衍生化HPLC‑DAD法测定药物中小分子卤代羧酸的方法与流程

技术特征：
1.衍生化HPLC-DAD法测定小分子卤代羧酸的方法，其特征在于包含以下步骤：（1）在常温下，使用硝基苯肼类衍生化试剂对小分子卤代羧酸衍生化反应，生成在320-450nm有较强吸收的产物；（2）以步骤（1）中衍生化反应产物，利用HPLC-DAD法，基于反相分配色谱法原理，在320-450nm测定其中卤代羧酸的衍生化产物，从而实现对小分子卤代羧酸的定性或定量检测。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包含以下步骤：（1）在常温下，以乙腈-水为反应体系，使用硝基苯肼类衍生化试剂，以碳二亚胺类偶联剂的盐酸盐为活化剂，对小分子卤代羧酸衍生化反应生成在330～420nm有较强吸收的产物；（2）以步骤（1）中衍生化反应产物，利用HPLC-DAD法，基于反相分配色谱法原理在330～420nm测定其中卤代羧酸的衍生化产物，从而实现对小分子卤代羧酸的定性或定量检测。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的小分子卤代羧酸为卤素取代的C1~C6的羧酸；所述的碳二亚胺类偶联剂选自二环己基碳二亚胺，N,N'-二异丙基碳二亚胺，1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺中的任意一种；硝基苯肼类衍生化试剂选自2-硝基苯肼盐酸盐、3-硝基苯肼盐酸盐、4-硝基苯肼盐酸盐和2，4-二硝基苯肼中的任意一种。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的小分子卤代羧酸选自氯乙酸、溴乙酸、二氯乙酸、2-氯丙酸、3-氯丙酸或2-溴丙酸中的任意一种；所述的碳二亚胺类偶联剂为1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺，所述的硝基苯肼类衍生化试剂为2-硝基苯肼盐酸盐。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于乙腈-水反应体系中乙腈的体积浓度为10%~90%；1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐浓度为1~4mg/mL，2-硝基苯肼盐酸盐在衍生化反应体系中的浓度为0.2～3mg/mL；衍生化反应时间为1~3h。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述的HPLC-DAD法采用HPLC色谱仪；采用反相分配色谱法；以非极性键合相为固定相，采用极性流动相，检测波长位于320-450nm之间。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述的HPLC-DAD法采用HPLC色谱仪；检测波长位于330～420nm之间。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述的HPLC-DAD法采用HPLC色谱仪；检测波长位于390~400nm之间。9.权利要求1~8中任一项所述的方法在测定药物中小分子卤代羧酸中的应用。10.衍生化HPLC-DAD法测定药物中小分子卤代羧酸的方法，其特征在于包含以下步骤：（1）常温下，在碳二亚胺类偶联剂的盐酸盐的活化作用下，使用硝基苯肼类衍生化试剂对待测药物进行衍生化反应，反应液作为样品进样测定；（2）以步骤（1）中衍生化反应结束后的反应液作为进样样品，利用HPLC-DAD法在320-450nm测定其中卤代羧酸的衍生化产物，从而实现对药物中小分子卤代羧酸的定性或定量检测。11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于所述的小分子卤代羧酸选自卤素取代的C1~C6的羧酸；所述的碳二亚胺类偶联剂盐选自二环己基碳二亚胺，N,N'-二异丙基碳二亚胺，1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺中的一种；所述的硝基苯肼类衍生化试剂选自2-硝基苯肼盐酸盐、3-硝基苯肼盐酸盐、4-硝基苯肼盐酸盐和2，4-二硝基苯肼中的任意一种。12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于所述的小分子卤代羧酸选自氯乙酸、溴乙酸、二氯乙酸、2-氯丙酸、3-氯丙酸或2-溴丙酸中的任意一种；所述的碳二亚胺类偶联剂盐选自1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺；所述的硝基苯肼类衍生化试剂为2-硝基苯肼盐酸盐。13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于衍生化反应的条件为常温下，以乙腈体积浓度为10%~90%的乙腈-水为反应体系，1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐浓度为1~4mg/mL，2-硝基苯肼盐酸盐浓度为0.2~3mg/mL，反应时间为1~3h。14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于衍生化反应的条件为以乙腈-水=70：30（V：V）为反应体系，1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐2mg/mL，2-硝基苯肼盐酸盐浓度为1mg/mL，反应时间为2h。15.根据权利要求11所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述的HPLC-DAD法采用HPLC色谱仪；采用反相分配色谱法；以非极性键合相为固定相，采用极性流动相，检测波长位于320-450nm之间。16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于所述的检测波长位于330~420nm之间；所述的HPLC-DAD法优选使用的仪器为ShimadzuLC20AT液相色谱仪，该色谱仪配制有在线真空脱气机、二元梯度泵，自动进样器、柱温箱、DAD检测器和LC-solution色谱工作站；色谱柱采用250mm×4.6mm,5μm的岛津InertsilODS-3；进样量：20μL；流动相流速：1.0mL/min；流动相梯度：A相为乙腈，B相为0.1%磷酸，0min28%A相，10min40%A相，14min40%A相，20min55%A相；柱温：40℃；检测波长：392nm。17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于所述的检测波长位于390~400nm之间。