提2h，提取后抽滤得滤液，将滤液旋转蒸发至原体积30%，得浓缩液；向上述浓缩液中加入6g海藻酸钠，搅拌至海藻酸钠完全溶解后得海藻酸钠溶液，再称取5g壳聚糖加入80mL质量分数0.5%盐酸中溶解，得壳聚糖溶液，并与海藻酸钠溶液混合，搅拌均匀后得粘稠液，备用；称取90g红糖加入到600mL无菌水中，搅拌至红糖溶解，向红糖水中加入7gEM菌粉，在40℃温度下搅拌混合50min后保温培养30h，培养后得菌液；分别称取150g葡萄糖、10g蛋白胨、3g玉米粉、15g牛肉膏、2g磷酸氢二钾、1.8g磷酸二氢钾和800mL无菌水，混合均匀后放在紫外灯下杀菌15min，得发酵培养基，将上述菌液按接种量30%接种到发酵培养基中，在37℃温度下发酵7天，得发酵液；称取300g蚯蚓粪，放入烘箱中，在120℃温度下干燥10h，将干燥后的蚯蚓粪按质量比1:3与上述发酵液混合，混合30min后放入温度40℃，湿度为60%的环境下，静置放置5天；将上述放置后的固体按质量比1:5与备用的粘稠液混合，以1000r/min转速进行搅拌混合20min，搅拌后立即过滤，得滤渣，即可得到生物除藻剂。
本发明的应用方法：将本发明制备得到的生物除藻剂按质量比1:9000加入铜绿微囊藻藻液、水华鱼腥藻藻液、蛋白核小球藻藻液和斜生栅藻藻液中，并用以2L/min间歇式曝空气，曝气10h后自然灭藻，灭藻10天后，对铜绿微囊藻灭藻率达到95%、水华鱼腥藻灭藻率达到98%、蛋白核小球藻灭藻率达到89%和斜生栅藻灭藻率达到91%，并且可以保持30天内不复发。