技术特征:
1.一种从生物流体分离疾病-相关的细胞外微泡的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡在其表面上具有带负电荷的磷脂酰丝氨酸;所述的方法包括将所述的生物流体的样品与以有效地从所述的生物流体沉淀疾病-相关的细胞外微泡的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂接触,以及从所述的沉淀物收集疾病-相关的细胞外微泡,从而分离所述的疾病-相关的细胞外微泡。2.权利要求1所述的方法,其中在所述的疾病-相关的细胞外微泡的表面上的磷脂酰丝氨酸与非-脂质的膜成分相连存在,并且其中所述的非-脂质的膜成分包含膜蛋白。3.权利要求1或2所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂中和所述的疾病-相关的细胞外微泡上的磷脂酰丝氨酸的表面电荷,由此从所述的生物流体沉淀所述的疾病-相关的细胞外微泡。4.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的生物流体包含细胞外微泡的混合群体,其中包括疾病-相关的和正常的细胞外微泡,并且其中所述的方法从所述的混合群体中选择性地沉淀所述的疾病-相关的细胞外微泡,这与所述的正常的细胞外微泡相反。5.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡在基本上不破坏其形态学特征或功能特征或者细胞表面抗原的条件下被分离。6.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的细胞外微泡为外来体。7.权利要求1至6的任意一项所述的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡衍生自被细胞内寄生虫感染的细胞。8.权利要求1至6的任意一项所述的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡衍生自病毒-感染的细胞。9.权利要求8所述的方法,其中所述的方法从病毒-感染的细胞分离疾病-相关的细胞外微泡,其中所述的病毒-感染的细胞疾基本上不具有感染性病毒。10.权利要求1至6的任意一项所述的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡为肿瘤-衍生的细胞外微泡。11.权利要求10所述的方法,其中所述的肿瘤-衍生的细胞外微泡衍生自黑素瘤、结肠直肠癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌或卵巢癌。12.权利要求10或11所述的方法,其中所述的肿瘤-衍生的细胞外微泡为肿瘤-衍生的外来体。13.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡为人类细胞外微泡。14.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂的pH为大约4.25至大约5.25。15.权利要求14所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂的pH为大约4.5至大约5.0。16.权利要求15所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂的pH为大约4.75。17.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂在所述的样品中的最终浓度为大约0.05M至大约0.25M。18.权利要求17所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂在所述的样品中的最终浓度为大约0.05M至大约0.1M。19.权利要求17所述的方法,其中将1/10体积的1.0M醋酸盐缓冲剂加入至所述的样品中。20.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂的pH为大约4.25至大约5.25,并且在所述的样品中的最终浓度为大约0.05M至大约0.25M。21.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂的pH为大约4.5至大约5.0,并且在所述的样品中的最终浓度为大约0.05M至大约0.1M。22.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂的pH为大约4.75,并且在所述的样品中的最终浓度为大约0.1M。23.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂包括醋酸钠。24.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂包括醋酸钾。25.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂实质上不具有除了聚合物以外的体积。26.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂实质上不具有聚乙二醇。27.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的醋酸盐缓冲剂为醋酸钠,pH为大约4.75,并且在所述的样品中的最终浓度为大约0.1M。28.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的生物流体为鼠、牛或人类生物流体。29.任何上述权利要求所述的方法,其中所述的生物流体为细胞培养物上清液、全血、血清、血浆、腹水、脑脊液、骨髓穿刺液、支气管肺泡洗液、尿、精液、阴道分泌物、黏液、唾液、痰或者从生物组织样品得到的澄清的裂解液。30.权利要求29所述的方法,其中所述的生物流体为细胞培养物上清液,血清,血浆或腹水。31.权利要求29所述的方法,其中所述的生物流体为澄清的细胞培养物上清液,其已经经过低速离心。32.权利要求29所述的方法,其中所述的生物流体为细胞培养物上清液,其得自在包含非-肿瘤细胞外微泡的血清存在下培养的肿瘤细胞。33.权利要求29所述的方法,其中所述的生物流体为细胞培养物\t上清液,其得自在非-人类血清存在下培养的人类肿瘤细胞。34.权利要求29所述的方法,其中所述的生物流体为细胞培养物上清液,其得自在牛或胎牛血清存在下培养的小鼠或人类肿瘤细胞。35.任何上述权利要求所述的方法,其进一步包括以下步骤,将所述的生物流体经过低速离心从而除去细胞、细胞碎片和大的膜囊泡,然后与所述的醋酸盐缓冲剂接触。36.任何上述权利要求所述的方法,其中包含所述的疾病-相关的细胞外微泡的沉淀物在与所述的醋酸盐缓冲剂接触后,通过低速离心收集。37.任何上述权利要求所述的方法,其进一步包括将所收集的包含所述的疾病-相关的细胞外微泡的沉淀物再次悬浮于大约中性pH的基本上不具有醋酸盐的缓冲剂中,从而提供疾病-相关的细胞外微泡的分离群体。38.权利要求37所述的方法,其进一步包括对所述的疾病-相关的细胞外微泡的分离群体进行离心,从而除去污染性成分,由此提供疾病-相关的细胞外微泡的基本纯的组合物。39.权利要求12所述的方法,其中所述的方法包括:(a)获得生物流体,该生物流体包含包括肿瘤-衍生的外来体和非-肿瘤外来体的外来体的混合群体;(b)将所述的生物流体与以有效地从所述的生物流体选择性地沉淀肿瘤-衍生的外来体、而并非非-肿瘤外来体的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂接触。(c)从步骤(b)收集所述的沉淀物,其中所述的沉淀物选择性\t地包含所述的肿瘤-衍生的外来体;以及(d)在大约中性的pH下,使所述的沉淀物再次悬浮于基本上不含醋酸盐的缓冲剂中,从而提供实质上不具有非肿瘤外来体的肿瘤-衍生的外来体的纯化群体。40.权利要求39所述的方法,其中所述的方法包括:(a)获得生物流体,该生物流体包含包括肿瘤-衍生的外来体和非-肿瘤外来体的外来体的混合群体;(b)对所述的生物流体实施第一低速离心,从而提供实质上不具有细胞、细胞碎片和大的膜囊泡的澄清的流体;(c)在有效地提供浑浊悬液的pH和浓度下、以及在有效地提供浑浊悬液的时间内,将所述的澄清的流体与醋酸盐缓冲剂温育,其中所述的悬液包含选择性沉淀的肿瘤-衍生的外来体,但是基本上不包含沉淀的非-肿瘤的外来体;(d)对所述的浑浊悬液进行低速离心,从而提供沉淀物和上清液,其中所述的沉淀物选择性地包含所述的肿瘤-衍生的外来体;(e)收集包含所述的肿瘤-衍生的外来体的沉淀物;(f)在大约中性pH下,将所述的沉淀物再次悬浮于基本上不含醋酸盐的缓冲剂中,由此提供纯化的外来体群体,该群体包含肿瘤-衍生的外来体,并且实质上不具有非-肿瘤的外来体;以及可任选地(g)对所述的纯化的外来体群体进行进一步的离心,从而提供包含非-外来体的成分的压粒,并除去所述的压粒,由此提供肿瘤-衍生的外来体的基本纯的组合物,其中所述的组合物基本上不具有非-肿瘤的外来体和非-外来体成分。41.任何上述权利要求所述的方法,其进一步包括在所述的疾病-相关的细胞外微泡中识别或定量至少第一生物标志物。42.权利要求41所述的方法,其中所述的生物标志物为RNA、\tmicroRNA、DNA或蛋白质生物标志物。43.一种从生病的细胞的上清液获得疾病-相关的细胞外微泡的方法,其中所述的生病的细胞是在包含正常的细胞外微泡的血清存在下培养的,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡在其表面上具有带负电荷的磷脂酰丝氨酸;所述的方法包括将所述的上清液与以有效地从所述的上清液沉淀疾病-相关的细胞外微泡的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂接触,以及收集所述的沉淀物,从而从所述的上清液获得疾病-相关的细胞外微泡,而基本上不被所述的血清中的正常的细胞外微泡污染。44.权利要求43所述的方法,其中所述的生病的细胞为在牛或胎牛血清的存在下培养的小鼠或人类肿瘤细胞。45.一种制备基本上不具有疾病-相关的细胞外微泡的血清的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡在其表面上具有带负电荷的磷脂酰丝氨酸;所述的方法包括:(a)获得疑似包含疾病-相关的细胞外微泡的血清;(b)将所述的血清与以有效地从所述的血清中沉淀疾病-相关的细胞外微泡的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂接触;以及(c)从所述的血清中除去在步骤(b)中形成的沉淀物,其中所述的沉淀物包含所述的疾病-相关的细胞外微泡,由此提供基本上不具有疾病-相关的细胞外微泡的血清。46.权利要求43或45所述的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡衍生自病毒-感染的细胞。47.权利要求43或45所述的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡为肿瘤-衍生的外来体。48.一种制备基本上不具有感染性病毒和细胞外微泡的血液、血清或血浆的方法,其中所述的细胞外微泡衍生自病毒-感染的细胞,所述的方法包括:(a)获得疑似包含感染性病毒和细胞外微泡的血液、血清或血浆,其中所述的细胞外微泡衍生自病毒-感染的细胞;(b)将所述的血液、血清或血浆与以有效地灭活或沉淀所述的感染性病毒、以及从所述的血液、血清或血浆沉淀所述的细胞外微泡的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂接触;以及(c)从所述的血液、血清或血浆中除去在步骤(b)中形成的所述的沉淀物,其中所述的沉淀物包含灭活的或沉淀的病毒,和所述的沉淀的细胞外微泡,由此提供基本上不具有感染性病毒和细胞外微泡的血液、血清或血浆,其中所述的细胞外微泡衍生自病毒-感染的细胞。49.权利要求48所述的方法,其中所述的方法是在输血之前实施的。50.一种检测澄清的生物流体中的疾病-相关的细胞外微泡的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡在其表面上具有带负电荷的磷脂酰丝氨酸;所述的方法包括将所述的澄清的生物流体与以有效地从所述的澄清的生物流体选择性地沉淀疾病-相关的细胞外微泡的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂接触,以及测定所得的生物流体中存在的浑浊度;其中所得的生物流体中存在的浑浊度表明检测到疾病-相关的细胞外微泡。51.权利要求50所述的方法,其中在所得的生物流体中存在的浑浊度是目测的。52.权利要求50所述的方法,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡为肿瘤-衍生的外来体。53.权利要求52所述的方法,其进一步包括从具有可检测的浑浊度的所得的生物流体中分离所述的肿瘤-衍生的外来体。54.权利要求53所述的方法,其中所述的肿瘤-衍生的外来体是通过使用低速离心收集所述的沉淀物,从具有可检测的浑浊度的所得的生物流体分离得到的。55.一种对患者进行诊断的方法,其中所述的患者具有通过存在疾病-相关的细胞外微泡来表征的第一疾病,其中所述的细胞外微泡在其表面上具有带负电荷的磷脂酰丝氨酸;所述的方法包括检测从所述的患者得到的生物流体中所述的疾病-相关的细胞外微泡的存在情况,由此将所述的患者诊断为患有所述的第一疾病;其中所述的疾病-相关的细胞外微泡是通过以下方法检测的:(a)将所述的生物流体与以有效地从所述的生物流体选择性地沉淀所述的疾病-相关的细胞外微泡的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂接触;以及(b)测定所得的生物流体中所述的沉淀物的存在情况,其中所得的生物流体中所述的沉淀物的存在表明检测到所述的疾病-相关的细胞外微泡。56.权利要求55所述的方法,其中所述的生物流体是澄清的生物流体,并且其中在所得的生物流体中所述的沉淀物的存在是通过所得的生物流体中存在的浑浊度来测定的。57.权利要求55所述的方法,其中对所述的疾病-相关的细胞外微泡的量进行定量。58.一种监测患者的疾病负担的方法,其中所述的患者具有通过\t存在疾病-相关的细胞外微泡来表征的第一疾病,其中所述的细胞外微泡在其表面上具有带负电荷的磷脂酰丝氨酸;所述的方法包括测量从所述的患者得到的生物流体中所述的疾病-相关的细胞外微泡的量;其中所述的疾病-相关的细胞外微泡的量是通过以下方法测量的:(a)将所述的生物流体与以有效地从所述的生物流体选择性地沉淀所述的疾病-相关的细胞外微泡的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂接触;以及(b)测量所述的沉淀物中所述的疾病-相关的细胞外微泡的量。59.权利要求55或58所述的方法,其中所述的第一疾病的鉴定是通过检验所述的第一疾病的生物标志物或临床迹象来证实的。60.权利要求55或58所述的方法,其中所述的第一疾病为病毒感染。61.权利要求55或58所述的方法,其中所述的第一疾病为癌症,并且其中所述的疾病-相关的细胞外微泡为肿瘤-衍生的外来体。62.权利要求61所述的方法,其中肿瘤-衍生的外来体的量是在一系列生物流体样品中测量的,其中所述的生物流体样品是在多个时间点从所述的患者得到的;并且其中肿瘤-衍生的外来体的量的增加表明肿瘤-负担增加,并且所述的肿瘤-衍生的外来体的量的降低表明肿瘤-负担降低。63.一种以有效地用于诊断的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂,其中所述的诊断是通过从生物流体沉淀疾病-相关的细胞外微泡进行的,其中所述的细胞外微泡在其表面上具有带负电荷的磷脂酰丝氨酸。64.一种以有效地用于治疗的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂,其中\t所述的治疗是通过从生物流体沉淀疾病-相关的细胞外微泡进行的,其中所述的细胞外微泡在其表面上具有带负电荷的磷脂酰丝氨酸。65.一种用于从生物流体中分离疾病-相关的细胞外微泡的试剂盒,其中所述的疾病-相关的细胞外微泡在其表面上具有带负电荷的磷脂酰丝氨酸;所述的试剂盒包含以有效地从生物流体沉淀所述的疾病-相关的细胞外微泡的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂,以及使用说明书。66.权利要求65所述的试剂盒,其中所述的试剂盒至少进一步包含用于识别或定量疾病-相关的细胞外微泡中的一种或多种生物标志物的第一试剂。