一种基于特异抗体的棕榈酰化修饰蛋白质的检测方法与流程

文档序号:11824630阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于特异抗体的棕榈酰化修饰蛋白质的检测方法,其特征在于,用蛋白质棕榈酰化修饰泛抗体血清高通量检测蛋白质的棕榈酰化修饰状态;其包括步骤:

(1)用半胱氨酸位点棕榈酰化修饰的肽段作为半抗原,将其与载体蛋白质偶联免疫实验动物,以获得抗棕榈酰化修饰的泛抗血清;

(2)第三次免疫后用ELISA技术检测抗血清的效价,然后收集抗血清;

(3)用收集的抗血清对实验动物小鼠脑膜组分蛋白质进行免疫化学检测,比对抗血清对羟胺处理前后的小鼠脑膜组分蛋白质的western blot检测效果,评价该抗血清检测棕榈酰化修饰蛋白质的特异性;

(4)用收集的抗血清对大肠癌细胞SW480中的棕榈酰化修饰蛋白质进行免疫化学检测,比对抗血清对羟胺处理前后的SW480细胞蛋白质的western blot检测效果,评价该抗血清检测棕榈酰化修饰蛋白质的特异性;

(5)采用高分辨的质谱方法对western blot检测结果阳性条带中的蛋白质鉴定分析,将鉴定蛋白质与已知棕榈酰化修饰蛋白质进行比对评价。

2.按权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,将含16个碳的饱和脂肪酸棕榈酸通过硫酯键共价修饰到半胱氨酸的巯基上,与KLH偶联后免疫疫实验动物。

3.按权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,利用载体偶联的棕榈酰化的多肽作为免疫原,并用该修饰肽段与未修饰肽段进行鉴别筛选,获得针对蛋白质棕榈酰化修饰的泛抗体血清。

4.按权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的方法中,采用制得的泛抗体血清通过western blot特异识别生物样本中棕榈酰化修饰蛋白质及其变化,并通过质谱分析鉴别修饰蛋白质的类别。

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