本发明涉及一种降解土壤中苯并芘的方法，特别是一种联合应用拟茎点霉菌及芦苇降解土壤中苯并芘的方法，属于环境保护技术领域。
背景技术：
多环芳烃(pahs)普遍存在于环境中，是一类具有强烈致癌性、致突变的持久性有机污染物。人类生产生活是多环芳烃产生的重要原因，如化石燃料的燃烧、有机废弃物的燃烧、汽车尾气以及石化、煤化工厂废气等。农业生产中，秸秆燃烧也是多环芳烃的重要来源。
苯并芘是多环芳烃中常见的高活性间接致癌物和突变原，是目前已经证实具有致癌、致畸性、致突变性的有毒物质。苯并芘进入人体后，会迅速与细胞线粒体中的混合功能氧化酶结合，生成具有直接致癌性的物质，同时代谢产生的7,8-二氢二羟基-9,10-环氧化物是最后的致癌物，可以造成dna损伤。多环芳烃中，苯并芘的污染最广、致癌性最强。与其他多换芳烃性质相似，该类化合物水溶性差，常以吸附在土壤颗粒上，土壤成为苯并芘的重要的载体。同时由于土壤中的多环芳烃生物利用度较低，同时难以溶于水，造成多环芳烃在土壤中稳定，难以分解。因此，利用高效的修复技术对土壤中的苯并芘进行降解十分有必要。
目前，降解土壤中苯并芘的方法主要有：微生物降解法、植物吸附修复法、化学氧化法、萃取法、物理降解法等。化学法修复效率高，但容易产生二次污染，同时修复不彻底，需要二次处理；萃取法效果虽然较高，但不适用与大规模土壤修复；目前物理降解中主要采用的是光降解法，其原理利用可见光可以被多环芳烃中的离域大π键吸收跃迁到激发态，在水的oh自由基作用下，发生裂解，但是这种方法在降解过程中极易受到环境的影响，造成降解速率变慢,而且光降解法技术尚未成熟，无法大规模应用于实际的土壤修复中；单一生物修复虽然产生的副产物少，对环境友好，但修复效果有限，比如微生物降解法具有降解效率高的特点，但缺点是单一性，且容易受到外界环境影响，同时对工艺要求苛刻，单一植物修复主要利用植物吸附的特点，受到外界环境影响小，但缺点是效率低。
拟茎点霉菌是半只菌亚门、腔孢纲、球壳胞目、球壳孢科的重要真菌，已报道有900多个种，是一种重要的植物内生菌，同时也是一种重要的植物病原菌，属于条件致病菌，但同时表明，施加内生拟茎点霉菌可以增强植物抗逆以及增加土壤降解酶活性，因此该菌在自然生态中占有重要的地位。
技术实现要素：
本发明的目的在于，解决现有技术的不足，提供一种降解土壤中苯并芘的方法，该方法可以有效的降解土壤中的苯并芘，修复效果显著，并且工艺简单，可实现对污染土壤的规模化修复并且不会造成二次污染，具有对环境友好的特点。
技术方案
一种降解土壤中苯并芘的方法，包括如下步骤：
(1)选取健康、无病害的芦苇，去掉上部和下部后，将芦苇杆分段，得到芦苇段，然后将芦苇段浸泡在5-20％的苯并芘的鼠李糖脂溶液中，出芽后取出芦苇段，用无菌水冲洗干净，并用无菌滤纸吸干表面的水分；
(2)将芦苇段转入无菌水中，黑暗环境下催芽培养至芽长3-5cm，备用；
(3)将拟茎点霉菌活化后，接入麸曲培养基中，25-30℃下培养2-5天后，过滤，往得到的菌体中加入脱脂奶粉，混合均匀后，冷冻干燥(真空度)，得到拟茎点霉菌菌剂；
(4)将步骤(2)得到的出芽后的芦苇段移种于苯并芘污染的土壤中，待长至苗长10cm后，将拟茎点霉菌菌剂施于芦苇根部，培养90-120天，即可。
步骤(3)中，菌体与脱脂奶粉的重量比为1：2-5，优选为1：3。
进一步，步骤(1)中，芦苇段每段有2-3节。
进一步，步骤(1)中，浸泡时间为6-8天。
进一步，步骤(3)中，拟茎点霉菌的活化方法为：将拟茎点霉菌菌接种于pda培养基上,培养至长出菌落后，再接种于麸曲培养基中培养5天。
进一步，步骤(3)中，真空冷冻干燥的参数为：真空度50pa，温度90℃。
进一步，步骤(4)中，出芽后的芦苇段移种在苯并芘污染的土壤中的种植密度为每平方米30-40棵。
进一步，步骤(4)中，拟茎点霉菌菌剂施于芦苇根部的用量为每公顷20-40kg。
本发明的有益效果：本发明提供一种降解土壤中苯并芘的方法，该方法可以有效的降解土壤中的苯并芘，修复效果显著，并且工艺简单，可实现对污染土壤的规模化修复并且不会造成二次污染，具有对环境友好的特点。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。值得说明的是：
1)下述实施例中，pda液体培养基的制备方法：称取200g马铃薯去皮切块，加入20g琼脂，1000ml去离子水，加热煮沸30分钟，过滤，加入葡萄糖20g，补加去离子水到1l，调节ph为7，121℃高温灭菌后分装，备用。
麸曲培养基的制备：取无霉变的麸皮筛去细粉，称取8g麸皮，加入250ml三角瓶中，加入8ml去离子水，拌匀，于121℃灭菌30min，备用。
2)下述实施例中，所用的拟茎点霉菌分离自芦苇根部，经鉴定为phomopsissp。
3)土壤中苯并芘的含量测定方法：
取处理前的土壤10g，剔除沙石等残留物，自然避光风干，研磨，过细筛，4℃下保存。
将土样放入索氏提取器内，使用三氯甲烷加热回流提取30min，回收溶剂，使用hplc测定其中苯并芘的含量，测定方法如下：c18色谱柱，规格4.6×150mm，10μm)；流动相为：甲醇：水＝90：10，荧光剂检测器激发波长365nm，发射波长410nm，流速1.0ml/min，柱温35℃，进样量10μl，以苯并芘标准品进行定标，标准曲线为y＝2.993x-875.33，r2＝0.9984。
土壤苯并芘降解率(％)＝(原始土壤中的苯并芘质量分数-处理后土壤中的苯并芘质量分数)/原始土壤中苯并芘质量分数×100％。
实施例1
一种降解土壤中苯并芘的方法，包括如下步骤：
(1)选取健康、无病害的芦苇，去掉上部和下部后，将芦苇杆分段，每段2-3节，得到芦苇段，然后将芦苇段浸泡在5％的苯并芘的鼠李糖脂溶液中，浸泡8天后(出芽率为85.16％)取出芦苇段，用无菌水冲洗干净，并用无菌滤纸吸干表面的水分；
(2)将芦苇段转入无菌水中催芽培养至芽长3-5cm，备用；
(3)活化拟茎点霉菌，将其接入麸曲培养基中，28℃下培养5天后，过滤，往得到的菌体中加入脱脂奶粉，菌体与脱脂奶粉的重量比为1：3，混合均匀后，冷冻干燥，得到拟茎点霉菌菌剂(测得拟茎点霉菌菌剂中拟茎点霉菌的复苏率为93.26％)；
(4)将步骤(2)得到的出芽后的芦苇段移种于苯并芘污染的土壤中(出芽后的芦苇段移种在苯并芘污染的土壤中的种植密度为每平方米40棵)，待长至苗长10cm后，将拟茎点霉菌菌剂施于芦苇根部(拟茎点霉菌菌剂施于芦苇根部的用量为每公顷30kg)，培养110天。测得土壤苯并芘降解率为74.51％。
实施例2
步骤(1)中，苯并芘的鼠李糖脂溶液的浓度为10％，浸泡8天后出芽率为87.45％。
步骤(3)中，菌体与脱脂奶粉的重量比为1：2，冷冻干燥后，测得拟茎点霉菌菌剂中拟茎点霉菌的复苏率为85.33％。
其余与实施例1相同。
测得土壤苯并芘降解率为70.62％。
实施例3
步骤(1)中，苯并芘的鼠李糖脂溶液的浓度为15％，浸泡8天后出芽率为78.22％。
步骤(3)中，菌体与脱脂奶粉的重量比为1：4，冷冻干燥后，测得拟茎点霉菌菌剂中拟茎点霉菌的复苏率为74.85％。
其余与实施例1相同。
测得土壤苯并芘降解率为66.04％。
实施例4
步骤(1)中，苯并芘的鼠李糖脂溶液的浓度为20％，浸泡8天后出芽率为74.92％。
步骤(3)中，菌体与脱脂奶粉的重量比为1：5，冷冻干燥后，测得拟茎点霉菌菌剂中拟茎点霉菌的复苏率为62.49％。
其余与实施例1相同。
测得土壤苯并芘降解率为62.98％。
实施例5
步骤(4)中，出芽后的芦苇段移种在苯并芘污染的土壤中的种植密度为每平方米40棵)，待长至苗长10cm后，将拟茎点霉菌菌剂施于芦苇根部(拟茎点霉菌菌剂施于芦苇根部的用量为每公顷20kg)
其余与实施例1相同。
测得土壤苯并芘降解率为69.09％。
实施例6
步骤(4)中，出芽后的芦苇段移种在苯并芘污染的土壤中的种植密度为每平方米40棵)，待长至苗长10cm后，将拟茎点霉菌菌剂施于芦苇根部(拟茎点霉菌菌剂施于芦苇根部的用量为每公顷40kg)。
其余与实施例1相同。
测得土壤苯并芘降解率为75.02％。
对比例1
单独采用芦苇
出芽后的芦苇段移种在苯并芘污染的土壤中的种植密度为每平方米40棵。110天后测得土壤苯并芘降解率为17.55％。
对比例2
单独采用拟茎点霉菌剂，拟茎点霉菌菌剂的制备方法同实施例1，拟茎点霉菌菌剂施用量为每公顷30kg。110天后测得土壤苯并芘降解率为20.19％。