模拟移动床方式色谱分离方法和模拟移动床方式色谱分离系统与流程

1.本发明涉及模拟移动床方式色谱分离方法和模拟移动床方式色谱分离系统。


背景技术：

2.在基于模拟移动床方式的色谱分离中，构建将填充有对原液中含有的2种成分以上的成分中的特定成分具有选择性吸附能力的吸附剂的多个单位填充塔(以下，也简称为“填充塔”，有时也称为“柱”)经由配管串联连结、且将最下游部的填充塔与最上游部的填充塔连结而形成为环状的循环系统。向该循环系统供给原液和洗脱液，并且将循环系统内的移动速度快的组分(弱吸附性组分)、慢的组分(强吸附性组分)、以及根据需要而移动速度处于中间速度的组分(中吸附性组分)分别从不同的位置提取，接着，一边将原液供给位置、洗脱液供给位置、弱吸附性组分的提取位置、中吸附性组分的提取位置及强吸附性组分的提取位置保持为一定的位置关系一边朝向循环系统的流体循环方向移动。通过反复进行该操作，从而模拟实现能够连续地进行原液供给的移动床的处理操作。在专利文献1中公开了如下方法：在一系列的改良后的模拟移动床装置中反复进行一边供给洗脱液和原液一边提取中吸附性组分的工序、以及一边供给洗脱液一边提取弱吸附性组分和强吸附性组分的工序，从而连续地分离对吸附剂的亲和力不同的3个以上的组分。
3.在以专利文献1记载的技术为代表的现有的基于一般的模拟移动床方式的色谱分离中，基本上使用1种洗脱液。因此，在向循环系统供给包含对吸附剂的吸附性强的成分的原液、包含容易产生拖尾(浓度分布变宽的现象)的成分的原液的情况下，为了使这些成分解吸(脱离)，需要使用大量的洗脱液。洗脱液的大量使用会导致提取液的浓缩成本的上升，另外，目标精制物的每吸附剂的生产量也会降低。
4.另一方面，还记载有在利用模拟移动床方式的色谱分离中使用2种以上的洗脱液。例如在专利文献2中记载了如下内容：使用解吸力弱的第一洗脱液和解吸力强的第二洗脱液，将这些洗脱液、原液的供给的定时与弱吸附性组分、中吸附性组分和强吸附性组分的提取的定时设为特定的组合，由此以较少的吸附剂量实现高分离性能。现有技术文献专利文献
5.专利文献1：日本专利第1998860号公报专利文献2：日本专利第4606092号公报


技术实现要素：

发明要解决的课题
6.模拟移动床方式的色谱分离能够连续地以高纯度得到目标精制对象物，因此也研究了向医疗领域等的应用。例如，在抗体药物的制造中，在产生抗体的培养细胞的提取液、
培养液中，除了目标抗体之外，还产生作为抗体被切断等而产生的抗体未充分发挥作用的片段、抗体凝聚而巨大化的凝聚体。一般而言，上述片段与吸附剂的相互作用部位少，对该吸附剂的吸附性弱。相反，凝聚体对吸附剂的吸附性强。因此，在将模拟移动床方式的色谱分离应用于抗体药物的精制的情况下，需要将目标抗体作为对吸附剂呈现中间吸附性的中吸附性组分进行分离。另一方面，对于弱吸附性组分和强吸附性组分，均需要以高去除率充分去除。另外，在这样的色谱分离的实用化中，尽可能地减少需要的吸附剂量并提高分离处理效率、实现低成本化也很重要。但是，本发明的发明人们对基于上述各专利文献中记载的技术的现有的模拟移动床方式的色谱分离进行研究的结果发现难以充分实现上述目的。
7.为此，本发明的课题在于提供一种使用了模拟移动床方式的色谱分离方法，能够以更少的吸附剂的使用量高纯度地分离原液中的精制对象成分。另外，本发明的课题在于提供适于上述色谱分离方法的实施的色谱分离系统。用于解决课题的技术方案
8.本发明的发明人们鉴于上述课题反复进行了深入研究，结果发现，在使用了模拟移动床方式的色谱分离方法中，通过使用2种以上洗脱液，另外，将循环系统中的原液供给口、强吸附性组分提取口、中吸附性组分提取口以及弱吸附性组分提取口设为特定的位置关系，能够解决上述课题。本发明是基于这些见解进一步反复进行研究而完成的。
9.本发明的上述课题通过下述技术方案得到了解决。[1]一种模拟移动床方式色谱分离方法，包括如下步骤：使用将填充有吸附剂的3个以上的单位填充塔经由配管串联且环状地连结而成的循环系统，以各区段具有至少1个单位填充塔的方式将该循环系统从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的3个区段即区段1～区段3，使用2种以上的洗脱液来分离原液中含有的相对于所述吸附剂的弱吸附性成分、强吸附性成分和中吸附性成分，所述中吸附性成分的吸附性处于所述弱吸附性成分的吸附性与所述强吸附性成分的吸附性之间，在所述循环系统的所述配管设置有原液供给口f、与所述2种以上的洗脱液各自对应的2个以上的洗脱液供给口d、包含所述弱吸附性成分的弱吸附性组分的提取口a、包含所述中吸附性成分的中吸附性组分的提取口b、以及包含所述强吸附性成分的强吸附性组分的提取口c，将该原液供给口f、该提取口a、该提取口b以及该提取口c的位置按下述(a)～(c)进行设置：(a)将所述提取口b隔着至少1个区段而设置于所述原液供给口f的下游侧，(b)将所述提取口c设置于具有所述原液供给口f的配管，或者将所述提取口c隔着至少1个区段而设置于所述原液供给口f的上游侧，(c)将所述提取口a设置于具有所述提取口b的配管，或者将所述提取口a隔着至少1个区段而设置于所述提取口b的下游侧，所述模拟移动床方式色谱分离方法包括依次重复下述步骤(a)以及步骤(b)的工序：[步骤(a)]
将原液、2种以上的洗脱液分别从所述原液供给口f、所述2个以上的洗脱液供给口d同时供给或者单独供给，并且将弱吸附性组分、中吸附性组分、强吸附性组分分别从所述提取口a、所述提取口b、所述提取口c同时提取或者单独提取的步骤，[步骤(b)]在所述步骤(a)结束后，使所述原液供给口f、所述洗脱液供给口d、所述提取口a、所述提取口b以及所述提取口c保持相对位置关系而向下游侧转移的步骤。[2]在[1]记载的模拟移动床方式色谱分离方法的基础上，使用所述2种以上的洗脱液在所述步骤(a)中进行下述子步骤(a1-8)、子步骤(a2-8)、子步骤(a3-8)以及子步骤(a4-8)，《子步骤(a1-8)》将区段2的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，且将区段3的下游侧末端作为所述提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，《子步骤(a2-8)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，《子步骤(a3-8)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为所述提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2中流通的洗脱液的解吸力，《子步骤(a4-8)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段2的下游侧末端作为所述提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2中流通的洗脱液的解吸力。[3]在[1]记载的模拟移动床方式色谱分离方法的基础上，使用所述2种以上的洗脱液在所述步骤(a)中进行下述子步骤(a1-9)、子步骤(a2-9)、子步骤(a3-9)以及子步骤(a4-9)，
《子步骤(a1-9)》将区段2的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，且将区段3的下游侧末端作为所述提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，《子步骤(a2-9)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，《子步骤(a3-9)》从所述洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1以及区段2中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1以及区段2中流通的洗脱液的解吸力，《子步骤(a4-9)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段2的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2中流通的洗脱液的解吸力。[4]在[1]记载的模拟移动床方式色谱分离方法的基础上，使用所述2种以上的洗脱液在所述步骤(a)中进行下述子步骤(a1-10)、子步骤(a2-10)、子步骤(a3-10)以及子步骤(a4-10)，《子步骤(a1-10)》将区段2的上游侧末端作为所述原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，且将区段3的下游侧末端作为所述提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，《子步骤(a2-10)》将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv，从该洗脱液供给口d-iv供给解吸力与所述原液相同或解吸力强于所述原液的洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，《子步骤(a3-10)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为所述提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所
述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2中流通的洗脱液的解吸力，《子步骤(a4-10)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段2的下游侧末端作为所述提取口b从该提取口b提取中吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2中流通的洗脱液的解吸力。[5]一种模拟移动床方式色谱分离方法，包括如下步骤：使用将填充有吸附剂的5个以上的单位填充塔经由配管串联且环状地连结而成的循环系统，以各区段具有至少1个单位填充塔的方式将该循环系统从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的5个区段即区段1～区段5，使用2种以上的洗脱液来分离原液中含有的相对于所述吸附剂的弱吸附性成分、强吸附性成分和中吸附性成分，所述中吸附性成分的吸附性处于所述弱吸附性成分的吸附性与所述强吸附性成分的吸附性之间，在所述循环系统的所述配管设置有原液供给口f、与所述2种以上的洗脱液各自对应的2个以上的洗脱液供给口d、包含所述弱吸附性成分的弱吸附性组分的提取口a、包含所述中吸附性成分的中吸附性组分的提取口b、以及包含所述强吸附性成分的强吸附性组分的提取口c，将该原液供给口f、该提取口a、该提取口b以及该提取口c的位置按下述(a)～(c)进行设置：(a)将所述提取口b隔着至少1个区段而设置于所述原液供给口f的下游侧，(b)将所述提取口c设置于具有所述原液供给口f的配管，或者将所述提取口c隔着至少1个区段而设置于所述原液供给口f的上游侧，(c)将所述提取口a设置于具有所述提取口b的配管，或者将所述提取口a隔着至少1个区段而设置于所述提取口b的下游侧，所述模拟移动床方式色谱分离方法包括依次重复下述步骤(a)以及步骤(b)的工序：[步骤(a)]将原液、2种以上的洗脱液分别从所述原液供给口f、所述2个以上的洗脱液供给口d同时供给或者单独供给，并且将弱吸附性组分、中吸附性组分、强吸附性组分分别从所述提取口a、所述提取口b、所述提取口c同时提取或者单独提取的步骤，[步骤(b)]在所述步骤(a)结束后，使所述原液供给口f、所述洗脱液供给口d、所述提取口a、所述提取口b以及所述提取口c保持相对位置关系而向下游侧转移的步骤。[6]在[5]记载的模拟移动床方式色谱分离方法的基础上，使用所述2种以上的洗脱液在所述步骤(a)中进行下述子步骤(a1-11)、子步骤
(a2-11)以及子步骤(a3-11)，《子步骤(a1-11)》将区段3的上游侧末端作为所述原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且将区段5的下游侧末端作为所述提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段3中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段4以及区段5中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段3中流通的洗脱液的解吸力，《子步骤(a2-11)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为所述提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，从所述洗脱液供给口d-iii供给所述洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段4以及区段5中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力，《子步骤(a3-11)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段3的下游侧末端作为所述提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段4以及区段5中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力。[7]在[5]记载的模拟移动床方式色谱分离方法的基础上，使用所述2种以上的洗脱液在所述步骤(a)中进行下述子步骤(a1-12)、子步骤(a2-12)、子步骤(a3-12)以及子步骤(a4-12)，《子步骤(a1-12)》将区段3的上游侧末端作为所述原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，且将区段5的下游侧末端作为所述提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，《子步骤(a2-12)》将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给解吸力与所述原液相同或解吸力强于所述原液的洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，《子步骤(a3-12)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为所述提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所
述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段4以及区段5中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力，《子步骤(a4-12)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段3的下游侧末端作为所述提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，从而使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段4以及区段5中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力。
[0010]
在本说明书中，“上游”、“下游”的用语相对于循环系统内的流体的流通方向而被使用。即，相对于循环系统的某部位，“上游侧”是指流体朝向该部位流通过来的一侧，“下游侧”是指流体从该部位流出去的一侧。在本说明书中，“强吸附性成分”是指原液中含有的多个成分中对吸附剂的吸附力强的成分，“弱吸附性成分”是指原液中含有的多个成分中对吸附剂的吸附力弱的成分，“中吸附性成分”是指与上述强吸附性成分相比对吸附剂的吸附性弱，但与上述弱吸附性成分相比对吸附剂的吸附性强的成分。也就是说，“强吸附性”、“中吸附性”以及“弱吸附性”的用语表示对原液中含有的各成分的对吸附剂的吸附力进行比较时的相对的吸附力的强度。上述的“强吸附性成分”、“中吸附性成分”以及“弱吸附性成分”分别可以由单一成分组成，也可以由多个成分组成。另外，该多个成分的吸附力可以相同，也可以不同。相对于原液中的各成分的“强吸附性成分”、“中吸附性成分”以及“弱吸附性成分”的分组可以根据目的适当设定。在以原液包含4种成分的情况为例的情况下，也可以将按照对吸附剂的吸附力从强到弱的顺序的前2种成分合起来定位为强吸附性成分，将对吸附剂的吸附力第三强的成分定位为中吸附性成分，将对吸附剂的吸附力最弱的成分定位为弱吸附性成分。另外，也可以将对吸附剂的吸附力最强的成分定位为强吸附性成分，将对吸附剂的吸附力第二强的成分和第三强的成分合起来定位为中吸附性成分，将对吸附剂的吸附力最弱的成分定位为弱吸附性成分。另外，也可以将对吸附剂的吸附力最强的成分定位为强吸附性成分，将对吸附剂的吸附力第二强的成分定位为中吸附性成分，将对吸附剂的吸附力第三强的成分和最弱的成分合起来定位为弱吸附性成分。在原液包含5种以上的成分的情况下，也同样地，能够进行基于各种分组的分离、精制。在本发明中，洗脱液的“解吸力”是指使吸附于吸附剂的成分从该吸附剂脱离的作用的强度。发明效果
[0011]
根据本发明的模拟移动床方式色谱分离方法，能够抑制吸附剂的使用量，并且能够以高纯度分离原液中的精制对象成分。另外，本发明的模拟移动床方式色谱分离系统能够适于应用于本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的实施。
附图说明
[0012]
图1是表示本发明的模拟移动床方式色谱分离系统的一个示例的系统图。图2是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的一个实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图3是图2所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图4是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的其他实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图5是图4所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图6是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的另外其他的实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图7是图6所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图8是本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的另外其他的实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图9是图8所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图10是表示比较例1以及2中的单柱
·
不连续梯度的运转工序的流程图。图11表示是比较例3中的模拟移动相方式色谱分离的运转工序的流程图。图12是表示比较例4中的模拟移动相方式色谱分离的运转工序的流程图。图13是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的另外其他的实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图14是图13所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图15是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的另外其他的实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图16是图15所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图17是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的另外其他的实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图18是图17所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图19是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的另外其他的实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图20是在图19所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图21是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的另外其他的实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。
图22是在图21所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图23是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的另外其他的实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图24是在图23所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图25是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的另外其他的实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图26是在图25所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。图27是在本发明的模拟移动床方式色谱分离方法的另外其他的实施方式中构成步骤(a)的各子步骤的流程图。图28是在图27所示的步骤(a)结束后，实施步骤(b)，构成之后的步骤(a)的各子步骤的流程图。
具体实施方式
[0013]
对本发明的模拟移动床方式色谱分离方法(以下，也简称为“本发明的方法”)的优选实施方式进行说明。
[0014]
本发明的方法利用将填充有吸附剂的多个单位填充塔经由配管串联且以环状连结的循环系统来实施。用于模拟移动床方式的循环系统本身是公知的，例如，可以参照日本特开2009-36536号公报或日本专利第4606092号公报等。关于该循环系统，使用附图在以下进行说明，但本发明除了在本发明中规定以外，并不限于这些方式。此外，以下提及的附图是用于易于理解本发明的的说明图，存在各结构的尺寸、相对的大小关系为了说明的方便而改变了大小的情况，并不直接表示实际的关系。另外，除了本发明所规定的事项以外，并不限于这些附图所示的形状、相对的位置关系等。另外，本发明中规定的条件以外的条件，例如单位填充塔的容量、配管的管内截面积、长度向循环系统供给的液体的流速等可以根据目的适当设定。
[0015]
在图1中示出用于本发明的方法的循环系统的优选的一个实施方式。图1所示的循环系统100具备4根(单位填充塔10a、10b、10c、10d)填充有吸附剂ab的单位填充塔(柱)，各单位填充塔的出口经由配管1与相邻的单位填充塔的入口连结，作为整体，各单位填充塔串联连结。而且，最后部的单位填充塔(例如单位填充塔10d)的出口经由配管1与最前部的单位填充塔(例如单位填充塔10a)的入口连结，全部单位填充塔以环状(圆环状)连结。通过该结构，在循环系统100内，能够使流体循环。单位填充塔10a～10d的内部的形状、尺寸、吸附剂的填充量可以彼此相同，也可以彼此不同。单位填充塔10a～10d的内部的形状、尺寸、吸附剂的填充量均优选使用等效的内部的形状、尺寸、吸附剂的填充量(优选地，为相同的内部的形状、尺寸、吸附剂的填充量)。
[0016]
在上述循环系统100内，可以配设用于使流体沿箭头方向流通的循环泵p1。循环泵
p1优选为定量泵。另外，在循环系统100内，在彼此相邻的2个单位填充塔之间的配管1，设置有能够阻断流体向其下游侧的单位填充塔的流通的截止阀r1、r2、r3、r4。
[0017]
在各截止阀r1～r4与位于其上游侧的各单位填充塔10a～10d的出口之间，分别分支配设有提取包含大量相对于吸附剂ab的弱吸附性成分的组分(在本说明书中称作“相对于吸附剂ab的弱吸附性组分”或简称为“弱吸附性组分”)的弱吸附性组分提取线2a、2b、2c、2d。在各弱吸附性组分提取线2a、2b、2c、2d，分别设有能够对各弱吸附性组分提取线进行开闭的弱吸附性组分提取阀a1、a2、a3、a4。各弱吸附性组分提取线2a、2b、2c、2d合流而汇集于一个弱吸附性组分合流管2j。
[0018]
另外，同样地，在各截止阀r1～r4与位于其上游侧的各单位填充塔10a～10d的出口之间，分支配设有提取包含大量相对于吸附剂ab的中吸附性成分的组分(在本说明书中称作“相对于吸附剂ab的中吸附性组分”或简称为“中吸附性组分”)的中吸附性组分提取线3a、3b、3c、3d。在各中吸附性组分提取线3a、3b、3c、3d，分别设有能够对各中吸附性组分提取线进行开闭的中吸附性组分提取阀b1、b2、b3、b4。各中吸附性组分提取线3a、3b、3c、3d合流而汇集于一个中吸附性组分合流管3j。
[0019]
另外，同样地，在各截止阀r1～r4与位于其上游侧的各单位填充塔10a～10d的出口之间，分支配设有提取包含大量相对于吸附剂ab的强吸附性成分的组分(在本说明书中称作“相对于吸附剂ab的强吸附性组分”或简称为“强吸附性组分”)的强吸附性组分提取线4a、4b、4c、4d。在各强吸附性组分提取线4a、4b、4c、4d，分别设有能够对各强吸附性组分提取线进行开闭的强吸附性组分提取阀c1、c2、c3、c4。各强吸附性组分提取线4a、4b、4c、4d合流而汇集于一个强吸附性组分合流管4j。
[0020]
在后述的步骤(a)中，弱吸附性组分提取阀a1、a2、a3、a4中的任一个处于开阀的状态。设置有该开阀的弱吸附性组分提取阀的弱吸附性组分提取线与配管1的连结部位成为后述的步骤(a)中的弱吸附性组分的提取口a。另外，在后述的步骤(a)中，中吸附性组分提取阀b1、b2、b3、b4中的任一个处于开阀的状态。设置有该开阀的中吸附性组分提取阀的中吸附性组分提取线与配管1的连结部位成为后述的步骤(a)中的中吸附性组分的提取口b。另外，在后述的步骤(a)中，强吸附性组分提取阀c1、c2、c3、c4中的任一个处于开阀的状态。设置有该开阀的强吸附性组分提取阀的强吸附性组分提取线与配管1的连结部位成为后述的步骤(a)中的强吸附性组分的提取口c。
[0021]
在循环系统100，为了防止循环系统100的压力过度上升，可以在适当的部位设置未图示的安全阀(或溢流阀)。另外，在相邻的2个单位填充塔之间，优选设置逆流防止用的止回阀t1、t2、t3、t4。
[0022]
如图1所示，循环系统100内为能够供给被收容于原液罐6的原液7的结构。另外，循环系统100内为能够供给2种以上的洗脱液的结构。在图1中，作为一个示例，示出了供给4种洗脱液的方式。原液7通过能够控制供给流量的原液供给泵p2经由原液供给线11被供给。原液供给泵p2优选为定量泵。如图1所示，原液供给线11为如下结构，被分支为4根原液供给分支线11a、11b、11c、11d，经由各原液供给分支线11a、11b、11c、11d，能够将原液分别向各单位填充塔10a、10b、10c、10d的入口供给。在各原液供给分支线11a、11b、11c、11d，设有能够开闭
的原液供给阀f1、f2、f3、f4，原液通过具有开阀的原液供给阀的原液供给分支线而被向连结于其下游的单位填充塔供给。在后述的步骤(a)中，上述原液供给阀f1、f2、f3、f4中的任一个处于开阀的状态。设置有该开阀的原液供给阀的原液供给分支线与配管1的连结部位成为后述的步骤(a)中的原液供给口f。
[0023]
图1表示供给解吸力不同的4种洗脱液的方式。收容于洗脱液罐8a的洗脱液9a通过能够控制供给流量的洗脱液供给泵p3而被向洗脱液供给线12供给。收容于洗脱液罐8b的洗脱液9b通过能够控制供给流量的洗脱液供给泵p4被向洗脱液供给线13供给。收容于洗脱液罐8c的洗脱液9c通过能够控制供给流量的洗脱液供给泵p5被向洗脱液供给线14供给。而且，收容于洗脱液罐8d的洗脱液9d通过能够控制供给流量的洗脱液供给泵p6被向洗脱液供给线15供给。洗脱液供给泵p3～p6优选为定量泵。如图1所示，洗脱液供给线12为如下结构，分支为4根洗脱液供给分支线12a、12b、12c、12d，经由各洗脱液供给分支线12a、12b、12c、12d，能够将洗脱液向各单位填充塔10a、10b、10c、10d的入口供给。在各洗脱液供给分支线12a、12b、12c、12d，设置有能够开闭的洗脱液供给阀e1a、e2a、e3a、e4a，洗脱液通过具有开阀的洗脱液供给阀的洗脱液供给分支线而被向连结于其下游的单位填充塔供给。同样地，构成为如下结构，洗脱液供给线13分支为4根洗脱液供给分支线13a、13b、13c、13d，洗脱液供给线14分支为4根洗脱液供给分支线14a、14b、14c、14d，洗脱液供给线15分支为4根洗脱液供给分支线15a、15b、15c、15d，能够将各洗脱液向各单位填充塔10a、10b、10c、10d的入口供给。在洗脱液供给分支线13a、13b、13c、13d，分别设置有能够开闭的洗脱液供给阀e1b、e2b、e3b、e4b，在洗脱液供给分支线14a、14b、14c、14d，分别设置有能够开闭的洗脱液供给阀e1c、e2c、e3c、e4c，在洗脱液供给分支线15a、15b、15c、15d，分别设置有能够开闭的洗脱液供给阀e1d、e2d、e3d、e4d。在后述的步骤(a)中，设置有开阀的洗脱液供给阀的洗脱液供给分支线与配管1的连结部位成为洗脱液供给口d。在本发明的方法中，由于使用2种以上洗脱液，因此在后述的步骤(a)中，有多个开阀的洗脱液供给阀。因此，在后述的步骤(a)中，洗脱液供给口d存在于所使用的洗脱液的种类对应的数量(2个以上)。
[0024]
接着，对通过上述循环系统实施本发明的方法时的循环系统的动作进行说明，但本发明除了在本发明中规定以外，并不限于这些实施方式。在本发明的方法中，循环系统将原液供给口f、弱吸附性组分的提取口a、中吸附性组分的提取口b以及强吸附性组分的提取口c的位置设为满足下述(a)～(c)的关系。即，在后述的步骤(a)以及(b)的重复中，原液供给口f、弱吸附性组分的提取口a、中吸附性组分的提取口b以及强吸附性组分的提取口c的彼此的相对的位置关系始终满足该(a)～(c)。
[0025]
(a)将中吸附性组分提取口b隔着至少1个单位填充塔(至少一个区段)而设置于原液供给口f的下游侧。
[0026]
(b)将强吸附性组分提取口c设置于具有原液供给口f的配管，或者将强吸附性组分提取口c隔着至少1个单位填充塔(至少一个区段)而设置于原液供给口f的上游侧。在此，“将强吸附性组分提取口c设置于具有原液供给口f的配管”是指在强吸附性
组分提取口c与原液供给口f之间没有配置单位填充塔。另外，在“将强吸附性组分提取口c设置于具有原液供给口f的配管”情况下，强吸附性组分提取口c设置在比原液供给口f更靠相同配管的上游侧。这适用于设置于相同配管的提取口与供给口的全部关系。也就是说，在循环系统中，在某个提取口和供给口设置于相同配管的情况下(不隔着单位填充塔而设置有提取口和供给口的情况)，将提取口配置在比供给口更靠相同配管的上游侧。这是为了防止在供给的液体到达其下游的单位填充塔之前，该液体从提取口被提取。上述(b)优选为将强吸附性组分提取口c隔着至少1个单位填充塔(至少一个区段)而设置于原液供给口f的上游侧的方式。
[0027]
(c)将弱吸附性组分提取口a设置于具有中吸附性组分提取口b的配管，或者将弱吸附性组分提取口a隔着至少1个单位填充塔(至少一个区段)而设置于中吸附性组分提取口b的下游侧。在此，“将弱吸附性组分提取口a设置于具有中吸附性组分提取口b的配管”是指在弱吸附性组分提取口a与中吸附性组分提取口b之间没有配置单位填充塔。上述(c)优选为将弱吸附性组分提取口a隔着至少1个单位填充塔(至少一个区段)而设置于中吸附性组分提取口b的下游侧的方式。
[0028]
在本发明的方法中，使用上述循环系统，依次重复下述步骤(a)以及(b)。
[0029]
[步骤(a)]将原液、2种以上的洗脱液分别从原液供给口f、2个以上的洗脱液供给口d同时供给或者单独供给，并且将弱吸附性组分、中吸附性组分以及强吸附性组分分别从弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b、强吸附性组分提取口c同时提取或者单独提取的步骤。在此，在步骤(a)中，从原液供给口f供给的原液体的量和从洗脱液供给口d供给的洗脱液体的量的合计与从弱吸附性组分提取口a提取的弱吸附性组分的量和从中吸附性组分提取口b提取的中吸附性组分的量和从强吸附性组分提取口c提取的强吸附性组分c的量的合计一致。即，在液体在循环系统内被供给的状态下，液体以与其相同的量被从循环系统内提取。更详细地说明的话，在从某供给口(x)供给液体，并从其下游侧的提取口(y)提取液体的情况下，在比x靠下游侧而从比y靠上游侧没有供给液体的情况下，从y提取的液体的量与从x供给的液体的量相同。另外，在比x靠下游侧而从比y靠上游侧供给液体的情况下，从y提取的液体的量与从x供给的液体的量和在比x靠下游侧且从比y靠上游侧供给的液体的量的合计相同。例如在图2的子步骤(a1-1)中，从洗脱液供给口d1供给的洗脱液的供给量与从强吸附性组分提取口c提取的强吸附性组分的提取量相同。另外，同样在子步骤(a1-1)中，从洗脱液供给口d2供给的洗脱液的供给量和从原液供给口f供给的原液的供给量的合计与从弱吸附性组分提取口a提取的弱吸附性组分的量相同。另外，上述的“同时供给或者单独供给”是指不设置时间上的差而(不错开供给的定时)进行供给，或者设置时间上的差(错开供给的定时)而进行供给。但是，在一个步骤(a)内，在相同配管配置供给2种以上的液体的2个以上的供给口的情况(在配管不隔着单位填充塔而配置2个以上的供给口，并从该2个以上的各供给口供给不同液体的情况)下，该2种
以上的液体的供给不同时进行。即，在一个步骤(a)中，将该2种以上的液体的供给作为不同的子步骤来进行。同样地，在一个步骤(a)内，在相同配管配置提取2种以上的组分的2个以上的提取口的情况(在配管不隔着单位填充塔而配置2个以上的提取口，并从该2个以上的各提取口提取不同的组分的情况)下，该2种以上的组分的提取不同时进行。即，在一个步骤(a)中，将该2种以上的组分的提取作为不同的子步骤来进行。
[0030]
[步骤(b)]所述步骤(a)结束后，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移的步骤。向该下游侧的转移是指使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移1个单位填充塔的量。例如，在步骤(a)中，在设置有原液供给阀f1的原液供给分支线与配管1的连结部位为原液供给口f的情况下，通过步骤(b)，该原液供给口f向设置有原液供给阀f2的原液供给分支线与配管1的连结部位转移。这对于所述洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c也是同样的。另外，上述的各供给口以及提取口向下游侧转移1个单位填充塔的量能够通过调节配置于循环系统的各种泵、各种阀的开闭来进行。通过步骤(b)的实施，在接着的步骤(a)(称为步骤(a2))中，在该步骤(b)之前的步骤(a)(称为步骤(a1))中，与对各单位填充塔进行的相同，针对比步骤(a1)靠下游侧一个量的各单位填充塔进行液体的供给以及提取。
[0031]
上述步骤(a)优选由多个子步骤构成。在该情况下，在不损害本发明的效果的范围内，在哪个子步骤进行来自原液供给口f的原液的供给、来自2个以上的洗脱液供给口d的2种以上的各洗脱液的供给、来自弱吸附性组分提取口a的弱吸附性组分的提取、来自中吸附性组分提取口b的中吸附性组分的提取、来自强吸附性组分提取口c的强吸附性组分的提取可以根据目的而适当设定。其中，在本发明的方法中，上述步骤(a)优选包括供给原液的子步骤和不供给原液的子步骤。即，在步骤(a)中，优选存在供给原液的时间和不供给原液的时间。
[0032]
在步骤(a)中，供给2种以上的洗脱液。优选将这些2种以上的洗脱液当中解吸力最强的洗脱液的供给口相对于强吸附性组分提取口c隔着单位填充塔而设置于上游侧的配管。关于剩余的洗脱液的供给口或原液供给口，优选设置于与解吸力最强的洗脱液的供给口相同的配管，或者与解吸力最强的洗脱液的供给口相比，隔着单位填充塔而设置于更靠上游侧。“设置于与解吸力最强的洗脱液的供给口相同的配管，或者与解吸力最强的洗脱液的供给口相比，隔着单位填充塔而设置于更靠上游侧”是指将除最强的洗脱液以外的洗脱液的供给口或原液供给口设置于将设置有最强的洗脱液的供给口的配管作为始点而向上游侧前进并到达设置有强吸附性组分提取口c的配管为止之间的任一配管(换言之，是指将除最强的洗脱液以外的洗脱液的供给口或原液供给口设置于将设置有强吸附性组分提取口c的配管作为始点而向下游侧前进并到达设置有最强的洗脱液的供给口的配管为止之间的任一配管。进一步换言之，是指在最强的洗脱液的供给口与强吸附性组分提取口c之间设
置有2个以上的单位填充塔的情况下，在连结该2个以上的单位填充塔彼此的配管，不设置洗脱液的供给口或原液供给口)。在该情况下，在除最强的洗脱液以外的洗脱液有2种以上的情况下，与其对应的2个以上的供给口的一部分可以设置于相同配管，也可以分别隔着单位填充塔而设置于不同的配管。另外，除最强的洗脱液以外的洗脱液的供给口和原液供给口可以设置于相同配管。此外，将除解吸力最强的洗脱液以外的洗脱液的供给口当中的1个供给口设置于与解吸力最强的洗脱液的供给口相同的配管是本发明的优选的一个实施方式。
[0033]
在步骤(a)中，在供给2种以上的洗脱液当中解吸力最强的洗脱液期间，优选从其下游提取与解吸力最强的洗脱液的供给量相同的量的强吸附性组分的方式。在此情况下，优选为如下方式，在从解吸力最强的洗脱液的供给口到其下游的强吸附性组分提取口之间，配置至少1个单位填充塔，另外，在其之间不存在其他的供给口。
[0034]
在步骤(a)中，优选设置一边供给2种以上的洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液，一边从其下游提取与解吸力第二强的洗脱液的供给量相同的量的中吸附性组分的时间段(子步骤)。在此情况下，在从解吸力第二强的洗脱液的供给口到其下游的中吸附性组分提取口为止之间，配置至少1个单位填充塔(优选地，为多个单位填充塔)。另外，即使在从设置有解吸力第二强的洗脱液的供给口的配管到其下游侧的设置有中吸附性组分提取口的配管为止之间存在其他的供给口，在上述的提取中吸附性组分的时间段也不从该其他的供给口供给液体。
[0035]
在实施步骤(a)的期间，优选始终提取弱吸附性组分。因此，在由多个子步骤构成步骤(a)的情况下，也优选在该多个子步骤中，始终提取弱吸附性组分。
[0036]
在本发明的方法中，优选使用解吸力彼此不同的3种以上的洗脱液，更优选使用解吸力彼此不同的4种以上的洗脱液，进一步优选使用解吸力彼此不同的4～6种洗脱液，特别优选使用解吸力彼此不同的4种或5种洗脱液。洗脱液的种类没有特别限制，根据与吸附剂的种类、原液中的成分的种类的关系适当设定。例如，在作为吸附剂使用离子交换树脂的情况下，通过改变洗脱液的盐浓度，能够制备解吸力不同的多个洗脱液。例如，在使用阳离子交换树脂的情况下，可以将改变了nacl浓度的多个洗脱液用作2种以上的洗脱液。
[0037]
关于上述步骤(a)中的子步骤的组合的优选实施方式，在以下进行说明。这些方式的实施能够使用图1的系统或者使用以图1的系统为基准的能够实施目的的方式的系统来进行。另外，下述的实施方式是本发明的一个示例，例如，从相对的解吸力的观点出发，也可以准备作为下述的洗脱液d-1被定位的2种以上的洗脱液，并在供给洗脱液d-1的子步骤之间，改变所使用的洗脱液d-1的种类。这对于洗脱液d-ii～d-v也是同样的。即，在本发明中，在某实施方式中称为“洗脱液d-1”的情况下，在该实施方式中，在不同的子步骤中使用“洗脱液d-1”的情况下，在不同的子步骤中使用的“洗脱液d-1”可以彼此相同，也可以彼此不同。这对于洗脱液d-ii～d-v也是同样的。
[0038]-实施方式1-在实施方式1中，使用具有4个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的4个区段即区段1～4。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。
在该实施方式1中，在步骤(a)中进行下述子步骤(a1-1)、(a2-1)以及(a3-1)。在本发明中，“在步骤(a)中进行子步骤x、y以及z”是指步骤(a)包括子步骤x、y以及z，进行子步骤x、y以及z的顺序在不损害本发明的效果的范围内可以适当设定。另外，步骤(a)除了子步骤x、y以及z以外，也可以包含其他的子步骤。作为“在步骤(a)中进行子步骤x、y以及z”的方式，典型地，可列举作为步骤(a)依次进行子步骤x、y以及z的方式，但本发明不限于该方式。即，“在步骤(a)中进行子步骤x、y以及z”不限于在紧接着子步骤x之后进行子步骤y，并在紧接着子步骤y之后进行子步骤z，并在紧接着子步骤z之后进行步骤(b)，并在紧接着步骤(b)之后进行子步骤x的方式。例如，在包括上述的其他子步骤的方式中，在子步骤x之前(步骤(b)与子步骤x之间)、子步骤x与y之间、子步骤y与z之间、子步骤z与步骤(b)之间的至少1个中，在不损害本发明的效果的范围内，可以加入其他的子步骤(除子步骤x、y以及z以外的子步骤)。通过调整供给流量、流速、洗脱液强度等，即使引入除子步骤x、y以及z以外的附加的子步骤，有时也能够得到目标效果，这对于与本说明书接触的本领域技术人员来说是容易理解的。
[0039]
《子步骤(a1-1)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i而从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，且将区段4的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段3以及4中流通的洗脱液的解吸力比在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱。在子步骤(a1-1)中，连续地进行上述的各液的供给和各组分的提取(即，在子步骤(a1-1)中，始终不间断地进行上述的各液的供给和各组分的提取的全部)。这在以下说明的各子步骤中也是同样的。另外，在本发明或本说明书中，在各子步骤中说明的洗脱液的解吸力的强弱的说明是该子步骤内的洗脱液的解吸力的强弱，而不是说明不同子步骤中的洗脱液的解吸力的强弱的说明。例如，在说明在构成步骤(a)的一个子步骤中使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，并在构成该步骤(a)的其他子步骤中也说明了使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强的情况下，在该一个子步骤中在区段1中流通的洗脱液的解吸力与在该其他子步骤中在区段1中流通的洗脱液的解吸力可以相同，也可以不同。
[0040]
《子步骤(a2-1)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，
且使在区段3以及4中流通的洗脱液的解吸力比在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱。该子步骤(a2-1)中的洗脱液供给口d-iii设置于与上述子步骤(a1-1)中的原液供给口f相同的配管。
[0041]
《子步骤(a3-1)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段3的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4中流通的洗脱液的解吸力比在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0042]
优选地，上述子步骤(a2-1)中在区段3以及4中流通的洗脱液的解吸力与上述子步骤(a3-1)中在区段4中流通的洗脱液的解吸力相同。
[0043]
作为上述子步骤(a1-1)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a1-1ex)的子步骤，但上述子步骤(a1-1)不限于子步骤(a1-1ex)。《子步骤(a1-1ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给4种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f，从该原液供给口f供给原液，且将区段4的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a，从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0044]
作为上述子步骤(a2-1)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a2-1ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-1)不限于子步骤(a2-1ex)。《子步骤(a2-1ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。该子步骤(a2-1ex)中的洗脱液供给口d3设置于与上述子步骤(a1-1)中的原液供给口f相同的配管。
[0045]
作为上述子步骤(a3-1)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a3-1ex)的子步骤，但上述子步骤(a3-1)不限于子步骤(a3-1ex)。《子步骤(a3-1ex)》从所述洗脱液供给口d1供给洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段3的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0046]
以各区段具有1个单位填充塔的情况为例，在图2中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-1ex)、(a2-1ex)以及(a3-1ex)的情况下的流程图。在图2中，四方形的包围线表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号(从左起依次编号)。依次进行上述子步骤(a1-1ex)、(a2-1ex)以及(a3-1ex)的步骤(a)结束后，通过步骤(b)，使原液供给口f、所述洗脱液供给口d、所述弱吸附性组分提取口a、所述中吸附性组分提取口b以及所述强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图3中示出依次进行了上述子步骤(a1-1ex)、(a2-1ex)以及(a3-1ex)的情况下的流程图。图2所示的配置于各区段的单位填充塔在图3中一个一个向下游侧移动。在此情况下，将从图2所示的步骤(a)开始并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行4组，从而再次返回到图2所示的形态。
[0047]-实施方式2-实施方式2也与实施方式1同样地，使用具有4个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的4个区段即区段1～4。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。在该实施方式2中，作为步骤(a)，依次进行下述子步骤(a1-2)、(a2-2)以及(a3-2)。
[0048]
《子步骤(a1-2)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，且将区段4的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1以及2中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段3以及4中流通的洗脱液的解吸力比在区段1以及2中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0049]
《子步骤(a2-2)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，
将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段3以及4中流通的洗脱液的解吸力比在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱。该子步骤(a2-2)中的洗脱液供给口d-i设置于与上述子步骤(a1-2)中的洗脱液供给口d-ii相同的配管。另外，洗脱液供给口d-iii设置于与原液供给口f相同的配管。在该子步骤(a2-2)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力优选比在上述子步骤(a1-2)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力强。
[0050]
《子步骤(a3-2)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从子步骤(a2-2)中的所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段3的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4中流通的洗脱液的解吸力比在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0051]
作为上述子步骤(a1-2)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a1-2ex)的子步骤，但上述子步骤(a1-2)不限于子步骤(a1-2ex)。《子步骤(a1-2ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f，从该原液供给口f供给原液，且将区段4的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a，从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0052]
作为上述子步骤(a2-2)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a2-2ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-2)不限于子步骤(a2-2ex)。《子步骤(a2-2ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给4种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液
当中解吸力最弱的洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。该子步骤(a2-2ex)中的洗脱液供给口d1设置于与上述子步骤(a1-2ex)中的洗脱液供给口d2相同的配管。另外，洗脱液供给口d3设置于与上述子步骤(a1-2ex)中的原液供给口f相同的配管。
[0053]
作为上述子步骤(a3-2)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a3-2ex)的子步骤，但上述子步骤(a3-2)不限于子步骤(a3-2ex)。《子步骤(a3-2ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从子步骤(a2-2ex)中的所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段3的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0054]
以各区段具有1个单位填充塔的情况为例，在图4中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-2ex)、(a2-2ex)以及(a3-2ex)的情况下的流程图。在图4中，四方形的包围线表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号。依次进行上述子步骤(a1-2ex)、(a2-2ex)以及(a3-2ex)的步骤(a)结束后，通过步骤(b)，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图5中示出依次进行了上述子步骤(a1-2ex)、(a2-2ex)以及(a3-2ex)的情况下的流程图。图4所示的配置于各区段的单位填充塔在图5中一个一个向下游侧移动。在此情况下，将从图4所示的步骤(a)开始并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行4组，从而再次返回到图4所示的形态。
[0055]-实施方式3-实施方式3使用具有5个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的5个区段即区段1～5。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。在该实施方式3中，作为步骤(a)，依次进行下述子步骤(a1-3)、(a2-3)以及(a3-3)。
[0056]
《子步骤(a1-3)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1以及2中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段3中流通的洗脱液的解吸力与在区段1以及2中流通的洗脱液的解吸力相
同或者比在区段1以及2中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0057]
《子步骤(a2-3)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，从所述洗脱液供给口d-iii供给所述洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱。在该子步骤(a2-3)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力优选比在上述子步骤(a1-3)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力强。该子步骤(a2-3)中的洗脱液供给口d-i设置于与上述子步骤(a1-3)中的洗脱液供给口d-ii相同的配管。
[0058]
《子步骤(a3-3)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从子步骤(a2-3)中的所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段4的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段5的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2、区段3以及区段4中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段5中流通的洗脱液的解吸力比在区段2、区段3以及区段4中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0059]
作为上述子步骤(a1-3)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a1-3ex)的子步骤，但上述子步骤(a1-3)不限于子步骤(a1-3ex)。《子步骤(a1-3ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f，从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a，从该提取口a提取弱吸附性组分。
4)。
[0064]
《子步骤(a1-4)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且将区段5的下游侧末端作为所述提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1以及2中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段3中流通的洗脱液的解吸力与在区段1以及2中流通的洗脱液的解吸力相同或者比在区段1以及2中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0065]
《子步骤(a2-4)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱。在该子步骤(a2-4)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力优选比在上述子步骤(a1-4)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力强。该子步骤(a2-4)中的洗脱液供给口d-i设置于与上述子步骤(a1-4)中的洗脱液供给口d-ii相同的配管。
[0066]
《子步骤(a3-4)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从子步骤(a2-4)中的所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段4的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段5的上游侧末端作为洗脱液供给口d-v，从该洗脱液供给口d-v供给洗脱液d-v，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2、区段3以及区段4中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段5中流通的洗脱液的解吸力比在区段2、区段3以及区段4中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0067]
作为上述子步骤(a1-4)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a1-4ex)的子步骤，但上述子步骤(a1-4)不限于子步骤(a1-4ex)。
《子步骤(a1-4ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给5种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f，从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给5种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a，从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0068]
优选地，上述子步骤(a3-3)中在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力与上述子步骤(a3-4)中在区段5中流通的洗脱液的解吸力相同。
[0069]
作为上述子步骤(a2-4)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a2-4ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-4)不限于子步骤(a2-4ex)。《子步骤(a2-4ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给5种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给5种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给5种洗脱液当中解吸力第四强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。该子步骤(a2-4ex)中的洗脱液供给口d1设置于与上述子步骤(a1-4ex)中的洗脱液供给口d2相同的配管。
[0070]
作为上述子步骤(a3-4)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a3-4ex)的子步骤，但上述子步骤(a3-4)不限于子步骤(a3-4ex)。《子步骤(a3-4ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从子步骤(a2-4ex)中的所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段4的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段5的上游侧末端作为洗脱液供给口d5，从该洗脱液供给口d5供给5种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d5，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0071]
在图8中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-4ex)、(a2-4ex)以及(a3-4ex)的情况下的流程的一个示例。在图8中，四方形的包围线表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号。另外，图8所示的方式具有7个单位填充塔，在区段1包括1个单位填充塔，在区段2包括2个单位填充塔，在区段3包括2个单位填充塔，在区段4包括1个单位
填充塔，在区段5包括1个单位填充塔。依次进行上述子步骤(a1-4ex)、(a2-4ex)以及(a3-4ex)的步骤(a)结束后，通过步骤(b)，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图9中示出依次进行了上述子步骤(a1-4ex)、(a2-4ex)以及(a3-4ex)的情况下的流程图。图8所示的配置于各区段的单位填充塔在图9中是一个一个单位填充塔的量向下游侧移动的。在此情况下，将从图8所示的步骤(a)开始并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行7组，从而再次返回到图8所示的形态。
[0072]-实施方式5-实施方式5使用具有5个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的5个区段即区段1～5。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。在该实施方式5中，作为步骤(a)，依次进行下述子步骤(a1-5)、(a2-5)以及(a3-5)。
[0073]
《子步骤(a1-5)》将区段3的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段3中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0074]
《子步骤(a2-5)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii作为来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，从所述洗脱液供给口d-iii供给所述洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0075]
《子步骤(a3-5)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段4的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段5的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2、区段3以及区段4中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液
的解吸力弱，且使在区段5中流通的洗脱液的解吸力比在区段2、区段3以及区段4中流通的洗脱液的解吸力弱。优选地，该子步骤(a3-5)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力与上述子步骤(a2-5)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力相同。
[0076]
作为上述子步骤(a1-5)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a1-5ex)的子步骤，但上述子步骤(a1-5)不限于子步骤(a1-5ex)。《子步骤(a1-5ex)》将区段3的上游侧末端作为原液供给口f，从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a，从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0077]
作为上述子步骤(a2-5)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a2-5ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-5)不限于子步骤(a2-5ex)。《子步骤(a2-5ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给4种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，从所述洗脱液供给口d3供给所述洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0078]
作为上述子步骤(a3-5)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a3-5ex)的子步骤，但上述子步骤(a3-5)不限于子步骤(a3-5ex)。《子步骤(a3-5ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段4的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段5的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0079]
以各区段具有1个单位填充塔的情况为例，在图13中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-5ex)、(a2-5ex)以及(a3-5ex)的情况下的流程图。在图13中，四方形的包围线表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号。依次进行上述子步骤(a1-5ex)、(a2-5ex)以及(a3-5ex)的步骤(a)结束后，通过步
骤(b)，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图14中示出依次进行了上述子步骤(a1-5ex)、(a2-5ex)以及(a3-5ex)的情况下的流程图。图13所示的配置于各区段的单位填充塔在图14中一个一个向下游侧移动。在此情况下，将从图13所示的步骤(a)开始并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行5组，从而再次返回到图13所示的形态。
[0080]-实施方式6-实施方式6使用具有5个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的5个区段即区段1～5。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。在该实施方式6中，作为步骤(a)，依次进行下述子步骤(a1-6)、(a2-6)以及(a3-6)。
[0081]
《子步骤(a1-6)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1、区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段1、区段2以及区段3中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0082]
《子步骤(a2-6)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为所述原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段3中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱。在该子步骤(a2-6)在区段1中流通的洗脱液的解吸力优选比在上述子步骤(a1-6)在区段1中流通的洗脱液的解吸力强。该子步骤(a2-6)中的洗脱液供给口d-i设置于与上述子步骤(a1-6)中的洗脱液供给口d-ii相同的配管。
[0083]
《子步骤(a3-6)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，从所述洗脱液供给口d-iii供给所述洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由
此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱。优选地，该子步骤(a3-6)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力与上述子步骤(a2-6)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力相同。
[0084]
作为上述子步骤(a1-6)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a1-6ex)的子步骤，但上述子步骤(a1-6)不限于子步骤(a1-6ex)。《子步骤(a1-6ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段3的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a，从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0085]
作为上述子步骤(a2-6)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a2-6ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-6)不限于子步骤(a2-6ex)。《子步骤(a2-6ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给4种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f，从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0086]
作为上述子步骤(a3-6)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a3-6ex)的子步骤，但上述子步骤(a3-6)不限于子步骤(a3-6ex)。《子步骤(a3-6ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，从所述洗脱液供给口d3供给所述洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0087]
以各区段具有1个单位填充塔的情况为例，在图15中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-6ex)、(a2-6ex)以及(a3-6ex)的情况下的流程图。在图15中，四方形的包围线表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号。依次进行上述子步骤(a1-6ex)、(a2-6ex)以及(a3-6ex)的步骤(a)结束后，通过步骤(b)，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图16中示出依次进行了上述子步骤(a1-6ex)、(a2-6ex)以及(a3-6ex)的情况下的流程图。图15所示的配置于各区段的单位填充塔在图16中一个一个向下游侧转移。在此情况下，将从图15所示的步骤(a)开始并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行5组，从而再次返回到图15所示的形态。
[0088]-实施方式7-实施方式7使用具有5个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的5个区段即区段1～5。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。在该实施方式7中，作为步骤(a)，依次进行下述子步骤(a1-7)、(a2-7)以及(a3-7)。
[0089]
《子步骤(a1-7)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且将区段5的下游侧末端作为所述提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段3中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0090]
《子步骤(a2-7)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，从所述洗脱液供给口d-iii供给所述洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力比在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0091]
《子步骤(a3-7)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段4的下游侧末端作为中吸附性组分
提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段5的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2、区段3以及区段4中流通的洗脱液的解吸力比在区段1中流通的洗脱液的解吸力弱，且使在区段5中流通的洗脱液的解吸力比在区段2、区段3以及区段4中流通的洗脱液的解吸力弱。
[0092]
作为上述子步骤(a1-7)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a1-7ex)的子步骤，但上述子步骤(a1-7)不限于子步骤(a1-7ex)。《子步骤(a1-7ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给4种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为原液供给口f，从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a，从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0093]
作为上述子步骤(a2-7)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a2-7ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-7)不限于子步骤(a2-7ex)。《子步骤(a2-7ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d3供给所述洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0094]
作为上述子步骤(a3-7)的一个示例，可列举实施下述子步骤(a3-7ex)的子步骤，但上述子步骤(a3-7)不限于子步骤(a3-7ex)。《子步骤(a3-7ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段4的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段5的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0095]
以各区段具有1个单位填充塔的情况为例，在图17中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-7ex)、(a2-7ex)以及(a3-7ex)的情况下的流程图。在图17中，四方形的包围线
表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号。依次进行上述子步骤(a1-7ex)、(a2-7ex)以及(a3-7ex)的步骤(a)结束后，通过步骤(b)，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图18中示出依次进行了上述子步骤(a1-7ex)、(a2-7ex)以及(a3-7ex)的情况下的流程图。图17所示的配置于各区段的单位填充塔在图18中一个一个向下游侧移动。在此情况下，将从图17所示的步骤(a)开始，并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行5组，再次返回到图17所示的形态。
[0096]-实施方式8-实施方式8使用具有3个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的3个区段即区段1～3。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。在该实施方式8中，作为步骤(a)，依次进行下述子步骤(a1-8)、(a2-8)、(a3-8)以及(a4-8)。
[0097]
《子步骤(a1-8)》将区段2的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，且将区段3的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0098]
《子步骤(a2-8)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力。
[0099]
《子步骤(a3-8)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2中流通的洗脱液的解吸力。
[0100]
《子步骤(a4-8)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段2的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，
使在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2中流通的洗脱液的解吸力。优选地，该子步骤(a4-8)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力与上述子步骤(a3-8)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力相同。
[0101]
作为上述子步骤(a2-8)的一例，可列举实施下述子步骤(a2-8ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-8)不限于子步骤(a2-8ex)。《子步骤(a2-8ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0102]
作为上述子步骤(a3-8)的一例，可列举实施下述子步骤(a3-8ex)的子步骤，但上述子步骤(a3-8)不限于子步骤(a3-8ex)。《子步骤(a3-8ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给4种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0103]
作为上述子步骤(a4-8)的一例，可列举实施下述子步骤(a4-8ex)的子步骤，但上述子步骤(a4-8)不限于子步骤(a4-8ex)。《子步骤(a4-8ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段2的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0104]
以各区段具有1个单位填充塔的情况为例，在图19中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-8)、(a2-8ex)、(a3-8ex)以及(a4-8ex)的情况下的流程图。在图19中，四方形的包围线表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号。依次进行上述子步骤(a1-8)、(a2-8ex)、(a3-8ex)以及(a4-8ex)的步骤(a)结束
后，通过步骤(b)，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图20中示出依次进行了上述子步骤(a1-8)、(a2-8ex)、(a3-8ex)以及(a4-8ex)的情况下的流程图。图19所示的配置于各区段的单位填充塔在图20中一个一个向下游侧移动。在此情况下，将从图19所示的步骤(a)开始并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行3组，从而再次返回到图19所示的形态。
[0105]-实施方式9-实施方式9使用具有3个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的3个区段即区段1～3。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。在该实施方式9中，作为步骤(a)，依次进行下述子步骤(a1-9)、(a2-9)、(a3-9)以及(a4-9)。
[0106]
《子步骤(a1-9)》将区段2的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，且将区段3的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0107]
《子步骤(a2-9)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力。
[0108]
《子步骤(a3-9)》从所述洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1以及2中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1以及2中流通的洗脱液的解吸力。
[0109]
《子步骤(a4-9)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段2的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2中流通的洗脱液的解吸力。
[0110]
作为上述子步骤(a2-9)的一例，可列举实施下述子步骤(a2-9ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-9)不限于子步骤(a2-9ex)。《子步骤(a2-9ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0111]
作为上述子步骤(a3-9)的一例，可列举实施下述子步骤(a3-9ex)的子步骤，但上述子步骤(a3-9)不限于子步骤(a3-9ex)。《子步骤(a3-9ex)》从所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0112]
作为上述子步骤(a4-9)的一例，可列举实施下述子步骤(a4-9ex)的子步骤，但上述子步骤(a4-9)不限于子步骤(a4-9ex)。《子步骤(a4-9ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给4种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段2的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0113]
以各区段具有1个单位填充塔的情况为例，在图21中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-9)、(a2-9ex)、(a3-9ex)以及(a4-9ex)的情况下的流程图。在图21中，四方形的包围线表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号。依次进行上述子步骤(a1-9)、(a2-9ex)、(a3-9ex)以及(a4-9ex)的步骤(a)结束后，通过步骤(b)，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图22中示出依次进行了上述子步骤(a1-9)、(a2-9ex)、(a3-9ex)以及(a4-9ex)的情况下的流程图。图21所示的配置于各区段的单位填充塔在图22中一个一个向下游侧移动。在此情况下，将从图21所示的步骤(a)开始并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行3组，从而再次返回到图21所示的形态。
[0114]-实施方式10-实施方式10使用具有3个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的3个区段即区段1～3。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。在该实施方式10中，作为步骤(a)，依次进行下述子步骤(a1-10)、(a2-10)、(a3-10)以及(a4-10)。
[0115]
《子步骤(a1-10)》将区段2的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，且将区段3的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0116]
《子步骤(a2-10)》将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分。此时，子步骤(a1-10)的原液与洗脱液d-iv的解吸力的关系设定为原液≤d-iv。
[0117]
《子步骤(a3-10)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2中流通的洗脱液的解吸力。
[0118]
《子步骤(a4-10)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段2的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2中流通的洗脱液的解吸力。优选地，该子步骤(a4-10)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力与上述子步骤(a3-10)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力相同。
[0119]
作为上述子步骤(a2-10)的一例，可列举实施下述子步骤(a2-10ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-10)不限于子步骤(a2-10ex)。《子步骤(a2-10ex)》将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0120]
作为上述子步骤(a3-10)的一例，可列举实施下述子步骤(a3-10ex)的子步骤，但
上述子步骤(a3-10)不限于子步骤(a3-10ex)。《子步骤(a3-10ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给4种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0121]
作为上述子步骤(a4-10)的一例，可列举实施下述子步骤(a4-10ex)的子步骤，但上述子步骤(a4-10)不限于子步骤(a4-10ex)。《子步骤(a4-10ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段2的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0122]
以各区段具有1个单位填充塔的情况为例，在图23中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-10)、(a2-10ex)、(a3-10ex)以及(a4-10ex)的情况下的流程图。在图23中，四方形的包围线表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号。依次进行上述子步骤(a1-10)、(a2-10ex)、(a3-10ex)以及(a4-10ex)的步骤(a)结束后，通过步骤(b)，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图24中示出依次进行了上述子步骤(a1-10)、(a2-10ex)、(a3-10ex)以及(a4-10ex)的情况下的流程图。图23所示的配置于各区段的单位填充塔在图24中一个一个向下游侧移动。在此情况下，将从图23所示的步骤(a)开始并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行3组，从而再次返回到图23所示的形态。
[0123]-实施方式11-实施方式11使用具有5个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的5个区段即区段1～5。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。在该实施方式11中，作为步骤(a)，依次进行下述子步骤(a1-11)、(a2-11)以及(a3-11)
[0124]
《子步骤(a1-11)》
将区段3的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段3中流通的洗脱液的解吸力最强，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段3中流通的洗脱液的解吸力。
[0125]
《子步骤(a2-11)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，从所述洗脱液供给口d-iii供给所述洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力。
[0126]
《子步骤(a3-11)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段3的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力。优选地，该子步骤(a3-11)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力与上述子步骤(a2-11)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力相同。
[0127]
作为上述子步骤(a1-11)的一例，可列举实施下述子步骤(a1-11ex)的子步骤，但上述子步骤(a1-11)不限于子步骤(a1-11ex)。《子步骤(a1-11ex)》将区段3的上游侧末端作为原液供给口f，从该原液供给口f供给原液，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a，从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0128]
作为上述子步骤(a2-11)的一例，可列举实施下述子步骤(a2-11ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-11)不限于子步骤(a2-11ex)。
《子步骤(a2-11ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给4种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，从所述洗脱液供给口d3供给所述洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0129]
作为上述子步骤(a3-11)的一例，可列举实施下述子步骤(a3-11ex)的子步骤，但上述子步骤(a3-11)不限于子步骤(a3-11ex)。《子步骤(a3-11ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段3的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0130]
以各区段具有1个单位填充塔的情况为例，在图25中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-11ex)、(a2-11ex)以及(a3-11ex)的情况下的流程图。在图25中，四方形的包围线表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号。依次进行上述子步骤(a1-11ex)、(a2-11ex)以及(a3-11ex)的步骤(a)结束后，通过步骤(b)，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图26中示出依次进行了上述子步骤(a1-11ex)、(a2-11ex)以及(a3-11ex)的情况下的流程图。图25所示的配置于各区段的单位填充塔在图26中一个一个向下游侧移动。在此情况下，将从图25所示的步骤(a)开始并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行5组，从而再次返回到图25所示的形态。
[0131]-实施方式12-实施方式12使用具有5个以上的单位填充塔的循环系统。而且，设想将该循环系统以各区段具有至少1个单位填充塔的方式从上游侧向下游侧划分为以圆环状连续的5个区段即区段1～5。另外，作为洗脱液，使用解吸力不同的4种洗脱液d-i～d-iv。在该实施方式12中，作为步骤(a)，依次进行下述子步骤(a1-12)、(a2-12)、(a3-12)以及(a4-12)。
[0132]
《子步骤(a1-12)》将区段3的上游侧末端作为原液供给口f来从该原液供给口f供给原液，且将区段5的下游侧末端作为弱吸附性组分提取口a来从该提取口a提取弱吸附性组分。
[0133]
《子步骤(a2-12)》将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分。此时，子步骤(a1-9)中的原液与洗脱液d-iv的解吸力的关系设定为原液≤d-iv。
[0134]
《子步骤(a3-12)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d-i来从该洗脱液供给口d-i供给洗脱液d-i，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c来从该提取口c提取强吸附性组分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d-ii来从该洗脱液供给口d-ii供给洗脱液d-ii，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iii来从该洗脱液供给口d-iii供给洗脱液d-iii，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力。
[0135]
《子步骤(a4-12)》从所述洗脱液供给口d-i供给所述洗脱液d-i，从所述提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d-ii供给所述洗脱液d-ii，将区段3的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b来从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d-iv来从该洗脱液供给口d-iv供给洗脱液d-iv，且从所述提取口a提取弱吸附性组分，由此，使在区段1中流通的洗脱液的解吸力最强，使在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段1中流通的洗脱液的解吸力，且使在区段4以及5中流通的洗脱液的解吸力弱于在区段2以及3中流通的洗脱液的解吸力。优选地，该子步骤(a4-12)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力与上述子步骤(a3-12)中在区段1中流通的洗脱液的解吸力相同。
[0136]
作为上述子步骤(a2-12)的一例，可列举实施下述子步骤(a2-12ex)的子步骤，但上述子步骤(a2-12)不限于子步骤(a2-12ex)。《子步骤(a2-12ex)》将区段3的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0137]
作为上述子步骤(a3-12)的一例，可列举实施下述子步骤(a3-12ex)的子步骤，但上述子步骤(a3-12)不限于子步骤(a3-12ex)。《子步骤(a3-12ex)》将区段1的上游侧末端作为洗脱液供给口d1，从该洗脱液供给口d1供给4种洗脱液当中解吸力最强的洗脱液d1，将区段1的下游侧末端作为强吸附性组分提取口c，从该提取口c提取强吸附性组
分，将区段2的上游侧末端作为洗脱液供给口d2，从该洗脱液供给口d2供给4种洗脱液当中解吸力第二强的洗脱液d2，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d3，从该洗脱液供给口d3供给4种洗脱液当中解吸力最弱的洗脱液d3，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0138]
作为上述子步骤(a4-12)的一例，可列举实施下述子步骤(a4-12ex)的子步骤，但上述子步骤(a4-12)不限于子步骤(a4-12ex)。《子步骤(a4-12ex)》从所述洗脱液供给口d1供给所述洗脱液d1，从所述强吸附性组分提取口c提取强吸附性组分，从所述洗脱液供给口d2供给所述洗脱液d2，将区段3的下游侧末端作为中吸附性组分提取口b，从该提取口b提取中吸附性组分，将区段4的上游侧末端作为洗脱液供给口d4，从该洗脱液供给口d4供给4种洗脱液当中解吸力第三强的洗脱液d4，且从所述弱吸附性组分提取口a提取弱吸附性组分。
[0139]
以各区段具有1个单位填充塔的情况为例，在图27中示出上述步骤(a)依次进行上述子步骤(a1-12)、(a2-12ex)、(a3-12ex)以及(a4-12ex)的情况下的流程图。在图27中，四方形的包围线表示1个单位填充塔，该包围线中的数字表示单位填充塔的编号。依次进行上述子步骤(a1-12)、(a2-12ex)、(a3-12ex)以及(a4-12ex)的步骤(a)结束后，通过步骤(b)，使原液供给口f、洗脱液供给口d、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移，接着，在图28中示出依次进行了上述子步骤(a1-12)、(a2-12ex)、(a3-12ex)以及(a4-12ex)的情况下的流程图。图27所示的配置于各区段的单位填充塔在图28中一个一个向下游侧移动。在此情况下，将从图27所示的步骤(a)开始并接着进行步骤(b)作为1组，通过将其进行5组，从而再次返回到图27所示的形态。
[0140]
在本发明的方法中，将目标液体供给到目标场所或将目标液体从目标场所提取可以适当调整设置于循环系统的各处的泵的动作、各处的阀的开闭来进行。即，循环系统中的目标流体的供给或目标组分的提取的方法其本身是公知的。另外，各液体的供给流量、提取的流量也可以根据处理效率等目的而适当设定。
[0141]
在本发明的方法中，精制对象成分可以是强吸附性成分、中吸附性成分、弱吸附性成分中的任一种，其中，是适合于精制中吸附性成分的方法。本发明的方法可以适合用于蛋白质的精制。通过本发明的方法能够高纯度地得到中吸附性成分，因此，是为了从除了目标蛋白质之外还包含其分解物、凝聚体的原液高纯度地得到目标蛋白质的合适的方法。对上述蛋白质没有特别限制，例如，可以将抗体作为精制对象成分。在本发明中，所谓“抗体”，可以使天然存在的抗体，也可以是嵌合抗体，也可以是通过酶等进行了片段化的抗体(例如，f(ab’)2片段、fab’片段、fab片段)。另外，还包括单链抗体或其2聚体(双抗体)或3聚体(三抗体)或微型抗体。另外，也可以是单域抗体。此外，这些是一个示例，对抗原
具有特异的结合能力的蛋白质或其衍生物全部包含在本发明的抗体的概念中。利用本发明的方法高纯度化的抗体也可以作为抗体药物进行应用。即，通过应用本发明的方法而对原液中含有的抗体进行分离，由此能够提供抗体药物的制造方法。更具体而言，通过本发明的方法，将抗体产生细胞的培养液和/或抗体产生细胞的提取液作为原液，通过分离其中含有的抗体，能够得到抗体药物。在本发明中，“抗体产生细胞的培养液”、“抗体产生细胞的提取液”是指包含将抗体产生细胞的培养液或抗体产生细胞的提取液进行离心分离处理或色谱分离处理等各种处理，形成某种程度的组分或精制等的状态的物质。
[0142]
在本发明的方法中，填充于单位填充塔的吸附剂根据精制对象成分适当选择，可以采用各种吸附剂。例如，可以使用强酸性阳离子交换树脂，弱酸性阳离子交换树脂、强碱性阴离子交换树脂、弱碱性阴离子交换树脂、合成吸附剂、沸石、硅胶以及被官能团修饰的硅胶(优选十八烷基甲硅烷基修饰的硅胶)、还有其他的凝胶过滤色谱材料、亲和吸附材料作为吸附剂。在精制对象成分为蛋白质的情况下，吸附剂优选离子交换树脂。其中，可适于使用阳离子交换树脂。
[0143]
本发明的模拟移动床方式色谱分离系统是用于实施本发明的方法的系统。即，本发明的模拟移动床方式色谱分离系统具有上述循环系统的结构，该循环系统是能够依次重复上述步骤(a)的动作和步骤(b)的动作的系统。【实施例】
[0144]
以下，基于实施例进一步对本发明进行详细说明，但本发明不限于下述的实施例。
[0145]
[原液的制备]培养产生人的免疫球蛋白g2(igg2)的细胞，通过透析将该培养液的上清液脱盐后，加入nacl而调整盐浓度，将其作为原液。该上清液中含有的抗体和其片段以及凝聚体的含量如下所述。下表中，片段1是以分子量5000附近为峰值的分子量小于25000的组分中所含的蛋白质，片段2是以分子量为25000以上且小于50000的组分中所含的蛋白质。另外，抗体是以分子量150000附近为峰值的分子量为50000以上且小于300000的组分中所含的蛋白质。另外，凝聚体是分子量为300000以上的组分所含的蛋白质。下述成分组成是通过使用分析柱(东曹tskgel g3000swxl)的高效液相色谱(hplc)来决定的。
[0146]
【表1】培养液上清液中的成分浓度(g/l)片段10.02片段20.326抗体1.564凝聚体0.090
[0147]
[用于单位填充塔(柱)的吸附剂]作为吸附剂，使用了阳离子交换树脂(商品名：fractogel(注册商标)emd so
3-(m)，默克公司制)。
[0148]
[洗脱液]使用下述a液以及b液来制备各种nacl浓度的磷酸缓冲液，并用作洗脱液。
《a液》20mm磷酸缓冲液ph6.0《b液》以0.3m(17.53g/l)的浓度含有nacl的20mm磷酸缓冲液ph6.0
[0149]
[比较例1]单柱
·
不连续梯度《柱》直径10mm
×
长度100mm 1根《原液》原液中的nacl浓度设为2.05g/l。《洗脱液》使用下述洗脱液。
[0150]
【表2】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d12.39d22.66d317.53
[0151]
《运转条件》依次进行下述工序1～6。在图10中示出工序1～6的流程图。下述运转条件设为如下条件，对弱吸附性组分的片段1以及片段2的回收率为98％以上，对中吸附性组分的抗体的回收率为98％以上，而且，对强吸附性组分的凝聚体的回收率为98％以上。这在后述的各比较例以及实施例中也是相同的。
[0152]
【表3】工序时间(分)流速(ml/min)15.039.1128.509.1130.719.11439.469.1150.669.1163.609.11
[0153]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及片段2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。该回收率通过100
×
[组分中的质量]/[原液中的质量]来计算。
[0154]
【表4】
[0155]-分离处理效率-将每单位体积的吸附剂(单位：“l(升)-r”，r为resin的缩写)、每单位时间(单位：“h(hour)”的原液的处理量(单位：“l(升)-原液”作为分离处理效率。此外，在使用多根后述的柱的多柱系统中，吸附剂的体积是全部的柱中所含的的吸附剂的总量。比较例1中的分离处理效率为6.04(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0156]
[比较例2]单柱
·
不连续梯度《柱》直径10mm
×
长度400mm 1根《原液》原液中的nacl浓度设为2.05g/l。《洗脱液》使用下述洗脱液。
[0157]
【表5】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d12.35d22.62d317.53
[0158]
《运转条件》依次进行下述工序1～6。工序1～6的流程图如图10所示。
[0159]
【表6】工序时间(分)流速(ml/min)15.9943.326.3543.330.6343.3422.4843.350.5843.363.5543.3
[0160]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及片段2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0161]
【表7】
[0162]-分离处理效率-比较例2中的分离处理效率为12.51(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0163]
[比较例3]多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式
《柱》直径10mm
×
长度100mm 4根《原液》原液中的nacl浓度为2.23g/l。《洗脱液》使用下述洗脱液。
[0164]
【表8】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d117.53d22.28d32.23
[0165]
《运转条件》在图11中示出比较例3的运转的流程图。将图11所示的第1～第4步骤作为1个循环，实施10个循环。在各步骤之间，进行如下步骤，使原液供给口f、洗脱液供给口d(d1～d3)、弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b以及强吸附性组分提取口c在保持它们的相对的位置关系的状态下向下游侧转移1个柱。此外，图11所示的第1～第4步骤与本发明的步骤(a)对应，但与该步骤(a)不同，不是由多个子步骤构成的(换言之，由1个子步骤构成了1个步骤)。图11中的“d1”、“d2”以及“d3”都是洗脱液供给口，分别供给洗脱液d1、d2以及d3。图11中的“c”是强吸附性组分提取口，提取强吸附性组分。同样地，“b”是中吸附性组分提取口，提取中吸附性组分，“a”是弱吸附性组分提取口，提取弱吸附性组分。图11所示的各步骤中的洗脱液(d1～d3)和原液(f)的供给流速如下所述。此外，在下表中没有记载提取的液体的流速，但从强吸附性组分提取口c提取的强吸附性组分的流速与供给洗脱液d1的流速相同。另外，从中吸附性组分提取口b提取的中吸附性组分的流速与供给洗脱液d2的流速相同。另外，从弱吸附性组分提取口a提取的弱吸附性组分的流速是供给洗脱液d3的流速和从原液供给口f供给原液的流速的合计。也就是说，供给流量与提取流量始终相同，这在以下的比较例或实施例中也是同样的。
[0166]
【表9】
[0167]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及片段2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0168]
【表10】
比较例4中的分离处理效率为7.19(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0177]
[实施例1]多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式《柱》直径10mm
×
长度100mm 4根《原液》原液中的nacl浓度设为1.93g/l。《洗脱液》使用下述洗脱液。
[0178]
【表14】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d117.53d23.59d31.93d42.21
[0179]
《运转条件》通过图2所示的子步骤的组合构成步骤(a)。将该步骤(a)和其后续的步骤(b)设为1组，将其进行4组而设为1个循环，实施10个循环。各步骤(a)中的洗脱液(d1～d4)和原液(f)的供给流速如下所述。
[0180]
【表15】
[0181]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0182]
【表16】
[0183]-分离处理效率-实施例1中的分离处理效率为19.696(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0184]
[实施例2]多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式《柱》
直径10mm
×
长度100mm 4根《原液》原液中的nacl浓度设为2.02g/l。《洗脱液》使用下述洗脱液。【表17】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d11753d23.57d32.02d42.21
[0185]
《运转条件》通过图4所示的子步骤的组合构成步骤(a)。将该步骤(a)和其后续的步骤(b)设为1组，将其进行4组而设为1个循环，实施10个循环。各步骤(a)中的洗脱液(d1～d4)和原液(f)的供给流速如下所述。
[0186]
【表18】
[0187]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0188]
【表19】
[0189]-分离处理效率-实施例2中的分离处理效率为18.610(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0190]
[实施例3]多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式《柱》直径10mm
×
长度805mm 5根《原液》原液中的nacl浓度设为2.46g/l。
《洗脱液》使用下述洗脱液。【表20】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d117.53d22.46d30.00d41.98
[0191]
《运转条件》通过图6所示的子步骤的组合构成步骤(a)。将该步骤(a)和其后续的步骤(b)设为1组，将其进行5组而设为1个循环，实施10个循环。各步骤(a)中的洗脱液(d1～d4)和原液(f)的供给流速如下所述。
[0192]
【表21】
[0193]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0194]
【表22】
[0195]-分离处理效率-实施例3中的分离处理效率为16.499(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0196]
[实施例4]多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式《柱》直径10mm
×
长度100mm 7根《原液》原液中的nacl浓度设为2.57g/l。《洗脱液》使用下述洗脱液。【表23】
洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d117.53d22.57d30.00d40.37d51.80
[0197]
《运转条件》通过图8所示的子步骤的组合构成步骤(a)。将该步骤(a)和其后续的步骤(b)设为1组，将其进行7组而设为1个循环，实施10个循环。各步骤(a)中的洗脱液(d1～d5)和原液(f)的供给流速如下所述。
[0198]
【表24】
[0199]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0200]
【表25】
[0201]-分离处理效率-实施例4中的分离处理效率为15.225(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0202]
如上所述，可见，在模拟移动床方式色谱分离中，使用2种以上的洗脱液，通过将循环系统中的弱吸附性组分提取口a、中吸附性组分提取口b、强吸附性组分提取口c、原液供给口f的位置关系设为由本发明规定的特定的关系，从而能够以更少的吸附剂的使用量将弱吸附性成分、中吸附性成分、强吸附性成分充分高纯度化地进行分离。根据本实施例，表明在中吸附性组分中，能够以高纯度、高效率得到目标抗体。
[0203]
[实施例5]多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式《柱》直径10mm
×
长度80mm 5根《原液》原液中的nacl浓度设为2.46g/l。
《洗脱液》使用下述洗脱液。
[0204]
【表26】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d117.53d22.46d30.00d41.98
[0205]
通过图13所示的子步骤的组合构成步骤(a)。将该步骤(a)和其后续的步骤(b)设为1组，将其进行5组而设为1个循环，实施10个循环。各步骤(a)中的洗脱液(d1～d4)和原液(f)的供给流速如下所述。
[0206]
【表27】
[0207]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0208]
【表28】
[0209]-分离处理效率-实施例5中的分离处理效率为16.502(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0210]
[实施例6]多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式《柱》直径10mm
×
长度80mm 5根《原液》原液中的nacl浓度设为2.55g/l。《洗脱液》使用下述洗脱液。【表29】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)
d117.53d22.55d30.00d42.03
[0211]
《运转条件》通过图15所示的子步骤的组合构成步骤(a)。将该步骤(a)和其后续的步骤(b)设为1组，将其进行5组而设为1个循环，实施10个循环。各步骤(a)中的洗脱液(d1～d4)和原液(f)的供给流速如下所述。
[0212]
【表30】
[0213]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0214]
【表31】
[0215]-分离处理效率-实施例6中的分离处理效率为18.898(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0216]
[实施例7]多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式《柱》直径10mm
×
长度80mm 5根《原液》原液中的nacl浓度设为2.55g/l。《洗脱液》使用下述洗脱液。【表32】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d117.53d22.55d30.00
d42.03
[0217]
《运转条件》通过图17所示的子步骤的组合构成步骤(a)。将该步骤(a)和其后续的步骤(b)设为1组，并将其进行5组而设为1个循环，实施10个循环。各步骤(a)中的洗脱液(d1～d4)和原液(f)的供给流速如下所述。
[0218]
【表33】
[0219]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0220]
【表34】
[0221]-分离处理效率-实施例7中的分离处理效率为16.502(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0222]
[实施例8]多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式《柱》直径10mm
×
长度133mm 3根《原液》原液中的nacl浓度设为2.21g/l。《洗脱液》使用下述洗脱液。【表35】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d117.53d23.89d30.46d42.20
[0223]
《运转条件》通过图19所示的子步骤的组合构成步骤(a)。将该步骤(a)和其后续的步骤(b)设
为1组，并将其进行3组而设为1个循环，实施10个循环。各步骤(a)中的洗脱液(d1～d4)和原液(f)的供给流速如下所述。
[0224]
【表36】
[0225]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0226]
【表37】
[0227]-分离处理效率-实施例8中的分离处理效率为17.362(l-原液)/(l-r).h。
[0228]
[实施例9]多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式《柱》直径10mm
×
长度133mm 3根《原液》原液中的nacl浓度设为2.21g/l。《洗脱液》使用下述洗脱液。【表38】洗脱液种类洗脱液的nacl浓度(g/l)d117.53d24.10d30.00d42.21
[0229]
《运转条件》通过图21所示的子步骤的组合构成步骤(a)。将该步骤(a)和其后续的步骤(b)设为1组，并将其进行3组而设为1个循环，实施10个循环。各步骤(a)中的洗脱液(d1～d4)和原
液(f)的供给流速如下所述。
[0230]
【表39】
[0231]
《结果》-回收率-在下表中示出对弱吸附性组分的片段1以及2的回收率、对中吸附性组分的抗体的回收率、对强吸附性组分的凝聚体的回收率。
[0232]
【表40】
[0233]-分离处理效率-实施例9中的分离处理效率为18.956(l-原液)/(l-r)
·
h。
[0234]
针对通过图23、25以及27所示的子步骤的组合来构成步骤(a)的各实施方式，与上述各实施例同样地，通过多柱
·
梯度
·
模拟移动床方式来尝试了原液的色谱分离(实施例10～12)。运转条件设为对弱吸附性组分的片段1以及片段2的回收率为98％以上、对中吸附性组分的抗体的回收率为98％以上且对强吸附性组分的凝聚体的回收率为98％以上的条件的结果是，在每一个实施方式中均实现了13(l-原液)/(l-r)
·
h以上的分离处理效率。
[0235]
虽然将本发明与其他实施方式一起进行了说明，但只要没有特别指定，在说明的任何细节中都没有要限定本发明，认为应在不违反添附的请求保护的范围所示的发明的精神和范围的情况下被广泛地解释。
[0236]
本技术主张基于2020年5月14日在日本进行专利申请的特愿2020-085028的优先权，将其参照于此并将其内容作为本说明书的记载的一部分而引入。(标号说明)
[0237]
100循环系统10a、10b、10c、10d单位填充塔(柱)ab吸附剂r1、r2、r3、r4截止阀2a、2b、2c、2d弱吸附性组分提取线
a1、a2、a3、a4弱吸附性组分提取阀3a、3b、3c、3d中吸附性组分提取线b1、b2、b3、b4中吸附性组分提取阀4a、4b、4c、4d强吸附性组分提取线c1、c2、c3、c4强吸附性组分提取阀t1、t2、t3、t4止回阀1配管2j弱吸附性组分合流管3j中吸附性组分合流管4j强吸附性组分合流管6原液罐7原液8a、8b、8c、8d洗脱液罐9a、9b、9c、9d洗脱液11原液供给线11a、11b、11c、11d原液供给分支线f1、f2、f3、f4原液供给阀12、13、14、15洗脱液供给线12a、12b、12c、12d洗脱液供给分支线13a、13b、13c、13d洗脱液供给分支线14a、14b、14c、14d洗脱液供给分支线15a、15b、15c、15d洗脱液供给分支线e1a、e2a、e3a、e4a洗脱液供给阀e1b、e2b、e3b、e4b洗脱液供给阀e1c、e2c、e3c、e4c洗脱液供给阀e1d、e2d、e3d、e4d洗脱液供给阀p1循环泵p2原液供给泵p3、p4、p5、p6洗脱液供给泵。