用于诊断和治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真的方法和组合物与流程

背景技术：

嗅觉减退是气味闻嗅和察觉能力的下降。嗅觉障碍是嗅觉的失真。嗅觉丧失是完全丧失气味闻嗅和察觉的能力。幻嗅觉是嗅觉的失真，例如，在不存在气味的情况下有嗅觉的感知。味觉减退是品尝出物品的味道的能力下降。味觉障碍是味觉的失真。味觉丧失是完全丧失察觉或识别味道的能力。幻味觉是味觉的失真，例如，在不存在味道的情况下有味觉的感知。本领域需要用于诊断和治疗这些病况的方法。

援引并入

本文的全部出版物、专利和专利申请均通过引用而并入，其程度如同特别地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用而并入。如果本文的术语与并入的参考文献中的术语有冲突，则以本文的术语为准。

技术实现要素：

本文公开了包括以下步骤的方法：(a)从受试者获得一个或多个生物样品；(b)测量来自所述受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；(c)根据低于阈值水平的刺猬(hedgehog)信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失或失真；和(d)治疗被诊断为具有味觉或嗅觉的损失或失真的受试者。

本文还公开了包括以下步骤的方法：(a)从受试者获得一个或多个生物样品；(b)测量来自所述受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；和(c)根据低于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失或失真；其中该诊断是计算机执行的。

本文进一步公开了包括以下步骤的方法：(a)从受试者获得一个或多个生物样品；(b)测量来自所述受试者的所述一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，其中该测量通过ELISA来进行；和(c)根据低于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失或失真。

本文公开了评估味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真的方法，该方法包括：(a)采用一种或多种药物治疗受试者；(b)从所述受试者获得一个或多个生物样品；(c)测量来自所述受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；(d)根据可以高于、低于和/或等于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失；以及(e)采用增加的、较少的和/或相同的一种或多种药物治疗所述受试者。

本文还公开了评估味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真的方法，该方法包括：(a)采用一种或多种药物治疗受试者；(b)从所述受试者获得一个或多个生物样品；(c)测量来自所述受试者的所述一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，其中该测量通过ELISA来进行；以及(d)根据可能高于、低于和/或等于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。

本文进一步公开了评估味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真的方法，该方法包括：(a)采用一种或多种药物治疗受试者；(b)从所述受试者获得一个或多个生物样品；(c)测量来自所述受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；以及(d)根据可能高于、低于和/或等于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失；其中该诊断是计算机执行的。

在一些实施方案中，所述受试者具有味觉损失。在一些实施方案中，所述受试者具有选自味觉减退、味觉障碍、幻嗅觉和味觉丧失的味觉损失。在一些实施方案中，所述受试者具有嗅觉损失。在一些实施方案中，所述受试者具有选自嗅觉减退、嗅觉障碍、幻味觉和嗅觉丧失的嗅觉损失。

在一些实施方案中，所述方法进一步包括治疗所述受试者。

在一些实施方案中，所述一个或多个生物样品包括全血样品、血清样品、血浆样品、尿液样品、唾液样品、粘液样品、汗液样品或其任意组合。在一些实施方案中，所述一个或多个生物样品包括唾液样品。在一些实施方案中，所述一个或多个生物样品包括粘液样品。

在一些实施方案中，所述刺猬信号途径的一个或多个成员选自：音猬蛋白(Sonic Hedgehog，SHH)、沙漠刺猬蛋白(Desert Hedgehog，DHH)、印度刺猬蛋白(Indian hedgehog，IHH)及其任意组合。在一些实施方案中，所述阈值水平为在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测得的所述刺猬信号途径的一个或多个成员的平均水平。在一些实施方案中，所述刺猬信号途径的一个或多个成员的水平比所述阈值水平低至少一个数量级。在一些实施方案中，所述测量包括使用与所述刺猬信号途径的一个或多个成员结合的一种或多种抗体。

在一些实施方案中，所述方法进一步包括通过采用一种或多种嗅觉测试化合物经由强迫选择(forced-choice)、三刺激物(three-stimuli)、逐步阶梯(stepwise-staircase)技术确定检测阈值(DT)得分、识别阈值(RT)得分、量值估计(ME)得分或其任意组合来评估受试者的味觉和/或嗅觉功能。在一些实施方案中，所述方法进一步包括治疗所述受试者，其中该治疗包括施用至少一种治疗剂。在一些实施方案中，所述至少一种治疗剂包含茶碱、利奥西呱(riociguat)、毛喉素(forskolin)或其任意组合。在一些实施方案中，所述至少一种治疗剂包含茶碱。在一些实施方案中，所述至少一种治疗剂在组合物或剂量单位中。在一些实施方案中，所述组合物或剂量单位不含类固醇。在一些实施方案中，所述一种或多种治疗剂包含有效量的一种或多种磷酸二酯酶抑制剂。在一些实施方案中，所述一种或多种磷酸二酯酶抑制剂包括非选择性磷酸二酯酶抑制剂、磷酸二酯酶-1选择性抑制剂、磷酸二酯酶-2选择性抑制剂、磷酸二酯酶-3选择性抑制剂、磷酸二酯酶-4选择性抑制剂、磷酸二酯酶-5选择性抑制剂、磷酸二酯酶-10选择性抑制剂或其任意组合。

在一些实施方案中，所述施用是鼻内施用。在一些实施方案中，所述治疗导致刺猬信号途径的一个或多个成员的水平提高。

本文进一步公开了诊断受试者的味觉或嗅觉的损失或失真的方法，该方法包括：(a)从所述受试者获得一个或多个生物样品；(b)测量来自所述受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；以及(c)基于以下一项或多项将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失或失真，(i)从约大于0pg/mL至约8,500pg/mL的音猬蛋白(SHH)的水平；(ii)从约大于0pg/mL至约1.0pg/mL的印度刺猬蛋白(IHH)的水平；或(iii)从约大于0pg/mL至约5.0pg/mL的沙漠刺猬蛋白(DHH)的水平。

本文还公开了治疗受试者的味觉或嗅觉的损失或失真的方法，该方法包括提高或维持刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。

在一些实施方案中，所述刺猬信号途径的一个或多个成员选自：音猬蛋白(SHH)、沙漠刺猬蛋白(DHH)、印度刺猬蛋白(IHH)及其任意组合。在一些实施方案中，所述提高或维持刺猬信号途径的一个或多个成员的水平包括给予受试者一种或多种环腺苷一磷酸激活剂和/或环鸟苷一磷酸激活剂。在一些实施方案中，所述一种或多种环腺苷一磷酸激活剂和/或环鸟苷一磷酸激活剂与一种或多种附加治疗剂联合给予。在一些实施方案中，所述一种或多种环鸟苷一磷酸激活剂是利奥西呱。在一些实施方案中，利奥西呱以从大于0.0μg至小于或等于约250μg的量存在。在一些实施方案中，所述一种或多种附加治疗剂包含有效量的一种或多种磷酸二酯酶抑制剂。在一些实施方案中，所述一种或多种磷酸二酯酶抑制剂包括非选择性磷酸二酯酶抑制剂、磷酸二酯酶-1选择性抑制剂、磷酸二酯酶-2选择性抑制剂、磷酸二酯酶-3选择性抑制剂、磷酸二酯酶-4选择性抑制剂、磷酸二酯酶-5选择性抑制剂、磷酸二酯酶-10选择性抑制剂，或其组合。在一些实施方案中，所述一种或多种附加治疗剂包含从大于0.0mg至小于或等于约45mg的量的茶碱。

在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用一种或多种附加治疗剂，其中所述一种或多种附加治疗剂包含从大于0mg至小于或等于约500mg的量的毛喉素。

本文还公开了包含一种或多种环鸟苷一磷酸激活剂和一种或多种环腺苷一磷酸激活剂的药物剂量单位。在一些实施方案中，该药物剂量包含选自3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、YC-1衍生物、邻氨基苯甲酸衍生物、阿他西呱(HMR1766)、苄达明类似物、CFM1517、A-350619、硝基血管扩张药、吗多明、硝酰基(HNO)、BAY 41-2272、BAY 41-8543、BAY 58-2667、西那西呱(BAY 58-2667)、利奥西呱(BAY 63-2521)及其组合的一种或多种环鸟苷酸激活剂。在一些实施方案中，所述一种或多种环鸟苷一磷酸激活剂是利奥西呱。在一些实施方案中，所述一种或多种环腺苷一磷酸激活剂选自：3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、胰高血糖素、PDE抑制剂、前列腺素E1(PGE1)、毛喉素、β-肾上腺素能激动剂及其组合。在一些实施方案中，所述一种或多种环腺苷一磷酸激活剂包括毛喉素。在一些实施方案中，所述环腺苷一磷酸激活剂为茶碱。在一些实施方案中，所述剂量单位是无类固醇的。

在一些实施方案中，所述一种或多种磷酸二酯酶抑制剂的有效量单独地为选自小于约100mg、小于约75mg、小于约50mg、小于约25mg、小于约20mg、小于约10mg、小于约5mg、小于约1mg、小于约0.5mg或小于约0.1mg的正量(positive amount)。

在一些实施方案中，所述方法、组合物或单位剂量是鼻内组合物，并且/或者所述施用或治疗是鼻内施用或治疗。在一些实施方案中，治疗食欲不振的方法包括向有需要的受试者施用一定剂量的PDE抑制剂。在一些实施方案中，所述PDE抑制剂的剂量对于改善与味觉和/或嗅觉损失相关的食欲不振是有效的。在一些实施方案中，所述一种或多种PDE抑制剂的有效量单独地为选自小于约100mg、小于约75mg、小于约50mg、小于约25mg、小于约20mg、小于约10mg、小于约5mg、小于约1mg、小于约0.5mg或小于约0.1mg的正量。

在一些实施方案中，所述有需要的受试者是癌症患者。在一些实施方案中，所述癌症患者正在经受化学疗法。在一些实施方案中，所述癌症患者正在经受放射疗法。在一些实施方案中，所述PDE抑制剂包括选择性PDE抑制剂。在一些实施方案中，所述PDE抑制剂包括非选择性PDE抑制剂。在一些实施方案中，所述非选择性PDE抑制剂包括茶碱。在一些实施方案中，所述方法不包括施用类固醇。在一些实施方案中，所述PDE抑制剂是鼻内施用的。

在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用止吐剂。在一些实施方案中，该止吐剂选自5-HT3受体拮抗剂、多巴胺拮抗剂、NK1受体拮抗剂、抗组胺药(H1组胺受体拮抗剂)、大麻素类、苯并二氮类、抗胆碱能药和类固醇。在一些实施方案中，该止吐剂选自多拉司琼(Anzemet)、格拉司琼(Kytril、Sancuso)、昂丹司琼(Zofran)、托烷司琼(Setrovel、Navoban)、帕洛诺司琼(Aloxi)、米氮平(Remeron)、多潘立酮(吗丁啉(Motilium))、奥氮平(Zyprexa)、氟哌利多、氟哌啶醇、氯丙嗪、普鲁氯嗪、阿立必利、普鲁氯嗪(Compazine、Stemzine、Buccastem、Stemetil、Phenotil)、甲氧氯普胺(Reglan)、阿瑞匹坦(Emend)、卡索匹坦、赛克利嗪、苯海拉明(Benadryl)、茶苯海明(Gravol、Dramamine)、多西拉敏、美克洛嗪(Bonine、Antivert)、异丙嗪(Pentazine、Phenergan、Promacot)、羟嗪(Vistaril)、大麻(Cannabis)、屈大麻酚(Marinol)、合成大麻素类如大麻隆(Cesamet)或JWH系列、Sativex、咪达唑仑、劳拉西泮(Ativan)、天仙子碱(也被称为东莨菪碱)、地塞米松(Decadron)、曲美苄胺、姜、愈吐宁锭(Emetrol)、丙泊酚、蝇蕈醇、薄荷和Ajwain。在一些实施方案中，该止吐剂单独地为0.1mg至500mg的正量。在一些实施方案中，该止吐剂单独地为选自0.3-0.6mg、0.5mg、25-50mg、25-100mg、25mg、12.5-25mg、0.5-2mg、0.25-2mg、0.5-2.5mg、2.5-5mg、1-3mg、1-5mg、5-15mg、4mg、8mg、8-20mg、250-500mg、12.5-25mg、25-50mg、50-100mg、5-10mg、10-30mg、10mg、100mg、0.1-1mg、4-8mg和1-4mg的正量。

附图说明

本发明的新颖特征在所附权利要求书中具体陈述。通过参考以下对利用了本发明原理的说明性实施方案加以阐述的详述和附图，将会获得对本发明的特征和优点的更好的理解，在附图中：

图1：在具有嗅觉减退的患者中按年龄示出的唾液和鼻粘液IL-1α(pg/ml)。IL-1α的水平示于纵坐标，年龄每10岁一组示于横坐标。平均水平以蓝条的高度表示，并示出SEM。没有获得血浆或尿液的值。

图2：按年龄示出的鼻粘液IL-1β。该图的构成如图1。没有获得唾液、血浆或尿液的值。

图3：按年龄示出的血浆、尿液、唾液和鼻粘液IL-1ra。该图的构成如图1。

图4：按年龄示出的血浆、尿液、唾液和鼻粘液IL-1RII。该图的构成如图1。

图5：按年龄示出的血浆、尿液、唾液和鼻粘液IL-2R。该图的构成如图1。

图6：按年龄示出的血浆、尿液、唾液和鼻粘液IL-6。该图的构成如图1。

图7：按年龄示出的血浆、唾液和鼻粘液IL-10。该图的构成如图1。没有获得尿液的值。

图8：按年龄示出的血浆、唾液和鼻粘液IL-18。该图的构成如图1。没有获得尿液的值。

图9：按年龄示出的血浆、尿液、唾液和鼻粘液TNF-α。该图的构成如图1。

图10：按年龄示出的血浆、唾液和鼻粘液IFN-β。该图的构成如图1。没有获得尿液的值。

图11：按年龄示出的鼻粘液IFN-γ。该图的构成如图1。没有获得血浆、尿液或唾液的值。

图12：示出了与诊断味觉或嗅觉失调的方法有关的事件的示例性过程。

图13：示出了一种计算机系统，其可用于显示、存储、检索或从与味觉或嗅觉失调相关的一种或多种生物标志物的水平计算诊断结果；显示、存储、检索或计算来自生物标志物分析的原始数据；或显示、存储、检索或计算在本文公开的诊断方法中有用的任何样品或受试者信息。

图14：相对于年龄的腮腺唾液cAMP。影线条反映cAMP，其中线表示±1SEM。斑点条反映cAMP/蛋白质，其中线表示±1SEM。与年龄之间存在复杂形状的函数关系，其中峰值在年龄41-50岁处，此后降低，并且在年龄>70岁处具有最后的增加。

图15：相对于年龄的腮腺唾液cGMP。影线条反映cGMP，其中线表示±1SEM。斑点条反映cGMP/蛋白质，其中线表示±1SEM。cGMP随着年龄增加，其中峰值在年龄41-50岁处，此后降低，并且在年龄>70岁处具有最后的增加。

具体实施方式

以下描述和实例详细地示出了本发明的实施方案。应当理解，本发明不限于本文描述的特定实施方案，其可以变化。本领域技术人员将会认识到，存在本发明的许多变形及改进，它们均涵盖在本发明的范围内。

定义

本文所用的术语“约”及其语法上的等同语，在与参考数值一起使用时，可以包括由该值加上或减去10％的值的范围。例如，“约10”的量可以包括9至11的量。在其他实施方案中，与参考数值一起使用的术语“约”可以包括由该值加上或减去10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的值的范围。

本文所用的术语“诊断”及其语法上的等同语可以意指对受试者进行的测试，以确定他们是否具有供临床决策使用的特定性状。诊断可以包括对具有发展为由传染性生物体感染引起的特定疾病或非传染性疾病如癌症或代谢病的风险的受试者进行的测试。诊断还可以包括对已发展出特定症状的受试者进行的测试，以确定该症状的原因。诊断还可以包括预后、监测疾病的进展和监测治疗方案的功效。诊断的结果可用于对患者进行分组，以进行关于施用某些疗法的临床试验。

本文所用的术语“药物”及其语法上的等同语可以意指具有任意程度的将会干扰生物状态的复杂性的任意化合物，无论是通过已知的还是未知的机理以及它们是否治疗性地使用。因而药物可以包括：具有研究或治疗意义的典型小分子；天然存在的因子，如内分泌、旁分泌或自分泌因子或与所有类型的细胞受体相互作用的因子；细胞内因子，如细胞内信号途径的元件；从其他天然来源中分离出的因子；杀虫剂；除草剂；和杀昆虫剂。本文所用的术语“药物”及其语法上的等同语还可以指它的游离碱、酸、盐、酯，和它们的混合物。如果药物是盐，它可以指药学上可接受的盐，包括但不限于“Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,”R.Heinrich Stahl和Camile G.Wermuth编著，Wiley-VCH，第二版(2011)中给出的盐，其通过引用以全文并入本文。例如，可将药物配制为但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、富马酸的盐、马来酸的盐、氨基酸盐、无机酸盐、加成盐、硝酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基硫酸盐、谷氨酸盐、乙酰氨基苯甲酸盐、钾盐、钠盐、钙盐、氨丁三醇盐、2-氨基乙醇盐、赖氨酸盐和/或精氨酸盐。

本文所用的术语“治疗”及其语法上的等同语可以包括取得治疗益处和/或预防益处。治疗益处可以是正在治疗的潜在病症的根除或改善。另外，治疗益处也可以这样获得：与潜在病症相关的一种或多种生理症状得到根除或改善，使得可以在患者中观察到改善，尽管该患者可能仍然受到该潜在病症的折磨。对于预防益处，可向具有发展成特定疾病的风险的患者或报告有疾病的一种或多种生理症状(即使可能还没有作出该疾病的诊断)的患者施用组合物。

本文所用的“治疗有效量”及其语法上的等同语可以指有效成分的量，它在具有或没有附加有效成分的情况下都可以有效地实现其预期目的。虽然单个患者的需要可能变化，但是化合物和组合物的有效量的最佳范围的确定在本领域普通技术人员的技能之内。通常，提供有效量的组合物所需的和本领域普通技术人员可以调节的剂量可以根据接受者的年龄、健康、身体状况、性别、体重、功能障碍的程度、治疗的频率和功能障碍的性质和范围而变化。

本文所用的术语“患者”或“受试者”及其语法上的等同语可以包括哺乳动物，如人，包括需要治疗者。根据语境，术语“患者”和“受试者”有时可以互换使用。

本文所用的术语“平均值”及其语法上的等同语可以指数学平均值。通常可以通过将一组确定的数字相加，然后将该总和除以该组中成员的个数来计算平均值。例如，一组数字1、2、3、4和5的平均值为3((1+2+3+4+5)/(5)＝3)。

本文所用的术语“激活剂”及其语法上的等同语可以用来描述导致另一种物质例如所测物质增加的物质。例如，cAMP激活剂可以导致cAMP的水平增加；cGMP激活剂可以导致cGMP的水平增加；或者SHH激活剂可以导致SHH的水平增加。

当在测量的情境中使用时，本文所用的术语“水平”及其语法上的等同语可以指，例如，核酸、蛋白质、细胞等的水平。例如，SHH水平可以意指SHH蛋白质或SHH核酸水平。在一些情况下，例如，当术语“水平”是指蛋白质时，术语“水平”还可以指酶活性。在一些情况下，例如，当术语“水平”是指浓度时，术语“水平”还可以指物质的浓度(例如，按照蛋白质表示)或物质的量(例如，按照蛋白质表示)。

本文所用的术语“剂量”和“剂量的量”及其语法上的等同语可以意指，提及的药物可被配制为适合于口服施用、跨粘膜施用、颊部施用、吸入施用、鼻内施用、肠胃外施用、静脉内施用、皮下施用、肌内施用、舌下施用、经皮施用和直肠施用的任何类型的剂型。

本文所用的术语“特异性PDE抑制剂”或“选择性PDE抑制剂”及其语法上的等同语可以用来描述相对于PDE受体的一种特定亚型的选择性，例如，具有抑制一种特定PDE受体亚型的偏好，但还可以表现出某种程度的混杂性。混杂性的程度可以变化，但小于50％，例如，49％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或5％或更低。

本文所用的术语“通信媒介”及其语法上的等同语可以指信息通信的任何手段。通信媒介的示例性类型可以包括但不限于书面、打印和电子类型的媒介。在不脱离本公开内容的精神和范围的情况下，通信媒介的其他类型对于相关领域的技术人员而言将是显而易见的。

本文所用的术语“其组合”及其语法上的等同语可以指所提到的组的一个或多个成员。例如，如果该组包含A、B或其任意组合，则考虑到单独的A、单独的B以及A和B的组中的每一种。

本文所用的术语“嗅觉测量”及其语法上的等同语可以指嗅觉的灵敏度的测试和测量。例如，可以通过对四种气味(吡啶、硝基苯、噻吩和乙酸戊酯)进行检测(DT)和识别(RT)阈值的确定、量值估计(ME)和愉悦性评价(H)来进行嗅觉测量。此外，嗅觉功能的异常可以包括对于一种或多种提供的气味，DT和/或RT升高至正常值以上(灵敏度降低)和/或ME降低(灵敏度降低)，或者对于吡啶和噻吩的气味，不愉悦感降低，或者对于硝基苯或乙酸戊酯的气味，不愉悦感增加。

本文所用的术语“主观改善”及其语法上的等同语可以指基于1-100的等级，对于所有外界气味的感知改善的测量值，其中100表示完全恢复正常的嗅觉功能，其中响应在1-100内适当地定级。“主观改善”及其语法上的等同语可以指风味(flavor)感知的改善，如可以按照1-100等级的响应来测量，其中100表示食物的所有风味均被认为是正常的，而<100的响应总是给予较低的等级。味觉功能的主观改善也可以采用以相同的1-100等级测量的对于咸、甜、酸和苦味促味剂的味觉变化来测量，其中100表示对于这四种促味剂中的每一种均恢复正常，而<100的响应总是给予较低的等级。

方法实施方案

味觉或嗅觉的损失或失真是可能影响到数百万人的问题。然而，没有良好的生物化学标志物可用来有效地诊断这种味觉或嗅觉的损失或失真。目前市场上也没有治疗味觉或嗅觉的损失或失真的好的治疗选择。

本文公开了用于诊断和/或治疗具有味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的受试者的方法。该方法可以包括(a)从受试者获得一个或多个生物样品；(b)测量来自该受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；和(c)根据可能低于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。本发明的方法可进一步包括以下至少一步：(a)治疗被诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的受试者；(b)经由通信媒介传送该诊断结果；和(c)计算机执行该诊断。

本文还公开了评估受试者的味觉和/或嗅觉的改善、衰退和/或无变化例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的方法。该方法可以包括(a)采用一种或多种药物治疗受试者；(b)从该受试者获得一个或多个生物样品；(c)测量来自该受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；和(d)根据可能高于、低于和/或等于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。

本文所述的方法可以包括分析来自受试者的一个或多个生物样品以确定一种或多种生物物质的水平。所述一个或多个生物样品可以包括一种或多种体液。所述一种或多种体液可以包括，例如，全血样品、血清样品、血浆样品、尿液样品、唾液样品、粘液样品、汗液样品或其任意组合。在一些情况下，所述一个或多个生物样品可以包括粘液样品。更具体地，该粘液样品可以包括鼻粘液样品。鼻试样(例如，鼻粘液样品)的使用可以提供获得用于分析的生物样品的最低程度侵入性方式。在其他情况下，所述一个或多个生物样品可以包括唾液样品。唾液样品的使用可以提供获得用于分析的生物样品的备选的最低程度侵入性方式。从患者中提取体液的另一种最低程度侵入性方式是通过收集汗液样品。收集汗液样品的方法在本领域技术人员的能力之内。一些患者可能更愿意进行血液检验。在这些情况下，体液可以是全血、血浆或血清样品，并且可以单独使用或互相组合使用。该分析的结果可能适用于诊断、预后和治疗干预的适用性的确定。

本文所用的术语“刺猬信号途径的一个或多个成员”及其语法上的等同语可以包括刺猬信号途径的已知或未知的成员。例如，刺猬信号途径的已知成员可以包括刺猬信号途径的目前已知的成员：音猬蛋白(SHH)、沙漠刺猬蛋白(DHH)和印度刺猬蛋白(IHH)。可通过比较核酸与蛋白质序列的同源性找到刺猬信号途径的未知成员。虽然本发明针对刺猬信号途径的所有成员，但是特定的刺猬成员可具有重要影响。因此可以预期，本发明可以重点在于SHH、DHH、IHH或其任意组合。例如，本文公开的实施方案可以重点在于SHH。

本文所用的术语“生物物质”及其语法上的等同语可以包括细胞和/或其细胞外和/或细胞内组分。例如，生物物质可以包括病原体、代谢物、DNA、RNA、脂质、蛋白质、碳水化合物、受体、酶、激素、生长因子、生长抑制因子、细胞、器官、组织，细胞、组织和/或器官的部分，亚细胞器，化学反应性分子如H⁺、超氧化物、ATP、柠檬酸、蛋白质白蛋白，以及这些类型的生物变量的组合或集合呈现。此外，生物物质可以包括治疗剂，例如但不限于甲氨蝶呤、类固醇、非甾体抗炎药、可溶性TNF-α受体、TNF-α抗体和白介素-1受体拮抗剂。

生物物质可以包含选自SHH、DHH和IHH的刺猬信号途径的一个或多个成员。刺猬信号途径的一个或多个成员的水平可以指示受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。如本文所公开的，“刺猬信号途径的一个或多个成员的水平”可以指它的生物水平，例如，核酸和/或蛋白质。

生物物质可以包含细胞因子，如促炎性细胞因子或抗炎性细胞因子。促炎性细胞因子可以包括IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α或其任意组合。抗炎性细胞因子可以包括IL-1ra、IL-10、IFN-γ、IFN-β或其任意组合。促炎性细胞因子和抗炎性细胞因子的平衡也可以指示受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。

生物物质可以包含细胞因子受体，如I型细胞因子受体、II型细胞因子受体、免疫球蛋白超家族的成员、肿瘤坏死因子受体家族的成员、趋化因子受体和/或TGFβ受体。细胞因子受体可以包括IL-1RII和/或IL-2R。

生物物质可以包含嗜酸性粒细胞。生物物质还可以包含IgE蛋白质。生物物质可以包含环核苷酸(例如，cAMP和cGMP)。生物物质还可以包含一氧化氮(NO)。

所述一种或多种生物物质的水平可以单独地与阈值水平进行比较。本文所述的阈值水平可以是在包括具有正常味觉和/或嗅觉功能的受试者的对照群体中测得的特定生物物质的平均水平。例如，如果该生物物质的水平高于或低于该生物物质的阈值水平，则受试者可以被诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，和/或对此进行治疗。在某些情况下，刺猬信号途径的一个或多个成员的水平比所述阈值水平低至少一个数量级。例如，比所述阈值水平低2、3、4、5、10、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、50、60、70 80、90、100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900或1000个或更多个数量级。

样品收集

本文所述的方法可以使用一个或多个生物样品。该生物样品可以通过各种方法从各种来源收集，其包括但不限于通篇描述的那些方法。可以从受试者中收集所述一个或多个生物样品以供分析。所述一个或多个生物样品可以包括一种或多种体液。例如，所述一种或多种体液可以包括全血样品、血清样品、血浆样品、尿液样品、唾液样品、粘液样品、汗液样品或其任意组合。最容易获得的体液之一是粘液，它可以是鼻粘液样品；本发明考虑使用鼻粘液样品。另一种容易获得的体液可以是唾液，并且在本文公开的实施方案中特别考虑。此外，因为血液样品有时同样容易获得，所述一种或多种体液可以包括血液样品、血清样品、全血样品或其任意组合。可在本发明中使用的另一种容易获得的体液是汗液样品。

如果所述一种或多种生物试样来自例如鼻区(例如，鼻粘液样品)，可以将鼻分泌物的样品从鼻中直接收集至收集管或装置中。也考虑了备选的收集方法。例如，可通过将样品收集装置伸入患者的鼻孔将鼻分泌物的样品收集于该样品收集装置上。可将该装置依次插入患者的每个鼻孔中，并在缓慢旋转的同时平行于硬腭前行。通常随后将该装置转移至输送管，如玻璃或塑料试管。该输送管可以包含适当体积的无菌介质如乙醇等。

其他体液，如唾液样品，例如，可以通过排出、吐出、吸出和/或擦拭来获得，以收集唾液，例如混合的唾液。为了更好地促进收集，可以采用味觉或咀嚼刺激来增加唾液的流出。另一种收集方法可以是使用放置在Stensen导管上的改良Lashley杯，或采用柠檬汁刺激舌以获得腮腺唾液，例如，纯唾液。

如先前所述，可以通过例如静脉穿刺或刺破手指收集血液样品。可将全血样品收集于例如管(例如，真空管、毛细管)、注射器或袋子中。血浆和血清样品可通过例如离心由血液样品得到。

可将尿液样品收集于例如杯子中或进行24小时收集。

可将汗液样品收集于例如管中，并可进一步纯化以供分析。可通过任何已知的方法进行收集。特别地，可以使用特殊的汗水刺激程序收集汗水样品。例如，(a)可将汗水刺激液涂敷在皮肤上以创建刺激区域；(b)可将电极放置于该刺激区域上；(c)可使该刺激区域暴露于弱电；和(d)可从该刺激区域收集汗水至塑料导管圈中或一片纱布或滤纸上。

鼻样品收集装置可以是拭子、木制压舌板、吸水材料如棉球、滤纸或纱布垫、尖头具有吸收剂的敷抹器、毛细管或移液管。拭子可以用作样品收集装置，并且样品处理元件可以包括拭子支撑物或拭子处理插入物。拭子支撑物或拭子处理插入物可以是锥形的或成角度的，以通过使具有不同纤维量或被缠绕至不同紧密度水平的拭子牢固地保持在支撑物或插入物内，而使单种样品处理元件适应所有类型的拭子。在某些情况下，拭子支撑物或拭子处理插入物可以牢固地支持拭子以提供稳定性。还可以从来自鼻腔的自发性排出物中收集鼻样品。

可以在一段时间内(例如，一天、一周、一个月、多于一个月、每半年、每年、几年等)反复地(例如，每天一次、每周一次、每月一次、每半年或每年)从个体中收集样品。在一段时间内从个体获得许多样品可以用来验证早期检测的结果和/或用来鉴定由例如药物治疗引起的改变。可以从人或非人个体获得样品。

分析

一旦收集了样品，就可使用它们来测定一种或多种相关生物物质的水平。

可以收集一个或多个生物样品并使用一种或多种分析技术进行分析，包括酶技术、ELISA、荧光技术、质谱法、可见光分光光度技术、HPLC、GLC、PCR、蛋白质和核酸测序和/或其他类似技术。该分析可以包括确定所述一个或多个生物样品中一种或多种生物物质的存在和/或水平。一旦该分析完成，就可以进行诊断和/或治疗。

聚合酶链反应(PCR)

聚合酶链反应(PCR)是一种用于扩增在核酸中发现的一种或多种所需特异性核酸序列的过程。由于该过程可产生大量的特异性序列，因此该过程可用于提高克隆DNA或信使RNA的效率和用于扩增靶序列以促进其检测。

PCR包括相对于所涉及的反应步骤数目以指数量产生至少一种特异性核酸序列的链反应，条件是：(a)充分详细地了解所需序列的两端以使得可以合成将与它们杂交的寡核苷酸，和(b)可利用少量的所述序列开始该链反应。该链反应的产物将会是末端对应于所用特异性引物的末端的离散的核酸双链体。

纯化或非纯化形式的任意来源的核酸可用作一种或多种起始核酸，条件是它含有或怀疑含有所需的特异性核酸序列。因此，该过程可以采用例如DNA或RNA，包括信使RNA，该DNA或RNA可以是单链或双链的。此外，可以使用含有各自一条链的DNA-RNA杂合体。还可以采用任意这些核酸的混合物，或者可以如此利用由此处先前的扩增反应使用相同或不同引物产生的核酸。待扩增的特异性核酸序列可以仅为较大分子的一部分，或者最初可以作为离散分子存在，使得该特异性序列构成整个核酸。待扩增的序列不需要最初以纯的形式存在；它可以是复杂混合物的较小部分，如完整的人DNA中含有的β-珠蛋白基因的一部分，或由特定微生物产生的核酸序列的一部分，该生物可能仅构成特定生物样品的较小部分。起始核酸可以含有多于一种所需的特异性核酸序列，这些序列可以是相同或不同的。因此，这不仅对产生大量的一种特异性核酸序列是有用的，而且对同时扩增位于相同或不同核酸分子中的多于一种不同的特异性核酸序列也是有用的。

所述一种或多种核酸可以从任意来源获得，例如，来自质粒如pBR322，来自克隆的DNA或RNA，或来自任意来源的天然DNA或RNA，所述任意来源包括但不限于细菌、酵母、病毒和高等生物如植物或动物。DNA或RNA可提取自，包括但不限于，血液(全血、血浆、血清)、组织材料如绒毛膜绒毛或羊膜细胞。该DNA或RNA可以是无细胞DNA或RNA。

应当理解，所用词语“引物”可以指多于一种引物，尤其是在关于待扩增片段的末端序列的信息在一定程度上不明确的情况下。例如，在由蛋白质序列信息推测核酸序列的情况下，基于遗传密码的简并性而含有代表所有可能密码子变异的序列的引物集合将用于每条链。来自该集合的一种引物可以与待扩增的所需序列的末端100％同源。

可以加入合适的试剂以诱导或催化引物延伸反应，并且可使该反应在本领域已知的条件下发生。该诱导剂可以是用以实现引物延伸产物的合成的任何化合物或系统，包括但不限于酶。用于该目的的合适的酶可包括，例如，大肠杆菌DNA聚合酶I、大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段、T4DNA聚合酶、其他可用的DNA聚合酶、逆转录酶，以及包括热稳定酶在内的其他酶，它们以适当方式促进核苷酸的组合以形成与每条核酸链互补的引物延伸产物。通常，所述合成可以在每个引物的3'端开始，并沿着模板链在5'方向上进行，直到合成终止，从而产生不同长度的分子。然而，可以存在诱导剂，其使用如上所述相同的过程在5'端开始合成并在另一方向上进行。

新合成的链及其互补核酸链可以形成可在所述过程的后续步骤中使用的双链分子。下一步，可以分离该双链分子的链以提供单链分子。新的核酸可以在单链分子上合成。为了使该反应在上述条件下进行，必要时可以加入附加的诱导剂、核苷酸和引物。此外，可以在寡核苷酸引物的一端开始合成，并可以沿着模板的单链进行以产生额外的核酸。在这一步骤之后，一半的延伸产物可以由被这两个引物所限制的特异性核酸序列组成。链分离和延伸产物合成的步骤可以根据需要频繁地重复，以产生所需量的特异性核酸序列。产生的特异性核酸序列的量可以以指数方式积累。在经过适当的时间长度而产生所需量的特异性核酸序列之后，可通过以任何已知方式使酶失活或分离该反应的组分来终止反应。

当可用于分析的核酸的量较少时，例如在使用从胎儿细胞或母亲血浆/血清/血液获得的DNA进行镰状细胞贫血的产前诊断时，扩增可能是有用的。如果可以使用可能固有不灵敏的非放射性检测技术对小样品进行这样的分析，或在采用放射性技术但可能期望快速检测的情况下，扩增可能尤其有用。

本文所述的测定可以使用任何已知的核酸(例如，DNA和RNA)扩增技术。一些扩增技术是聚合酶链反应(PCR)方法，其可以包括但不限于溶液PCR和原位PCR。

本发明不限于仅使用简单(straightforward)的PCR。例如可以使用嵌套引物的系统。还可以应用本领域已知的其他合适的扩增方法，例如但不限于连接酶链反应(LCR)、链置换扩增(SDA)、自动维持序列复制(3SR)、基于阵列的试验、数字PCR和TAQMAN。

本文所用的“扩增”可以指增加核酸序列的拷贝数的任何体外方法，例如，使用DNA聚合酶。核酸扩增可以导致核苷酸掺入DNA分子或引物中，从而形成与DNA模板互补的新的DNA分子。新形成的DNA分子和它的模板可以用作模板来合成额外的DNA分子。如本文所用的，一个扩增反应可以由多轮DNA复制组成。DNA扩增反应可以包括，例如，聚合酶链反应(PCR)。一个PCR反应可以由5-100个“循环”的DNA分子的变性、退火和合成组成。

核酸测序

核酸测序可以用于检测生物样品中的生物物质。核酸测序能够检测核酸的存在与否，测定核酸的水平，以及测定确切的核苷酸序列。所述方法可通过任何已知的方法进行，例如，Maxam-Gilbert测序、Sanger测序、鸟枪法测序、桥式PCR、大规模平行特征测序(MPSS)、聚合酶克隆(polony)测序、454焦磷酸测序、Illumina(Solexa)测序、SOLiD测序、Ion Torrent半导体测序、DNA纳米球测序、heliscope单分子测序和/或单分子实时(SMRT)测序。可以使用其他测序方法，如纳米孔DNA测序、隧道电流DNA测序、杂交测序、质谱法测序、微流体Sanger测序、基于显微术的技术、RNAP测序和/或体外病毒高通量测序。文献中公开了这些方法。

荧光显微术

荧光显微术可以用于检测生物样品中的生物物质。荧光显微术可使得能够通过使用高化学特异性的荧光标记探针如抗体来鉴定正在观测的结构的分子组成。这可以通过使荧光团与蛋白质直接缀合并将其引回到细胞中来完成。荧光类似物的行为可以像天然蛋白质，因此可以用于揭示此蛋白质在细胞中的分布和行为。连同NMR、红外光谱法、圆二色性和其他技术一起，蛋白质固有荧光衰变及其相关的对荧光各向异性、碰撞猝灭和共振能量转移的观测是用于蛋白质检测的技术。显微术也可以用来检测细胞如嗜酸性粒细胞，以及对其计数。

天然荧光蛋白可以用作荧光探针。维多利亚多管发光水母(jellyfish aequorea victoria)产生被称为绿色荧光蛋白(GFP)的天然荧光蛋白。这些荧光探针与靶蛋白的融合使得能够通过荧光显微术可视化和通过流式细胞术定量。对本发明范围不作限制，一些探针如下：

标记：荧光的灵敏性和安全性(与放射性方法相比)已导致越来越多地用于特异性标记核酸、蛋白质和其他生物分子。除了荧光素以外，其他荧光标记还覆盖了400至820nm的全部范围。仅举例而言，一些标记可以是：荧光素及其衍生物、羧基荧光素、罗丹明及其衍生物、atto标记、荧光红和荧光橙：Cy3/Cy5择一、具有长寿命的镧系元素络合物、长波长标记-可达800nm、DY花青标记和藻胆蛋白。

缀合物：可以生成对于实际上任何表位均具有特异性的抗体缀合物，因此它们适用于使许多生物分子成像。仅举例而言，一些缀合物可以是：异硫氰酸缀合物、链霉亲和素缀合物和/或生物素缀合物。

酶底物：仅举例而言，一些酶底物可以是荧光和发色底物。

微颗粒和纳米颗粒：仅举例而言，一些荧光染料可以是：FITC(绿色荧光，激发/发射＝506/529nm)、罗丹明B(橙色荧光，激发/发射＝560/584nm)和尼罗蓝A(红色荧光，激发/发射＝636/686nm)。荧光纳米颗粒可以用于不同类型的免疫测定。荧光纳米颗粒可以基于不同的材料，如聚丙烯腈和聚苯乙烯。

分子转子：荧光分子转子是微环境限制的传感器，当它们的旋转受到约束时变为发荧光的。分子约束的几个实例可以包括增加的染料(聚集)、与抗体的结合或受困于肌动蛋白的聚合作用。

IEF-标记物：IEF(等电聚焦)是用于分离两性电解质(主要是蛋白质)的分析工具。采用荧光IEF-标记物的IEF-凝胶电泳的优点是直接观测到梯度形成的可能性。还可以通过280nm(20℃)处的紫外吸收检测到荧光IEF-标记物。

任意或全部这些荧光探针可以用于检测鼻粘液中的生物物质。可以在固体支持物上合成肽文库，并且通过使用着色受体，可以逐个选择随后染色的固体支持物。如果受体不能显示任何颜色，则可以将它们的结合抗体染色。所述方法不仅可以用于蛋白质受体，而且还用于筛选合成的人工受体的结合配体以及筛选新的金属结合配体。还可以使用HTS和FACS(荧光激活细胞分选仪)的自动化方法。FACS机器最初使细胞流过毛细管，并通过检测它们的荧光强度来分离细胞。

免疫测定

免疫测定可以用于检测生物样品中的生物物质。在免疫印迹法如电泳分离的蛋白质的Western印迹中，单个蛋白质可通过它的抗体来鉴定。免疫测定可以是竞争性结合免疫测定，其中分析物与标记的抗原竞争有限的一批抗体分子(例如，放射免疫测定，EMIT)。免疫测定可以是非竞争性的，其中抗体过量存在并且被标记。随着分析物抗原复合物增加，标记的抗体-抗原复合物的量可能也增加(例如，ELISA)。如果抗体是通过向实验动物注射抗原产生的，则抗体可以是多克隆的，或者如果抗体是由细胞融合和细胞培养技术产生的，则抗体是单克隆的。在免疫测定中，抗体可以用作分析物抗原的特异性试剂。

对本发明的范围和内容不作限制，免疫测定的一些类型可以是，仅举例而言，RIA(放射免疫测定)、酶免疫测定如ELISA(酶联免疫吸附测定)、EMIT(酶放大免疫测定技术)、微粒酶免疫测定(MEIA)、LIA(发光免疫测定)和FIA(荧光免疫测定)。这些技术可用于检测鼻试样中的生物物质。可以用放射性同位素(例如，125I)、荧光染料(例如，FITC)或可催化荧光或发光反应的酶(例如，HRP或AP)标记抗体——用作第一抗体或第二抗体。

EMIT(酶放大免疫测定技术)：EMIT是一种省略了分离步骤的竞争性结合免疫测定。EMIT是免疫测定的一种类型，其中可以用酶标记蛋白质，并且酶-蛋白质-抗体复合物可以酶促失活，以允许未标记的蛋白质的定量。

ELISA(酶联免疫吸附测定)：本发明还可以使用ELISA来检测鼻试样中的生物物质。ELISA基于与酶反应组合的附接至固体支持物的选择性抗体以产生能够检测低水平蛋白质的系统。它还被称为酶免疫测定或EIA。蛋白质可通过针对它而产生的抗体来检测，即，该蛋白质是该抗体的抗原。通常使用单克隆抗体。

所述试验可能要求将抗体固定至固体表面如试管的内表面以及制备与酶偶联的相同抗体。该酶可以是由无色底物产生有色产物的酶(例如，β-半乳糖苷酶)。例如，可通过将待测定的抗原溶液(例如，蛋白质)装入试管中进行所述试验。存在的任何抗原分子可以与固定的抗体分子结合。可将抗体-酶缀合物加入反应混合物中。该缀合物的抗体部分与先前结合的任何抗原分子结合，从而产生抗体-抗原-抗体“夹心结构(sandwich)”。在洗掉任何未结合的缀合物之后，可以添加底物溶液。在设置的时间间隔之后，可以终止反应(例如，通过添加1N NaOH)，并且可以在分光光度计中测量形成的有色产物的浓度。颜色的强度可以与结合的抗原的浓度成比例。

ELISA还可以适合于测量抗体的浓度，在此情况下，孔可以用合适的抗原包被。可以添加含有抗体的溶液(例如，血清)。在有时间与固定的抗原结合之后，可以添加由针对正在检测的抗体的抗体组成的酶缀合的抗免疫球蛋白。在洗掉未反应的试剂之后，可以添加底物。产生的颜色的强度可以与结合的酶标记的抗体的量成比例(因此与正在测定的抗体的浓度成比例)。

放射免疫测定：本发明的一些实施方案可以包括用来检测生物样品例如鼻试样中的生物物质的放射免疫测定。放射性同位素可以用于研究体内代谢、分布和少量化合物的结合。在体内可以使用¹H、¹²C、³¹P、³²S和¹²⁷I的放射性同位素，如³H、¹⁴C、³²P、³⁵S和¹²⁵I。

在96-孔板中的受体固定方法中，可通过使用抗体或化学方法将受体固定在每个孔中，并可将放射性标记的配体加入每个孔中以诱导结合。可洗出未结合的配体，随后可通过结合的配体的放射性或洗出的配体的放射性的定量分析来确定标准。随后，筛选靶化合物的添加可诱导与受体的竞争性结合反应。如果化合物显示对受体的亲和力高于标准放射性配体，则大多数放射性配体将不会结合受体并可留在溶液中。因此，通过分析结合的放射性配体(或洗出的配体)的量，可以指示测试化合物对受体的亲和力。

当受体不能被固定在96-孔板时，或当配体结合需要在溶液相中完成时，可能需要滤膜法。换言之，在溶液中的配体-受体结合反应之后，如果反应溶液可以通过硝化纤维滤纸过滤，则包括配体在内的小分子可穿过滤纸，而只有蛋白质受体能够留在滤纸上。只有与受体牢固结合的配体可以留在滤纸上，并可通过对标准放射性配体的定量分析来鉴定所添加的化合物的相对亲和力。

荧光免疫测定：本发明还可以包括用于检测生物样品中的生物物质的荧光免疫测定。基于荧光的免疫学方法可以根据标记的配体相对于未标记的配体在高度特异性受体位点上的竞争性结合。荧光免疫测定也可以用来检测细胞如嗜酸性粒细胞，并对其计数。

根据荧光寿命随着改变分析物浓度而变化，荧光技术可以用于免疫测定。该技术可以与短寿命的染料如异硫氰酸荧光素(FITC)(供体)一起使用，该染料的荧光可通过能量转移至曙红(接受体)而猝灭。可以使用许多光致发光化合物，如花青、噁嗪、噻嗪、卟啉、酞菁、荧光红外发射多核芳香烃、藻胆蛋白、方酸菁和有机金属络合物、烃和偶氮染料。

基于荧光的免疫学方法可以是例如非均相的或均相的。非均相免疫测定可以包括游离的标记分析物与结合的标记分析物的物理分离。可将分析物或抗体附接至固体表面。该技术可以是竞争性的(较高的选择性)或非竞争性的(较高的灵敏性)。检测可以是直接的(仅使用一种类型的抗体)或间接的(可以使用第二种类型的抗体)。均相免疫测定可以不包括物理分离。双抗体荧光团标记的抗原可以参加与针对该抗原和该荧光团的抗体的平衡反应。标记和未标记的抗原可以竞争有限数目的抗-抗原抗体。

一些荧光免疫测定方法可以包括简单的荧光标记法、荧光共振能量转移(FRET)、时间分辨荧光(TRF)和扫描探针显微术(SPM)。通过使用相关的荧光，简单的荧光标记法可以用于受体-配体结合、酶活性，并作为各种体内生理学变化如pH、离子浓度和电压的荧光指示。TRF是在其他荧光分子的发射结束之后可选择性测量镧系的荧光的方法。TRF可以与FRET一起使用，并且镧系可以变成供体或接受体。在扫描探针显微术中，在捕获阶段，例如，至少一种单克隆抗体可以附着至固相，并且可以利用扫描探针显微镜检测可存在于固相的表面上的抗原/抗体复合物。扫描隧道显微术的使用可以消除对于标记的需要，所述标记通常可在许多免疫测定系统中用于检测抗原/抗体复合物。

核磁共振(NMR)

本发明还可以包括用于检测生物样品中的生物物质的NMR。NMR光谱分析可以在原子分辨率下确定生物大分子如蛋白质和核酸的结构。此外，有可能采用NMR来研究时间依赖性现象，如大分子的分子内动力学、反应动力学、分子识别或蛋白质折叠。可通过均一的或选择性的同位素标记将杂核如¹⁵N、¹³C和²H并入蛋白质中。此外，可采用这些方法确定关于大分子的结构和动力学的一些新信息。

X射线晶体法

本发明还可以包括用于检测生物样品中的生物物质的X射线晶体法。X射线晶体法是这样一种技术，其中记录了通过X射线衍射穿过晶体中紧密间隔排列的原子晶格而产生的图案，随后对其进行分析以揭示所述晶格的性质。这通常可以导致对物质的材料和分子结构的了解。可以使用布拉格定律确定晶格中的间距。通常可以使用材料的单晶进行X射线衍射，但是如果单晶不可获得，也可以使用可能需要不同设备的微晶粉末样品。

荧光光谱法

本发明还可以包括用于检测生物样品中的生物物质的荧光光谱法。仅举例而言，传统荧光分析法是针对荧光团的特定发射最大值在限定的波长下对发射光强度的测量方法。总荧光分析法是关于连续的吸光度及发射波长的数据的集合。荧光偏振是，使用偏振光激发并将荧光染料标记的抗原与特异性抗体结合。窄线光谱法(Line narrowing spectroscopy)是从窄线发射光谱中得到其选择性的低温固态光谱法。

时间依赖性荧光光谱法可以包括比稳态测量方法含有更多信息的时间分辨测量方法，因为稳态值代表时间分辨测定的时间平均值。这是一种单光子定时技术，其中测量了激发光脉冲与样品发射的第一个光子之间的时间。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(MALDI TOF-MS)

本发明可以包括用于检测生物样品中的生物物质的MALDI TOF-MS。MALDI TOF-MS提供精确的质量测定和一级序列信息。可通过利用单级或双级反射器(RETOF-MS)在MALDI TOF-MS中获得改善的质量分辨率。在反射器质谱中，可以良好地分辨同位素多重谱线，从而产生约3400的半峰宽度(FWHM)质量分辨率。采用RETOF-MS，对于高达约3000Da的肽，可以获得高达6000(FWHM)的质量分辨率。当测定离子的质量时，增强质量分辨率还可以提高质量准确度。

线性和反射器MALDI-TOF-MS均可用于分子离子的分子量测定和酶促消化，从而产生蛋白质的结构信息。通常在分子量测定之前，在进行或不进行纯化的情况下对这些消化物进行质量分析。已经开发了多种方法来利用MALDI TOF-MS获得蛋白质和肽的一级序列信息。可以采用两种不同的方法。第一种方法被称为蛋白质梯形测序，并且可以用来在插入TOF质谱仪及随后的分析之前产生分析物的具有结构信息的片段。第二种方法可以利用发生在TOF质谱仪内部的亚稳离子衰变的现象来产生序列信息。

采用TOF-MS的梯形测序包括从蛋白质/肽的N-或C-末端以时间依赖性或浓度依赖性的方式化学降解成片段，每一个片段相差一个氨基酸残基。可以在单个MALDI-TOF-MS实验中对该混合物进行质量分析，其中相邻质谱峰之间的质量差对应于特定的氨基酸残基。质谱中出现的顺序确定了在原始蛋白质/肽中的氨基酸的序列。

采用RETOF-MS MALDI的源后衰变是一种产生完整的质子化伪分子离子种类的电离技术。显著程度的亚稳离子衰变可以在离子加速之后且检测之前发生。肽和蛋白质的亚稳离子衰变产生的离子片段通常可以包括中性分子损失(如水、氨和氨基酸侧链的部分)和肽键处的随机切割。采用线性TOF-MS的源中衰变是一种用于研究MALDI生成的离子的亚稳离子衰变的RETOF-MS的替代方法。通过该方法可获得肽和蛋白质的一级结构信息。由这些亚稳衰变离子可以产生相干的质谱峰，从而产生肽和蛋白质的重要结构信息。

表面增强激光解析电离-飞行时间(SELDI-TOF)

本发明可以包括用于检测生物样品中的生物物质的SELDI TOF-MS。该技术可以利用构建有直径为1-2mm的化学(亲水的、疏水的、预活化的、正相、固定的金属亲和力，和阳离子的或阴离子的)或生物(抗体、抗原结合片段(例如，scFv)、DNA、酶或受体)诱饵表面的不锈钢或铝基支持物或芯片。这些不同的化学和生物化学表面可以允许基于蛋白质自身的固有特性而差别捕获蛋白质。可将小至0.1μl的体积的溶解组织或体液直接涂敷在这些表面上，其中对诱饵表面具有亲和力的蛋白质可以与之结合。在一系列洗涤以去除非特异性或微弱结合的蛋白质之后，结合的蛋白质可被激光解吸并离子化以供MS分析。可以基于飞行时间计算从小于1000Da的小肽到大于300kDa的蛋白质范围内的蛋白质的质量。由于可以分析不同样品中的蛋白质的混合物，因此可以对每一个测试样品产生唯一的样品指纹或特征。因此，SELDI分析可以产生质量图案而非实际的蛋白质鉴定。这些质谱图案可以用来对患者样品进行彼此区分，如病变样品与正常样品。

UV-Vis

本发明可以包括用于检测生物样品中的生物物质的光吸收光谱法(UV/VIS)。UV/VIS提供了光吸收数据，它有助于测定诸如蛋白质、DNA、核苷酸等大分子的浓度。有机染料可以用来增强吸收和用来使吸收转移到可见光范围(例如，考马斯蓝试剂)。拉曼共振光谱法(RRS)可以用来研究分子结构和动力学。RRS通过使用不同的激发波长帮助研究大分子的特定部分。

液相色谱法(LC)

本发明可以包括用于检测生物样品中的生物物质的LC。LC的实例为但不限于亲和色谱法、凝胶过滤色谱法、阴离子交换色谱法、阳离子交换色谱法、二极管阵列-LC和高效液相色谱法(HPLC)。

凝胶过滤色谱法可以根据大小分离蛋白质、肽和寡核苷酸。分子可以移动通过多孔珠子的床层，程度或大或小地扩散至珠子中。较小的分子可以进一步扩散至珠子的孔中，因此更缓慢地移动通过该床层，而较大的分子可以较少地或根本不进入，因此较快地移动通过该床层。分子量和三维形状均有助于保留的程度。凝胶过滤色谱法可用于分子大小的分析、混合物中组分的分离或从大分子的制剂中去除盐或更换缓冲液。

亲和色谱法是生物选择性吸附和随后从固定的配体中回收化合物的过程。该过程可允许许多不同的蛋白质和其他化合物的特异性和有效纯化。离子交换色谱法可以基于蛋白质的总电荷之间的差异来分离分子。它可以用于蛋白质、寡核苷酸、肽或其他带电荷分子的纯化。

HPLC可以用于鼻粘液中生物物质的分离、纯化和检测。粗组织提取物可以直接加载至HPLC系统上并通过梯度洗脱使之流通。如果批准或者需要进一步纯化，相同条件下的再次色谱法分析可以是一种选择。反相色谱法(RPC)可以在蛋白质结构测定的过程中使用。HPLC可以与MS耦合。HPLC方法描述于Henkin等人,New Frontiers in Immunobiology,2000,pp.127-152，其全文并入本文。

大小排阻色谱法(SEC)和离子交换色谱法(IEC)可以用于生物活性蛋白质如酶、激素和抗体的分离和纯化。在液相亲和色谱法(LAC)中，相互作用可基于由底物、受体等的模拟引起的蛋白质的结合。可通过引入竞争性结合剂或通过改变可促进解离的蛋白质构型来洗脱蛋白质。一种可在膜蛋白质的分离中使用的程序是使用非离子去污剂，如Triton X-100，或采用IEC通过有机溶剂的蛋白质溶解。

二极管阵列检测器-液相色谱法(DAD-LC)提供了每个HPLC峰的完整的多个光谱，它们通过比较可以提供峰纯度的指示。这些数据还可以确定tyr、trp、phe和可能的其他氨基酸(his、met、cys)的存在，并可以通过第二次衍生或多组分分析定量这些氨基酸。通过柱后衍生，DAD-LC还可以鉴定并定量单独肽中的cys、his和arg。因此，在单个LC运行中分析每种分离出的肽的20种氨基酸中的6种是可能的，并且可以在单个步骤中获得关于在给定肽中存在或不存在这些氨基酸的信息。这可以通过知晓每种肽中的残基数目而得到帮助。

电泳

本发明可以包括用于检测生物样品中的生物物质的电泳。电泳可以是凝胶电泳或毛细管电泳。

凝胶电泳：凝胶电泳是可用于分离蛋白质的技术。在电泳过程中，当施加电流时大分子被迫使移动通过孔。它们通过电场的迁移速率取决于电场的强度、分子的大小和形状、样品的相对疏水性，以及取决于离子强度和缓冲液(分子在其中移动)的温度。染色之后，在从凝胶的一端扩散至另一端的一系列条带中可见在每条泳道中分离的大分子。使用该技术可以使得能够分离并鉴定相差低至单个氨基酸的蛋白质分子。而且，凝胶电泳可以允许测定蛋白质的重要性质，如它的等电点和近似分子量。电聚焦或等电聚焦是根据不同分子的电荷差异(如果它们具有任意电荷)而使之分离的技术。该技术是区带电泳的一种类型，它利用分子的电荷随着其周围pH的变化而变化的事实。

毛细管电泳：毛细管电泳是一系列分离技术的集合，它可以包括跨越装有缓冲液的毛细管施加高压以实现分离。其变化可以包括基于分析物之间的大小和电荷差异的分离(被称为毛细管区带电泳(CZE)或自由溶液CE(FSCE))，使用表面活性剂胶束分离中性化合物(胶束电动毛细管色谱法(MECC)或有时被称为MEKC)，通过凝胶网络筛分溶质(毛细管凝胶电泳，GCE)，基于电泳迁移率的阳离子(或阴离子)的分离(毛细管等速电泳，CITP)，和pH梯度内两性溶质的分离(毛细管等电聚焦，CIEF)。毛细管电色谱法(CEC)可以是一种相关的电动分离技术，它包括跨越装有硅胶固定相的毛细管施加电压。CEC的分离选择性可以是电泳和色谱过程的任意组合。许多CE分离技术可依赖于在毛细管内存在电诱导的溶液流(电渗流，EOF)以将溶质泵送到检测器中。

阵列

本发明可以包括用于检测生物样品中的生物物质的阵列。阵列可以包括相对于已知的蛋白质靶标进行多个样品的平行分析。各种微阵列平台的开发能够实现并加快对细胞或组织内蛋白质丰度、定位和相互作用的测定。微阵列可以提供允许针对表征的一组蛋白质、抗体或肽鉴定蛋白质相互作用或功能的平台。基于蛋白质的芯片可以使蛋白质排列在小表面上，并可以使用基于荧光的成像直接测量组织中的蛋白质水平。蛋白质可以排列在平坦的固相上或毛细管系统(微流体阵列)中，并且可将若干种不同的蛋白质涂敷在这些阵列上。除了使用抗体作为阵列探针以外，单链寡核苷酸也提供了一种可行的选择，其特异性通过体外洗脱来优化(适体)。随后可使用非特异性蛋白质染色剂来检测结合的蛋白质。

阵列可以包括但不限于珠子阵列、基于珠子的阵列、生物阵列、生物电子阵列、cDNA阵列、细胞阵列、DNA阵列、基因阵列、基因表达阵列、冷冻细胞阵列、基因组阵列、高密度寡核苷酸阵列、杂交阵列、微悬臂梁阵列、微电子阵列、多重DNA杂交阵列、纳米阵列、寡核苷酸阵列、寡糖阵列、平面阵列、蛋白质阵列、溶液阵列、斑点阵列、组织阵列、外显子阵列、滤波阵列、宏阵列、小分子微阵列、悬浮阵列、主题阵列(theme array)、瓦片阵列(tiling array)和转录物阵列。

传感器

本发明可以包括用于检测生物样品中的生物物质的传感器。传感器可以用于体内和体外检测。传感器可以是化学传感器、光学传感器和生物传感器。化学传感器可以是小型分析装置，其可以传送关于复杂样品中存在特定化合物或离子的实时和在线信息。光学传感器可以基于分析物固有的光学性质或指示染料或附接至固体支持物上的标记的生物分子的光学性质的测量。生物传感器可以是基于酶将底物转化为产物的能力的亲和力生物传感器，或催化生物传感器。生物传感器可以使用各种物理方法检测抗体和分析物复合物。一些生物传感器可以测量当分析物与抗体或其他结合剂结合(该抗体或其他结合剂又结合至表面)时发生的表面电荷的变化。其他生物传感器可以使用附接至表面的结合剂，并测量在分析物结合时该支持物的物理性质而非表面电荷的变化。一些生物传感器技术可以使用标记的结合剂或抗原的特定性质来产生可测量的变化。

由文库筛查鉴定蛋白质的方法

仅举例而言，蛋白质鉴定方法可以包括通过Edman降解的低通量测序、质谱技术、肽质量指纹分析、从头测序和基于抗体的测定。蛋白质定量测定可以包括荧光染料凝胶染色、标记或化学修饰方法(即，同位素编码的亲和标签(ICATS)，组合分数对角线色谱法(COFRADIC))。纯化的蛋白质还可以用于确定三维晶体结构，该结构可用于模拟分子间相互作用。用于确定三维晶体结构的常见方法可以包括X射线晶体法和NMR光谱法。以下详述了本发明中几种用于鉴定蛋白质的方法。

蛋白质测序：N-末端测序可以帮助鉴定未知蛋白质，可以证实重组蛋白质的同一性和保真度(阅读框、翻译起点等)，可以帮助解释NMR和晶体学数据，可以显示出蛋白质之间的同一性程度，或可以为用于生成抗体的合成肽的设计提供数据等。N-末端测序可以利用Edman降解化学，顺序地从蛋白质的N-末端去除氨基酸残基，并通过反相HPLC鉴定它们。灵敏度可以为100s飞摩尔的水平，并且通常可以从很少的10s皮摩尔的起始材料获得长序列读序(read)(20-40个残基)。纯蛋白质(>90％)可以容易地生成解释的数据，但是不充分纯化的蛋白质混合物也可以提供有用的数据，经受严格的数据解释。N-末端修饰的(尤其是乙酰化的)蛋白质不能被直接测序，因为游离的伯氨基的缺失阻止了Edman化学。然而，嵌段蛋白质的限制性蛋白质水解(例如，使用溴化氰)可以允许在仪器的每个循环中生成氨基酸的混合物，其可以经历数据库分析以便解释有意义的序列信息。C-末端测序可以是翻译后修饰，这影响了蛋白质的结构和活性。各种疾病状况可能与受损的蛋白质加工相关，而C-末端测序提供了额外一种用于研究蛋白质结构和加工机理的工具。

蛋白质组分析：蛋白质组学可主要通过计算机搜索算法来鉴定，该算法为序列赋予了一组凭经验获得的质量/强度数据，这些数据通过对感兴趣的蛋白质进行电喷雾电离(ESI)、基质辅助激光解析/电离(MALDI-TOF)或三维四极离子阱而生成。

诊断

总的来说，本公开内容的组合物和方法可以通过检测一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员来提供嗅觉损失和/或失真(例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失)和/或味觉损失和/或失真(例如，味觉减退、味觉障碍、味觉丧失)的诊断或治疗。

生物物质的实例

仅举例而言，可以在本文公开的方法中分析和/或测量的各种物质可以包括蛋白质、碳水化合物、脂质、控制食欲的激素(例如，瘦素、生长素释放肽)、胆固醇和其他脂质，以及控制脂质代谢的携带脂质的蛋白质、生长因子(例如，肝生长因子、粒细胞集落生长因子、脑源性神经营养因子)和抗体、肝酶(例如，SGOT、SGPT)、滥用的治疗性和消遣性药物、痕量金属[或者是毒性过大(例如，铅、汞、砷)或涉及锌、铜、镁的营养缺乏性疾病中的金属]，以及大多数在血浆、红细胞、尿液、唾液和汗液中发现的其他物质。鼻粘液中的每种代谢物可以反映每种代谢物所特有的人体代谢的生理学和病理学变化，并且可以反映鼻粘液提供信息的方式，该信息是关于人体代谢的信息，如由血浆、红细胞、尿液、唾液和汗液所提供的，或是对于鼻粘液而言相对独特的信息。

生物物质可以包含选自SHH、DHH和IHH的刺猬信号途径的一个或多个成员。刺猬信号途径的一个或多个成员的水平可以指示受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。

生物物质可以包含细胞因子，如促炎性细胞因子或抗炎性细胞因子。促炎性细胞因子可以包括IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α或其任意组合。抗炎性细胞因子可以包括IL-1ra、IL-10、IFN-γ、IFN-β或其任意组合。促炎性细胞因子和抗炎性细胞因子的平衡可以指示受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。

生物物质可以包含细胞因子受体如I型细胞因子受体、II型细胞因子受体、免疫球蛋白超家族的成员、肿瘤坏死因子受体家族的成员、细胞因子受体和/或TGF-β受体。例如，细胞因子受体可以是IL-1RII和/或IL-2R。

生物物质可以包含嗜酸性粒细胞。生物物质可以包含IgE蛋白。生物物质可以包含环核苷酸(例如，cAMP、cGMP)。生物物质可以包含一氧化氮(NO)。

本文公开的生物物质的鉴定和分析可以具有许多治疗性和诊断性应用。临床应用可以包括，例如，检测味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失；区分味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的潜在原因以告知预后、疗法的选择和/或治疗反应的预测；监测与疗法相关的功效和毒性；以及检测味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的复发。

生物物质的存在或其浓度的增加或减少可以允许医生诊断味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，和/或预测治疗方案的功效。

味觉或嗅觉的损失和/或失真例如本文公开的嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的诊断可用来实现或帮助治疗剂的药物研发过程。可以使用该分析诊断加入临床试验的患者。该诊断可以指示味觉或嗅觉的损失和/或失真的状态，例如，在临床试验中经历治疗的患者的嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的状态，并显示该状态在治疗过程中的变化。该诊断可以证明治疗的功效，并可以用来根据患者对不同疗法的反应将患者分层。

可以使用本文的方法评估治疗随着时间变化的功效。例如，可以在患者经历治疗的一段时间内从患者获得生物样品。来自不同样品的生物物质可以互相进行比较以确定治疗的功效。另外，可以使用本文所述的方法比较不同疗法的功效和/或不同群体(例如，不同年龄组、种族、家族史、味觉或嗅觉的损失和/或失真的原因等)中对一种或多种治疗的反应。

一般诊断方法

总的来说，本公开内容的组合物和方法可以提供通过确定检测阈值(DT)得分、识别阈值(RT)得分、量值估计(ME)得分或其任意组合评估受试者的味觉和/或嗅觉功能。可以如先前Henkin,R.I.,Schecter,P.J.,Friedewald,W.T.,DeMets,D.L.,Raff,M.S,A double blind study of the effects of zinc sulfate on taste or smell dysfunction.Amer.J.Med.Sci.1976；272:285-299中所述确定这些得分，其通过引用以其全文并入本文。一些方法描述于Henkin,R.I.,Levy,L.M.和Fordyce,A.Taste and smell function in chronic disease:a review of clinical and biochemical evaluations of taste and smell dysfunction in over 5000patients at The Taste and Smell Clinic in Washington,DC.Am.J.Otolaryngol.2013Sept-Oct；34(5):477-489，其通过引用以其全文并入本文。

例如，如果患者的感觉功能障碍显示为味觉(即，风味)和/或嗅觉功能的损失，则患者最初可被诊断为具有疑似嗅觉减退。通过如本文中和Henkin,R.I.Evaluation and treatment of human olfactory dysfunction,in Otolaryngology(English,G.M.Ed.),Lippincott,Philadelphia,1993,Vol.2,pp.1-86(通过引用以其全文并入本文)中先前所述，在固定的、带对照的设计中使用强迫选择、三刺激物、逐步阶梯技术，可通过向每个患者进行的对嗅觉功能的客观精神物理学测量来证明该主观反应。

在一些情况下，可以使用四种测试气味；它们可以是吡啶(死鱼气味)、硝基苯(苦杏仁气味)、噻吩(石油样气味)和乙酸戊酯(香蕉油气味)。可如先前所述确定每种气味的检测阈值(DT)、识别阈值(RT)和量值估计(ME)值。可如先前所述将阈值转化为瓶单位(BU)，并将结果报告为每个治疗组中对每种气味的正确反应的M±SEM；ME可以以％报告，并且使用存在的四种最高的气味浓度的数据计算结果，以获得每个治疗组对于全部正确反应的M±SEM(10^-2M至绝对气味浓度)。

此外，可以使用对于这些相同气味浓度呈现的每种气味的愉悦(H)值将每个患者分等级(使用-100–0–+100的等级，10^-2M至绝对气味浓度)。如果他们认为气味好闻(“他们希望再次闻到该气味”)，他们可以按照愉悦度把该气味分级为+1–+100；如果他们认为气味不好闻(“他们不希望再闻到该气味”)，他们按照不愉悦的程度把该气味分级为-1–-100；如果他们不认为该气味好闻或不好闻，他们可以把该气味分级为中性或0。可通过计算按照愉悦、不愉悦或中性对每种气味的每个正确识别反应的算术总和获得结果。可以获得每个治疗组对呈现的每种气味的算术M±SEM。这些得分随后可与参考或阈值水平进行比较。该比较可以用于帮助嗅觉减退的诊断。一些方法描述于Henkin,R.I.,Levy,L.M.和Fordyce,A.Taste and smell function in chronic disease:a review of clinical and biochemical evaluations of taste and smell dysfunction in over5000patients at The Taste and Smell Clinic in Washington,DC.Am.J.Otolaryngol.2013Sept-Oct；34(5):477-489，其通过引用以其全文并入本文。

此外，本公开内容可以提供与味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失相关的一种或多种生物物质的水平的测量。这些水平还可以与阈值水平进行比较，其中该比较还可以用来帮助诊断味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。这些生物物质的水平可以包括但不限于刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。

例如，刺猬信号途径的这些成员可以是SHH、DHH和/或IHH，和/或可以减少或排除其任意组合。在一些情况下，刺猬蛋白成员可以是SHH、DHH、IHH或其任意组合。用于确定生物流体中的SHH水平降低的阈值可以变化，例如，SHH可以为或约为：0pg/mL，大于0pg/mL至小于1pg/mL、1pg/mL至25pg/mL、15pg/mL至30pg/mL、20pg/mL至40pg/mL；35pg/mL至50pg/mL；45pg/mL至100pg/mL；75pg/mL至150pg/mL、125pg/mL至1000pg/mL、900pg/mL至2500pg/mL、2000pg/mL至5000pg/mL、4000pg/mL至7500pg/mL、6000pg/mL至10,000pg/mL。用于确定生物流体中的DHH水平降低的阈值可以变化，例如，DHH可以为或约为：0pg/mL，大于0pg/mL至0.1pg/mL、0.05pg/mL至0.15pg/mL、0.125pg/mL至0.2pg/mL、0.15pg/mL至0.30pg/mL、0.25pg/mL至0.5pg/mL、0.4pg/mL至0.7pg/mL、0.6pg/mL至0.75pg/mL、0.725pg/mL至0.9pg/mL、0.8pg/mL至1.0pg/mL、0.9pg/mL至1.1pg/mL、1.0pg/mL至1.3pg/mL、1.2pg/mL至1.5pg/mL、1.4pg/mL至2.0pg/mL、1.9pg/mL至2.5pg/mL、2.4pg/mL至3.0pg/mL、2.9pg/mL至3.5pg/mL、3.4pg/mL至3.8pg/mL、3.7pg/mL至3.9pg/mL、3.85pg/mL至5.0pg/mL、小于5.0pg/mL、小于0.05ng/mL、小于0.15ng/mL、小于0.2ng/mL、小于0.3ng/mL、小于0.5ng/mL、小于0.7ng/mL、小于0.75ng/mL、小于0.9ng/mL、小于1.0ng/mL、小于1.1ng/mL、小于1.5ng/mL、小于1.75ng/mL、小于2.0ng/mL、小于2.25ng/mL、小于5.0ng/mL、小于6.0ng/mL、小于7.0ng/mL、小于10.0ng/mL或小于100.0ng/mL。用于确定生物流体中的IHH水平降低的阈值可以变化，例如，IHH可以为或约为：0pg/mL，大于0pg/mL至0.1pg/mL、0.05pg/mL至0.15pg/mL、0.125pg/mL至0.2pg/mL、0.15pg/mL至0.30pg/mL、0.25pg/mL至0.5pg/mL、0.4pg/mL至0.7pg/mL、0.6pg/mL至0.75pg/mL、0.725pg/mL至0.9pg/mL、0.8pg/mL至1.0pg/mL、小于1.0pg/mL、小于2.0pg/mL、小于5.0pg/mL、小于10.0pg/mL、小于0.05ng/mL、小于0.15ng/mL、小于0.2ng/mL、小于0.3ng/mL、小于0.5ng/mL、小于0.7ng/mL、小于0.75ng/mL、小于0.9ng/mL、小于1.0ng/mL、小于1.1ng/mL、小于1.5ng/mL、小于1.75ng/mL、小于2.0ng/mL、小于2.25ng/mL、小于5.0ng/mL、小于6.0ng/mL、小于7.0ng/mL、小于10.0ng/mL或小于100.0ng/mL。

本公开内容还可以提供与味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失相关的一种或多种生物物质的水平的测量。这些生物物质的水平可以包括但不限于IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-1RII、IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-1RII、IL-2、IL-2R、IL-6、IL-10、IL-18、TNF-α、IFN-β、IFN-γ、细胞因子、IgE或嗜酸性粒细胞。

例如，分子如IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-1RII、IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-1RII、IL-2、IL-2R、IL-6、IL-10、IL-18、TNF-α、IFN-β、IFN-γ或其任意组合可能升高。在一些情况下，该分子可以为IL-6。在一些情况下，用于确定升高的阈值为约15pg/mL至约45pg/mL，并且其中较高水平的本文所述的分子可以指示受试者具有嗅觉减退。该阈值可以为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、10、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、50、60、70、80、90或100pg/mL。IL-6的水平，其中IL-6的阈值水平可以为或约为：0.05pg/mL至50pg/mL和约0.05pg/mL至约50pg/mL，例如，0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，或0.1pg/mL至0.2pg/mL，或0.15pg/mL至0.3pg/mL，或0.2pg/mL至0.4pg/mL，或0.3pg/mL至0.5pg/mL，或0.4pg/mL至0.6pg/mL，或0.5pg/mL至0.7pg/mL，或0.6pg/mL至0.8pg/mL，或0.7pg/mL至0.9pg/mL，或0.8pg/mL至1.0pg/mL，或0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL，或5pg/mL至7pg/mL，或6pg/mL至8pg/mL，或7pg/mL至9pg/mL，或8pg/mL至10pg/mL，或9pg/mL至11pg/mL，或10pg/mL至12pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或12pg/mL至16pg/mL，或15pg/mL至25pg/mL，或20pg/mL至40pg/mL，或30pg/mL至50pg/mL，或40pg/mL至60pg/mL，或50pg/mL至70pg/mL，或60pg/mL至80pg/mL，或70pg/mL至90pg/mL，或80pg/mL至100pg/mL。仅举例而言，而不应被解释为以任何方式限制，唾液、尿液和血浆中的IHH的范围可以为或约为：0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，或0.1pg/mL至0.2pg/mL，或0.15pg/mL至0.3pg/mL，或0.2pg/mL至0.4pg/mL，或0.3pg/mL至0.5pg/mL，或0.4pg/mL至0.6pg/mL，或0.5pg/mL至0.7pg/mL，或0.6pg/mL至0.8pg/mL，或0.7pg/mL至0.9pg/mL，或0.8pg/mL至1.0pg/mL，或0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL；并且在粘液中，可以为或约为0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL，或5pg/mL至7pg/mL，或6pg/mL至8pg/mL，或7pg/mL至9pg/mL，或8pg/mL至10pg/mL，或9pg/mL至11pg/mL，或10pg/mL至12pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或12pg/mL至16pg/mL，或15pg/mL至25pg/mL，或20pg/mL至40pg/mL，或30pg/mL至50pg/mL，或40pg/mL至60pg/mL，或50pg/mL至70pg/mL，或60pg/mL至80pg/mL，或70pg/mL至90pg/mL，或80pg/mL至100pg/mL，小于0.05ng/mL、小于0.15ng/mL、小于0.2ng/mL、小于0.3ng/mL、小于0.5ng/mL、小于0.7ng/mL、小于0.75ng/mL、小于0.9ng/mL、小于1.0ng/mL、小于1.1ng/mL、小于1.5ng/mL、小于1.75ng/mL、小于2.0ng/mL、小于2.25ng/mL、小于5.0ng/mL、小于6.0ng/mL、小于7.0ng/mL、小于10.0ng/mL或小于100.0ng/mL。

一种或多种生物物质的测量或检测值可以与阈值进行比较，或可以与其他生物物质的水平或量进行比较。

例如，生物样品中IgE水平的升高可以用于帮助诊断味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。阈值水平可以是75kU/L。阈值还可以是75kU/L-125kU/L。阈值还可以是45、55、65、75、76、77、78、79、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、150、175、200kU/L。阈值还可以高于75kU/L、100kU/L或125kU/L和约75kU/L、约100kU/L或约125kU/L。升高的IgE水平可以升高至阈值以上。升高的水平可以指示受试者具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。如果测得受试者的IgE值高于45、55、65、75、76、77、78、79、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、150、175、200kU/L，则该受试者可能具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。如果测得受试者的IgE值高于75kU/L、100kU/L或125kU/L和约75kU/L、约100kU/L或约125kU/L，则该受试者可能具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。可通过本文所述的任何合适的测定法来测定受试者的IgE值。例如，可使用荧光偏振测定来测量IgE的水平。

生物样品例如血液样品中嗜酸性粒细胞的水平的升高可以用于帮助诊断嗅觉减退。阈值水平可以是200个细胞/HPF。阈值还可以是200个细胞/HPF-400个细胞/HPF。阈值还可以是50-600个细胞/HPF。阈值还可以是50、100、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390或400、420、440、460、480、500、520、540、560、580或600个细胞/HPF。阈值还可以是300个细胞/HPF(高倍视野)、350个细胞/HPF或400个细胞/HPF和约300个细胞/HPF、350个细胞/HPF或400个细胞/HPF。嗜酸性粒细胞的升高的水平可以高于阈值。升高的水平可以指示受试者具有嗅觉减退。如果受试者的嗜酸性粒细胞计数或水平高于50、100、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390或400、420、440、460、480、500、520、540、560、580或600个细胞/HPF，则该受试者可能具有嗅觉减退。如果受试者的嗜酸性粒细胞计数或水平高于300个细胞/HPF(高倍视野)、350个细胞/HPF或400个细胞/HPF和约300个细胞/HPF、350个细胞/HPF或400个细胞/HPF，则该受试者可能具有嗅觉减退。可通过本文所述的任何合适的测定来测定受试者的嗜酸性粒细胞计数，其包括但不限于显微术或库尔特计数器。

图12示出了本文公开的诊断方法的示例性实施。如图所示通过注射器从受试者中收集样品，其代表本文所述收集生物样品的一种手段。收集生物样品的方法将取决于收集的生物样品的类型。可以使用显微术或测量生物标志物水平的任何其他手段分析生物样品以测量来自生物样品的一种或多种生物标志物的水平。每一种所述一种或多种生物标志物的水平可以用于计算机执行的诊断。可通过由计算机、斜线指向箭头和打印机代表的通信媒介，将基于生物标志物分析的所得诊断发送至一方。基于诊断结果，可以治疗患者的味觉或嗅觉失调。

用于诊断、评估和/或治疗的方法

已知刺猬信号途径是动物发育的关键调节子，尤其是在胚胎发育和变态的后期过程中。哺乳动物具有刺猬信号途径的三个成员：音猬蛋白(SHH)、沙漠刺猬蛋白(DHH)和印度刺猬蛋白(IHH)。该途径与一些癌症的形成有关。然而，刺猬信号途径的成员在诊断和治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失中的作用仍有待确定。

在一方面，本文公开了诊断受试者的味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的方法，该方法包括(a)从受试者获得一个或多个生物样品；(b)测量来自该受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；和(c)根据可能低于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。本文还公开了评估受试者的味觉和/或嗅觉的改善、衰退和/或无变化例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的方法，该方法包括(a)采用一种或多种药物治疗该受试者；(b)从该受试者获得一个或多个生物样品；(c)测量来自该受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；和(d)根据可能高于、低于和/或等于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。该阈值水平可以是刺猬信号途径的一个或多个成员的平均水平，如在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测得的。所述刺猬信号途径的一个或多个成员的水平可以比所述阈值水平低至少一个数量级。例如，比所述阈值水平低2、3、4、5、10、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、50、60、70 80、90、100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900或1000个或更多个数量级。本发明的方法可进一步包括以下至少一步：(a)治疗被诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的受试者；(b)经由通信媒介传送该诊断结果；和(c)计算机执行该诊断。

在不比较刺猬信号途径的成员的水平与阈值的情况下，一些患者可被诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。本文公开了诊断受试者的味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的方法，该方法包括从受试者获得一个或多个生物样品；测量来自该受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；和基于以下一项或多项，将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失：(i)音猬蛋白(SHH)的水平等于或约大于0pg/mL至8,500pg/mL；(ii)印度刺猬蛋白(IHH)的水平等于或约大于0pg/mL至1.0pg/mL；和(iii)沙漠刺猬蛋白(DHH)的水平等于或约大于0pg/mL至5.0pg/mL。

为了评估患者(例如，患者反应)针对药物例如茶碱(例如，鼻和/或口服)、cGMP激活剂(例如，利奥西呱)和/或cAMP激活剂(例如，毛喉素)、本文所述任何药物及其任意组合的改善、衰退和/或无变化，本发明人已开发了合适的方法。例如，可通过评估受试者的味觉和/或嗅觉的改善、衰退和/或无变化，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的方法，测定患者对药物的反应，该方法包括(a)采用一种或多种药物治疗该受试者；(b)从该受试者获得一个或多个生物样品；(c)测量来自该受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；和(d)根据可能高于、低于和/或等于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。例如，如果受试者对药物没有反应，则以下方法：(a)采用一种或多种药物治疗受试者；(b)从受试者获得一个或多个生物样品；和(c)测量来自受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，可导致(d)根据可能与阈值水平相同或大致相同的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为无味觉和/或嗅觉变化，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。在另一个实例中，如果受试者对药物有消极反应，则以下方法：(a)采用一种或多种药物治疗受试者；(b)从受试者获得一个或多个生物样品；和(c)测量来自受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，可导致(d)根据可能低于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉和/或嗅觉的下降，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。在进一步的实例中，如果受试者对药物有积极反应，则以下方法：(a)采用一种或多种药物治疗受试者；(b)从受试者获得一个或多个生物样品；和(c)测量来自受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，可导致(d)根据可能高于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉和/或嗅觉的提高，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。在一些实施方案中，(b)和(c)在(a)之前和/或之后进行。例如，本文所述的方法可包括评估受试者的味觉和/或嗅觉的改善、衰退和/或无变化，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，该方法包括(a)从受试者获得一个或多个生物样品；(b)测量来自该受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；(c)采用一种或多种药物治疗该受试者；(d)从该受试者获得一个或多个生物样品；(e)测量来自该受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；和(f)根据可能高于、低于和/或等于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。在另一个实例中，本文所述的方法可包括评估受试者的味觉和/或嗅觉的改善、衰退和/或无变化，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，该方法包括(a)从该受试者获得一个或多个生物样品；(b)测量来自该受试者的一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；(c)采用一种或多种药物治疗该受试者；和(d)根据可能高于、低于和/或等于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉和/或嗅觉的改善、衰退、无变化、降低和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。不受理论的束缚，在许多情况下，味觉和嗅觉功能可以同时改善，然而，在一些情况下，当嗅觉功能衰退时味觉功能可能改善，并且当味觉功能衰退时嗅觉功能可能改善。在另外的实施方案中，所述方法可进一步包括以下一项或多项：(a)本文所述的患者可以采用更多药物(例如，剂量增加)治疗，可以采用更少药物(例如，剂量减少)治疗，维持相同的药物(例如，相同剂量)、更换为不同的药物(例如，PDE抑制剂更换为cGMP激活剂)，和/或其组合；(b)可通过基于抗体的测定例如ELISA进行刺猬信号途径的一个或多个成员的水平的测量；(c)所述诊断可以是计算机执行的；和(d)其任意组合。

为了有效地测量受试者中刺猬信号途径的成员的水平，可能需要一个或多个生物样品。如以上详细描述的，用于取得和制备生物样品的各种方法是已知的，并且可用来提取并制备生物样品以供测试。还如上所述，所述一个或多个生物样品可以包括一种或多种体液。所述一种或多种体液还可以包括全血样品、血清样品、血浆样品、尿液样品、唾液样品、粘液样品、汗液样品或其任意组合。如果使用单一的体液，则所述一种或多种体液还可以包括粘液样品(例如，鼻粘液样品)、血浆样品、血清样品、全血样品和/或汗液样品。

所述刺猬信号途径的一个或多个成员可以选自：音猬蛋白(SHH)、沙漠刺猬蛋白(DHH)和/或印度刺猬蛋白(IHH)。所述刺猬信号途径的一个或多个成员可以为SHH、DHH、IHH或其任意组合。尽管可以测量哺乳动物(例如，人)刺猬蛋白，但是也考虑到可以测量非哺乳动物刺猬蛋白。

可以通过使用本领域的方法进行刺猬信号途径的成员的水平的测量。合并使用抗体的方法可能尤其有用。然而，这不应被解释为限制基于抗体试验的测量方法。刺猬信号途径的一个或多个成员的水平的测量可以包括使用结合该刺猬信号途径的一个或多个成员的一种或多种抗体。该测量可以进一步包括结合刺猬信号途径的一个或多个成员的一种或多种抗体，其中所述一种或多种抗体用于免疫染色、免疫沉淀、免疫电泳、免疫印迹、Western印迹或分光光度法测定。考虑到所述方法还可以进一步包括结合刺猬信号途径的一个或多个成员的一种或多种抗体，其中所述一种或多种抗体用于分光光度法测定，它可以是EMIT(酶放大免疫测定技术)测定或ELISA(酶联免疫吸附测定)。本说明书通篇描述了测量技术的一些实例。例如，所述方法可包括使用一种或多种技术，它们是荧光显微术、放射免疫测定、荧光免疫测定、质谱法、液相色谱法、电泳或其任意组合。

为了根据刺猬信号途径的一个或多个成员的水平评估受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，可以使用阈值比较，例如基础水平。因此，所述阈值水平可以是刺猬信号途径的一个或多个成员的平均水平，如在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测得的。所述刺猬信号途径的一个或多个成员的水平可以比所述阈值水平低至少一个数量级。例如，比所述阈值水平低2、3、4、5、10、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900或1000个或更多个数量级。

在诊断受试者具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失方面，单独的或与刺猬信号途径的成员水平和/或其他生物标志物组合的促炎性细胞因子的水平可能是有用的。例如，一些方法可进一步包括测量至少一个或多个生物样品中一种或多种促炎性细胞因子的水平。所述方法还可以包括测量选自IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α或其任意组合的一种或多种促炎性细胞因子的水平。或者，所述方法还可以包括测量一种或多种促炎性细胞因子的水平，其中所述一种或多种促炎性细胞因子可以包括IL-6。所述方法还可以包括测量IL-6的水平，其中IL-6的阈值水平可以为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、10、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、50、60、70、80、90或100pg/mL。IL-6的水平，其中IL-6的阈值水平可以为或约为：0.05pg/mL至50pg/mL和约0.05pg/mL至约50pg/mL，例如，0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，或0.1pg/mL至0.2pg/mL，或0.15pg/mL至0.3pg/mL，或0.2pg/mL至0.4pg/mL，或0.3pg/mL至0.5pg/mL，或0.4pg/mL至0.6pg/mL，或0.5pg/mL至0.7pg/mL，或0.6pg/mL至0.8pg/mL，或0.7pg/mL至0.9pg/mL，或0.8pg/mL至1.0pg/mL，或0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL，或5pg/mL至7pg/mL，或6pg/mL至8pg/mL，或7pg/mL至9pg/mL，或8pg/mL至10pg/mL，或9pg/mL至11pg/mL，或10pg/mL至12pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或12pg/mL至16pg/mL，或15pg/mL至25pg/mL，或20pg/mL至40pg/mL，或30pg/mL至50pg/mL，或40pg/mL至60pg/mL，或50pg/mL至70pg/mL，或60pg/mL至80pg/mL，或70pg/mL至90pg/mL，或80pg/mL至100pg/mL。仅举例而言，而不应被解释为以任何方式限制，唾液、尿液和血浆中IL-6的范围可以为或约为：0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，或0.1pg/mL至0.2pg/mL，或0.15pg/mL至0.3pg/mL，或0.2pg/mL至0.4pg/mL，或0.3pg/mL至0.5pg/mL，或0.4pg/mL至0.6pg/mL，或0.5pg/mL至0.7pg/mL，或0.6pg/mL至0.8pg/mL，或0.7pg/mL至0.9pg/mL，或0.8pg/mL至1.0pg/mL，或0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL；以及在粘液中，可以为或约为0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL，或5pg/mL至7pg/mL，或6pg/mL至8pg/mL，或7pg/mL至9pg/mL，或8pg/mL至10pg/mL，或9pg/mL至11pg/mL，或10pg/mL至12pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或12pg/mL至16pg/mL，或15pg/mL至25pg/mL，或20pg/mL至40pg/mL，或30pg/mL至50pg/mL，或40pg/mL至60pg/mL，或50pg/mL至70pg/mL，或60pg/mL至80pg/mL，或70pg/mL至90pg/mL，或80pg/mL至100pg/mL。

为了根据一种或多种促炎性细胞因子的水平评估受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，可以使用阈值比较，例如基础水平。例如，所述方法可进一步包括测量一种或多种促炎性细胞因子的水平，其中诊断可以进一步基于高于如在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测得的平均促炎性细胞因子水平的一种或多种促炎性细胞因子中的至少一种的水平。

在诊断受试者具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失方面，单独的或与刺猬信号途径的成员水平和/或其他生物标志物组合的抗炎性细胞因子的水平可能是有用的。例如，所述方法可进一步包括测量至少一个生物样品中一种或多种抗炎性细胞因子的水平。所述方法还可以包括测量一种或多种抗炎性细胞因子的水平，其中所述一种或多种抗炎性细胞因子可以选自IL-1ra、IL-10、IFN-γ、IFN-β或其组合。

为了根据一种或多种抗炎性细胞因子的水平评估受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，可以使用阈值比较，例如，基础水平。例如，所述诊断可以进一步基于低于如可在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测得的平均抗炎性细胞因子水平的一种或多种抗炎性细胞因子中的至少一种的水平。

在诊断受试者具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失方面，单独的或与刺猬信号途径的成员水平和/或其他生物标志物组合的其他生物标志物的水平可能是有用的。例如，所述方法可进一步包括测量所述一个或多个生物样品中的至少一个中免疫球蛋白E(IgE)、嗜酸性粒细胞、环腺苷一磷酸(cAMP)、环鸟苷一磷酸(cGMP)、一氧化氮(NO)、IL-1RII、IL-2R或其任意组合的水平。

为了根据IgE的水平评估受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，可以使用阈值比较，例如，基础水平。因此，所述方法可进一步包括测量IgE的水平，其中诊断可以进一步基于高于如在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测得的平均IgE水平的IgE水平。所述方法可进一步包括测量IgE的水平，其中诊断可进一步基于高于75kU/L、100kU/L或125kU/L和约75kU/L、约100kU/L或约125kU/L的IgE水平。所述方法可进一步包括测量IgE的水平，其中测量IgE的水平可以包括荧光偏振测定。

为了根据嗜酸性粒细胞的水平评估受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，可以使用阈值比较，例如，基础水平。所述方法可进一步包括测量嗜酸性粒细胞的水平，其中诊断可以进一步基于高于如在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测得的平均嗜酸性粒细胞水平的嗜酸性粒细胞水平。所述方法可进一步包括测量嗜酸性粒细胞的水平，其中诊断可进一步基于高于300个细胞/HPF(高倍视野)、350个细胞/HPF或400个细胞/HPF和约300个细胞/HPF、350个细胞/HPF或400个细胞/HPF的嗜酸性粒细胞水平。可采用库尔特计数器进行嗜酸性粒细胞水平的测量。

为了根据NO的水平评估受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，可以使用阈值比较，例如，基础水平。所述方法可进一步包括测量NO的水平，其中诊断可以进一步基于低于如在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测得的平均NO水平的NO水平。

为了根据cAMP的水平评估受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，可以使用阈值比较，例如基础水平。所述方法可进一步包括测量cAMP的水平，其中诊断可以进一步基于低于如在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测得的平均cAMP水平的cAMP水平。

为了根据cGMP的水平评估受试者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失，可以使用阈值比较，例如，基础水平。所述方法可进一步包括测量cGMP的水平，其中诊断可以进一步基于低于如在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测得的平均cGMP水平的cGMP水平。

本发明人已发现刺猬信号途径的成员的水平的降低可用来诊断和建议治疗具有味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的受试者。例如，根据以下一项或多项，可将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失：(a)SHH的水平可以为或约为0pg/mL、大于0pg/mL至小于1pg/mL、1pg/mL至25pg/mL、15pg/mL至30pg/mL、20pg/mL至40pg/mL；35pg/mL至50pg/mL；45pg/mL至100pg/mL；75pg/mL至150pg/mL、125pg/mL至1000pg/mL、900pg/mL至2500pg/mL、2000pg/mL至5000pg/mL、4000pg/mL至7500pg/mL、6000pg/mL至10,000pg/mL；(b)IHH的水平可以为或约为0pg/mL、大于0pg/mL至0.1pg/mL、0.05pg/mL至0.15pg/mL、0.125pg/mL至0.2pg/mL、0.15pg/mL至0.30pg/mL、0.25pg/mL至0.5pg/mL、0.4pg/mL至0.7pg/mL、0.6pg/mL至0.75pg/mL、0.725pg/mL至0.9pg/mL、0.8pg/mL至1.0pg/mL、小于1.0pg/mL、小于0.05ng/mL、小于0.15ng/mL、小于0.2ng/mL、小于0.3ng/mL、小于0.5ng/mL、小于0.7ng/mL、小于0.75ng/mL、小于0.9ng/mL、小于1.0ng/mL、小于1.1ng/mL、小于1.5ng/mL、小于1.75ng/mL、小于2.0ng/mL、小于2.25ng/mL、小于5.0ng/mL、小于6.0ng/mL、小于7.0ng/mL、小于10.0ng/mL或小于100.0ng/mL；(c)DHH的水平可以为或约为0pg/mL、大于0pg/mL至0.1pg/mL、0.05pg/mL至0.15pg/mL、0.125pg/mL至0.2pg/mL、0.15pg/mL至0.30pg/mL、0.25pg/mL至0.5pg/mL、0.4pg/mL至0.7pg/mL、0.6pg/mL至0.75pg/mL、0.725pg/mL至0.9pg/mL、0.8pg/mL至1.0pg/mL、0.9pg/mL至1.1pg/mL、1.0pg/mL至1.3pg/mL、1.2pg/mL至1.5pg/mL、1.4pg/mL至2.0pg/mL、1.9pg/mL至2.5pg/mL、2.4pg/mL至3.0pg/mL、2.9pg/mL至3.5pg/mL、3.4pg/mL至3.8pg/mL、3.7pg/mL至3.9pg/mL、3.85pg/mL至5.0pg/mL、小于5.0pg/mL、小于0.05ng/mL、小于0.15ng/mL、小于0.2ng/mL、小于0.3ng/mL、小于0.5ng/mL、小于0.7ng/mL、小于0.75ng/mL、小于0.9ng/mL、小于1.0ng/mL、小于1.1ng/mL、小于1.5ng/mL、小于1.75ng/mL、小于2.0ng/mL、小于2.25ng/mL、小于5.0ng/mL、小于6.0ng/mL、小于7.0ng/mL、小于10.0ng/mL或小于100.0ng/mL。

本发明人还发现，测量特定生物标志物的水平可用来例如诊断和治疗具有味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的受试者。所述方法可进一步包括可根据以下一个或多个测量值，将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失：(a)IL-1α的水平可以为或约为125pg/mL至195pg/mL、150pg/mL至170pg/mL、120pg/mL至170pg/mL，或150pg/mL至195pg/mL，或185pg/mL至500pg/mL(例如，仅举例而言，在鼻粘液中为约15pg/mL至30pg/mL，或25pg/mL至50pg/mL，或45pg/mL至75pg/mL，或70pg/mL至100pg/mL，或90pg/mL至150pg/mL，或125pg/mL至200pg/mL，或150pg/mL至250pg/mL，或200pg/mL至300pg/mL，或250pg/mL至350pg/mL，或300pg/mL至400pg/mL，或350pg/mL至450pg/mL，或400pg/mL至500pg/mL；以及在唾液中为0.1pg/mL至0.5pg/mL，或0.25pg/mL至0.75pg/mL，或0.6pg/mL至0.9pg/mL，或0.7pg/mL至1.0pg/mL，或0.9pg/mL至1.5pg/mL，或1.25pg/mL至2.0pg/mL，或1.75pg/mL至2.5pg/mL，或2.4pg/mL至3.0pg/mL，2.7pg/mL至3.5pg/mL或3.4pg/mL至4.5pg/mL，或4.0pg/mL至5.0pg/mL，或4.6pg/mL至5.5pg/mL，或5.4pg/mL至6.0pg/mL，或5.9pg/mL至6.5pg/mL，或6.4pg/mL至7.0pg/mL，或6.9pg/mL至7.5pg/mL，或7.4pg/mL至8.0pg/mL，或7.9pg/mL至8.5pg/mL，或8.4pg/mL至9.0pg/mL，或8.9pg/mL至9.5pg/mL，或9.4pg/mL至10.0pg/mL；(b)IL-1β的水平可以为或约为10pg/mL至30pg/mL、25pg/mL至50pg/mL、45pg/mL至100pg/mL、90pg/mL至150pg/mL、140pg/mL至200pg/mL、195pg/mL至300pg/mL、220pg/mL至275pg/mL、220pg/mL至300pg/mL或195pg/mL至275pg/mL、250pg/mL至300pg/mL、290pg/mL至350pg/mL、340pg/mL至400pg/mL、390pg/mL至450pg/mL、440pg/mL至500pg/mL；(c)IL-1ra的水平可以为或约为50pg/mL至150,000pg/mL，例如，30,000pg/mL至90,000pg/mL、45,000pg/mL至75,000pg/mL、45,000pg/mL至90,000pg/mL或30,000pg/mL至75,000pg/mL(例如，仅举例而言，在血浆中为约1pg/mL至25pg/mL、20pg/mL至40pg/mL、30pg/mL至60pg/mL、50pg/mL至100pg/mL、75pg/mL至150pg/mL、125pg/mL至200pg/mL、175pg/mL至250pg/mL、225pg/mL至300pg/mL、275pg/mL至350pg/mL、325pg/mL至400pg/mL、375pg/mL至450pg/mL、425pg/mL至500pg/mL、475pg/mL至550pg/mL、525pg/mL至600pg/mL、575pg/mL至650pg/mL、625pg/mL至700pg/mL；在尿液中为100pg/mL至500pg/mL、400pg/mL至1000pg/mL、900pg/mL至1500pg/mL、1400pg/mL至2000pg/mL、1900pg/mL至2500pg/mL、2400pg/mL至3000pg/mL、2900pg/mL至3500pg/mL、3400pg/mL至4000pg/mL、3900pg/mL至4500pg/mL、4400pg/mL至5000pg/mL、4900pg/mL至5500pg/mL、5400pg/mL至6000pg/mL、5900pg/mL至6500pg/mL、6400pg/mL至7000pg/mL、6900pg/mL至7500pg/mL、7400pg/mL至8000pg/mL、7900pg/mL至8500pg/mL、8400pg/mL至9000pg/mL、8900pg/mL至9500pg/mL、9400pg/mL至10,000pg/mL；在鼻粘液中为2500pg/mL至4000pg/mL、3500pg/mL至6000pg/mL、5000pg/mL至10,000pg/mL、9000pg/mL至15,000pg/mL、14,000pg/mL至20,000pg/mL、19,000pg/mL至25,000pg/mL、24,000pg/mL至30,000pg/mL、29,000pg/mL至35,000pg/mL、34,000pg/mL至40,000pg/mL、39,000pg/mL至45,000pg/mL、44,000pg/mL至50,000pg/mL、49,000pg/mL至55,000pg/mL、54,000pg/mL至60,000pg/mL、59,000pg/mL至65,000pg/mL、64,000pg/mL至70,000pg/mL、69,000pg/mL至75,000pg/mL、74,000pg/mL至80,000pg/mL、79,000pg/mL至85,000pg/mL、84,000pg/mL至90,000pg/mL、89,000pg/mL至95,000pg/mL、94,000pg/mL至100,000pg/mL、104,000pg/mL至110,000pg/mL、109,000pg/mL至115,000pg/mL、114,000pg/mL至120,000pg/mL、119,000pg/mL至120,000pg/mL、119,000pg/mL至125,000pg/mL、124,000pg/mL至130,000pg/mL、129,000pg/mL至135,000pg/mL、134,000pg/mL至140,000pg/mL、139,000pg/mL至145,000pg/mL、144,000pg/mL至150,000pg/mL)；(d)IL-1RII的水平可以为或约为960pg/mL至2600pg/mL、1370pg/mL至2190pg/mL、1370pg/mL至2600pg/mL或960pg/mL至2190pg/mL；(例如，仅举例而言，在唾液中为约1pg/mL至5pg/mL、5pg/mL至10pg/mL、9pg/mL至15pg/mL、14pg/mL至20pg/mL，或19pg/mL至25pg/mL，或24pg/mL至30pg/mL，或29pg/mL至35pg/mL，或34pg/mL至40pg/mL，或39pg/mL至45pg/mL，44pg/mL至50pg/mL，或49pg/mL至55pg/mL，或54pg/mL至60pg/mL，或59pg/mL至65pg/mL，或64pg/mL至70pg/mL，或69pg/mL至75pg/mL，74pg/mL至80pg/mL，或79pg/mL至85pg/mL，或84pg/mL至90pg/mL，或89pg/mL至95pg/mL，或94pg/mL至100pg/mL，或99pg/mL至105pg/mL，104pg/mL至110pg/mL，或109pg/mL至105pg/mL，或104pg/mL至110pg/mL，或109pg/mL至115pg/mL，或114pg/mL至120pg/mL，或119pg/mL至125pg/mL，124pg/mL至130pg/mL，或129pg/mL至135pg/mL，或134pg/mL至140pg/mL，或139pg/mL至145pg/mL，或144pg/mL至150pg/mL，或149pg/mL至200pg/mL；在尿液中为25pg/mL至75pg/mL、50pg/mL至100pg/mL、75pg/mL至150pg/mL、125pg/mL至200pg/mL、175pg/mL至250pg/mL、225pg/mL至300pg/mL、275pg/mL至350pg/mL、325pg/mL至400pg/mL、375pg/mL至450pg/mL、425pg/mL至500pg/mL、475pg/mL至550pg/mL、525pg/mL至600pg/mL、575pg/mL至650pg/mL、625pg/mL至700pg/、690pg/mL至750pg/mL、740pg/mL至800pg/mL；在鼻粘液中为100pg/mL至500pg/mL、400pg/mL至1000pg/mL、900pg/mL至1500pg/mL、1400pg/mL至2000pg/mL、1900pg/mL至2500pg/mL、2400pg/mL至3000pg/mL、2900pg/mL至3500pg/mL、3400pg/mL至4000pg/mL、3900pg/mL至4500pg/mL、4400pg/mL至5000pg/mL、4900pg/mL至5500pg/mL、5400pg/mL至6000pg/mL；在血浆中为5000pg/mL至10,000pg/mL、9000pg/mL至15,000pg/mL、14,000pg/mL至20,000pg/mL、19,000pg/mL至25,000pg/mL、24,000pg/mL至30,000pg/mL、29,000pg/mL至35,000pg/mL、34,000pg/mL至40,000pg/mL、39,000pg/mL至45,000pg/mL、44,000pg/mL至50,000pg/mL、49,000pg/mL至55,000pg/mL、54,000pg/mL至60,000pg/mL、59,000pg/mL至65,000pg/mL、64,000pg/mL至70,000pg/mL)；(e)IL-2的水平可以为或约为0pg/mL、0.1pg/mL、0.2pg/mL、0.3pg/mL或0.5pg/mL；(f)IL-2R的水平可以为或约为0至200pg/mL、50至150pg/mL、0至150pg/mL或50至200pg/mL(例如，仅举例而言，在唾液中为0.1pg/mL至0.5pg/mL，或0.25pg/mL至0.75pg/mL，或0.6pg/mL至0.9pg/mL，或0.7pg/mL至1.0pg/mL，或0.9pg/mL至1.5pg/mL，或1.25pg/mL至2.0pg/mL，或1.75pg/mL至2.5pg/mL，或2.4pg/mL至3.0pg/mL，2.7pg/mL至3.5pg/mL，或3.4pg/mL至4.5pg/mL，或4.0pg/mL至5.0pg/mL，或4.6pg/mL至5.5pg/mL，或5.4pg/mL至6.0pg/mL，或5.9pg/mL至6.5pg/mL，或6.4pg/mL至7.0pg/mL，或6.9pg/mL至7.5pg/mL，或7.4pg/mL至8.0pg/mL，或7.9pg/mL至8.5pg/mL，或8.4pg/mL至9.0pg/mL，或8.9pg/mL至9.5pg/mL，或9.4pg/mL至10.0pg/mL，9.0pg/mL至15.0pg/mL，或14.0pg/mL至20.0pg/mL，或19.0pg/mL至25.0pg/mL，或24.0pg/mL至30.0pg/mL，或29.0pg/mL至35.0pg/mL，或34.0pg/mL至40.0pg/mL，或39.0pg/mL至45.0pg/mL，或44.0pg/mL至50.0pg/mL；在鼻粘液中为0.1pg/mL至3pg/mL、2.5pg/mL至4pg/mL、3.5pg/mL至6pg/mL、5pg/mL至10pg/mL、9pg/mL至15pg/mL、14pg/mL至20pg/mL，或19pg/mL至25pg/mL，或24pg/mL至30pg/mL，或29pg/mL至35pg/mL，或34pg/mL至40pg/mL，或39pg/mL至45pg/mL，44pg/mL至50pg/mL，或49pg/mL至55pg/mL，或54pg/mL至60pg/mL，或59pg/mL至65pg/mL，或64pg/mL至70pg/mL，或69pg/mL至75pg/mL，74pg/mL至80pg/mL，或79pg/mL至85pg/mL，或84pg/mL至90pg/mL，或89pg/mL至95pg/mL，或94pg/mL至100pg/mL，或99pg/mL至105pg/mL，104pg/mL至110pg/mL，或109pg/mL至105pg/mL，或104pg/mL至110pg/mL，或109pg/mL至115pg/mL，或114pg/mL至120pg/mL，或119pg/mL至125pg/mL，124pg/mL至130pg/mL，或129pg/mL至135pg/mL，或134pg/mL至140pg/mL，或139pg/mL至145pg/mL，或144pg/mL至150pg/mL、149pg/mL至200pg/mL、190pg/mL至250pg/mL、240pg/mL至300pg/mL、290pg/mL至350pg/mL、340pg/mL至400pg/mL、390pg/mL至450pg/mL、440pg/mL至500pg/mL；在尿液和血浆中为50pg/mL至100pg/mL、75pg/mL至150pg/mL、125pg/mL至200pg/mL、175pg/mL至250pg/mL、225pg/mL至300pg/mL、275pg/mL至350pg/mL、325pg/mL至400pg/mL、375pg/mL至450pg/mL、425pg/mL至500pg/mL、475pg/mL至550pg/mL、525pg/mL至600pg/mL、575pg/mL至650pg/mL、625pg/mL至700pg/mL、675pg/mL至750pg/mL、725pg/mL至800pg/mL、775pg/mL至850pg/mL、825pg/mL至900pg/mL、875pg/mL至950pg/mL、925pg/mL至1000pg/mL、950pg/mL至1100pg/mL、1075pg/mL至1200pg/mL、1175pg/mL至1300pg/mL、1275pg/mL至1400pg/mL、1375pg/mL至1500pg/mL；1475pg/mL至1600pg/mL、1575pg/mL至1700pg/mL、1675pg/mL至1800pg/mL、1775pg/mL至1900pg/mL、1875pg/mL至2000pg/mL)；(g)IL-6的水平可以为或约为0.1pg/mL至2.2pg/mL、0.6pg/mL至1.7pg/mL、0.6pg/mL至2.2pg/mL或0.1pg/mL至1.7pg/mL(例如，仅举例而言，在唾液、尿液和血浆中可以为或约为0.005pg/mL至0.01pg/mL、0.0075pg/mL至0.015pg/mL、0.0125pg/mL至0.02pg/mL、0.015pg/mL至0.03pg/mL、0.025pg/mL至0.04pg/mL、0.035pg/mL至0.045pg/mL、0.044pg/mL至0.051pg/mL、0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，或0.1pg/mL至0.2pg/mL，或0.15pg/mL至0.3pg/mL，或0.2pg/mL至0.4pg/mL，或0.3pg/mL至0.5pg/mL，或0.4pg/mL至0.6pg/mL，或0.5pg/mL至0.7pg/mL，或0.6pg/mL至0.8pg/mL，或0.7pg/mL至0.9pg/mL，或0.8pg/mL至1.0pg/mL，或0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL；以及在鼻粘液中可以为或约为0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，或0.1pg/mL至0.2pg/mL，或0.15pg/mL至0.3pg/mL，或0.2pg/mL至0.4pg/mL，或0.3pg/mL至0.5pg/mL，或0.4pg/mL至0.6pg/mL，0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL，或5pg/mL至7pg/mL，或6pg/mL至8pg/mL，或7pg/mL至9pg/mL，或8pg/mL至10pg/mL，或9pg/mL至11pg/mL，或10pg/mL至12pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或12pg/mL至16pg/mL，或15pg/mL至25pg/mL，或20pg/mL至40pg/mL，或30pg/mL至50pg/mL，或40pg/mL至60pg/mL，或50pg/mL至70pg/mL，或60pg/mL至80pg/mL，或70pg/mL至90pg/mL，或80pg/mL至100pg/mL)；(h)IL-10的水平可以为或约为0pg/mL至3.5pg/mL、0.8pg/mL至2.7pg/mL、0.8pg/mL至3.5pg/mL或0pg/mL至2.7pg/mL(例如，仅举例而言，在鼻粘液、血浆和唾液中可以为约0.005pg/mL至0.01pg/mL、0.0075pg/mL至0.015pg/mL、0.0125pg/mL至0.02pg/mL、0.015pg/mL至0.03pg/mL、0.025pg/mL至0.04pg/mL、0.035pg/mL至0.045pg/mL、0.044pg/mL至0.051pg/mL、0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，或0.1pg/mL至0.2pg/mL，或0.15pg/mL至0.3pg/mL，或0.2pg/mL至0.4pg/mL，或0.3pg/mL至0.5pg/mL，或0.4pg/mL至0.6pg/mL，或0.5pg/mL至0.7pg/mL，或0.6pg/mL至0.8pg/mL，或0.7pg/mL至0.9pg/mL，或0.8pg/mL至1.0pg/mL，或0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL；以及在鼻粘液中可以为或约为0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，或0.1pg/mL至0.2pg/mL，或0.15pg/mL至0.3pg/mL，或0.2pg/mL至0.4pg/mL，或0.3pg/mL至0.5pg/mL，或0.4pg/mL至0.6pg/mL，0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL，或5pg/mL至7pg/mL，或6pg/mL至8pg/mL，或7pg/mL至9pg/mL，或8pg/mL至10pg/mL，或9pg/mL至11pg/mL，或10pg/mL至12pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或12pg/mL至16pg/mL，或15pg/mL至25pg/mL，或20pg/mL至40pg/mL)；(i)IL-18的水平可以为或约为40pg/mL至290pg/mL、100pg/mL至230pg/mL、40pg/mL至230pg/mL或100pg/mL至290pg/mL(例如，仅举例而言，在鼻粘液和唾液中可以为约0.1pg/mL至0.5pg/mL，或0.25pg/mL至0.75pg/mL，或0.6pg/mL至0.9pg/mL，或0.7pg/mL至1.0pg/mL，或0.9pg/mL至1.5pg/mL，或1.25pg/mL至2.0pg/mL，或1.75pg/mL至2.5pg/mL，或2.4pg/mL至3.0pg/mL，2.7pg/mL至3.5pg/mL，或3.4pg/mL至4.5pg/mL，或4.0pg/mL至5.0pg/mL，或4.6pg/mL至5.5pg/mL，或5.4pg/mL至6.0pg/mL，或5.9pg/mL至6.5pg/mL，或6.4pg/mL至7.0pg/mL，或6.9pg/mL至7.5pg/mL，或7.4pg/mL至8.0pg/mL，或7.9pg/mL至8.5pg/mL，或8.4pg/mL至9.0pg/mL，或8.9pg/mL至9.5pg/mL，或9.4pg/mL至10.0pg/mL，9.0pg/mL至15.0pg/mL，或14.0pg/mL至20.0pg/mL，或19.0pg/mL至25.0pg/mL，或24.0pg/mL至30.0pg/mL，或29.0pg/mL至35.0pg/mL，或34.0pg/mL至40.0pg/mL，或39.0pg/mL至45.0pg/mL，或44.0pg/mL至50.0pg/mL、50pg/mL至100pg/mL、75pg/mL至150pg/mL、125pg/mL至200pg/mL、175pg/mL至250pg/mL、225pg/mL至300pg/mL、275pg/mL至350pg/mL、325pg/mL至400pg/mL、375pg/mL至450pg/mL、425pg/mL至500pg/mL、475pg/mL至550pg/mL、525pg/mL至600pg/mL、575pg/mL至650pg/mL；在血浆中为10pg/mL至30pg/mL、20pg/mL至40pg/mL、35pg/ml至60pg/mL、50pg/mL至100pg/mL、75pg/mL至150pg/mL、125pg/mL至200pg/mL、175pg/mL至250pg/mL、225pg/mL至300pg/mL、275pg/mL至350pg/mL、325pg/mL至400pg/mL、375pg/mL至450pg/mL、425pg/mL至500pg/mL、475pg/mL至550pg/mL、525pg/mL至600pg/mL、575pg/mL至650pg/mL、625pg/mL至700pg/mL、675pg/mL至750pg/mL、725pg/mL至800pg/mL、775pg/mL至850pg/mL、825pg/mL至900pg/mL、875pg/mL至950pg/mL、925pg/mL至1000pg/mL；(j)TNF-α的水平可以为或约为3pg/mL至13pg/mL、6pg/mL至10pg/mL、6pg/mL至13pg/mL或3pg/mL至10pg/mL(例如，仅举例而言，在鼻粘液、血浆、唾液和尿液中可以为约大于0至0.025、0.02至0.06、0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，或0.1pg/mL至0.2pg/mL，或0.15pg/mL至0.3pg/mL，或0.2pg/mL至0.4pg/mL，或0.3pg/mL至0.5pg/mL，或0.4pg/mL至0.6pg/mL，或0.5pg/mL至0.7pg/mL，或0.6pg/mL至0.8pg/mL，或0.7pg/mL至0.9pg/mL，或0.8pg/mL至1.0pg/mL，或0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL；以及在鼻粘液中可以为或约为0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL，或5pg/mL至7pg/mL，或6pg/mL至8pg/mL，或7pg/mL至9pg/mL，或8pg/mL至10pg/mL，或9pg/mL至11pg/mL，或10pg/mL至12pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或12pg/mL至16pg/mL，或15pg/mL至25pg/mL，或20pg/mL至40pg/mL，或30pg/mL至50pg/mL)；(k)IFN-β的水平可以为或约为0pg/mL至910pg/mL、230pg/mL至680pg/mL、230pg/mL至910pg/mL，或0pg/mL至680pg/mL(例如，仅举例而言，在唾液中可以为约0至0.025、0.02至0.06、0.05pg/mL至0.1pg/mL，或0.75pg/mL至0.125pg/mL，或0.1pg/mL至0.2pg/mL，或0.15pg/mL至0.3pg/mL，或0.2pg/mL至0.4pg/mL，或0.3pg/mL至0.5pg/mL，或0.4pg/mL至0.6pg/mL，或0.5pg/mL至0.7pg/mL，或0.6pg/mL至0.8pg/mL，或0.7pg/mL至0.9pg/mL，或0.8pg/mL至1.0pg/mL，或0.5pg/mL至2.0pg/mL，或1.5pg/mL至3.0pg/mL，或2.5pg/mL至4.0pg/mL，或3.5pg/mL至5.0pg/mL，或4pg/mL至6pg/mL，5pg/mL至8pg/mL，或7pg/mL至9pg/mL，或8pg/mL至10pg/mL，或9pg/mL至11pg/mL，或10pg/mL至12pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或11pg/mL至13pg/mL，或12pg/mL至16pg/mL，或15pg/mL至25pg/mL，或20pg/mL至40pg/mL，或30pg/mL至50pg/mL；49pg/mL至55pg/mL，或54pg/mL至60pg/mL，或59pg/mL至65pg/mL，或64pg/mL至70pg/mL，或69pg/mL至75pg/mL，74pg/mL至80pg/mL，或79pg/mL至85pg/mL，或84pg/mL至90pg/mL，或89pg/mL至95pg/mL，或94pg/mL至100pg/mL，或99pg/mL至105pg/mL，104pg/mL至110pg/mL，或109pg/mL至105pg/mL，或104pg/mL至110pg/mL，或109pg/mL至115pg/mL，或114pg/mL至120pg/mL，或119pg/mL至125pg/mL，124pg/mL至130pg/mL，或129pg/mL至135pg/mL，或134pg/mL至140pg/mL，或139pg/mL至145pg/mL，或144pg/mL至150pg/mL；125pg/mL至200pg/mL、175pg/mL至250pg/mL、225pg/mL至300pg/mL、275pg/mL至350pg/mL、325pg/mL至400pg/mL、375pg/mL至450pg/mL、425pg/mL至500pg/mL；在鼻粘液和血浆中为约50pg/mL至100pg/mL、75pg/mL至150pg/mL、125pg/mL至200pg/mL、175pg/mL至250pg/mL、225pg/mL至300pg/mL、275pg/mL至350pg/mL、325pg/mL至400pg/mL、375pg/mL至450pg/mL、425pg/mL至500pg/mL、475pg/mL至550pg/mL、525pg/mL至600pg/mL、575pg/mL至650pg/mL、625pg/mL至700pg/mL；在血浆中为100pg/mL至500pg/mL、400pg/mL至1000pg/mL、900pg/mL至1500pg/mL、1400pg/mL至2000pg/mL、1900pg/mL至2500pg/mL、2400pg/mL至3000pg/mL、2900pg/mL至3500pg/mL、3400pg/mL至4000pg/mL、3900pg/mL至4500pg/mL、4400pg/mL至5000pg/mL、4900pg/mL至5500pg/mL、5400pg/mL至6000pg/mL、5900pg/mL至6500pg/mL、6400pg/mL至7000pg/mL、6900pg/mL至7500pg/mL、7400pg/mL至8000pg/mL、7900pg/mL至8500pg/mL、8400pg/mL至9000pg/mL、8900pg/mL至9500pg/mL、9400pg/mL至10,000pg/mL；或(l)IFN-γ的水平可以为或约为55pg/mL至110pg/mL、70pg/mL至95pg/mL、70pg/mL至110pg/mL、55pg/mL至95pg/mL、0.1pg/mL至3pg/mL、2.5pg/mL至4pg/mL、3.5pg/mL至6pg/mL、5pg/mL至10pg/mL、9pg/mL至15pg/mL、14pg/mL至20pg/mL，或19pg/mL至25pg/mL，或24pg/mL至30pg/mL，或29pg/mL至35pg/mL，或34pg/mL至40pg/mL，或39pg/mL至45pg/mL，44pg/mL至50pg/mL，或49pg/mL至55pg/mL，或54pg/mL至60pg/mL，或59pg/mL至65pg/mL，或64pg/mL至70pg/mL，或69pg/mL至75pg/mL，74pg/mL至80pg/mL，或79pg/mL至85pg/mL，或84pg/mL至90pg/mL，或89pg/mL至95pg/mL，或94pg/mL至100pg/mL，或99pg/mL至105pg/mL，104pg/mL至110pg/mL，或109pg/mL至105pg/mL，或104pg/mL至110pg/mL，或109pg/mL至115pg/mL，或114pg/mL至120pg/mL，或119pg/mL至125pg/mL，124pg/mL至130pg/mL，或129pg/mL至135pg/mL，或134pg/mL至140pg/mL，或139pg/mL至145pg/mL，或144pg/mL至150pg/mL，149pg/mL至200pg/mL。

所述方法可以基于一个或多个测量值中的2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个。

所述方法可进一步包括通过使用一种或多种味觉和/或嗅觉测试化合物经由强迫选择、三刺激物、逐步阶梯技术确定检测阈值(DT)得分、识别阈值(RT)得分、量值估计(ME)得分或其任意组合来评估受试者的味觉和/或嗅觉功能。味觉测试化合物可以包括咸、甜、苦、酸或鲜味的任何物质，例如，糖(如蔗糖、葡萄糖、果糖和乳糖)、盐(如氯化钠)、酸(如盐酸和柠檬酸)、奎宁(例如，硫酸奎宁)和谷氨酸一钠。可唤起咸、甜、苦、酸或鲜味的感觉的任何物质可以用作测试物质，并因此明确地涉及。所述一种或多种嗅觉测试化合物可以包括吡啶、硝基苯、噻吩、乙酸戊酯或其任意组合。所述诊断可进一步基于高于如在包括具有正常嗅觉功能的受试者的对照群体中测得的平均DT得分的DT得分，高于如在包括具有正常嗅觉功能的受试者的对照群体中测得的平均RT得分的RT得分，和/或低于如在包括具有正常嗅觉功能的受试者的对照群体中测得的平均ME得分的ME得分。

在根据一种或多种先前所述的诊断方法将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失之后，可治疗受试者以改善和/或治愈他们的味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失病况。所述诊断方法另外补充味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的治疗。所述诊断方法可进一步包括对被诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的受试者(可以是需要治疗的受试者)治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。

本发明的方法可进一步包括以下至少一步：(a)治疗被诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的受试者；(b)经由通信媒介传送例如诊断结果；和/或(c)计算机执行该诊断。

所述治疗可以包括向例如有需要的受试者施用至少一种治疗剂。

所述至少一种治疗剂可以是PDE抑制剂。“磷酸二酯酶抑制剂”或“PDE抑制剂”可以指抑制磷酸二酯酶、同工酶或异型酶的任意化合物。该术语可以指环鸟苷3’,5’-一磷酸磷酸二酯酶(cGMP-PDE)和/或环腺苷3’,5’-一磷酸磷酸二酯酶(cAMP-PDE)的选择性或非选择性抑制剂。

茶碱和罂粟碱是可被开出经口服以通过松弛气道中的平滑肌来治疗哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)的非选择性PDE抑制剂的代表性成员。茶碱对气道具有抗炎作用，它可用于对抗哮喘中所见的异常炎症。最重要的是，获得该抗炎作用的血液水平处于远低于引起在大多数人中见到的常见副作用的血液水平。当肺气肿和慢性支气管炎患者的症状部分地与可逆的气道变窄有关时，还可以用茶碱帮助所述患者。

茶碱是甲基黄嘌呤衍生物；这一类别中的其他非选择性磷酸二酯酶抑制剂可以包括咖啡因、IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、氨茶碱、多索茶碱、西潘茶碱(cipamphylline)、可可碱、己酮可可碱(oxpentifylline)和二羟丙茶碱。

先前被称为钙依赖性和钙调蛋白依赖性磷酸二酯酶的PDE1选择性抑制剂可以包括埃那美宁-14-羧酸乙酯(长春西汀)，它可用于诱导脑平滑肌组织上的血管舒张。其他PDE-1选择性抑制剂可以包括化合物KS505a、bepril、氟桂利嗪、胺碘酮、扎普司特、8-甲氧基甲基IPMX、SCH 51866、尼莫地平和IC224。

PDE2减少醛固酮分泌，并且可在调节血小板中升高的cAMP和cGMP的细胞内浓度中发挥重要作用。大脑的几个区域可以表达PDE2，并且大鼠实验表明PDE2的抑制加强记忆。PDE2可在调节炎性病况过程中的液体和细胞外渗方面发挥作用，因为PDE2可集中于微血管，尤其是静脉毛细血管和内皮细胞，但明显不在较大的血管处。PDE2还可以是病理状态如脓毒症或在更多局部炎性反应如肺中凝血酶诱导的水肿形成中的药理学靶标。PDE-2选择性抑制剂可以包括EHNA(赤式-9-(2-羟基-3-壬基)腺嘌呤)、9-(6-苯基-2-氧代己-3-基)-2-(3,4-二甲氧基苄基)-嘌呤-6-酮(PDP)和BAY 60-7750。

PDE3家族使cAMP和cGMP水解，但其水解方式表明在体内cAMP的水解可受到cGMP的抑制。PDE3家族还以根据它们被几种磷酸化途径(包括PKA和PI3K/PKB途径)激活的能力来区分。PDE3A可以在血小板以及心肌细胞和卵母细胞中相对高度表达。PDE3B可以是脂肪组织、肝和胰以及几种心血管组织中的主要PDE。PDE3A和PDE3B均可以在血管平滑肌细胞中高度表达并且很可能调节收缩。

PDE3抑制剂可以模拟交感神经刺激以增加心脏收缩力、变时性(chronotropy)和变传导性(dromotropy)。PDE3抑制剂还可以拮抗血小板聚集、增强心肌收缩性和/或加强血管和气道平滑肌松弛。PDE3A可以是该过程的调节剂，而PDE3抑制剂可以有效防止血小板的聚集。西洛他唑(Cilastazol)(Pletal)被批准用于间歇性跛行的治疗。不受理论的限制，认为西洛他唑(Cilastazol)的作用机理涉及对血小板聚集的抑制以及对平滑肌增生和血管扩张的抑制。PDE3选择性抑制剂可以包括依诺昔酮、米力农(Primacor)、氨力农(amrinone)、西洛酰胺、西洛他唑(Pletal)、曲喹辛、氨力农(inamrinone)、阿那格雷、匹莫苯旦、利沙齐农和二氢哒嗪酮。

PDE4抑制剂可以有效地抑制炎性介质(例如，细胞因子)的释放，并且可以抑制活性氧的产生和免疫细胞浸润。PDE4选择性抑制剂可以包括松叶菊碱；咯利普兰；异丁司特，一种主要用于治疗哮喘和中风的神经保护性和支气管扩张药物；罗氟司特(Daxas)、西洛司特(Airflo)、吡拉米司特、木犀草素、屈他维林和登布茶碱。PDE4抑制剂可以有效治疗哮喘、关节炎和银屑病。

PDE5可以调节血管平滑肌收缩，并且可以是可用来治疗勃起功能障碍和/或肺性高血压的药物的分子靶标。在肺中，PDE5的抑制可以对抗平滑肌血管收缩。PDE5抑制剂可以用来治疗肺性高血压。

PDE5选择性抑制剂可以包括西地那非、他达拉非、伐地那非、乌地那非和阿伐那非、双嘧达莫、淫羊藿苷、4-甲基哌嗪、吡唑并嘧啶7-1、西洛司特和扎普司特。

PDE6选择性抑制剂可以包括扎普司特、双嘧达莫、伐地那非和他达拉非。

PDE7选择性抑制剂可以包括喹唑啉型PDE7抑制剂、双嘧达莫和噻二唑。

PDE8选择性抑制剂可以包括双嘧达莫。

PDE9选择性抑制剂可以包括扎普司特。

PDE10选择性抑制剂可以包括罂粟碱、OMS824、PF-2545920和双嘧达莫。

PDE11选择性抑制剂可以包括他达拉非、扎普司特和双嘧达莫。

PDE抑制剂可以抑制细胞凋亡。不受理论的限制，凋亡抑制的机理可以包括TNFα、TRAIL和它们的代谢物的抑制。PDE抑制剂可以激活组织中一氧化氮的产生和分泌，其可以诱导血管(例如，周围血管，从而抑制间歇性跛行；四肢远端；以及在阴茎区域中，有助于阴茎勃起)的血管舒张或血管扩张。

可用于本发明的PDE抑制剂可以包括，例如，非明司特、吡拉米司特、咯利普兰、Org 20241、MCI-154、罗氟司特、托波力农、posicar、利沙齐农、扎普司特、西地那非、吡唑并嘧啶酮(如WO 98/49166中公开的那些)、莫他匹酮、匹莫苯旦、扎达维林、氰胍佐旦、CI-930、EMD53998、伊马唑旦、沙特力农、盐酸洛普力农、3-吡啶甲腈衍生物、登布茶碱(denbufyllene)、阿比茶碱、托巴茶碱、多索茶碱、茶碱、己酮可可碱(pentoxofylline)、南力农、西洛他唑、西洛酰胺、MS 857、匹罗昔酮、米力农、氨力农、托拉芬群、双嘧达莫、罂粟碱、E4021、噻吩并嘧啶衍生物(如WO 98/17668中公开的那些)、三氟柳、ICOS-351、四氢哌嗪并[1,2-b]β-咔啉-1,4-二酮衍生物(如美国专利号5,859,006、WO 97/03985和WO 97/03675中公开的那些)、咔啉衍生物(如WO 97/43287中公开的那些)、2-吡唑啉-5-酮衍生物(如美国专利号5,869,516中公开的那些)、稠合哒嗪衍生物(如美国专利号5,849,741中公开的那些)、喹唑啉衍生物(如美国专利号5,614,627中公开的那些)、邻氨基苯甲酸衍生物(如美国专利号5,714,993中公开的那些)、咪唑并喹唑啉衍生物(如WO 96/26940中公开的那些)等，其通过引用以全文并入本文。还包括在WO 99/21562和WO 99/30697中公开的那些磷酸二酯酶抑制剂，其通过引用以全文并入本文。考虑到在某些时候，鼻内组合物不包含PDE5选择性抑制剂。

茶碱是可根据本文公开的方法施用的示例性PDE抑制剂。例如，可以每天施用两次20μg/鼻孔的茶碱。也可以每天施用一次40μg/鼻孔的茶碱。也可以每天施用两次40μg/鼻孔的茶碱。也可以每天施用一次80μg/鼻孔的茶碱。也可以每天施用两次80μg/鼻孔的茶碱。

通过鼻内给药施用有效量的PDE抑制剂如茶碱可能不产生PDE抑制剂的可检测的血液水平。可通过本领域已知的方法测量PDE抑制的总体水平。例如，可用来测定PDE水平的方法测量PDE的下游靶标。也可以使用商业试验。例如，可以如Lu等人,Cell Physiology,2012,V302:C59-C66所述使用磷酸二酯酶测定，其通过引用以全文并入本文。通过鼻内给药施用有效量的PDE抑制剂可以产生可小于5mg/dl、2mg/dl、1mg/dl、500μg/dl、250μg/dl、100μg/dl、50μg/dl、25μg/dl、10μg/dl、5μg/dl或1μg/dl的PDE抑制剂的血液浓度。

有效量的PDE抑制剂如茶碱的鼻内施用可以提高味觉或嗅觉敏锐度。与未经治疗的状态相比，味觉或嗅觉敏锐度的提高可以为至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、75％或100％。味觉或嗅觉敏锐度可以提高至正常个体的敏锐度的至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、75％或100％。可以客观地测量味觉或嗅觉敏锐度，而在其他实施方案中可以主观地测量味觉或嗅觉敏锐度。根据NIH(www.nlm.nih.gov/medlinepluse/druginfo/meds/a681006.html)，PDE抑制剂如茶碱的使用可能与诸如胃部不适、胃痛、腹泻、头痛、烦乱不安、失眠、易激惹、呕吐、心率加快或急促、心律不齐、癫痫发作和/或皮疹等副作用有关。PDE抑制剂如茶碱的鼻内施用可以引起比其他施用途径更少的副作用。PDE抑制剂如茶碱的鼻内施用可以引起与其他施用途径相比严重程度较低的副作用。

PDE抑制剂如茶碱可以单独地或与一种或多种其他活性成分联合施用；例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种其他活性成分，如本文公开的任意药物。例如，可以使用其他选择性或非选择性PDE抑制剂，或者可以使用诸如毛喉素和利奥西呱的药物。

所述至少一种PDE抑制剂可以是非选择性PDE抑制剂、PDE-1选择性抑制剂、PDE-2选择性抑制剂、PDE-3选择性抑制剂、PDE-4选择性抑制剂、PDE-5选择性抑制剂、PDE-10选择性抑制剂或其任意组合。所述至少一种PDE抑制剂可以是非选择性PDE抑制剂，它可以是甲基黄嘌呤衍生物。该甲基黄嘌呤衍生物可以是咖啡因、茶碱、多索茶碱、西潘茶碱、甘油茶碱、己酮可可碱或二羟丙茶碱。该甲基黄嘌呤衍生物可以是茶碱。PDE 1抑制剂可以是长春西汀、化合物KS505a、bepril、氟桂利嗪、胺碘酮、扎普司特、8-甲氧基甲基IPMX、SCH 51866、尼莫地平或IC224。PDE 2抑制剂可以是EHNA。PDE 3抑制剂可以是依诺昔酮、米力农(Primacor)、氨力农(amrinone)、西洛酰胺、西洛他唑(Pletal)、曲喹辛、氨力农(inamrinone)、阿那格雷、匹莫苯旦、利沙齐农或二氢哒嗪酮。PDE 4抑制剂可以是松叶菊碱、咯利普兰、异丁司特、罗氟司特(Daxas)、西洛司特(Airflo)、吡拉米司特、木犀草素、屈他维林和登布茶碱。PDE 5抑制剂可以是西地那非、他达拉非、伐地那非、乌地那非和阿伐那非、双嘧达莫、淫羊藿苷、4-甲基哌嗪、吡唑并嘧啶7-1、西洛司特或扎普司特。PDE6选择性抑制剂可以是扎普司特、双嘧达莫、伐地那非或他达拉非。PDE7选择性抑制剂可以是喹唑啉型PDE7抑制剂、双嘧达莫或噻二唑。PDE8选择性抑制剂可以是双嘧达莫。PDE9选择性抑制剂可以是扎普司特。PDE 10抑制剂可以是罂粟碱、OMS824(来自Omeros Corporation)和/或PF-2545920(来自Pfizer)。PDE11选择性抑制剂可以是他达拉非、扎普司特或双嘧达莫。如本文所述，可以使用一种或多种PDE抑制剂的任意组合。

毛喉素是由植物毛喉鞘蕊花(Coleus forskohlii)产生的半日花烷型二萜。毛喉素可用来提高cAMP的水平。机理可以包括激活腺苷酸环化酶。

利奥西呱(也被称为BAY 63-2521)可以用作鸟苷酸环化酶(sGC)刺激物。在特定的毫克口服剂量下，利奥西呱被认为有助于治疗两种形式的肺性高血压(PH)：慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)和肺动脉高压(PAH)。

本文所述的方法可进一步包括采用至少一种治疗剂治疗需要治疗的受试者，其中所述至少一种治疗剂可以是非选择性PDE抑制剂、毛喉素和/或利奥西呱。考虑到各种组合。举例而言，本文公开了几种方法。所述方法可进一步包括采用至少一种治疗剂治疗需要治疗的受试者，其中所述至少一种治疗剂可以是选择性PDE抑制剂、毛喉素和/或利奥西呱。所述方法可进一步包括采用至少一种治疗剂治疗需要治疗的受试者，其中所述至少一种治疗剂可以是非选择性PDE抑制剂、茶碱和/或利奥西呱。所述方法可进一步包括采用至少一种治疗剂治疗需要治疗的受试者，其中所述至少一种治疗剂可以包括选择性PDE抑制剂、茶碱和/或利奥西呱。所述方法可进一步包括采用至少一种治疗剂治疗需要治疗的受试者，其中所述至少一种治疗剂可以包括非选择性PDE抑制剂和/或利奥西呱。所述方法可进一步包括采用至少一种治疗剂治疗需要治疗的受试者，其中所述至少一种治疗剂可以包括选择性PDE抑制剂和/或利奥西呱。所述方法可进一步包括采用至少一种治疗剂治疗需要治疗的受试者，其中所述至少一种治疗剂可以包括茶碱和/或利奥西呱。所述方法可进一步包括至少一种治疗剂，其中所述至少一种治疗剂可以包括毛喉素和/或利奥西呱。所述方法可进一步包括至少一种治疗剂，其中所述至少一种治疗剂可以包括茶碱、毛喉素和/或利奥西呱。所述方法可进一步包括至少一种治疗剂，其中所述至少一种治疗剂可以包括利奥西呱。所述方法可进一步包括至少一种治疗剂，其中所述至少一种治疗剂可以包括茶碱。所述方法可进一步包括至少一种治疗剂，其中所述至少一种治疗剂可以包括毛喉素。所述方法可进一步包括至少一种治疗剂，其中所述至少一种治疗剂可以包括非选择性PDE抑制剂。所述方法可进一步包括至少一种治疗剂，其中所述至少一种治疗剂可以包括选择性PDE抑制剂。

利奥西呱可以用来有效治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。特别地，利奥西呱的有效剂量可以由高水平到低水平而不同。利奥西呱可以以选自下组的量给予和/或存在：大于0.0μg至1μg、0.5μg至2μg、1.5μg至3.0μg、2.5μg至10μg、5μg至15μg、12.5μg至30μg、25μg至50μg、40μg至80μg、60μg至100μg、90μg至120μg、110μg至130μg、125μg至150μg、140μg至180μg、170μg至200μg、200μg至230μg、215μg至240μg、235μg至小于250μg，和小于250μg，和大于约0.0μg至约1μg、约0.5μg至约2μg、约1.5μg至约3.0μg、约2.5μg至约10μg、约5μg至约15μg、约12.5μg至约30μg、约25μg至约50μg、约40μg至约80μg、约60μg至约100μg、约90μg至约120μg、约110μg至约130μg、约125μg至约150μg、约140μg至约180μg、约170μg至约200μg、约200μg至约230μg、约215μg至约240μg，和约235μg至小于250μg。

茶碱可以用来有效治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。特别地，茶碱的有效剂量可以由高水平到低水平而不同。茶碱可以以选自下组的量给予和/或存在：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg，和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg。

毛喉素可以用来有效治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。特别地，毛喉素的有效剂量可以由高水平到低水平而不同。毛喉素可以以选自下组的量给予和/或存在：小于500mg至450mg、475mg至425mg、435mg至400mg、415mg至300mg、325mg至250mg、275mg至150mg、200mg至100mg、135mg至80mg、95mg至65mg、75mg至50mg、60mg至40mg、45mg至25mg、30mg至20mg、15mg至5mg、10mg至2.5mg、3.5mg至1mg，和2mg至大于0mg，和小于约500mg至约450mg、约475mg至约425mg、约435mg至约400mg、约415mg至约300mg、约325mg至约250mg、约275mg至约150mg、约200mg至约100mg、约135mg至约80mg、约95mg至约65mg、约75mg至约50mg、约60mg至约40mg、约45mg至约25mg、约30mg至约20mg、约15mg至约5mg、约10mg至约2.5mg、约3.5mg至约1mg，和约2mg至大于0mg。

可以给予例如有需要的受试者利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的任意组合。在某些情况下，与单独采用利奥西呱、茶碱和/或毛喉素治疗时相比，利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的特定组合在治疗病况时可以表现出协同效应。在其他情况下，与成对地采用利奥西呱、茶碱和/或毛喉素治疗时相比，利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的特定组合在治疗病况时可以表现出协同效应。所述病况可以是疾病。所述病况可以是味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。所述方法可以包括采用一种或多种治疗剂治疗受试者，其中：(a)利奥西呱可以以选自下组的量给予和/或存在：大于0.0μg至1μg、0.5μg至2μg、1.5μg至3.0μg、2.5μg至10μg、5μg至15μg、12.5μg至30μg、25μg至50μg、40μg至80μg、60μg至100μg、90μg至120μg、110μg至130μg、125μg至150μg、140μg至180μg、170μg至200μg、200μg至230μg、215μg至240μg、235μg至小于250μg，和小于250μg，和大于约0.0μg至约1μg、约0.5μg至约2μg、约1.5μg至约3.0μg、约2.5μg至约10μg、约5μg至约15μg、约12.5μg至约30μg、约25μg至约50μg、约40μg至约80μg、约60μg至约100μg、约90μg至约120μg、约110μg至约130μg、约125μg至约150μg、约140μg至约180μg、约170μg至约200μg、约200μg至约230μg、约215μg至约240μg，和约235μg至小于250μg；(b)茶碱可以以选自下组的量给予和/或存在：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg，和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg；和(c)毛喉素可以以选自下组的量给予和/或存在：小于500mg至450mg、475mg至425mg、435mg至400mg、415mg至300mg、325mg至250mg、275mg至150mg、200mg至100mg、135mg至80mg、95mg至65mg、75mg至50mg、60mg至40mg、45mg至25mg、30mg至20mg、15mg至5mg、10mg至2.5mg、3.5mg至1mg，和2mg至大于0mg，和小于约500mg至约450mg、约475mg至约425mg、约435mg至约400mg、约415mg至约300mg、约325mg至约250mg、约275mg至约150mg、约200mg至约100mg、约135mg至约80mg、约95mg至约65mg、约75mg至约50mg、约60mg至约40mg、约45mg至约25mg、约30mg至约20mg、约15mg至约5mg、约10mg至约2.5mg、约3.5mg至约1mg，和约2mg至大于0mg。

细胞色素P450超家族(CYP)可以是多样化的一大组催化有机物质氧化的酶。CYP是参与药物代谢和生物活化的主要的酶。本发明人已经发现，通过抑制CYP，本发明的治疗剂的作用能够延长并具有更深远的作用。这可以允许较低的剂量和经由许多不同的施用途径的递送。本发明人还发现，不同的施用途径可以避免抗药性。

所述方法可以进一步包括治疗需要治疗的受试者，其中该治疗包括向受试者施用有效量的细胞色素p450抑制剂。所述方法可以进一步包括向受试者施用有效量的细胞色素p450抑制剂，其中该细胞色素p450抑制剂能够完全或部分地抑制选自下组的细胞色素：CYP1、CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1、CYP2、CYP2A6、CYP2A7、CYP2A13、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C18、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP2F1、CYP2J2、CYP2R1、CYP2S1、CYP2U1、CYP2W1、CYP3、CYP3A4、CYP3A5、CYP3A7、CYP3A43、CYP4、CYP4A11、CYP4A22、CYP4B1、CYP4F2、CYP4F3、CYP4F8、CYP4F11、CYP4F12、CYP4F22、CYP4V2、CYP4X1、CYP4Z1、CYP5、CYP5A1、CYP7、CYP7A1、CYP7B1、CYP8、CYP8A1、CYP8B1、CYP11、CYP11A1、CYP11B1、CYP11B2、CYP17、CYP17A1、CYP19、CYP19A1、CYP20、CYP20A1、CYP21、CYP21A2、CYP24、CYP24A1、CYP26、CYP26A1、CYP26B1、CYP26C1、CYP27、CYP27A1、CYP27B1、CYP27C1、CYP39、CYP39A1、CYP46、CYP46A1、CYP51和CYP51A1。所述方法还可以进一步包括向受试者施用有效量的细胞色素p450抑制剂，其中该细胞色素p450抑制剂能够完全或部分地抑制CYP1。所述方法还可以进一步包括向受试者施用有效量的细胞色素p450抑制剂，其中该细胞色素p450抑制剂能够完全或部分地抑制CYP1A2。CYP1A2抑制剂可以选自：氟喹诺酮、选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)、钙通道阻滞剂、草本茶、柚皮素、H2-受体拮抗剂、抗心律失常剂、干扰素、花椒毒素、米贝拉地尔、小茴香、姜黄和异烟肼。一种或多种CYP1A2抑制剂可以为西柚汁。一种或多种CYP1A2抑制剂可以为柚皮素。

β-肾上腺素能激动剂是可作用于β肾上腺素受体的一类拟交感神经药。β-肾上腺素能激动剂的刺激可激活腺苷酸环化酶并提高细胞内cAMP水平。本发明人已经发现，β-肾上腺素能激动剂治疗可改善味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。所述方法可进一步包括治疗需要治疗的受试者，其中该治疗可包括向受试者施用有效量的一种或多种β-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可以为β₁-肾上腺素能激动剂和/或β₂-肾上腺素能激动剂。所述方法还可进一步包括一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可以为β₁-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可以为选自多巴酚丁胺、异丙肾上腺素、扎莫特罗和肾上腺素的β₁-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可以为β₂-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可以为选自沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇、非诺特罗、福莫特罗、异丙肾上腺素(β₁和β₂)、奥西那林、沙美特罗、特布他林、克伦特罗、异他林、吡布特罗、丙卡特罗、利托君和肾上腺素的β₂-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可以选自：阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基阿普洛尔薄荷烷(bromoacetylalprenololmenthane)、溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、地诺帕明、多培沙明、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、异克舒令、马布特罗、甲氧那明、布酚宁、奥昔非君、普瑞特罗、雷托巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗和净特罗。

可以用抗炎性细胞因子来改善味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。所述方法还可进一步包括治疗，其中该治疗可包括向有需要的受试者施用有效量的一种或多种抗炎性细胞因子。所述一种或多种抗炎性细胞因子可包括IL-1ra、IL-10、IFN-γ、IFN-β或其任意组合。

抗体等，例如抗体模拟物和抗体片段，可用于改善味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。所述方法还可进一步包括治疗，其中该治疗可包括施用有效量的能够抑制一种或多种促炎性细胞因子的抗体、抗体片段或抗体模拟物。该抗体、抗体片段或抗体模拟物可与所述一种或多种促炎性细胞因子中的一种结合。该抗体、抗体片段或抗体模拟物可与针对所述一种或多种促炎性细胞因子中的至少一种的受体结合。该抗体可为单克隆抗体。该单克隆抗体可为重组抗体、嵌合抗体、人类单克隆抗体或人源化单克隆抗体。所述抗体片段可为FAB片段、FAB2片段、Fv片段、ScFv片段、抗体轻链或抗体重链。所述抗体模拟物可为亲和体(affibody)分子、affilin、affitin、anticalins、高亲和多聚体(avimers)、DARPins、fynomer、Kunitz域肽或单体(monobody)。

预期所述方法包括能与IL-6结合的抗体、抗体片段或抗体模拟物。该抗体、抗体片段或抗体模拟物可与针对IL-6的受体结合。该抗体、抗体片段或抗体模拟物可为tociluzumab、sarilumab、艾西莫单抗(elsilimomab)、司妥昔单抗(siltuximab)、sirukumab、BMS-945429、CDP6038、VX30、ARGX-109或FM101。所述抑制剂可为露那辛(lunasin)。所述方法还可包括能够与IL-1α结合的抗体、抗体片段或抗体模拟物。该抗体、抗体片段或抗体模拟物可与针对IL-1α的受体结合。所述抑制剂可为IL-1RA。该抗体、抗体片段或抗体模拟物能够与IL-1β结合。该抗体、抗体片段或抗体模拟物能够与针对IL-1β的受体结合。该抗体、抗体片段或抗体模拟物可为康纳单抗(canakinumab)。该抗体、抗体片段或抗体模拟物能够与TNF-α结合。该抗体、抗体片段或抗体模拟物能够与针对TNF-α的受体结合。该抗体、抗体片段或抗体模拟物可为英利普单抗、阿达木单抗、培化舍珠单抗(certolizumab pegol)或戈利木单抗(golimumab)。所述抑制剂可为依那西普、黄嘌呤衍生物、安非他酮或5-HT2A激动剂。所述抑制剂可为黄嘌呤衍生物，其可为己酮可可碱。所述抑制剂可为5-HT2A激动剂，其可为(R)-DOI(2,5-二甲氧基-4-碘苯丙胺)、TCB-2(1-[(7R)-3-溴-2,5-二甲氧基双环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-7-基]甲胺)、LSD(麦角酸二乙胺)或LSZ(麦角酸2,4-二甲基吖丁啶(dimethylazetidide))。

所述方法可进一步包括施用可不含类固醇的组合物或剂量单位。

本发明的另一个方面可以将刺猬信号途径的成员的水平恢复到治疗有效水平。这可以通过各种方法来实现，包括但不限于本领域中已知的那些方法。所述治疗可包括通过施用有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员来提高刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。提高刺猬信号途径的一个或多个成员的水平还可包括施用有效量的刺猬信号途径的一个或多个外来成员。提高刺猬信号途径的一个或多个成员的水平还可包括激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达。激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达可通过遗传操作负责刺猬信号途径的一个或多个成员的表达的基因来完成。激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达也可通过治疗剂来实现。所述治疗可直接或间接影响刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。

本发明的方法可包括针对一种或多种治疗剂的不同施用途径。可采用本领域的已知方法来制备不同的制剂。所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可适于通过选自下组的方法予以施用，所述方法包括：口服施用、跨粘膜施用、颊部施用、吸入施用、鼻内施用、肠胃外施用、静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、舌下施用、经皮施用和直肠施用。出于使用方便的原因，所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可适于口服施用、吸入施用、鼻内施用，或其任意组合。

本发明的受试者可为哺乳动物。例如，该受试者可以是人。该受试者可以是有需要的受试者。

治疗方法

本发明人发现，通过改变刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，可治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。

本文公开了治疗受试者的味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的方法，该方法包括提高和/或维持刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。

所述刺猬信号途径的一个或多个成员可选自SHH、DHH和IHH。所述刺猬信号途径的一个或多个成员可为SHH、DHH、IHH或其任意组合。

可通过提高cGMP水平来提高和/或维持所述刺猬信号途径的一个或多个成员。提高和/或维持所述刺猬信号途径的一个或多个成员的水平可包括将一种或多种cGMP激活剂给予受试者。所述一种或多种cGMP激活剂可以与一种或多种附加治疗剂联合给予。该cGMP激活剂可为利奥西呱。所述一种或多种附加治疗剂可以包括一种或多种非选择性PDE抑制剂和/或毛喉素，或其组合。所述一种或多种附加治疗剂可以包括一种或多种选择性PDE抑制剂和/或毛喉素，或其组合。

所述方法可进一步包括向受试者施用一种或多种附加治疗剂，其中所述一种或多种附加治疗剂可包括以选自下组的量给予或存在的利奥西呱：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg，和小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg，和约235μg到小于250μg。

所述方法可进一步包括向受试者施用一种或多种附加治疗剂，其中所述一种或多种附加治疗剂可包括以选自下组的量给予或存在的茶碱：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg；和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg。

所述方法可进一步包括向受试者施用一种或多种附加治疗剂，其中所述一种或多种附加治疗剂可包括以选自下组的量给予或存在的毛喉素：小于500mg到450mg、475mg到425mg、435mg到400mg、415mg到300mg、325mg到250mg、275mg到150mg、200mg到100mg、135mg到80mg、95mg到65mg、75mg到50mg、60mg到40mg、45mg到25mg、30mg到20mg、15mg到5mg、10mg到2.5mg、3.5mg到1mg，和2mg到大于0mg，和小于约500mg到约450mg、约475mg到约425mg、约435mg到约400mg、约415mg到约300mg、约325mg到约250mg、约275mg到约150mg、约200mg到约100mg、约135mg到约80mg、约95mg到约65mg、约75mg到约50mg、约60mg到约40mg、约45mg到约25mg、约30mg到约20mg、约15mg到约5mg、约10mg到约2.5mg、约3.5mg到约1mg，和约2mg到大于0mg。

可将利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的任意组合给予受试者以提高刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。在某些情况下，与单独采用利奥西呱、茶碱和/或毛喉素治疗相比，利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的特定组合可表现出协同效应。在其他情况下，与成对地采用利奥西呱、茶碱和/或毛喉素治疗相比，利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的特定组合可表现出协同效应。所述方法可进一步包括向受试者施用一种或多种附加治疗剂，其中所述一种或多种附加治疗剂可包括：(a)以选自下组的量给予或存在的利奥西呱：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg，和小于250μg，以及大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg，和约235μg到小于250μg；(b)以选自下组的量给予或存在的茶碱：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg，和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg；(c)以选自下组的量给予或存在的毛喉素：小于500mg到450mg、475mg到425mg、435mg到400mg、415mg到300mg、325mg到250mg、275mg到150mg、200mg到100mg、135mg到80mg、95mg到65mg、75mg到50mg、60mg到40mg、45mg到25mg、30mg到20mg、15mg到5mg、10mg到2.5mg、3.5mg到1mg，和2mg到大于0mg，以及小于约500mg到约450mg、约475mg到约425mg、约435mg到约400mg、约415mg到约300mg、约325mg到约250mg、约275mg到约150mg、约200mg到约100mg、约135mg到约80mg、约95mg到约65mg、约75mg到约50mg、约60mg到约40mg、约45mg到约25mg、约30mg到约20mg、约15mg到约5mg、约10mg到约2.5mg、约3.5mg到约1mg，和约2mg到大于0mg。

所述方法可进一步包括一种或多种非选择性PDE抑制剂，其中所述一种或多种非选择性PDE抑制剂可包括茶碱。所述方法还可进一步包括一种或多种选择性PDE抑制剂，其中所述一种或多种选择性PDE抑制剂可选自：PDE-1选择性抑制剂、PDE-2选择性抑制剂、PDE-3选择性抑制剂、PDE-4选择性抑制剂、PDE-5选择性抑制剂或其任意组合。

维持和/或提高刺猬信号途径的一个或多个成员的水平可包括施用有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员。维持和/或提高刺猬信号途径的一个或多个成员的水平还可包括施用有效量的刺猬信号途径的一个或多个外来成员。维持和/或提高刺猬信号途径的一个或多个成员的水平还可包括激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达。激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达可通过遗传操作负责刺猬信号途径的一个或多个成员的表达的一个或多个基因来实现。激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达还可通过治疗剂来实现。该治疗剂能够直接影响刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。该治疗剂能够间接影响刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。

所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可适于通过选自下组的方法予以施用：口服施用、跨粘膜施用、颊部施用、吸入施用、鼻内施用、肠胃外施用、静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、舌下施用、经皮施用和直肠施用。出于使用方便的原因，所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可适于口服施用、吸入施用、鼻内施用，或其任意组合。

本发明人发现，可通过提高刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，同时影响一氧化氮(NO)、TNF alpha(TNF-α)、TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)、白介素-1(IL-1)、白介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)、和/或白介素-10(IL-10)的水平，来有效地改善味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。在一些情况下，所述组合可导致协同效应。

本文还公开了治疗有需要的受试者的味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的方法，该方法包括向该受试者施用一种或多种治疗剂或含有一种多种治疗剂的组合物，其足以实现：(a)刺猬信号途径的一个或多个成员的维持和/或提高；(b)以下至少一项或多项：(i)一氧化氮(NO)增加；(ii)TNF alpha(TNF-α)减少；(iii)TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)减少；(iv)白介素-1(IL-1)减少；(v)白介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)减少；和(vi)白介素-10(IL-10)增加；以及(c)干细胞分化。

所述一种或多种治疗剂可包括一种或多种cGMP激活剂，一种或多种cAMP激活剂，或其任意组合。

所述方法可进一步包括一种或多种cGMP激活剂，其中所述一种或多种cGMP激活剂可选自：3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、YC-1衍生物、邻氨基苯甲酸衍生物、阿他西呱(HMR1766)、苄达明类似物、CFM1517、A-350619、硝基血管扩张剂、吗多明、硝酰基(HNO)、BAY 41-2272、BAY 41-8543、BAY 58-2667、西那西呱(BAY 58-2667)和利奥西呱(BAY 63-2521)。所述一种或多种cGMP激活剂可为利奥西呱。

所述方法可进一步包括一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可选自：3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、胰高血糖素、PDE抑制剂、前列腺素E1(PGE1；药学上称为前列地尔)、毛喉素和β-肾上腺素能激动剂。所述方法可进一步包括一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可包括一种或多种PDE抑制剂和/或毛喉素。所述方法可进一步包括一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可为毛喉素。

所述方法可进一步包括一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可为一种或多种PDE抑制剂。所述一种或多种PDE抑制剂可包括非选择性PDE抑制剂、PDE-1选择性抑制剂、PDE-2选择性抑制剂、PDE-3选择性抑制剂、PDE-4选择性抑制剂、PDE-5选择性抑制剂、PDE-10选择性抑制剂，或其组合。所述一种或多种PDE抑制剂可为选择性PDE抑制剂。所述一种或多种PDE抑制剂可包括非选择性PDE抑制剂，其可为甲基黄嘌呤衍生物。该甲基黄嘌呤衍生物可为咖啡因、茶碱、多索茶碱、西潘茶碱、甘油茶碱、己酮可可碱(pentoxiphylline)或二羟丙茶碱。该甲基黄嘌呤衍生物可为茶碱。所述PDE 1抑制剂可为长春西汀、化合物KS505a、bepril、氟桂利嗪、胺碘酮、扎普司特、8-甲氧基甲基IPMX、SCH 51866、尼莫地平或IC224。PDE 2抑制剂可为EHNA。所述PDE 3抑制剂可为依诺昔酮、米力农(Primacor)、氨力农(amrinone)、西洛酰胺、西洛他唑(Pletal)、曲喹辛、氨力农(inamrinone)、阿那格雷、匹莫苯旦、利沙齐农或二氢哒嗪酮。所述PDE 4抑制剂可为松叶菊碱、咯利普兰、异丁司特、罗氟司特(Daxas)、西洛司特(Airflo)、吡拉米司特、木犀草素、屈他维林或登布茶碱。所述PDE 5抑制剂可为西地那非、他达拉非、伐地那非、乌地那非和阿伐那非、双嘧达莫、淫羊藿苷、4-甲基哌嗪、吡唑并嘧啶-7-1、西洛司特或扎普司特。所述PDE6选择性抑制剂可为扎普司特、双嘧达莫、伐地那非或他达那非。所述PDE7选择性抑制剂可为喹唑啉型PDE7抑制剂、双嘧达莫或噻二唑。所述PDE8选择性抑制剂可为双嘧达莫。所述PDE9选择性抑制剂可为扎普司特。所述PDE 10抑制剂可为罂粟碱、OMS824(来自Omeros Corporation)和/或PF-2545920(来自Pfizer)。所述PDE11选择性抑制剂可为他达拉非、扎普司特或双嘧达莫。

所述一种或多种治疗剂可包括非选择性PDE抑制剂、毛喉素和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括选择性PDE抑制剂、毛喉素和利奥西呱。也可以考虑各种组合。例如，所述一种或多种治疗剂可包括非选择性PDE抑制剂、茶碱和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括选择性PDE抑制剂、茶碱和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括非选择性PDE抑制剂和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括选择性PDE抑制剂和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括茶碱和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括毛喉素和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括茶碱、毛喉素和利奥西呱。

本发明的方法可包括一种或多种治疗剂，其中所述一种或多种治疗剂可以是无类固醇的。

利奥西呱可以以选自下组的量给予和/或存在:大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg、小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg、约235μg到小于约250μg。

茶碱可以以选自下组的量给予和/或存在：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg、或20μg；和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg。

毛喉素可以以选自下组的量给予和/或存在：小于500mg到450mg、475mg到425mg、435mg到400mg、415mg到300mg、325mg到250mg、275mg到150mg、200mg到100mg、135mg到80mg、95mg到65mg、75mg到50mg、60mg到40mg、45mg到25mg、30mg到20mg、15mg到5mg、10mg到2.5mg、3.5mg到1mg、2mg到大于0mg；和小于约500mg到约450mg、约475mg到约425mg、约435mg到约400mg、约415mg到约300mg、约325mg到约250mg、约275mg到约150mg、约200mg到约100mg、约135mg到约80mg、约95mg到约65mg、约75mg到约50mg、约60mg到约40mg、约45mg到约25mg、约30mg到约20mg、约15mg到约5mg、约10mg到约2.5mg、约3.5mg到约1mg、约2mg到大于约0mg。

可将利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的任意组合给予受试者以提高刺猬信号途径的一个或多个成员和/或NO、TNF-α、TRAIL、IL-1、IL-1RA、和/或IL-10的水平。在某些情况下，与单独采用利奥西呱、茶碱和/或毛喉素治疗相比，利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的特定组合可表现出协同效应。在其他情况下，与成对地采用利奥西呱、茶碱和/或毛喉素治疗相比，利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的特定组合可表现出协同效应。所述方法可包括方法，其中，(a)利奥西呱可以以选自下组的量给予和/或存在：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg，和小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg，和约235μg到小于250μg；(b)茶碱可以以选自下组的量给予和/或存在：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg；和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg；以及(c)毛喉素可以以选自下组的量给予和/或存在：小于500mg到450mg、475mg到425mg、435mg到400mg、415mg到300mg、325mg到250mg、275mg到150mg、200mg到100mg、135mg到80mg、95mg到65mg、75mg到50mg、60mg到40mg、45mg到25mg、30mg到20mg、15mg到5mg、10mg到2.5mg、3.5mg到1mg，和2mg到大于0mg；和小于约500mg到约450mg、约475mg到约425mg、约435mg到约400mg、约415mg到约300mg、约325mg到约250mg、约275mg到约150mg、约200mg到约100mg、约135mg到约80mg、约95mg到约65mg、约75mg到约50mg、约60mg到约40mg、约45mg到约25mg、约30mg到约20mg、约15mg到约5mg、约10mg到约2.5mg、约3.5mg到约1mg，和约2mg到大于0mg。

提高和/或维持刺猬信号途径的一个或多个成员的水平可包括施用有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员。提高和/或维持刺猬信号途径的一个或多个成员的水平可包括施用有效量的刺猬信号途径的一个或多个外来成员。提高和/或维持刺猬信号途径的一个或多个成员的水平可包括激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达。激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达可通过遗传操作负责刺猬信号途径的一个或多个成员的表达的一个或多个基因来实现。激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达可通过治疗剂来实现。该治疗剂能够直接影响刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。该治疗剂能够间接影响刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。

所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可适于通过选自下组的方法予以施用：口服施用、跨粘膜施用、颊部施用、吸入施用、鼻内施用、肠胃外施用、静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、舌下施用、经皮施用和直肠施用。出于使用方便的原因，所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可适于口服施用、吸入施用、鼻内施用，或其任意组合。

所述一种或多种治疗剂或组合物在配制成高于特定pH的液体时可表现出意料之外的功效。有时，一种或多种治疗剂的任意组合在配制成高于特定pH时可导致协同效应。所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可为液体。所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物的pH可大于7.0。所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物的pH可大于7.1。所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物的pH可大于7.5。所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物的pH可大于8.0。所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物的pH可大于9.0。

可将赋形剂加入所述一种或多种治疗剂或组合物。本发明可用的赋形剂可包括在R.C.Rowe,P.J.Shesky和M.E.Quinn编著的Handbook of Pharmaceutical Excipients,第六版(2009)中可以找到的那些，其通过引用以全文并入本文。例如，预期以下赋形剂可以单独地或任意组合地加入一种或多种治疗剂或组合物：阿拉伯树胶、乙酰氨基磺酸钾、冰醋酸、丙酮、柠檬酸乙酰三丁酯、柠檬酸乙酰三乙酯、己二酸、琼脂、白蛋白、醇、海藻酸、脂肪族聚酯、阿力甜、杏仁油、α生育酚、氢氧化铝、佐剂、单硬脂酸铝、氧化铝、磷酸铝佐剂、氨水、藻酸铵、氯化铵、抗坏血酸、棕榈酸抗坏血酸酯、阿斯巴甜、凹凸棒石、膨润土、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲酸、苯甲醇、苯甲酸苄酯、硼酸、溴硝丙二醇、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、丁二醇、对羟基苯甲酸丁酯、乙酸钙、藻酸钙、碳酸钙、氯化钙、氢氧化钙、乳酸钙、无水磷酸氢二钙、二水合磷酸氢二钙、磷酸钙、硅酸钙、硬脂酸钙、硫酸钙、菜籽油、卡波姆、二氧化碳、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、角叉菜胶、蓖麻油、氢化蓖麻油、微晶纤维素、微晶纤维素及羧甲基纤维素钠、纤维素粉、硅化微晶纤维素、醋酸纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素、角豆胶、地蜡、蜡硬脂醇(Cetostearyl Alcohol)、西曲溴铵、鲸蜡醇、氯化十六烷基吡啶、壳聚糖、氯己定、氯丁醇、氯甲酚、氯二氟乙烷(HCFC)、氯氟碳(CFC)、氯二甲苯酚、胆固醇、一水合柠檬酸、椰子油、胶体二氧化硅、着色剂、聚维酮、玉米油、玉米淀粉及预胶化淀粉、棉籽油、甲酚、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、环糊精、环甲硅油、苯甲地那铵、葡萄糖结合剂(Dextrates)、糊精、右旋糖、邻苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、二乙醇胺、邻苯二甲酸二乙酯、二氟乙烷(HFC)、聚二甲基硅氧烷、二甲醚、邻苯二甲酸二甲酯、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、乙二胺四乙酸二钠、多库酯钠、依地酸、异抗坏血酸、赤藓醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、乙基麦芽酚、油酸乙酯、乙基香草醛、乙基纤维素、乙二醇单脂酸酯、乙烯醋酸乙烯酯、对羟基苯甲酸乙酯、果糖、富马酸、明胶、葡萄糖液、甘油、山萮酸甘油酯、单油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、棕榈酰硬脂酸甘油酯、甘氨酸、糖原质、瓜尔胶、锂蒙脱石、七氟丙烷(HFC)、海克替啶、烃类(HC)、盐酸、疏水胶体二氧化硅、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基倍他环糊精、羟丙基纤维素、低取代羟丙基纤维素、羟丙基淀粉、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素醋酸酯琥珀酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、咪脲、菊粉、氧化铁、异麦芽(Isomalt)、异丙醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、高岭土、乳酸、乳糖醇、无水乳糖、吸入式乳糖、一水合乳糖、一水合乳糖和玉米淀粉、一水合乳糖和微晶纤维素、一水合乳糖和聚维酮、一水合乳糖和粉状纤维素、喷雾干燥乳糖、羊毛脂、含水羊毛脂、羊毛脂醇、月桂酸、卵磷脂、亮氨酸、亚油酸、聚乙二醇15羟基硬脂酸酯、硅酸镁铝、碳酸镁、氧化镁、硅酸镁、硬脂酸镁、三硅酸镁、马来酸、苹果酸、麦芽糖醇、麦芽糖醇溶液、麦芽糖糊精、麦芽酚、麦芽糖、甘露醇、中链甘油三酯、葡甲胺、薄荷醇、甲硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯酸甲酯、矿物油、轻矿物油、矿物油和羊毛脂醇、单乙醇胺、谷氨酸一钠、硫代甘油、肉豆蔻酸、肉豆蔻醇、新橙皮苷二氢查耳酮、纽甜(Neotame)、氮、氧化亚氮、辛基十二醇、油酸、油醇、橄榄油、棕榈酸、石蜡、花生油、果胶、喷替酸、凡士林、凡士林和羊毛脂醇、酚、苯氧乙醇、苯乙基醇、醋酸苯汞、硼酸苯汞、硝酸苯汞、磷脂、磷酸、聚克立林钾、泊洛沙姆、聚卡波非、聚葡萄糖、聚(DL-旋乳酸)、聚乙二醇、聚氧化乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基乙烯醚/马来酸酐)、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚乙二醇甘油酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、聚乙烯醇、海藻酸钾、钾明矾、苯甲酸钾、碳酸氢钾、氯化钾、柠檬酸钾、氢氧化钾、偏亚硫酸氢钾、山梨酸钾、聚维酮、丙酸、没食子酸丙酯、碳酸丙烯酯、丙二醇、藻酸丙二醇酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丙酯钠、吡咯烷酮、棉籽糖、糖精、糖精钠、红花油、皂石、芝麻油、虫胶、二甲基硅油、乙酸钠、海藻酸钠、抗坏血酸钠、苯甲酸钠、碳酸氢钠、硼酸钠、碳酸钠、氯化钠、二水合柠檬酸钠、环己基氨基磺酸钠、甲醛次硫酸钠、透明质酸钠、氢氧化钠、乳酸钠、十二烷基硫酸钠、偏亚硫酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢钠、丙酸钠、羟基乙酸淀粉钠、硬脂酰富马酸钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠、山梨酸、脱水山梨糖醇酯(脱水山梨糖醇脂肪酸酯)、山梨糖醇、大豆油、淀粉、预胶化淀粉、可灭菌玉米淀粉、硬脂酸、硬脂醇、三氯蔗糖、蔗糖、蔗糖八醋酸酯、可压缩糖、糖粉(Sugar-Confectioner’s)、糖球、磺丁基醚β环糊精、二氧化硫、硫酸、葵花油、栓剂基质-硬脂、塔格糖、滑石、酒石酸、四氟乙烷(HFC)、奇异果甜蛋白(Thaumatin)、硫柳汞、麝香草酚、二氧化钛、黄蓍胶、海藻糖、三醋精、柠檬酸三丁酯、三辛酸甘油酯、三乙醇胺、柠檬酸三乙酯、三油酸酯、香草醛、氢化植物油、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯、水、阴离子乳化蜡、巴西棕榈蜡、十六烷基酯蜡、微晶蜡、非离子乳化蜡、白蜡、黄蜡、黄原胶、木糖醇、玉米醇溶蛋白、醋酸锌和/或硬脂酸锌。

所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可进一步包含一种或多种赋形剂。所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可进一步包含一种或多种赋形剂，其中所述一种或多种赋形剂可选自：防粘剂、防沫剂、缓冲剂、聚合物、抗氧化剂、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂(viscomodulators)、张度调节剂(tonicifiers)、调味剂、着色剂、香味剂、遮光剂、悬浮剂、粘结剂、填充剂、塑化剂、润滑剂，及其混合物。

所述一种或多种治疗剂可包含一种或多种细胞色素p450抑制剂。所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可进一步包含一种或多种细胞色素p450抑制剂，其中所述一种或多种细胞色素p450抑制剂能够完全或部分地抑制选自下组的细胞色素p450：CYP1、CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1、CYP2、CYP2A6、CYP2A7、CYP2A13、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C18、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP2F1、CYP2J2、CYP2R1、CYP2S1、CYP2U1、CYP2W1、CYP3、CYP3A4、CYP3A5、CYP3A7、CYP3A43、CYP4、CYP4A11、CYP4A22、CYP4B1、CYP4F2、CYP4F3、CYP4F8、CYP4F11、CYP4F12、CYP4F22、CYP4V2、CYP4X1、CYP4Z1、CYP5、CYP5A1、CYP7、CYP7A1、CYP7B1、CYP8、CYP8A1、CYP8B1、CYP11、CYP11A1、CYP11B1、CYP11B2、CYP17、CYP17A1、CYP19、CYP19A1、CYP20、CYP20A1、CYP21、CYP21A2、CYP24、CYP24A1、CYP26、CYP26A1、CYP26B1、CYP26C1、CYP27、CYP27A1、CYP27B1、CYP27C1、CYP39、CYP39A1、CYP46、CYP46A1、CYP51和CYP51A1。所述一种或多种细胞色素p450抑制剂能够完全或部分地抑制CYP1。所述一种或多种细胞色素p450抑制剂能够完全或部分地抑制CYP1A2。所述一种或多种CYP1A2抑制剂可选自：氟龙诺酮、选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)、钙通道阻滞剂、草本茶、柚皮素、H2-受体拮抗剂、抗心律失常剂、干扰素、花椒毒素、米贝拉地尔、小茴香、姜黄和异烟肼。所述一种或多种CYP1A2抑制剂可为西柚汁。所述一种或多种CYP1A2抑制剂可为柚皮素。

所述一种或多种治疗剂或含有一种或多种治疗剂的组合物可进一步包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为β₁-肾上腺素能激动剂和/或β₂-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种治疗剂或组合物可包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为β1-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种治疗剂或组合物可包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为选自多巴酚丁胺、异丙肾上腺素、扎莫特罗和肾上腺素的β₁-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种治疗剂或组合物可包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为β₂-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种治疗剂或组合物可包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为选自沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇、非诺特罗、福莫特罗、异丙肾上腺素(β₁和β₂)、奥西那林、沙美特罗、特布他林、克伦特罗、异他林、吡布特罗、丙卡特罗、利托君和肾上腺素的β₂-肾上腺素能激动剂。所述一种或多种治疗剂或组合物可包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可选自：阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基阿普洛尔薄荷烷、溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、地诺帕明、多培沙明、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、异克舒令、马布特罗、甲氧那明、布酚宁、奥昔非君、普瑞特罗、雷托巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗和净特罗。

治疗用药物组合物

本发明人发现，可通过使用包含一种或多种cGMP激活剂和/或一种或多种cAMP激活剂的药物剂量单位有效改善味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。在一些情况下，cGMP和cAMP激活剂的组合可产生协同效应。

在本发明的另外一个方面，本文公开了一种包含一种或多种cGMP激活剂、一种或多种cAMP激活剂及其任意组合的药物剂量单位。

所述药物剂量单位可包含一种或多种cGMP激活剂，其中所述一种或多种cGMP激活剂可选自3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、YC-1衍生物、邻氨基苯甲酸衍生物、阿他西呱(HMR1766)、苄达明类似物、CFM1517、A-350619、硝基血管扩张剂、吗多明、硝酰基(HNO)、BAY 41-2272、BAY 41-8543、BAY 58-2667、西那西呱(BAY58-2667)和利奥西呱(BAY 63-2521)。所述药物剂量单位还可包含一种或多种cGMP激活剂，其中所述一种或多种cGMP激活剂可为利奥西呱。

所述药物剂量单位可包含一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可选自：3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、胰高血糖素、PDE抑制剂、前列腺素E1(PGE1；药学上被称为前列地尔)、毛喉素和β-肾上腺素能激动剂。所述药物剂量单位还包含一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可包括一种或多种PDE抑制剂和/或毛喉素。所述药物剂量单位还包含一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可包括毛喉素。

所述药物剂量单位可进一步包含一种或多种PDE抑制剂。所述一种或多种PDE抑制剂可包括非选择性PDE抑制剂、PDE-1选择性抑制剂、PDE-2选择性抑制剂、PDE-3选择性抑制剂、PDE-4选择性抑制剂、PDE-5选择性抑制剂、PDE-10选择性抑制剂，或其任意组合。所述一种或多种PDE抑制剂可为选择性PDE抑制剂。所述一种或多种PDE抑制剂可包括非选择性PDE抑制剂，其可为甲基黄嘌呤衍生物。该甲基黄嘌呤衍生物可为咖啡因、茶碱、多索茶碱、西潘茶碱、甘油茶碱、己酮可可碱或二羟丙茶碱。该甲基黄嘌呤衍生物可为茶碱。所述PDE 1抑制剂可为长春西汀、化合物KS505a、bepril、氟桂利嗪、胺碘酮、扎普司特、8-甲氧基甲基IPMX、SCH 51866、尼莫地平或IC224。所述PDE 2抑制剂可为EHNA。所述PDE 3抑制剂可为依诺昔酮、米力农(Primacor)、氨力农(amrinone)、西洛酰胺、西洛他唑(Pletal)、曲喹辛、氨力农(inamrinone)、阿那格雷、匹莫苯旦、利沙齐农或二氢哒嗪酮。所述PDE4抑制剂可为松叶菊碱、咯利普兰、异丁司特、罗氟司特(Daxas)、西洛司特(Airflo)、吡拉米司特、木犀草素、屈他维林或登布茶碱。所述PDE 5抑制剂可为西地那非、他达拉非、伐地那非、乌地那非和阿伐那非、双嘧达莫、淫羊藿苷、4-甲基哌嗪、吡唑并嘧啶-7-1、西洛司特或扎普司特。所述PDE6选择性抑制剂可为扎普司特、双嘧达莫、伐地那非或他达那非。所述PDE7选择性抑制剂可为喹唑啉型PDE7抑制剂、双嘧达莫或噻二唑。所述PDE8选择性抑制剂可为双嘧达莫。所述PDE9选择性抑制剂可为扎普司特。所述PDE 10抑制剂可为罂粟碱、OMS824(来自Omeros Corporation)和/或PF-2545920(来自Pfizer)。所述PDE11选择性抑制剂可为他达拉非、扎普司特或双嘧达莫。

所述药物剂量单位可包含非选择性PDE抑制剂、毛喉素和利奥西呱。所述剂量单位可包含选择性PDE抑制剂、毛喉素和利奥西呱。可以采用各种组合。例如，所述剂量单位可包含非选择性PDE抑制剂、茶碱和利奥西呱。所述剂量单位可包括选择性PDE抑制剂、茶碱以及利奥西呱。所述剂量单位可包含非选择性PDE抑制剂和利奥西呱。所述剂量单位可包含选择性PDE抑制剂和利奥西呱。所述剂量单位可包含茶碱、毛喉素和利奥西呱。所述剂量单位可包含茶碱和利奥西呱。所述剂量单位可包含毛喉素和利奥西呱。所述剂量单位可包含利奥西呱。

本发明可包括一种剂量单位，其中该剂量单位可以是无类固醇的。

利奥西呱可以以选自下组的量给予和/或存在：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg、小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg、约235μg到小于约250μg。

茶碱可以以选自下组的量给予和/或存在：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg；和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg。

毛喉素可以以选自下组的量给予和/或存在：小于500mg到450mg、475mg到425mg、435mg到400mg、415mg到300mg、325mg到250mg、275mg到150mg、200mg到100mg、135mg到80mg、95mg到65mg、75mg到50mg、60mg到40mg、45mg到25mg、30mg到20mg、15mg到5mg、10mg到2.5mg、3.5mg到1mg、2mg到大于0mg；和小于约500mg到约450mg、约475mg到约425mg、约435mg到约400mg、约415mg到约300mg、约325mg到约250mg、约275mg到约150mg、约200mg到约100mg、约135mg到约80mg、约95mg到约65mg、约75mg到约50mg、约60mg到约40mg、约45mg到约25mg、约30mg到约20mg、约15mg到约5mg、约10mg到约2.5mg、约3.5mg到约1mg、约2mg到大于约0mg。

预期利奥西呱、茶碱和/或毛喉素能够组合。在某些情况下，与只具有利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的组合物相比，利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的特定组合能够表现出协同效应。在某些情况下，与具有成对使用的利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的组合物相比，利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的特定组合能够表现出协同效应。所述药物剂量单位可为一种剂量单位，其中，(a)利奥西呱可以以选自下组的量给予和/或存在：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg、小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg、约235μg到小于250μg；(b)茶碱可以以选自下组的量给予和/或存在：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg；和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg；以及(c)毛喉素可以以选自下组的量给予和/或存在：小于500mg到450mg、475mg到425mg、435mg到400mg、415mg到300mg、325mg到250mg、275mg到150mg、200mg到100mg、135mg到80mg、95mg到65mg、75mg到50mg、60mg到40mg、45mg到25mg、30mg到20mg、15mg到5mg、10mg到2.5mg、3.5mg到1mg、2mg到大于0mg；和小于约500mg到约450mg、约475mg到约425mg、约435mg到约400mg、约415mg到约300mg、约325mg到约250mg、约275mg到约150mg、约200mg到约100mg、约135mg到约80mg、约95mg到约65mg、约75mg到约50mg、约60mg到约40mg、约45mg到约25mg、约30mg到约20mg、约15mg到约5mg、约10mg到约2.5mg、约3.5mg到约1mg、约2mg到大于0mg。

所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物可适于通过选自下组的方法予以施用：口服施用、跨粘膜施用、颊部施用、吸入施用、鼻内施用、肠胃外施用、静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、舌下施用、经皮施用和直肠施用。为了便于使用，所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物可适于口服施用、吸入施用、鼻内施用，或其任意组合。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可以为液体。

pH可影响所述剂量单位或组合物。所述剂量单位在pH高于特定阈值时可表现出协同效应。例如，所述剂量单位或组合物的pH可大于7.0。所述剂量单位或组合物的pH可大于7.1。所述剂量单位或组合物的pH可大于7.5。所述剂量单位或组合物的pH可大于8.0。所述剂量单位或组合物的pH可大于9.0。

可将赋形剂加入一种或多种治疗剂或组合物。本发明可用的赋形剂可包括在R.C.Rowe,P.J.Shesky和M.E.Quinn编著的Handbook of Pharmaceutical Excipients,第六版(2009)中找到的那些，其通过引用以全文并入本文。例如，预期以下赋形剂可以单独地或任意组合地加入一种或多种治疗剂或组合物：阿拉伯树胶、乙酰氨基磺酸钾、冰醋酸、丙酮、柠檬酸乙酰三丁酯、柠檬酸乙酰三乙酯、己二酸、琼脂、白蛋白、醇、海藻酸、脂肪族聚酯、阿力甜、杏仁油、α生育酚、氢氧化铝、佐剂、单硬脂酸铝、氧化铝、磷酸铝佐剂、氨水、藻酸铵、氯化铵、抗坏血酸、棕榈酸抗坏血酸酯、阿斯巴甜、凹凸棒石、膨润土、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲酸、苯甲醇、苯甲酸苄酯、硼酸、溴硝丙二醇、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、丁二醇、对羟基苯甲酸丁酯、乙酸钙、藻酸钙、碳酸钙、氯化钙、氢氧化钙、乳酸钙、无水磷酸氢二钙、二水合磷酸氢二钙、磷酸钙、硅酸钙、硬脂酸钙、硫酸钙、菜籽油、卡波姆、二氧化碳、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、角叉菜胶、蓖麻油、氢化蓖麻油、微晶纤维素、微晶纤维素及羧甲基纤维素钠、纤维素粉、硅化微晶纤维素、醋酸纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素、角豆胶、地蜡、蜡硬脂醇(Cetostearyl Alcohol)、西曲溴铵、鲸蜡醇、氯化十六烷基吡啶、壳聚糖、氯己定、氯丁醇、氯甲酚、氯二氟乙烷(HCFC)、氯氟碳(CFC)、氯二甲苯酚、胆固醇、一水合柠檬酸、椰子油、胶体二氧化硅、着色剂、聚维酮、玉米油、玉米淀粉及预胶化淀粉、棉籽油、甲酚、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、环糊精、环甲硅油、苯甲地那铵、葡萄糖结合剂(Dextrates)、糊精、右旋糖、邻苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、二乙醇胺、邻苯二甲酸二乙酯、二氟乙烷(HFC)、聚二甲基硅氧烷、二甲醚、邻苯二甲酸二甲酯、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、乙二胺四乙酸二钠、多库酯钠、依地酸、异抗坏血酸、赤藓醇、乙酸乙酯、乳酸乙酯、乙基麦芽酚、油酸乙酯、乙基香草醛、乙基纤维素、乙二醇单脂酸酯、乙烯醋酸乙烯酯、对羟基苯甲酸乙酯、果糖、富马酸、明胶、葡萄糖液、甘油、山萮酸甘油酯、单油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、棕榈酰硬脂酸甘油酯、甘氨酸、糖原质、瓜尔胶、锂蒙脱石、七氟丙烷(HFC)、海克替啶、烃类(HC)、盐酸、疏水胶体二氧化硅、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基倍他环糊精、羟丙基纤维素、低取代羟丙基纤维素、羟丙基淀粉、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素醋酸酯琥珀酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、咪脲、菊粉、氧化铁、异麦芽(Isomalt)、异丙醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、高岭土、乳酸、乳糖醇、无水乳糖、吸入式乳糖、一水合乳糖、一水合乳糖和玉米淀粉、一水合乳糖和微晶纤维素、一水合乳糖和聚维酮、一水合乳糖和粉状纤维素、喷雾干燥乳糖、羊毛脂、含水羊毛脂、羊毛脂醇、月桂酸、卵磷脂、亮氨酸、亚油酸、聚乙二醇15羟基硬脂酸酯、硅酸镁铝、碳酸镁、氧化镁、硅酸镁、硬脂酸镁、三硅酸镁、马来酸、苹果酸、麦芽糖醇、麦芽糖醇溶液、麦芽糖糊精、麦芽酚、麦芽糖、甘露醇、中链甘油三酯、葡甲胺、薄荷醇、甲硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯酸甲酯、矿物油、轻矿物油、矿物油和羊毛脂醇、单乙醇胺、谷氨酸一钠、硫代甘油、肉豆蔻酸、肉豆蔻醇、新橙皮苷二氢查耳酮、纽甜(Neotame)、氮、氧化亚氮、辛基十二醇、油酸、油醇、橄榄油、棕榈酸、石蜡、花生油、果胶、喷替酸、凡士林、凡士林和羊毛脂醇、酚、苯氧乙醇、苯乙基醇、醋酸苯汞、硼酸苯汞、硝酸苯汞、磷脂、磷酸、聚克立林钾、泊洛沙姆、聚卡波非、聚葡萄糖、聚(DL-旋乳酸)、聚乙二醇、聚氧化乙烯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基乙烯醚/马来酸酐)、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚乙二醇甘油酯、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、聚乙烯醇、海藻酸钾、钾明矾、苯甲酸钾、碳酸氢钾、氯化钾、柠檬酸钾、氢氧化钾、偏亚硫酸氢钾、山梨酸钾、聚维酮、丙酸、没食子酸丙酯、碳酸丙烯酯、丙二醇、藻酸丙二醇酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丙酯钠、吡咯烷酮、棉籽糖、糖精、糖精钠、红花油、皂石、芝麻油、虫胶、二甲基硅油、乙酸钠、海藻酸钠、抗坏血酸钠、苯甲酸钠、碳酸氢钠、硼酸钠、碳酸钠、氯化钠、二水合柠檬酸钠、环己基氨基磺酸钠、甲醛次硫酸钠、透明质酸钠、氢氧化钠、乳酸钠、十二烷基硫酸钠、偏亚硫酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢钠、丙酸钠、羟基乙酸淀粉钠、硬脂酰富马酸钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠、山梨酸、脱水山梨糖醇酯(脱水山梨糖醇脂肪酸酯)、山梨糖醇、大豆油、淀粉、预胶化淀粉、可灭菌玉米淀粉、硬脂酸、硬脂醇、三氯蔗糖、蔗糖、蔗糖八醋酸酯、可压缩糖、糖粉(Sugar-Confectioner’s)、糖球、磺丁基醚β环糊精、二氧化硫、硫酸、葵花油、栓剂基质-硬脂、塔格糖、滑石、酒石酸、四氟乙烷(HFC)、奇异果甜蛋白(Thaumatin)、硫柳汞、麝香草酚、二氧化钛、黄蓍胶、海藻糖、三醋精、柠檬酸三丁酯、三辛酸甘油酯、三乙醇胺、柠檬酸三乙酯、三油酸酯、香草醛、氢化植物油、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯、水、阴离子乳化蜡、巴西棕榈蜡、十六烷基酯蜡、微晶蜡、非离子乳化蜡、白蜡、黄蜡、黄原胶、木糖醇、玉米醇溶蛋白、醋酸锌和/或硬脂酸锌。

所述剂量单位或组合物可进一步包含一种或多种赋形剂。所述剂量单位或组合物可进一步包含一种或多种赋形剂，其中所述一种或多种赋形剂可选自：防粘剂、防沫剂、缓冲剂、聚合物、抗氧化剂、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、张度调节剂、调味剂、着色剂、香味剂、遮光剂、悬浮剂、粘结剂、填充剂、塑化剂、润滑剂及其混合物。

所述剂量单位或组合物可进一步包含一种或多种细胞色素p450抑制剂。所述剂量单位或组合物可进一步包含一种或多种细胞色素p450抑制剂，其中所述一种或多种细胞色素p450抑制剂可完全或部分地抑制选自下组的细胞色素p450：CYP1、CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1、CYP2、CYP2A6、CYP2A7、CYP2A13、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C18、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP2F1、CYP2J2、CYP2R1、CYP2S1、CYP2U1、CYP2W1、CYP3、CYP3A4、CYP3A5、CYP3A7、CYP3A43、CYP4、CYP4A11、CYP4A22、CYP4B1、CYP4F2、CYP4F3、CYP4F8、CYP4F11、CYP4F12、CYP4F22、CYP4V2、CYP4X1、CYP4Z1、CYP5、CYP5A1、CYP7、CYP7A1、CYP7B1、CYP8、CYP8A1、CYP8B1、CYP11、CYP11A1、CYP11B1、CYP11B2、CYP17、CYP17A1、CYP19、CYP19A1、CYP20、CYP20A1、CYP21、CYP21A2、CYP24、CYP24A1、CYP26、CYP26A1、CYP26B1、CYP26C1、CYP27、CYP27A1、CYP27B1、CYP27C1、CYP39、CYP39A1、CYP46、CYP46A1、CYP51和CYP51A1。所述剂量单位或组合物还可包含一种或多种细胞色素p450抑制剂，其中所述一种或多种细胞色素p450抑制剂能够完全或部分地抑制CYP1。所述剂量单位或组合物还可包含一种或多种细胞色素p450抑制剂，其中所述一种或多种细胞色素p450抑制剂能够完全或部分地抑制CYP1A2。所述剂量单位或组合物还可包含一种或多种CYP1A2抑制剂，其中所述一种或多种CYP1A2抑制剂可选自：氟龙诺酮、选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)、钙通道阻滞剂、草本茶、柚皮素、H2-受体拮抗剂、抗心律失常剂、干扰素、花椒毒素、米贝拉地尔、小茴香、姜黄和异烟肼。所述剂量单位或组合物还可包含一种或多种CYP1A2抑制剂，其中所述一种或多种CYP1A2抑制剂可为西柚汁。所述剂量单位或组合物还可包含一种或多种CYP1A2抑制剂，其中所述一种或多种CYP1A2抑制剂可为柚皮素。

所述剂量单位或组合物可进一步包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或组合物还可进一步包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为β₁-肾上腺素能激动剂和/或β₂-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或组合物还可进一步包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为β₁-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或组合物还可进一步包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为选自多巴酚丁胺、异丙肾上腺素、扎莫特罗和肾上腺素的β₁-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位组合物还可进一步包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为β₂-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或组合物还可进一步包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为选自沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇、非诺特罗、福莫特罗、异丙肾上腺素(β₁和β₂)、奥西那林、沙美特罗、特布他林、克伦特罗、异他林、吡布特罗、丙卡特罗、利托君和肾上腺素的β₂-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或组合物还可进一步包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可选自：阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基阿普洛尔薄荷烷、溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、地诺帕明、多培沙明、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、异克舒令、马布特罗、甲氧那明、布酚宁、奥昔非君、普瑞特罗、雷托巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗和净特罗。

诊断及治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真

本发明还公开了诊断受试者的味觉或嗅觉损失和/或失真的方法，该方法包括(a)从该受试者获得一个或多个生物样品；(b)测量来自该受试者的所述一个或多个生物样品中刺猬信号途径的一个或多个成员的水平；(c)基于低于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平，将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真；以及(d)对受试者施用味觉或嗅觉失调的治疗。本文所公开的诊断味觉或嗅觉损失和/或失真的任何方法都可以与本文所公开的任意药物剂量单位结合使用。

制备药物组合物

在本发明的另一个方面，本文公开了制备药物剂量单位的方法，其包括以其任意组合方式组合一种或多种cGMP激活剂和一种或多种cAMP激活剂。

所述方法可包括一种或多种cGMP激活剂，其中所述一种或多种cGMP激活剂可选自3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、YC-1衍生物、邻氨基苯甲酸衍生物、阿他西呱(HMR1766)、苄达明类似物、CFM1517、A-350619、硝基血管扩张剂、吗多明、硝酰基(HNO)、BAY41-2272、BAY 41-8543、BAY 58-2667、西那西呱(BAY 58-2667)和利奥西呱(BAY 63-2521)。所述方法还可包括一种或多种cGMP激活剂，其中所述一种或多种cGMP激活剂可包括利奥西呱。所述方法可包括一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可选自：3-(5’-羟甲基-2’-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、胰高血糖素、PDE抑制剂、前列腺素E1(PGE1；药学上被称为前列地尔)、毛喉素和β-肾上腺素能激动剂。

所述方法可包括一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可进一步包括一种或多种PDE抑制剂和/或毛喉素。

所述方法可包括一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可为毛喉素。

所述一种或多种PDE抑制剂可包括非选择性PDE抑制剂、PDE-1选择性抑制剂、PDE-2选择性抑制剂、PDE-3选择性抑制剂、PDE-4选择性抑制剂、PDE-5选择性抑制剂、PDE-10选择性抑制剂，或其组合。所述方法还可包括一种或多种PDE抑制剂，其中所述一种或多种PDE抑制剂可为选择性PDE抑制剂。所述方法还可包括一种或多种PDE抑制剂，其中所述一种或多种PDE抑制剂可包括非选择性PDE抑制剂，其可为甲基黄嘌呤衍生物。所述方法还可包括甲基黄嘌呤衍生物，其可为咖啡因、茶碱、多索茶碱、西潘茶碱、甘油茶碱、己酮可可碱或二羟丙茶碱。所述方法还可包括甲基黄嘌呤衍生物，其可为茶碱。所述方法还可包括PDE 1抑制剂，其可为长春西汀、化合物KS505a、bepril、氟桂利嗪、胺碘酮、扎普司特、8-甲氧基甲基IPMX、SCH 51866、尼莫地平或IC224。所述方法还可包括PDE 2抑制剂，其可为EHNA。所述方法还可包括PDE 3抑制剂，其可为依诺昔酮、米力农(Primacor)、氨力农(amrinone)、西洛酰胺、西洛他唑(Pletal)、曲喹辛、氨力农(inamrinone)、阿那格雷、匹莫苯旦、利沙齐农或二氢哒嗪酮。所述方法还可包括PDE4抑制剂，其可为松叶菊碱、咯利普兰、异丁司特、罗氟司特(Daxas)、西洛司特(Airflo)、吡拉米司特、木犀草素、屈他维林或登布茶碱。所述方法还可包括PDE 5抑制剂，其可为西地那非、他达拉非、伐地那非、乌地那非和阿伐那非、双嘧达莫、淫羊藿苷、4-甲基哌嗪、吡唑并嘧啶-7-1、西洛司特或扎普司特。所述方法还可包括PDE6-选择性抑制剂，其可为扎普司特、双嘧达莫、伐地那非或他达那非。所述方法还可包括PDE7选择性抑制剂，其可为喹唑啉型PDE7抑制剂、双嘧达莫或噻二唑。所述方法还可包括PDE8选择性抑制剂，其可为双嘧达莫。所述方法还可包括PDE9选择性抑制剂，其可为扎普司特。所述方法还可包括PDE 10抑制剂，其可为罂粟碱、OMS824(来自Omeros Corporation)和/或PF-2545920(来自Pfizer)。所述方法还可包括PDE11选择性抑制剂，其可为他达拉非、扎普司特或双嘧达莫。

可通过组合非选择性PDE抑制剂、毛喉素和利奥西呱来制备所述药物剂量单位。可通过组合选择性PDE抑制剂、毛喉素和利奥西呱来制备所述剂量单位。可通过组合非选择性PDE抑制剂、茶碱和利奥西呱来制备所述剂量单位。可通过组合选择性PDE抑制剂、茶碱和利奥西呱制备所述剂量单位。可通过组合非选择性PDE抑制剂和利奥西呱来制备所述剂量单位。可通过组合选择性PDE抑制剂和利奥西呱来制备所述剂量单位。可通过组合茶碱和利奥西呱来制备所述剂量单位。可通过组合毛喉素和利奥西呱来制备所述剂量单位。可通过组合茶碱、毛喉素和利奥西呱来制备所述剂量单位。

利奥西呱可以以选自下组的量来组合和/或存在：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg、小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg、约235μg到小于约250μg。

茶碱可以以选自下组的量来组合和/或存在：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg；和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg。

毛喉素可以以选自下组的量来组合和/或存在：小于500mg到450mg、475mg到425mg、435mg到400mg、415mg到300mg、325mg到250mg、275mg到150mg、200mg到100mg、135mg到80mg、95mg到65mg、75mg到50mg、60mg到40mg、45mg到25mg、30mg到20mg、15mg到5mg、10mg到2.5mg、3.5mg到1mg、2mg到大于0mg；和小于约500mg到约450mg、约475mg到约425mg、约435mg到约400mg、约415mg到约300mg、约325mg到约250mg、约275mg到约150mg、约200mg到约100mg、约135mg到约80mg、约95mg到约65mg、约75mg到约50mg、约60mg到约40mg、约45mg到约25mg、约30mg到约20mg、约15mg到约5mg、约10mg到约2.5mg、约3.5mg到约1mg、约2mg到大于约0mg。

在本发明的一些方面，利奥西呱、茶碱和毛喉素可以组合。例如，(a)利奥西呱可以以选自下组的量来组合和/或存在：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg、小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg、约235μg到小于250μg；(b)茶碱可以以选自下组的量来组合和/或存在：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg；和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg；以及(c)毛喉素可以以选自下组的量来组合和/或存在：小于500mg到450mg、475mg到425mg、435mg到400mg、415mg到300mg、325mg到250mg、275mg到150mg、200mg到100mg、135mg到80mg、95mg到65mg、75mg到50mg、60mg到40mg、45mg到25mg、30mg到20mg、15mg到5mg、10mg到2.5mg、3.5mg到1mg、2mg到大于0mg；和小于约500mg到约450mg、约475mg到约425mg、约435mg到约400mg、约415mg到约300mg、约325mg到约250mg、约275mg到约150mg、约200mg到约100mg、约135mg到约80mg、约95mg到约65mg、约75mg到约50mg、约60mg到约40mg、约45mg到约25mg、约30mg到约20mg、约15mg到约5mg、约10mg到约2.5mg、约3.5mg到约1mg、约2mg到大于0mg。

可以将所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物制成适于通过选自下组的方法予以施用的剂量单位：口服施用、跨粘膜施用、颊部施用、吸入施用、鼻内施用、肠胃外施用、静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、舌下施用、经皮施用和直肠施用。为方便使用，可以将所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物制成适于口服施用、吸入施用、鼻内施用或其任意组合的剂量单位。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物可以为液体。

所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物的pH可大于7.0。例如，所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物的pH可大于7.1。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物的pH可大于7.5。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物的pH可大于8.0。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物的pH可大于9.0。

所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物可进一步包含一种或多种赋形剂。该剂量单位可经制备以包含一种或多种赋形剂，其中所述一种或多种赋形剂可选自：防粘剂、防沫剂、缓冲剂、聚合物、抗氧化剂、防腐剂、螯合剂、粘度调节剂、张度调节剂、调味剂、着色剂、香味剂、遮光剂、悬浮剂、粘结剂、填充剂、塑化剂、润滑剂，及其混合物。

所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物可进一步包括组合一种或多种细胞色素p450抑制剂。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种细胞色素p450抑制剂，其中所述一种或多种细胞色素p450抑制剂可完全或部分地抑制选自下组的细胞色素：CYP1、CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1、CYP2、CYP2A6、CYP2A7、CYP2A13、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C18、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP2F1、CYP2J2、CYP2R1、CYP2S1、CYP2U1、CYP2W1、CYP3、CYP3A4、CYP3A5、CYP3A7、CYP3A43、CYP4、CYP4A11、CYP4A22、CYP4B1、CYP4F2、CYP4F3、CYP4F8、CYP4F11、CYP4F12、CYP4F22、CYP4V2、CYP4X1、CYP4Z1、CYP5、CYP5A1、CYP7、CYP7A1、CYP7B1、CYP8、CYP8A1、CYP8B1、CYP11、CYP11A1、CYP11B1、CYP11B2、CYP17、CYP17A1、CYP19、CYP19A1、CYP20、CYP20A1、CYP21、CYP21A2、CYP24、CYP24A1、CYP26、CYP26A1、CYP26B1、CYP26C1、CYP27、CYP27A1、CYP27B1、CYP27C1、CYP39、CYP39A1、CYP46、CYP46A1、CYP51和CYP51A1。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种细胞色素p450抑制剂，其中所述细胞色素p450抑制剂能够完全或部分地抑制CYP1。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种细胞色素p450抑制剂，其中所述细胞色素p450抑制剂能够完全或部分地抑制CYP1A2。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种CYP1A2抑制剂，其中所述CYP1A2抑制剂可选自：氟龙诺酮、选择性5-羟色胺再吸收抑制剂(SSRI)、钙通道阻滞剂、草本茶、柚皮素、H2-受体拮抗剂、抗心律失常剂、干扰素、花椒毒素、米贝拉地尔、小茴香、姜黄和异烟肼。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种CYP1A2抑制剂，其中所述CYP1A2抑制剂可为西柚汁。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种CYP1A2抑制剂，其中所述CYP1A2抑制剂可为柚皮素。

所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物可进一步包括组合一种或多种β-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包括组合一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为β₁-肾上腺素能激动剂和/或β₂-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为β₁-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为选自多巴酚丁胺、异丙肾上腺素、扎莫特罗和肾上腺素的β₁-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为β₂-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可为选自沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇、非诺特罗、福莫特罗、异丙肾上腺素(β₁和β₂)、奥西那林、沙美特罗、特布他林、克伦特罗、异他林、吡布特罗、丙卡特罗、利托君和肾上腺素的β₂-肾上腺素能激动剂。所述剂量单位或含有该剂量单位的组合物还可包含一种或多种β-肾上腺素能激动剂，其中所述一种或多种β-肾上腺素能激动剂可选自：阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基阿普洛尔薄荷烷、溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、地诺帕明、多培沙明、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、异克舒令、马布特罗、甲氧那明、布酚宁、奥昔非君、普瑞特罗、雷托巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗和净特罗。

诊断和/或治疗用试剂盒

涉及可用于诊断味觉或嗅觉的损失和/或失真例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失的试剂盒作为本发明的一部分。

在本发明的其他方面，本文公开了一种试剂盒，其可包含：(a)抗体，其结合刺猬信号途径的一个或多个成员；和(b)插页，其描述如何基于可低于阈值水平的刺猬信号途径的一个或多个成员的水平将受试者诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。

所述抗体可为SHH特异性抗体。所述抗体可为IHH特异性抗体。所述抗体可为DHH特异性抗体。

所述试剂盒可进一步包括ELISA测定。

所述试剂盒可进一步包含能够维持和/或提高刺猬信号途径的一个或多个成员的一种或多种治疗剂。

包含利奥西呱的药物组合物

据信利奥西呱有助于治疗两种类型的肺性高血压：慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)和肺动脉高压(PAH)。但是，所述剂量通常为毫克范围，并且可以口服剂型给予。然而，如果剂型改变成例如适于鼻内施用的形式，利奥西呱可以低得多的剂量(微克或更低的范围)给予。另外，当利奥西呱以其他剂型呈现时，其可以有效地治疗其他疾病，诸如肺性高血压、味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。

在本发明的另一个方面，本文公开了一种包含利奥西呱的药物剂量单位。还公开了一种具有微克或更低范围例如低于250微克的利奥西呱的药物剂量单位。

利奥西呱可适于通过选自下组的方法予以施用：跨粘膜施用、吸入施用、鼻内施用、肠胃外施用、静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、舌下施用、经皮施用和直肠施用。为方便使用，利奥西呱可适于吸入施用、鼻内施用、静脉内施用，或其任意组合。

利奥西呱可以选自下组的量存在：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg、小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg、约235μg到小于约250μg。利奥西呱可以小于250μg到大于0或约小于250μg到大于0的量存在。利奥西呱可以小于200μg到大于0或约小于200μg到大于0的量存在。利奥西呱可以小于150μg到大于0或约小于150μg到大于0的量存在。利奥西呱可以小于100μg到大于0或约小于100μg到大于0的量存在。利奥西呱可以小于50μg到大于0或约小于50μg到大于0的量存在。

预期所述剂量单位可以为无类固醇的。

包含利奥西呱的治疗方法

利奥西呱可以用毫克口服剂量有效地治疗肺性高血压。本发明人发现，当利奥西呱经重新配制时，可以用微克剂量治疗一些病况，包括但不限于肺性高血压、骨相关病症、味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。

在本发明的另一个方面，本文公开了用利奥西呱治疗疾病的方法，包括治疗需要治疗的受试者。

例如，可以治疗受试者的肺性高血压。还可治疗受试者的慢性血栓栓塞性肺动脉高压。还可以治疗受试者的肺动脉高压。还可以治疗受试者的骨相关病症。

利奥西呱可通过跨粘膜施用、吸入施用、鼻内施用、肠胃外施用、静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、舌下施用、经皮施用和直肠施用予以施用。为方便起见，利奥西呱可通过吸入施用、鼻内施用、静脉内施用或其任意组合方式给予。

利奥西呱可以选自下组的量给予和/或存在：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg、小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg、约235μg到小于约250μg。利奥西呱可以小于250μg到大于0或约小于250μg到大于0的量给予和/或存在。利奥西呱可以小于200μg到大于0或约小于200μg到大于0的量给予和/或存在。利奥西呱可以小于150μg到大于0或约小于150μg到大于0的量给予或存在。所述利奥西呱可以小于100μg到大于0或约小于100μg到大于0的量给予和/或存在。利奥西呱可以小于50μg到大于0或约小于50μg到大于0的量给予和/或存在。

治疗食欲不振

经历化学疗法的癌症患者常常会体重明显下降。该体重下降可至少部分归咎于食欲降低(也称作厌食)。

本文描述的方法还预期食欲不振可以用一种或多种治疗剂来治疗。食欲不振的减少可与疾病或疾病治疗相关或不相关。例如，厌食一般可以通过本文所公开的方法来治疗。无论有无化学疗法，癌症都可引起食欲不振。可以导致食欲不振并可由本文公开的方法治疗的其他疾病包括但不限于阿狄森病、淀粉样变性、哮喘、癌症、猫抓病、急性淋巴母细胞性白血病、柯萨奇病毒、痴呆、抑郁、大便失禁、胃食管反流性疾病、胃酸反流、传染性单核细胞增多症、肾功能衰竭、军团病、利氏病、消化性溃疡、产后抑郁症、精神病、类风湿性关节炎、落矶山斑疹热、应激、炭疽病、神经性厌食、恶性贫血、戒酒、偏头痛、维生素B12缺乏、急性高山病、中风、甲状腺疾病、黄热病、肝病、慢性阻塞性肺病、心力衰竭、肝炎、HIV、妊娠、肠病、胃肠道疾病(例如，胆囊疾病、克罗恩病、肠易激综合征、阑尾炎)、脑损伤(例如，创伤导致)、激素(内分泌)疾病、炎症(例如，由慢性感染性或慢性炎性疾病导致)，或味觉丧失。由这些疾病中的每一种引起的食欲不振可单独治疗。而且，药品或药物(例如，包括但不限于地高辛、可卡因、可待因、杜冷丁、吗啡、抗生素、苯丙胺类、甲基苯丙胺、化疗剂、常用感冒药和咳嗽及鼻塞减充血剂)相关的食欲不振也可以通过本文所公开的方法来治疗。与感染如流感、流行性腮腺炎、梅毒、血管炎、贾弟虫病、李斯特菌病、AIDS/HIV、肺炎、水痘、脓毒性咽喉炎、黄热病、伤寒、利什曼病、胃肠炎、单核细胞增多症、血吸虫病、猫抓热、柯萨奇病、钩虫病、落矶山斑疹热和食物中毒～大肠杆菌肠炎相关的其他食欲不振可以通过本文描述的方法进行治疗。

本文公开了治疗食欲不振的方法，其可包括向有需要的受试者施用一剂一种或多种治疗剂，例如PDE抑制剂。该受试者可为有需要的受试者。例如，患有食欲不振和/或任何上述疾病(或服用任何药品或药物)的受试者可为有需要的受试者。例如，有需要的受试者可为癌症患者。该癌症患者可以经历或可以不经历化学疗法。

一种或多种治疗剂可用于治疗食欲不振。例如，PDE抑制剂可用来治疗食欲不振。所述一种或多种PDE抑制剂可为非选择性PDE抑制剂、PDE-1选择性抑制剂、PDE-2选择性抑制剂、PDE-3选择性抑制剂、PDE-4选择性抑制剂、PDE-5选择性抑制剂、PDE-10选择性抑制剂或其组合。所述方法还可包括一种或多种PDE抑制剂，其中所述一种或多种PDE抑制剂可为选择性PDE抑制剂。所述方法还可包括一种或多种PDE抑制剂，其中所述一种或多种PDE抑制剂可为非选择性PDE抑制剂，其可为甲基黄嘌呤衍生物。所述方法还可包括甲基黄嘌呤衍生物，其可为咖啡因、茶碱、多索茶碱、西潘茶碱、甘油茶碱、己酮可可碱或二羟丙茶碱。所述方法还可包括甲基黄嘌呤衍生物，其可为茶碱。所述方法还可包括PDE 1抑制剂，其可为长春西汀、化合物KS505a、bepril、氟桂利嗪、胺碘酮、扎普司特、8-甲氧基甲基IPMX、SCH 51866、尼莫地平或IC224。所述方法还可包括PDE 2抑制剂，其可为EHNA。所述方法还可包括PDE 3抑制剂，其可为依诺昔酮、米力农(Primacor)、氨力农(amrinone)、西洛酰胺、西洛他唑(Pletal)、曲喹辛、氨力农(inamrinone)、阿那格雷、匹莫苯旦、利沙齐农或二氢哒嗪酮。所述方法还可包括PDE4抑制剂，其可为松叶菊碱、咯利普兰、异丁司特、罗氟司特(Daxas)、西洛司特(Airflo)、吡拉米司特、木犀草素、屈他维林或登布茶碱。所述方法还可包括PDE 5抑制剂，其可为西地那非、他达拉非、伐地那非、乌地那非和阿伐那非、双嘧达莫、淫羊藿苷、4-甲基哌嗪、吡唑并嘧啶-7-1、西洛司特或扎普司特。所述方法还可包括PDE6选择性抑制剂，其可为扎普司特、双嘧达莫、伐地那非或他达那非。所述方法还可包括PDE7选择性抑制剂，其可为喹唑啉型PDE7抑制剂、双嘧达莫或噻二唑。所述方法还可包括PDE8选择性抑制剂，其可为双嘧达莫。所述方法还可包括PDE9选择性抑制剂，其可为扎普司特。所述方法还可包括PDE 10抑制剂，其可为罂粟碱、OMS824(来自Omeros Corporation)、和/或PF-2545920(来自Pfizer)。所述方法还可包括PDE11-选择性抑制剂，其可为他达拉非、扎普司特或双嘧达莫。

所述方法可进一步包括对受试者施用一种或多种附加治疗剂，其中所述一种或多种附加治疗剂可包括以选自下组的量给予或存在的利奥西呱：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg、小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg、约235μg到小于250μg。

所述方法可进一步包括对受试者施用一种或多种附加治疗剂，其中所述一种或多种附加治疗剂可包括以选自下组的量给予或存在的茶碱：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg；和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg。

所述方法可进一步包括对受试者施用一种或多种附加治疗剂，其中所述一种或多种附加治疗剂可包括以选自下组的量给予或存在的毛喉素：小于500mg到450mg、475mg到425mg、435mg到400mg、415mg到300mg、325mg到250mg、275mg到150mg、200mg到100mg、135mg到80mg、95mg到65mg、75mg到50mg、60mg到40mg、45mg到25mg、30mg到20mg、15mg到5mg、10mg到2.5mg、3.5mg到1mg、2mg到大于0mg；和小于约500mg到约450mg、约475mg到约425mg、约435mg到约400mg、约415mg到约300mg、约325mg到约250mg、约275mg到约150mg、约200mg到约100mg、约135mg到约80mg、约95mg到约65mg、约75mg到约50mg、约60mg到约40mg、约45mg到约25mg、约30mg到约20mg、约15mg到约5mg、约10mg到约2.5mg、约3.5mg到约1mg、约2mg到大于0mg。

可将利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的任意组合给予受试者。在某些情况下，与单独用利奥西呱、茶碱和/或毛喉素治疗时相比，利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的特定组合能够表现出协同效应。在某些情况下，与成对地使用利奥西呱、茶碱和/或毛喉素治疗时相比，利奥西呱、茶碱和/或毛喉素的特定组合能够表现出协同效应。所述方法可进一步包括对受试者施用一种或多种附加治疗剂，其中所述一种或多种附加治疗剂可包括(a)选自下组的量给予或存在的利奥西呱：大于0.0μg到1μg、0.5μg到2μg、1.5μg到3.0μg、2.5μg到10μg、5μg到15μg、12.5μg到30μg、25μg到50μg、40μg到80μg、60μg到100μg、90μg到120μg、110μg到130μg、125μg到150μg、140μg到180μg、170μg到200μg、200μg到230μg、215μg到240μg、235μg到小于250μg、小于250μg；和大于约0.0μg到约1μg、约0.5μg到约2μg、约1.5μg到约3.0μg、约2.5μg到约10μg、约5μg到约15μg、约12.5μg到约30μg、约25μg到约50μg、约40μg到约80μg、约60μg到约100μg、约90μg到约120μg、约110μg到约130μg、约125μg到约150μg、约140μg到约180μg、约170μg到约200μg、约200μg到约230μg、约215μg到约240μg、约235μg到小于250μg；(b)以选自下组的量来给予或存在的茶碱：小于45mg、30mg、15mg、10mg、5mg、1mg、500μg、250μg、120μg、80μg、40μg或20μg；和小于约45mg、约30mg、约15mg、约10mg、约5mg、约1mg、约500μg、约250μg、约120μg、约80μg、约40μg或约20μg；以及(c)以选自下组的量来给予或存在的毛喉素：小于500mg到450mg、475mg到425mg、435mg到400mg、415mg到300mg、325mg到250mg、275mg到150mg、200mg到100mg、135mg到80mg、95mg到65mg、75mg到50mg、60mg到40mg、45mg到25mg、30mg到20mg、15mg到5mg、10mg到2.5mg、3.5mg到1mg、2mg到大于0mg；和小于约500mg到约450mg、约475mg到约425mg、约435mg到约400mg、约415mg到约300mg、约325mg到约250mg、约275mg到约150mg、约200mg到约100mg、约135mg到约80mg、约95mg到约65mg、约75mg到约50mg、约60mg到约40mg、约45mg到约25mg、约30mg到约20mg、约15mg到约5mg、约10mg到约2.5mg、约3.5mg到约1mg、约2mg到大于0mg。

所述一种或多种治疗剂可为有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员。例如，所述方法可以包括施用有效量的刺猬信号途径的一个或多个外来成员。所述方法还可包括激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达。激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达可通过遗传操作负责刺猬信号途径的一个或多个成员的表达的一个或多个基因来实现。激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达也可通过治疗剂来实现。该治疗剂能直接影响刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。该治疗剂能间接影响刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。

所述一种或多种治疗剂或包含一种或多种治疗剂的组合物可适于通过选自下组的方法予以施用：口服施用、跨粘膜施用、颊部施用、吸入施用、鼻内施用、肠胃外施用、静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、舌下施用、经皮施用和直肠施用。出于使用方便的原因，所述一种或多种治疗剂或包含一种或多种治疗剂的组合物可适于口服施用、吸入施用、鼻内施用，或其任意组合。

所述一种或多种治疗剂可包括一种或多种cGMP激活剂、一种或多种cAMP激活剂或其任意组合。

所述方法可进一步包括一种或多种cGMP激活剂，其中所述一种或多种cGMP激活剂可选自3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、YC-1衍生物、邻氨基苯甲酸衍生物、阿他西呱(HMR1766)、苄达明类似物、CFM1517、A-350619、硝基血管扩张剂、吗多明、硝酰基(HNO)、BAY 41-2272、BAY 41-8543、BAY 58-2667、西那西呱(BAY 58-2667)和利奥西呱(BAY 63-2521)。所述一种或多种cGMP激活剂可为利奥西呱。

所述方法可进一步包括一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可选自3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、胰高血糖素、PDE抑制剂、前列腺素E1(PGE1；药学上称为前列地尔)、毛喉素和β-肾上腺素能激动剂。该方法可进一步包括一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可包括一种或多种PDE抑制剂和/或毛喉素。该方法可进一步包括一种或多种cAMP激活剂，其中所述一种或多种cAMP激活剂可为毛喉素。

所述一种或多种治疗剂可包括非选择性PDE抑制剂、毛喉素和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括选择性PDE抑制剂、毛喉素和利奥西呱。也考虑各种组合。例如，所述一种或多种治疗剂可包括非选择性PDE抑制剂、茶碱和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括选择性PDE抑制剂、茶碱和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括非选择性PDE抑制剂和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括选择性PDE抑制剂和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括茶碱和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括毛喉素和利奥西呱。所述一种或多种治疗剂可包括茶碱、毛喉素和利奥西呱。

治疗也可基于疾病和有需要的受试者的病况严重程度而变化。医生可决定PDE抑制剂或可有效治疗食欲不振的其他药剂的适宜剂量。

另外，所述方法可进一步包括使用止吐剂进行治疗。例如，该止吐剂可选自5-HT3受体拮抗剂、多巴胺拮抗剂、NK1受体拮抗剂、抗组胺药(H1组胺受体拮抗剂)、大麻素类、苯并二氮类、抗胆碱能药和类固醇。该止吐剂也可选自多拉司琼(Anzemet)、格拉司琼(Kytril、Sancuso)、昂丹司琼(Zofran)、托烷司琼(Setrovel、Navoban)、帕洛诺司琼(Aloxi)、米氮平(Remeron)、多潘立酮(吗丁啉)、奥氮平(Zyprexa)、氟哌利多、氟哌啶醇、氯丙嗪、普鲁氯嗪、阿立必利、普鲁氯嗪(Compazine、Stemzine、Buccastem、Stemetil、Phenotil)、甲氧氯普胺(Reglan)、阿瑞匹坦(Emend)、卡索匹坦、赛克利嗪、苯海拉明(Benadryl)、茶苯海明(Gravol、Dramamine)、多西拉敏、美克洛嗪(Bonine、Antivert)、异丙嗪(Pentazine、Phenergan、Promacot)、羟嗪(Vistaril)、大麻、屈大麻酚(Marinol)、合成大麻素类如大麻隆(Cesamet)或JWH系列、Sativex、咪达唑仑、劳拉西泮(Ativan)、天仙子碱(也被称为东莨菪碱)、地塞米松(Decadron)、曲美苄胺、姜、愈吐宁锭、丙泊酚、蝇蕈醇、薄荷和Ajwain。

剂量可按下表所述提供。

止吐剂剂量指导表

商业方法

在本文公开的诊断方法中可使用一台或多台计算机，例如图13中所示的计算机800。考虑可以为手头的任务单独设计计算机800，例如，该计算机不是通用计算机。计算机800可用于管理受试者和样品信息，例如样品或受试者追踪、数据库管理、分析生物标志物数据、分析细胞学数据、存储数据、编制账单、营销、报告结果或存储结果。该计算机可包括监视器807或其他用于显示数据、结果、账单信息、营销信息(例如人口统计资料)、受试者信息或样品信息的图形界面。该计算机还可包括数据或信息输入816、815。该计算机可包括处理单元801和固定介质803或可移动介质811或其任意组合。该计算机可由物理接近该计算机的用户访问，例如通过键盘和/或鼠标，或由用户822不必接近实体计算机而通过通信媒介805如调制解调器、因特网连接、电话连接或者有线或无线通信信号载波来使用。在一些情况下，该计算机可连接至服务器809或其他通信设备以用于将信息从用户中继传送至计算机或从计算机中继传送至用户。在一些情况下，用户可将通过信息媒介805从计算机获得的数据或信息存储在介质上，例如可移动介质812上。可以想像，数据或诊断可通过此类网络或连接进行传输以供一方接收和/或查看。接收方可以是，但不仅限于个人、医疗保健提供者或医疗保健管理者。例如，计算机可读介质包括适合传输生物样品分析结果(例如一种或多种生物标志物的水平)的介质。该介质可包含关于受试者具有味觉或嗅觉失调的诊断的结果，其中这样的结果通过使用本文描述的方法得出。

为了以下一个或多个目的，可将样品信息输入到数据库中：库存跟踪、分析结果跟踪、订单跟踪、受试者管理、受试者服务、编制账单和销售。样品信息可包括但不仅限于：受试者姓名、受试者的唯一身份证明、受试者相关的医疗专业人员、指示的一种或多种分析、分析结果、适应性(adequacy)状态、指示的适应性测试、受试者的医疗史、初步诊断、疑似诊断、样品历史、保险提供方、医疗服务提供方、第三方检验中心或任何适合存储在数据库中的信息。样品历史可包括但不限于：样品年龄、样品类型、获得方法、保存方法或运输方法。

数据库可由受试者、医疗专业人员、保险提供方、第三方或任何经授权访问的个人或实体方访问。数据库的访问可采取电子通信的形式，例如计算机或电话。数据库可通过中介如客户服务代表、商业代表、顾问、独立检验中心或医疗专业人员来访问。数据库访问的可用性或程度或者诸如分析结果的样品信息可在为所提供或将要提供的产品或服务付费后改变。数据库访问的程度或样品信息可受到限制，以便符合普遍认可的或法律上对患者或受试者保密性的要求。

实施例

实施例1：嗅觉减退中的IL-6。

目标：测定嗅觉减退患者的生物体液中的IL-6水平。

研究设计：这是一项对评估嗅觉减退的患者的回顾性临床研究。

方法：测量59名具有数种病因的嗅觉减退患者的血浆、尿液、唾液和鼻粘液中的IL-6，并与正常受试者测得的水平进行比较。通过使用分光光度ELISA测定进行测量。

结果：研究的所有生物体液中均存在IL-6。在正常受试者和嗅觉减退患者中，鼻粘液中的IL-6水平均大于任何其他生物体液中的水平。嗅觉减退患者的水平显著高于正常受试者。嗅觉减退患者，例如流感样疾病后嗅觉减退[类似流感后嗅觉减退和味觉减退(PIHH)]患者、口灼伤综合征(BMS)患者和头部损伤后嗅觉减退患者的鼻粘液中的IL-6选择性地更高。

结论：在此报告了相比于正常受试者，嗅觉减退患者中升高的IL-6水平。由于IL-6为促炎性细胞因子，因此这些变化可能与局部或全身炎性过程相关，该炎性过程作为与嗅觉减退相关的病理学过程的起因或结果起作用。

引言

嗅觉损失(嗅觉减退)可以是反映涉及多器官系统的多种慢性疾病过程的症状，这些器官系统包括内分泌、维生素、微量金属、代谢、神经、神经变性、血液、免疫及其他器官系统。嗅觉减退可反映影响嗅觉感受器的口腔或鼻腔中的局部变化、连接感受器至大脑的神经中或大脑本身中的局部变化。与上述主要病理学相关的全身性变化可包括作为主要症状的嗅觉减退。

本研究致力于通过研究发生嗅觉减退的多器官系统的分泌物变化来了解致使嗅觉减退的开始和持续的多重病理学。特异性生物化学部分与嗅觉减退的发病相关，其置换将纠正该症状。例如，甲状腺激素的缺乏可诱发甲状腺功能减退及其相关的全身性症状，其中一种可为嗅觉减退；甲状腺激素的施用可纠正甲状腺功能减退的全身性症状及相关的嗅觉减退。锌的缺乏可诱发多种全身性症状及嗅觉减退，其可表现为味肽[碳酸酐酶(CA)VI]分泌减少；向缺锌患者施用锌离子可纠正这些全身性症状及相关的嗅觉减退，这与CA VI分泌增加相关。

纠正这些不同病因的嗅觉减退的这些不同器官系统的多种生物化学部分可以是生长因子，其刺激嗅上皮干细胞开始成熟，且负责正常嗅觉的感觉细胞发生复原。

嗅觉是一个由包括感受器、神经和大脑的多组分部分组成的复杂过程。此复杂过程的局部和全身组分尚未完全探明。细胞信号传导过程在诸如嗅觉的任何复杂感觉系统中可能是关键的，并且可涉及腺苷酸环化酶、音猬蛋白和细胞因子。鉴于在这些患者中尚未见这种类型的在先研究的报道，本文中研究了嗅觉减退患者的IL-6水平。

IL-6，一种促炎性细胞因子，可在包括以下各项的一系列临床疾病和病况中过量产生：心血管疾病、骨质疏松、关节炎、II型糖尿病、肾病、肝炎、精神分裂症、先兆子痫、多种肿瘤、牙周病、虚弱、应激和机能衰退。在这些病况中，可在血浆中发现IL-6增加。在急性而非慢性的头部损伤后的血浆和脑室流体中IL-6均可增加。IL-6增加可在外伤性脑损伤后的脑脊液中发现，且可触发星形胶质细胞中的神经生长因子分泌。在持续性坐骨疼痛患者的血浆中可发现IL-6增加，在外周神经损伤后的大鼠脊髓中IL-6mRNA可增加。在一些口灼伤综合征(BMS)患者的血浆和唾液中可发现IL-6增加；在具有和没有相关抑郁和自觉疼痛的患者中未有IL-6差异的报道。然而，应激激素可通过Src依赖性机制调节IL-6在多种卵巢癌细胞中的表达。特异性和非特异性因子均可引发IL-6在数种疾病过程中的数种生物体液中的变化，包括神经性的、炎性的和心理的应激。

为了评估嗅觉中的IL-6，研究了嗅觉减退患者的血浆、尿液、腮腺唾液和鼻粘液中的IL-6水平，并与从一组正常受试者获得的类似的测量结果进行比较。

方法

受试者：本研究的受试者为59名患者，26名男性，33名女性，年龄10-86岁，54±2岁(平均值±SEM)，他们表现出不同程度的嗅觉损失。这些患者的诊断包括24例类似流感后嗅觉减退和味觉减退(PIHH)、七例变应性鼻炎、七例先天性嗅觉损失、六例与特发性原因相关的嗅觉减退、五例头部损伤、四例药物诱发的嗅觉减退、三例幻味觉和嗅觉减退，以及三例嗅觉减退和BMS。如通过主观陈述和测定每个患者的嗅觉功能损伤的嗅觉测量所显现的，所有患者均具有嗅觉损失。嗅觉测量通过心理物理技术使用四种气味剂(吡啶、硝基苯、噻吩和乙酸戊酯)来进行。这些技术已通过在双盲临床试验中的表现而得到验证。通过针对所述四种气味剂中的一种或多种的损伤检测阈值(DT)和/或识别阈值(RT)(高于正常值)和/或降低的量值估计(ME)水平(低于正常水平)来确定嗅觉损伤。

通过使用这些技术，已证实了每名患者的嗅觉损失，其中12名患者表现出I型嗅觉减退(最严重的嗅觉减退形式，所有患者对所有气味RT＝0且ME＝0)，44名II型嗅觉减退患者(次严重的嗅觉减退形式，所有患者的DT、TR和ME<正常值)，且3名患者表现出III型嗅觉减退(最不严重的嗅觉减退形式，DT和RT＝正常值但ME<正常值)。

本研究的受试者还包括八名正常的志愿者，4名男性，4名女性，年龄39-76岁，60±8岁。所有正常受试者都是健康的，且不使用任何处方药。根据主观陈述和正常嗅觉测量，所有志愿者都具有正常的嗅觉功能。

程序：在最初的临床评价时，通过静脉穿刺从每名患者采集血浆，在冰中置入含100μl无锌肝素的管中，在3000rpm下离心10min，移出血浆并在-20℃下保存直至测定。经24小时与血浆采集时间相关地(in timed relationship)采集每名患者的尿液。测量尿液量并将20ml等份在4℃下保存直至测定。腮腺唾液在血液采集后立即从每名患者采集，方法是通过在Stensen导管上放置Lashley杯，并用重建的柠檬汁(Borden，Real Lemon，Stamford，CT)进行舌部刺激。经8-12min的一段时间将唾液在冰中收集在塑料管中。样品在-20℃下保存直至测定。经与血液、尿液和唾液采集时间相关的2-5天时间，直接从每名患者的鼻腔采集鼻粘液，置入50ml广口塑料管中。每次日常采集后，将鼻粘液在4℃下保存。全部采集完成后，将鼻粘液转移到塑料离心管中，在18K-20K x g下离心40-55min，将上清液转移到塑料PCR管并在-20℃下保存直至测定。

也对每个正常志愿者进行血液、尿液、唾液和鼻粘液的类似采集。

通过从R&D Systems(Minneapolis，MN)获得的分光光度96孔板ELISA分析测定IL-6。根据制造商的说明进行试验。由于之前尚未进行过鼻粘液中IL-6的测定，因此制备多种样品稀释液来进行测定。这些研究反映了对从患者制备的这些生物体液中的IL-6的所有测定。

所有测定均在不考虑任何采集的样品的来源的情况下进行。所有测定完成后，将值与患者的记录进行匹配，根据诊断分类，并与正常受试者得到的结果进行比较。确定每个患者诊断分类的平均值±SEM，并与正常者的类似结果进行比较。通过Student t检验确定差异，当p<0.05时认为有显著性差异。对患者诊断、嗅觉损失类型(I、II、III)和每种研究的生物体液中的IL-6水平之间进行方差分析，p<0.05时认为有显著性差异。

结果

测定了所研究的全部生物体液中的IL-6水平。每种生物体液中的IL-6水平的比较是在患者和正常者之间进行比较。患者在IL-6水平上表现出大的、一致的且显著的差异(表1)。患者在血浆、唾液和鼻粘液中的IL-6显著高于正常者。患者的平均鼻粘液水平是正常值的2.6倍，平均唾液水平是正常值的1.9倍，平均血浆水平是正常值的7.9倍。

按照损失的病因分类的患者与正常者之间IL-6的比较证实所有患者的平均血浆IL-6均显著高于正常对照；最高水平见于BMS中，其次水平见于头部损伤中，再次水平见于PIHH中，而最低水平则见于变应性鼻炎患者中(表2)。除IL-6水平显著低于正常对照的先天性嗅觉减退外，所有患者分类中的患者的平均尿液IL-6均与正常者相似。患有BMS、头部损伤和PIHH的患者的平均唾液IL-6显著高于正常对照，其中最高水平见于BMS中。头部损伤、BMS、变应性鼻炎、幻味觉和PIHH患者的平均鼻粘液IL-6有所增加，但仅在BMS和PIHH患者中显著增加。头部损伤和BMS患者的鼻粘液中的IL-6水平最高。

对正常对照的血浆、尿液、唾液和鼻粘液中的IL-6水平的比较分析揭示了不同于患者中所见的特定层级(表1)。鼻粘液中的IL-6水平高于其他任何其他生物体液中的水平，其超过尿液、唾液或血浆中所见水平的10倍。尿液中的水平是次高的，再次是唾液，血浆中最低。鼻粘液：血浆水平之比为97:1，鼻粘液：唾液为34:1，而鼻粘液：尿液为9:1。

对患者的IL-6水平的比较分析也产生了IL-6水平的层级，但与正常者中发现的比例稍有不同。鼻粘液中的IL-6水平仍是最高的，其超过唾液、尿液或血浆中所见水平的30倍。次高的水平见于血浆和尿液中(水平相似)，而唾液中水平则最低。鼻粘液：血浆水平之比为31:1，约为正常者中所见的1/3，鼻粘液：唾液为52:1，约为正常者中的比例的1¹/₂倍，而鼻粘液：尿液为32:1，约为正常者中所见比例的3¹/₂倍。

对于嗅觉损失类型和患者诊断，血浆、唾液或鼻粘液中的IL-6水平之间没有显著差异。

讨论

本研究首次证实了嗅觉减退患者中的IL-6升高。假如这些发现与类风湿性关节炎(RA)中发现的类似结果有关，则升高的IL-6可被认为是反映出血液、唾液或鼻粘液中局部和/或全身免疫性和/或炎性变化的嗅觉减退的引发的病因。此假说与在炎性RA患者中发现嗅觉损失相符。在嗅觉减退患者中，可在PIHH患者的鼻粘膜中发现慢性淋巴细胞性炎症。可在患有自然获得的病毒性鼻炎的患者的鼻灌洗液中发现升高的IL-6。可在患有病毒后嗅觉功能障碍的患者的鼻甲上皮细胞中发现细小病毒(paravirus)和其他病毒。可在最初实验感染长达200天后在小鼠的嗅球神经元中以及在疑似侵入门户的星形胶质细胞中发现疱疹病毒感染的表现。然而，在这些情况下可能发生在嗅上皮、传递神经或大脑中的组织学变化尚未得到研究。用IL-6抑制剂治疗RA已与炎症和IL-6升高的减少相关。假如嗅觉减退患者的IL-6升高与其病理学原因有关，则用IL-6抑制药物进行治疗可伴有其嗅觉功能的改善。

许多物质的局部或全身性升高可抑制嗅觉功能，包括锌、镉、数种类型的药物和数种其他化学部分。升高的IL-6可作为调节嗅神经元活性的内源性物质，因为其可调节神经元和胶质细胞活性。因此，嗅觉减退和慢性头部损伤患者的IL-6升高可与神经性及炎性变化相关。

在一些BMS患者的血浆和唾液中发现IL-6水平升高提示，其不仅是对炎性过程的反应，还是对可能的神经学过程的反应。神经学而非炎性机制在BMS中引起胃灼热的提示与这些患者缺乏明显的口腔炎症体征相符。BMS可被认为是一种三叉神经小纤维神经病变，可采用抗氧化剂、GABA能(GABAergic)药物或反复经颅磁刺激的治疗来减轻这种病况。

本研究的结果还表明鼻粘液中的IL-6水平高于血浆、尿液或唾液中的水平。这似乎是首次直接比较这些生物体液中的IL-6水平，且是首次证实嗅觉减退患者和正常受试者的鼻粘液中的IL-6水平相对于血浆、尿液或唾液中的水平有所增加。本发现与通常存在于鼻粘液中的微生物和抗微生物剂的丰度在逻辑上是一致的。鼻粘液中的活性炎性剂可包括细菌、病毒、真菌和其他物质，包括组胺，而所发现的抗炎剂可包括溶菌酶、乳铁蛋白和白蛋白。然而，与此假定相反的是，在此报道的鼻粘液中的最高IL-6水平并非在预期这些物质最活跃的变应性鼻炎患者中出现，而是在推测不发生活跃的局部鼻腔炎性过程的头部损伤和BMS患者中出现，虽然这两组患者均表现出嗅觉减退。

IL-6信号传导与嗅觉损失的关系的可能的机理有多种。IL-6可以是复杂且精巧的信号系统的一部分，其在身体代谢中扮演多重角色。IL-6可以是驱动急性期蛋白质(包括C反应蛋白和纤维蛋白原，此两种蛋白质均由全身炎症诱发)的炎性细胞因子。IL-6可以是B细胞分化成产生抗体的血浆细胞中的因子。其可影响NF-κB和ATP-泛素依赖性蛋白水解途径，其可激活TNF-α，从而激活可直接抑制嗅觉功能的细胞凋亡途径。神经生成素(Neuropoietin)(一种影响通过睫状神经营养因子受体的信号传导的IL-6相关细胞因子)可直接抑制嗅觉功能，因为数种睫状因子的抑制已引发了Kartagener和Bardet-Biedl综合征患者的嗅觉损失。Castleman病患者可过量产生IL-6，而抑制IL-6或IL-6受体活性的治疗可减轻此疾病的症状。缺乏IL-6的小鼠不能发起炎性应答。在IL-6与其受体结合后，IL-6受体复合物在无法正常表达IL-6受体的细胞中激活gp130信号传导，该机理可在慢性炎性病症的病理生理学中起作用。

这些结果表明，特异性和非特异性因子均可在急性和慢性疾病过程中增加IL-6。这些过程可包括神经性和炎性过程以及涉及心理应激的过程。事实上，应激激素可通过Src依赖性机制调节在各种卵巢癌细胞中的IL-6表达。

这是以下任意类型的首次研究，其中在类似的时基(timely based)研究中，对慢性疾病过程患者的数种生物体液(血浆、尿液、唾液和鼻粘液)中的IL-6进行测量并比较。这些结果提供了对在一些嗅觉减退患者中存在的信号传导过程的了解，该过程可能影响负责感觉改变的一些复杂过程。

表1

嗅觉减退患者和正常受试者的血浆、尿液、腮腺唾液和鼻粘液中的IL-6

IL-6(pg/ml)

*平均值±SEM

()受试者数目

a相对于正常者，p<0.001

表2

嗅觉减退患者的血浆、尿液、腮腺唾液和鼻粘液中的IL-6

*平均值±均值

()受试者数目

实施例2：按年龄分类的嗅觉损失患者的鼻粘液及其他生物体液中的细胞因子变化。

按年龄分类的嗅觉损失患者的鼻粘液及其他生物体液中的细胞因子变化。

背景：嗅觉损失(嗅觉减退)患者的鼻粘液中的细胞因子活性未见研究。据报道，细胞因子随年龄而变化，已知其中一些将增加，另外一些将减少，而另外一些将不变。然而，大多数这些报道的变化是与主要在各种血液系统功能中的刺激活性相关地被观察的。因此，我们对按年龄分类的嗅觉减退患者进行了一项包括鼻粘液在内的数种生物体液中的细胞因子活性的研究。

方法：通过使用灵敏的96孔板分光光度ELISA技术，对从<30岁到>70岁递进的每10岁一组的79名嗅觉减退受试者测量了鼻粘液、血浆、尿液和腮腺唾液中的IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-1RII、IL-2、IL-2R、IL-6、IL-10、IL-18、TNF-α、IFN-β和IFN-γ。

结果：鼻粘液中的IL-1ra水平是任意生物体液中最高的，与该细胞因子作为抗炎因子的作用相符。鼻粘液中存在细胞因子IL-1α、IL-1β和IFN-γ，与其作为炎性因子的作用相符。后面的这些细胞因子在血浆、尿液和唾液中不存在。

结论：鼻粘液中的细胞因子水平提示，在嗅觉减退患者的促炎性和抗炎性细胞因子之间发生复杂的相互作用，在鼻粘液中抗炎性细胞因子IL-1ra水平最高。细胞因子水平以复杂的模式随年龄而变化。这首次与其他生物体液相关地证明了鼻粘液中的数种细胞因子。

引言

细胞因子是由特定刺激物激活的细胞信号传导部分，其引起多种生理反应。然而，这些信号传导蛋白在多种途径中发挥作用，但其特异性可能尚未清楚地确定。我们对多种细胞因子在嗅觉损失(嗅觉减退)患者中所起的作用产生了兴趣，并已发表了关于在也表现出厌食和味觉失真的这些患者中细胞因子随着年龄发生的变化的初步数据。

然而，与嗅觉减退相关的病理学随多种临床病况而变化较大。大部分患者在病毒型感染后发生嗅觉减退，而其他患者在头部损伤后或伴随变应性鼻炎的全身性和鼻症状发生此症状。我们已致力于确定藏在这些不同病理学下的一些共同的生化线索，为此，我们和其他前人确定了嗅觉损失归咎于多种器官系统的分泌物的变化，包括微量金属和维生素水平的降低、各种治疗药物的治疗以及相关的病理学状况，包括糖尿病、其他内分泌紊乱、神经障碍和肝病。为了确定这些假定的藏在这些不同病理学下的共同病理学线索，我们着手进行了推定导致嗅觉功能损失的多种生化参数的系统研究。为了进行这些研究，我们评估了血浆中微量金属及唾液和鼻粘液中环核苷酸的水平。这些研究揭示，许多嗅觉减退患者的唾液中的锌水平比正常水平低，且其唾液和鼻粘液中的腺苷酸环化酶水平比正常水平低。

由于嗅觉减退涉及感觉感受器、神经和大脑的变化，因此显而易见的是，此复杂系统中涉及细胞信号传导以及细胞因子的变化。例如，音猬蛋白分泌的抑制通过抑制味蕾中的干细胞刺激而引起味觉损失，味蕾中的干细胞刺激负责启动并维持正常味觉功能的细胞组分的优良组库(elegant repertoire)的生长和成熟。由于细胞因子在细胞信号传导中扮演如此重要的角色，因此我们在一组嗅觉减退患者中进行了血浆、尿液、唾液和鼻粘液中的数种细胞因子的研究。

许多研究者以前已报道了细胞因子水平随年龄而变化。据报道，与较为年轻的人类受试者相比，老年人的外周单核细胞在体外产生增多的IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ。与年幼小鼠相比，来自老年小鼠的受刺激的T细胞显示IFN-γ产量增加，IL-2减少，但IL-4没有差异。相比于年轻受试者，来自老年人的白细胞产生更大量的IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α，老年人中IL-2和可溶性IL-2R的释放减少，但细胞表面的IL-2R表达并未增加。对于循环单核细胞，IL-1β和IL-6的绝对量在归一化后未观察到年龄相关的差异，且IL-2没有年龄相关的减少。由于这些结果，细胞因子水平随年龄的变化似乎是嗅觉减退可能发生变化的一个因素。

我们的研究结果表明，在嗅觉减退患者中，鼻粘液中的抗炎性细胞因子IL-1ra水平高于其他任何细胞因子，与之相比，存在较低的但仍然大量的鼻粘液促炎性细胞因子。这些结果表明，在这些患者中发生了抗炎性和促炎性细胞因子之间的复杂相互作用，且该相互作用在其嗅觉功能中可发挥作用。

材料和方法

患者：受试者为去往华盛顿特区的味觉或嗅觉门诊的79名患者，他们临床主诉嗅觉损失。除嗅觉损失外，患者身体状况良好且健康。患者为44名女性和35名男性，年龄53±5岁(平均值±SEM)，范围为21-83岁。研究由乔治城大学医学中心机构审查委员会(Institutional Review Board of the Georgetown University Medical Center)批准；所有患者对于参与此研究均知情同意。

在最初的临床评价时，通过静脉穿刺获得血浆并在-20℃下保存至测定。与血浆采集直接时间相关地采集24小时尿液；测量尿量并将等份在-20℃下保存直至测定。腮腺唾液在血液采集后立即从每名患者采集，方法是通过在Stensen导管上放置经改良的Lashley杯，并用重建的柠檬汁(Borden，Real Lemon，Stamford，CT)进行舌部刺激，并在-20℃下保存直至测定。如前文所述，在2-5天内利用自然流涕收集鼻粘液。每次日常采集后，将样品在4℃下保存。将样品转移到塑料管中，在17K-19K x g下离心40-55min，将上清液在-20℃下保存直至测定。

通过从R&D Systems(Minneapolis，MN)获得的灵敏的分光光度96孔板ELISA分析测定细胞因子及其一些受体(IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-1RII、IL-2、IL-2R、IL-6、IL-10、IL-18、TNF-α、IFN-β和IFN-γ)。根据制造商的说明进行试验。由于以前尚未进行过鼻粘液中细胞因子的测定，因此需要制备多种样品稀释液来进行该分析。

所有测定均在不考虑包括患者年龄在内的任何特定临床数据的情况下进行。所有测定完成后，将值与患者的记录进行匹配，并按年龄分类。将患者分成<30岁、31-40岁、41-50岁、51-60岁、61-70岁和>70岁的递进的年龄组，测定每种细胞因子的平均值±SEM。通过Student t检验确定差异的显著性，p≤0.05时认为差异显著。

结果

IL-1α。仅获得鼻粘液和唾液中的值(表3)。鼻粘液的水平为唾液水平的24-92倍。对于鼻粘液，随着年龄的增加有逐步的小幅减小。未观察到唾液中有明显的年龄相关的关系。

IL-1β。仅获得鼻粘液中的值(表3)。鼻粘液中的值普遍高于IL-1α的值。未观察到有明显的年龄相关的关系。

IL-1ra。获得了每种生物体液中的值(表3)。鼻粘液中的水平在所有生物体液中是最高的。鼻粘液中的水平是血浆水平的80到超过1000倍，血浆中的水平在所研究的体液中相对最低。鼻粘液中的IL-1ra水平几乎比IL-1α和IL-1β的水平高1000倍。随着年龄的变化，鼻粘液具有倒U形模式，其在40-49岁年龄段到达峰值。唾液则具有U形模式，其最低点和鼻粘液在相似的年龄段，40-49岁。

IL-1 RII。获得了每种生物体液中的值(表3)。鼻粘液中的水平为血浆中水平的约0.1-0.5％，但为唾液中水平的5-90倍，尿液中水平的2-9倍。鼻粘液中的水平为测得的IL-1ra值的约0.2-0.4％，但为测得的IL-1α水平的5-17倍，且比IL-1β水平高5-17倍。随着年龄的变化，与IL-1ra中测得的类似，鼻粘液具有倒U形模式，其在40-49岁年龄段达到峰值，且在血浆中具有类似的倒U形模式，其在类似年龄段达到峰值。

IL-2。在用于此细胞因子的稀释度时，未获得任何体液的值。

IL-2R。测量了所有生物体液中的值(表3)。鼻粘液中的水平比血浆中测得的值低2％-36％，比尿液中测得的值低2％-20％，但比唾液中测得的值高出5-335倍。鼻粘液中的水平低于测得的IL-1α、IL-1β、IL-1ra或IL-1RII的值。随着年龄的变化，鼻粘液具有相对倒U形模式，其再一次在40-49岁年龄段达到峰值。

IL-6。测量了所有生物体液中的值(表4)。鼻粘液中的水平高于任何其他这些生物体液中的水平，为血浆中水平的3-13倍，尿液中水平的7-25倍以及唾液中水平的3-10倍。IL-6的水平低于IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-1RII和IL-2R的水平。相对于年龄，鼻粘液中的水平在最多到30-39岁时增加，而此后下降。

IL-10。除了尿液，测量了鼻粘液、唾液和血浆中的值。除了在年龄范围的任一端，鼻粘液中的水平通常高于唾液或血浆中的水平。鼻粘液中的水平在比血浆中的水平高2-20倍到比唾液中的水平高2-8倍的范围内变化。相对于年龄，鼻粘液中的水平逐渐增加直到60-69岁，而此后下降。

IL-18。与IL-10一样，除了尿液，测量了鼻粘液、唾液和血浆中的值。鼻粘液中的值相对于血浆中的水平是变化的，但通常比唾液中的水平高多达七倍。鼻粘液中的水平高于IL-2R、IL-6或IL-10的水平，但低于IL-1α、IL-1β、IL-1ra或IL-1RII的水平。相对于年龄，鼻粘液中的水平再一次呈倒U形模式，且在50-59岁达到峰值。

TNF-α。测量了所有生物体液中的值(表4)。鼻粘液中的水平高于任意一种这些生物体液中的水平，是血浆中的水平的3-11倍，是尿液中水平的7-23倍，并且是唾液中水平的7-27倍。鼻粘液中TNF-α的水平高于IL-6或IL-10的水平，但低于IL-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-1RII和IL-18的水平。相对于年龄，鼻粘液中的水平为近似U形模式，虽然在60-69岁具有最低水平，但在40-49岁时为最低点；而在该年龄范围的两端则测得最高水平。

IFN-β。获得了除尿液以外的所有生物体液中的值。鼻粘液中的值通常类似于血浆中的水平，但高于唾液中的水平。鼻粘液中的水平高于IL-2R、IL-6、IL-10、IL-18或TNF-α的水平，但低于IL-1α、IL-1β、IL-1ra和IL-1RII的水平。由于缺失多个数据而无法评估鼻粘液和唾液中的年龄相关值，但在血浆中似乎呈倒U形模式，且在30-39岁达到峰值。

IFN-γ。仅获得了鼻粘液中的值。其水平高于IL-2R、IL-6、IL-10和TNF-α的水平，但低于IL-1α、IL-1β、IL-1ra和IL-1RII的水平。随着年龄的增长可呈U形模式，且在50-59岁具有最低点。

表3和表4中在单个单元格内的所有数字应作为一个数字来看。

讨论

这些数据表明，多种生物体液中的多种细胞因子存在于嗅觉减退患者中，但每一种体液中的每一种细胞因子的水平是不同的。鼻粘液中的水平通常在测量的任意生物体液中是最高的，具有特定的活性模式。该模式似乎与嗅觉减退患者中促炎性细胞因子(例如，IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α)与抗炎性细胞因子(例如，IL-1ra、IL-10、IFN-γ)间特定的相互作用相关，并且表明尽管有多个致病因素导致嗅觉损失，且它们中的许多不具有明显的炎性成分，例如在头部损伤或甲状腺功能减退之后，但在这些鼻粘液细胞因子中存在潜在的生理学相互作用。

鼻粘液中细胞因子的变化提示了嗅觉减退患者中促炎性细胞因子与它们的竞争性抑制剂——抗炎性组分之间这种复杂的相互作用。由于鼻粘液的变化可以且确实反映了嗅觉功能的变化，因此这些结果与这些患者中嗅觉损失的基本机理相关。鼻粘液中的促炎性细胞因子的身份与先前在这些嗅觉减退患者中确定的鼻粘膜中慢性炎症的解剖学和病理学变化一致。然而，这些结果与IL-1ra(这些促炎性细胞因子的竞争性抑制剂)的水平形成鲜明对比，其浓度比促炎性细胞因子的浓度高很多，提示在这些患者中有针对急性或慢性炎症的内源性保护作用。这一结果与嗅觉减退患者中茶碱或其他磷酸二酯酶抑制剂的治疗一致，其用于改善这些患者的嗅觉功能并且还抑制TNF-α和其他促炎性细胞因子的分泌。

细胞因子是多效的和冗余的分子，其具有各种各样的功能且在多种细胞中有重叠的活性。例如，TNF-α最初被认为主要具有免疫调节和促炎的效应，但最近的数据表明TNF-α还具有显著的抗炎性质。另一方面，IL-10在动物中通过调节脂多糖诱导的发热和类似的变化来抑制包括IL-1、IL-6和TNF-α在内的促炎性细胞因子的合成。

IL-1是一种17KD的促炎性细胞因子，其由与疾病状态相关的多种细胞类型合成或在扰动如免疫应答中合成。它是细胞因子家族的一部分，这些细胞因子共享与属于IL-1受体家族的受体结合的保守的β-三叶草结构。在炎症被激活的大多数情况下，IL-1是主要的成分。通常被认为是一种促炎性细胞因子的IL-18已被报道还对IL-1的这种活性起拮抗作用，但这一作用仍然存在争议。存在一种天然产生的IL-1特异性受体拮抗剂――IL-1ra，它与IL-1β具有40％的氨基酸同源性，以与IL-1相同的亲和力结合至IL-1表面受体，不具有激动剂活性而是作为IL-1的竞争性抑制剂起作用。研究表明，IL-1在触发炎性细胞应答级联时起关键作用，IL-1ra阻断内源性IL活性。

鼻粘液中的IL-1ra是所有经测定的生物体液细胞因子中水平最高的分泌细胞因子，并且在所有经测定的鼻粘液细胞因子中是最高的。鼻粘液中的这一水平比IL-1α水平高约800倍，比IL-1β水平高超过400倍，是IL-1RII水平的约30倍，并且比TNF-α水平高超过19000倍。

考虑到这种情况，对该研究结果的评价提示了在嗅觉减退患者的鼻粘液中发生促炎性细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α与它们的竞争性抑制剂IL-1ra、IL-10和IFN-γ之间的复杂相互作用。这些结果提示在这些患者中促炎性和抗炎性细胞因子之间的粘膜平衡，表明嗅觉减退中这些元素的一定的控制。这与炎性肠病患者中这些促炎性和抗炎性细胞因子之间的不平衡形成鲜明对比，在炎性肠病中，IL-1显著大于IL-1ra，后者与慢性炎性肠病中慢性肠炎的新机制及嗅觉减退的存在相关。

鼻粘液中增加的促炎性细胞因子与先前在病毒性鼻炎患者和这些嗅觉减退患者中确定的鼻粘膜中炎症的解剖学和病理学变化一致。改善这些患者的嗅觉功能的茶碱治疗还抑制了TNF-α和其他促炎性细胞因子的分泌，从而支持这些观察结果。由于这些促炎性细胞因子的主要竞争性抑制剂―IL-1ra的水平比促炎性细胞因子的水平高很多，因此这些结果提示在这些患者中发生针对急性或慢性炎症的内源性保护作用。

尽管在该研究中观察到的变化涉及由鼻上皮腺体中的细胞释放至鼻粘液中的细胞因子的粘膜变化，但这些变化也可能涉及中枢神经系统和垂体前叶功能的变化。在中枢神经系统和垂体前叶中的全身炎症过程中，IL-1β、IL-1ra和IL-10基因表达的变化都已被证明是增加的。这些结果表明，与我们在嗅觉减退患者中观察到的结果一致，IL-1ra可以作为全身抗炎性激素由垂体前叶分泌，该激素响应于IL-1β从多系统来源释放。在变应性疾病患者中也发现了IL-18基因多态性。

我们在每一种生物体液中测定的细胞因子水平随年龄增长的变化是复杂的。以前的研究者报道，除了年龄以外还有很多因素影响细胞因子变化，包括卡路里限制、内毒素的存在、氧化应激和激素状态。TNF-α与年龄相关的变化已被报道用于预测胰岛素抗性。因此，我们研究的每一种生物体液中水平的差异不仅可以反映每一种细胞因子随着年龄增长的差异，还可以反映与该研究中未确定的多个因素相关的其他机制。实际上，该研究最相关的方面不涉及年龄变化，而涉及鼻粘液中的细胞因子的变化本身，该变化相对于与嗅觉减退患者相关的其他生物体液中的变化。基于鼻粘液中这些细胞因子的变化，这些结果提示在嗅觉减退患者中发生促炎性细胞因子与它们的竞争性抑制剂之间的复杂相互作用。由于鼻粘液的变化可以且确实反映了嗅觉功能的变化，因此这些结果与这组患者中嗅觉损失的潜在基本机理相关。实际上，特定细胞因子的抗体已被成功用于疾病治疗。

在测定的细胞因子中，研究的各种生物体液中存在明显的水平层级。尽管这些测量存在显著变化，但在研究的任意生物体液中鼻粘液IL-1ra是最普遍的细胞因子。在所有研究的尿细胞因子中，尿IL-1ra是最普遍的尿细胞因子。在测定的血浆和唾液水平中，血浆和唾液IL-1RII是最普遍的细胞因子。

在这些生物体液中发现的细胞因子浓度与使用的测量技术相关。因为这些结果反映了生理条件下的细胞因子水平，虽然在嗅觉减退患者中，但很难将这些结果与那些由大多数其他研究者先前报道的结果进行比较，因为他们主要报道了响应于特定刺激性和抑制性物质的、血液的或组织细胞的功能中细胞因子活性与年龄相关的变化。Inamizu等人报道，随着年龄的增长，巨噬细胞IL-1β产生减少，但在我们的研究中，随着年龄的增长，在鼻粘液中没有变化。以前的研究者报道，随着年龄的增长，角质形成细胞IL-1α产生减少，但我们的结果显示了所研究的每一种生物体液中的IL-1α随着年龄的增长普遍增加。已知IL-1刺激IL-1ra产生，但我们在鼻粘液或唾液中证明的随着年龄增长的复杂变化不能支持IL-1与增加的IL-1ra水平相关的观察结果。已经报道了老年受试者的IL-2R随着年龄增长而下降，但在我们的研究中，其在血浆中增加，在尿液中变化甚微，且在鼻粘液中有复杂的变化模式。Beharka等人报道，IL-6产生不会随着年龄的增长而增加，但在我们的研究中，血浆中的IL-6增加，尤其在60-69岁时，而在尿液中是40-49岁。在我们的研究中，每一种体液中的IL-10随着年龄的增长而增加，而Ye等人报道了小鼠的大脑切片和神经胶质细胞中IL-10的年龄相关性下降。与我们的研究一致，老龄鼠的CD4⁺T细胞比年轻的细胞产生更多的IL-10。未见IFN-γ的产生随着年龄增长而变化的报道，但我们报道了在60-69岁时鼻粘液水平的增加。很多以前的研究者已经报道了TNF-α和干扰素的可变的年龄相关性变化。先前报道了在数种其他生物体液中细胞因子水平随着年龄增长的变化；Kawasaki等人报道，龈沟液中的RANKL和OPG水平随着年龄的增长而下降，而Yamakawa等人报道，鼠腮腺腺泡细胞中的IL-1β产生随着年龄的增长而增加，并且他们报道了IL-6的减少。

这是报告嗅觉减退患者的数种生物体液中的细胞因子水平的首个研究，并且是报告在彼此临近的时间测定数种生物体液中的细胞因子水平的首个研究。

表3

人类细胞因子水平随年龄的变化

*平均值

±SEM

0值为0

表4

人类细胞因子水平随年龄的变化

*平均值

±SEM

0值为0

--未得到样品

a相对于60-69岁，p<0.05

实施例3：嗅觉减退中IgE和嗜酸性粒细胞的变化

嗅觉损失患者具有定义他们的病理学的多个临床和生物化学特征。在最近对华盛顿特区的味觉或嗅觉门诊中获得的数据进行的再分析中，对28名味觉或嗅觉功能障碍患者进行了分析。这28名患者在品尝味道或闻嗅能力方面都具有显著的异常。这28名患者中的8名(29％)具有升高的血清IgE水平。水平在128-781kU/L范围内变化(平均值±SEM，258±82)。这些患者中的4名被初步诊断为类似流感后嗅觉减退和味觉减退(PIHH)；4名被初步诊断为变应性鼻炎。患者是7名男性，1名女性，年龄在35-71岁。这28名患者中的5名(18％)具有升高的血浆嗜酸性粒细胞水平。总白细胞的水平在3.7-11.9％的范围内变化(平均值±SEM，6.1±2.3％)，且嗜酸性粒细胞计数为307-750个细胞(平均值±SEM，462±176)。这些患者中的3名被诊断为PIHH，2名被诊断为变应性鼻炎。患者是4名男性，1名女性，年龄在39-71岁。两名患者都具有升高的IgE和嗜酸性粒细胞计数，1名男性，1名女性，均具有PIHH，年龄分别为39和71岁。这些患者的唾液和鼻粘液中还具有低水平的cAMP和cGMP。

用茶碱对患者进行治疗和检查，以检查嗅觉功能能否得到恢复。该患者亚群与较大患者组进行比较。

实施例4：一氧化氮在嗅觉损失中的作用

在该实施例中研究了一氧化氮在嗅觉损失中的作用。磷酸二酯酶(PDE)抑制剂可以通过其他机制如通过一氧化氮(NO)改善嗅觉损失。茶碱是一种广义的PDE抑制剂，其可以在增加cAMP和cGMP的同时增加一氧化氮(NO)。用茶碱治疗的嗅觉减退患者可能不仅具有增加的鼻粘液cAMP和cGMP，还具有增加的NO。NO通过鸟苷酸环化酶产生cGMP，而cGMP的升高部分地介导NO对嗅觉损失的刺激效应。cGMP可以1)被PDE同工型降解，且2)可通过维持其存在的PDE抑制来提高。

为了研究这种可能性，向嗅觉减退患者施用了可以提高一氧化氮产量、水平、有效量或半衰期的备选药物组合物的治疗。也可以施用针对提高cGMP和cAMP的药物组合物。

实施例5：唾液中的环核苷酸

方法：所有研究均在2001年2月至2005年7月间在华盛顿特区的味觉和嗅觉门诊进行，并在连续正常受试者和患者上建立研究。研究由乔治城大学医学中心机构审查委员会批准。

腮腺唾液收集自61名正常的志愿者，年龄为18-75岁(50±5岁(平均值±SEM))。正常的志愿者是40名年龄为23-75岁(51±7岁)的男性和21名年龄为18-69岁(49±4岁)的女性，他们身体状况良好且健康，没有任何急性或慢性疾病，并且没有使用任何药物。腮腺唾液还收集自253名具有味觉和嗅觉功能障碍的患者，年龄为9-83岁[55±3岁(平均值±SEM)]。患者是104名年龄为9-83岁(56±2岁)的男性和149名年龄为12-79岁(54±2岁)的女性。

通过使用先前详细描述的针对四种促味剂(NaCl用于咸味、用于甜味、HCl用于酸味、尿素用于苦味)和四种气味剂(吡啶—“死鱼”气味、硝基苯—苦杏仁气味、噻吩—石油气味和乙酸戊酯—香蕉油气味)的检测阈值(DT)、识别阈值(RT)和量值估计(ME)的标准三刺激物、强迫选择、阶梯固定设计测量，在所有正常受试者和患者中进行嗅觉和味觉功能测试，其结果在双盲临床试验和其他研究者的研究中得到证实和验证。正常受试者对所有测试的促味剂和气味剂表现出正常范围内的DT、RT和ME。

味觉和嗅觉功能障碍患者表现出继发于数种致病因素的多种感觉异常。功能障碍发作的病因包括病毒感染后[约30％的患者]、脑震荡综合征后[约20％]、变应性鼻炎[约15％]、特发性原因[约12％]和数个其他病因。感觉功能异常患者包括味觉敏锐度丧失[90％的患者中对两种或更多种促味剂有升高的DT、RT和ME]、嗅觉敏锐度丧失[98％的患者中对两种或更多种气味剂有升高的DT、RT和/或ME]、味觉障碍[70％，味觉功能失真，包括味觉丧失和幻味觉]和嗅觉障碍[70％，嗅觉功能失真，包括嗅觉丧失和幻嗅觉]。超过85％的患者具有多于一种的感觉异常。

在清晨时分，从收集前至少两个小时禁食或禁烟的受试者中收集唾液。通过将改良的Lashley杯放置在Stensen导管上并以10秒间隔通过舌部放置重建的柠檬汁(Borden,Tarrytown,NY)最大地刺激流出来收集唾液。在8-12分钟内连续收集唾液，直到获得约8ml。通过获得单位收集时间的平均流体重量来计算流速。将唾液保存在-20℃下直到测定。

使用由R&D Systems(Minneapolis，MN)提供的试剂盒，通过分光光度比色96孔板ELISA技术测定cAMP和cGMP。试剂盒标准的平均偏差为≤5％。通过获得215-225nm处的分光光度测量的吸光度并使用消光系数来测定蛋白质；以这种方式估计非常少量样品中的蛋白质。cAMP和cGMP以三种方式表示；每ml唾液、每mg蛋白质和每ml流速。

为了确定方法的可靠性，使用数个参数测定了cAMP和cGMP。在20种场景下测定了六个唾液样品的重复样品；这些样品中cAMP和cGMP的标准偏差均在0.007-0.038变化；这两种部分的平均变异系数在1-10％之间变化，总平均值为4％。在两年时间内，在20种不同的场景下测定来自一名受试者的cAMP和cGMP；cAMP(pmol/ml)的这些测定结果的标准偏差为0.29，平均变异系数为3％；cAMP/mg蛋白质的标准偏差为0.13，平均变异系数为4％；cAMP/ml流速的标准偏差为0.49，平均变异系数为5％；cGMP(pmol/ml)的标准偏差为0.02，变异系数为6％；cGMP(pmol/mg蛋白质)的标准偏差为0.007，变异系数为7％；cGMP(pmol/ml流速)的标准偏差为0.05，变异系数为10％。

计算了每一个受试者组的平均值和SEM。利用Student t检验计算了组平均值间的差异。由于研究的正常者的年龄有足够的差距，因此，仅呈现了患者的年龄数据。但是，用包括的正常者计算年龄变化不影响仅使用患者数据获得的结果。

结果：正常受试者中的唾液cAMP和cGMP

cAMP和cGMP均存在于正常受试者的腮腺唾液中，在所用测定的检测范围内(表5)。通过所有测定方法，唾液cAMP显著高于cGMP，且高7-10倍不等(表5)。女性中的唾液cAMP水平始终高于男性，且高25-49％不等(表5)。男性和女性之间在流速、蛋白质或年龄上没有差异(表5)。

与正常受试者相比，味觉和嗅觉功能障碍患者中的唾液cAMP和cGMP

cAMP和cGMP均存在于从味觉和嗅觉功能障碍患者获得的腮腺唾液中(表6)。患者表现出比正常受试者低的唾液cAMP和cGMP的平均浓度，但只有cAMP水平显著较低(表6)。这些结果与表示方法无关。cAMP的浓度比cGMP高8-9倍(表6)。患者中的平均唾液流速显著低于正常者(表6)。

男性和女性患者中的唾液cAMP分别显著低于正常者(表7)，而cGMP没有差异(表7)。男性和女性患者中的平均唾液流速与正常者相比均显著更低(表7)。

相对于年龄的唾液cAMP和cGMP

相对于年龄，唾液cAMP和cGMP浓度是不同的(图14和15)。尽管受试者数目相对较小，但在年龄范围上存在cAMP的复杂模式，通常随着年龄的增长而增加，且在41-50岁达到峰值，然后下降直到>70岁时水平9再次升高(图14)。与cAMP类似，cGMP也具有在41-50岁达到最大值的类似的模式，然后值在此后减少，但在>70岁时有最后的增加。cAMP和cAMP/蛋白质的年龄差异在将31-40岁与41-50岁(分别为p<0.02和p<0.05，t检验)以及51-60岁与41-50岁(分别为p<0.05和p<0.01，t检验)比较时显著不同。cGMP和cGMP/蛋白质的年龄差异在将31-40岁与>70岁(分别为p<0.01和p<0.005，t检验)以及61-70岁与>70岁(p<0.05，t检验)比较时显著不同。唾液蛋白质分泌和流速在整个老化过程中没有显著变化(表8)。

表5

正常受试者腮腺唾液中的cAMP和cGMP

表5.正常受试者腮腺唾液中的cAMP和cGMP。()反映受试者数目。对于每个所研究的参数，数据表示为平均值±SEM。如果＜0.05[a.p＜0.001，分别与cAMP相比]，则认为P值(通过Student t检验确定)是显著的。

表6

正常受试者和嗅觉损失患者腮腺唾液中的cAMP和cGMP

表6.味觉和嗅觉功能障碍患者和正常受试者腮腺唾液中的cAMP和cGMP。()反映受试者数目。对于每个所研究的参数，数据表示为平均值±SEM。如果＜0.05[a.p＜0.001，相对于正常者]，则认为P值(通过Student t检验确定)是显著的。

表7

正常男性与女性和具有嗅觉损失的男性与女性的腮腺唾液中的cAMP和cGMP

表7.具有味觉和嗅觉功能障碍的男性与女性患者和正常男性与女性的腮腺唾液中的cAMP和cGMP。()反映受试者数目。对于每个所研究的参数，数据表示为平均值±SEM。如果＜0.05[a.p＜0.001，相对于正常男性或女性；c.p＜0.005，相对于正常男性；b.p＜0.005，相对于正常女性]，则认为P值(通过Student t检验确定)是显著的。

表8

与年龄相关的腮腺唾液蛋白质及流速的变化

表8.与年龄相关的腮腺唾液蛋白质及流速。()反映受试者数目。数据表示为平均值±SEM。

实施例6：具有味觉和嗅觉功能障碍的患者中与嗅觉损失严重程度有关的腮腺唾液环核苷酸的减少

方法：所有研究都在2001年2月至2005年7月之间于华盛顿特区的味觉和嗅觉诊所进行，并在连续健康受试者和患者上建立研究。研究由乔治城大学医学中心机构审查委员会批准。

从61名年龄为18至75岁(平均值±SEM，50±5岁)的健康志愿者收集腮腺唾液。所述志愿者为40名年龄为23至73岁(51±7岁)的男性和21名年龄为19至69岁(49±4岁)的女性，他们身体状况良好且健康，没有任何急性或慢性病，并且没有使用任何药物。每名受试者的嗅觉和味觉功能均在正常范围内。还从253名年龄为9至83岁(55±3岁)的具有味觉和嗅觉功能障碍的患者收集腮腺唾液。患者全都是已经损失嗅觉的具有味觉和嗅觉功能障碍的患者。这些患者包括104名年龄为9至83岁(56±2岁)的男性和149名年龄为12至79岁(49±4岁)的女性。

在清晨时分，从收集前至少2小时禁食或禁烟的受试者中收集唾液。通过将改良的Lashley杯放置在Stensen导管上并以10秒间隔通过舌部放置重建的柠檬汁(Borden,Tarrytown,NY)最大地刺激流出来收集唾液。在患者中，在感官品尝完成后立即收集唾液。在8至12分钟的时间段内连续收集唾液，直到收集到约8mL。通过获得单位收集时间的平均流体重量来计算流速。将唾液保存在-20℃下直至测定。

使用由R&D Systems(Minneapolis,MN)提供的试剂盒，通过灵敏的分光光度96孔板酶联免疫吸附测定技术测定环AMP和cGMP。试剂盒标准的平均偏差等于或不超过5％。通过获得215至225nm处的分光光度测量的吸光度并使用消光系数来测定蛋白质；以这种方式估计非常少量样品中的蛋白质。皮摩尔/浓度的环AMP和cGMP以3种方式表示：每毫升唾液、每毫克蛋白质以及每毫升流速。

为确定方法的可靠性，以若干种方式测定了cAMP和cGMP。在20种场景下测定了6个唾液样品的重复样品；对于cAMP，这些样品的标准偏差在0.007至0.038之间变化，对于cGMP在0.007至0.038之间变化；每种部分的平均变异系数在1％至10％之间变化。在2年时间内，在12种不同的场景下测定了来自1名受试者的环AMP和cGMP。cAMP(皮摩尔/毫升)的这些测定结果的标准偏差为0.29，平均变异系数为3％；对于cAMP(皮摩尔每毫克蛋白)，标准偏差为0.13，平均变异系数为4％；对于cAMP(皮摩尔/毫升流速)，标准偏差为0.49，平均变异系数为5％；对于cGMP(皮摩尔/毫升)，标准偏差为0.02，平均变异系数为6％；对于cGMP(皮摩尔/毫克蛋白质)，标准偏差为0.007，平均变异系数为7％；对于cGMP(皮摩尔/毫升流速)，标准偏差为0.05，平均变异系数为10％。

通过在固定的、带对照的设计中使用强迫选择、三刺激物、逐步阶梯技术，通过心理物理学技术测量嗅觉损失。这些技术的效力及其结果之前在双盲临床试验中记载。使用了四种气味：吡啶或“死鱼”气味、硝基苯或苦杏仁气味、噻吩或基于石油的气味，以及乙酸戊酯或香蕉油气味。在这种固定的、带对照的设计中确定了对每种气味的检测阈值(DT)、识别阈值(RT)和量值估计(ME)。

气味以噻吩、乙酸戊酯、硝基苯和吡啶的顺序提供。将气味保存在60-mL、广口、螺旋盖的琥珀色瓶中，其中每个瓶子中有12mL的测试溶液。对于每个测试，每名患者均相对于测试管理员呈直角就座，并屏蔽其与测试材料的任何视觉接触。对于每个测试，要求患者按固定、混合的设计以连续3个刺激物的顺序闻嗅每个瓶子中溶液上方的顶部空间。该刺激物的两种是润肤剂(水或轻质矿物油)，并且一种是具有气味剂的润肤剂。3种溶液的每一种依次打开和关闭，患者在打开的瓶子的边缘上方约2至3cm处闻嗅2至10秒。3种刺激物的每轮顺序需要20至60秒，其中每组3种刺激物之间有5至20秒的休息期。

在提供每组3种刺激物之后，要求患者完成3个任务。首先，患者确定哪个具有气味剂的刺激物与2个没有气味剂的润肤剂不同(以检测3种刺激物之间的差异)；其次，患者用文字描述含有气味剂的刺激物中的气味剂，即，识别并描述该气味剂的特征；第三，患者使用1至100的等级估计所识别的气味剂的强度(量级强度的估计)。在此等级上，100被描述为在该气味类别内，之前在正常情况下所经历的该气味剂类型的最强气味剂。因此，1为最低强度，100为最高强度，并相应地判断1至100之间的任何强度。

测试总是在之前已经被确定为正常检测的上限(对于每种气味剂，为10^-5mol/L)开始。如果患者在此浓度下正确地检测和识别出该气味剂，则将气味剂浓度逐步降低(10^-6、10^-7、10^-8和10^-9mol/L)，直到该患者不再能正确地检测或识别出3种刺激物之间的任何差异。如果患者在10^-5mol/L下既不能正确地检测也不能正确地识别出该气味剂，则将气味剂浓度逐步升高(10^-4、10^-3、10^-2、10^-1和100mol/L和纯物质(absolute))，直到该患者可以正确地检测和识别该气味剂。使用该阶梯、回转技术，可以增加或降低气味剂浓度，直到患者在1个浓度下在3次中有2次将该气味剂正确地检测和识别为与润肤剂不同，并且在下一个更低或更高的浓度下未能做到。因此，如果患者不能正确地检测或识别出10^-5、10^-4和10^-3mol/L的气味剂，但能够正确检测和识别10^-2mol/L的气味剂，则所提供的下一个刺激物为下一个更低的浓度，10^-3mol/L。如果患者再次未能正确地检测或识别出10^-3mol/L的刺激物，则再次提供10^-2mol/L的刺激物。如果患者再次检测和正确地识别出10^-2mol/L的刺激物，则该测试的这一部分完成，因为该患者在1个刺激物浓度下给出了2次不正确的反应而在下一个更高的浓度下给出了2次正确的反应。10^-2mol/L的气味剂浓度被认为是DT和RT。

尽管总是要求气味剂刺激物量值的测量以及气味剂检测和识别的每个陈述，但量值估计确定在之前被确定为正常气味识别下限(10^-2mol/L)的浓度下在健康受试者中开始。因此，通过将从气味剂浓度10^-2、10^-1或100mol/L和纯物质得到的强度进行平均，使用强度和正确的识别反应来计算实际的ME确定值。这些数字的平均值包含ME反应。

因为DT和RT的间隔呈现是不同的，所以将气味浓度转化为线性标度(例如，10^-9mol/L＝1、10^-8mol/L＝2…纯物质＝11)，以获得相等单位的标度和绝对零点。使用该标度，为每个患者的DT和RT指定数字，并且计算了每个患者组的反应的平均值±SEM。使用之前确定的单独的值类似地确定(按百分比)每个患者组的ME的平均值±SEM。

基于DT、RT和ME的结果，如表9中所示将嗅觉损失程度分类。此分类表明，具有嗅觉丧失的患者具有最严重的嗅觉损失；接下来是具有I型嗅觉减退的患者；接下来是具有II型嗅觉减退的患者；具有III型嗅觉减退的患者损失最不严重。与嗅觉损失的严重程度有关，敏锐度从嗅觉损失的最严重程度至最不严重程度降低，使得嗅觉丧失、I型嗅觉减退、II型嗅觉减退、III型嗅觉减退(表9)。

将唾液cAMP和cGMP的每个测量值放到嗅觉损失严重程度的4个类别的1个中。随后，计算每组损失严重程度中环核苷酸的平均值±SEM。采用Student t检验计算组平均值之间的差异。还通过使用Spearman秩相关技术使每个唾液cAMP和cGMP水平的生化测定值与4个嗅觉损失类别中的每一个相互关联，并确定相关性的显著性。

唾液环核苷酸的所有研究都在开始时是编码。嗅觉损失分类的结果独立于任何唾液环核苷酸结果获得。只有在所有的患者嗅觉损失分类确定后，才对唾液研究进行解码(uncode)和关联。

结果：具有嗅觉损失的所有患者的唾液cAMP水平显著低于健康受试者中的水平(表10)。依损失严重程度分类时，随着损失严重程度的增加，存在唾液cAMP和cGMP的一致降低(表10)。

虽然只研究了2名具有嗅觉丧失的患者，但cAMP和cGMP的平均水平都低于正常，并且低于任何其他的嗅觉损失类型(表10)。

具有次严重类型的嗅觉减退(I型)的患者的唾液cAMP水平显著低于具有倒数第二严重的嗅觉损失类型(II型)的患者和健康受试者。依流速分类时，cAMP比具有II型和III型嗅觉减退的患者中显著更低。但依蛋白质分类时，具有II型嗅觉减退的患者中的cAMP虽然与具有III型嗅觉减退的患者中的水平没有显著不同，但其低6％(表10)，而当通过流速水平表征时，其低7％(表10)。

cGMP的水平比健康受试者中的水平低2至3倍(表10)。虽然水平没有显著不同，但具有I型嗅觉减退的患者中的cGMP是具有III型嗅觉减退的患者的一半。在具有II型嗅觉减退的患者中，其水平是具有III型嗅觉减退的患者的46％。具有III型嗅觉减退(严重程度最低的嗅觉减退类型)的患者的平均唾液cGMP虽然比健康受试者的水平低27％，但与正常水平没有显著不同(表10)。

除了具有嗅觉丧失的2名患者(其中两种环核苷酸的测量值均接近于零)之外，在所有患者组中cAMP的唾液水平都高于cGMP的唾液水平。然而，患者中的cAMP水平仅比cGMP高3至5倍，而在健康受试者中，该差异在高7至10倍的范围内。

唾液cAMP与嗅觉损失类型的相关性为rs＝-0.83(P b.001)；唾液cGMP与嗅觉损失类型的相关性为rs＝-0.79(P b.001)。这些表明，这些患者中唾液cGMP或cGMP的水平越高，嗅觉敏锐度损失的严重程度越低。只有在具有II型嗅觉减退的患者中，唾液流速才显著低于正常值。

还在按嗅觉损失程度和性别分类的具有嗅觉损失的受试者中确定了唾液环核苷酸(表11)。与嗅觉损失程度相关的唾液cAMP或cGMP中没有显著的性别差异。然而，具有II嗅觉减退的男性和女性都明显比具有I嗅觉减退的男性和女性更老；具有I型嗅觉减退的女性的唾液蛋白质显著低于具有II型嗅觉减退的女性(表11)。

表9

嗅觉损失严重程度的分类

检测阈值、RT和ME。0表示不能正确地检测和识别任何浓度的任何气味剂；0*，患者不能正确地识别任何浓度的任何气味剂，致使任何强度测量均无效或为0；DT-，不能检测≤10^-5mol/L的任何气味剂(对于所有气味剂，反应为≥10^-4mol/L)；RT-*，不能正确地识别≤10^-2mol/L的任何气味剂(对于所有气味剂，反应为≥10^-1mol/L)；DT+，能够检测≤10^-5mol/L的所有气味剂；RT+*，能够正确地识别≤10^-2mol/L的所有气味剂。量值估计，正常(吡啶，＜61％；硝基苯，＜46％；噻吩，＜63％；乙酸戊酯，＜48％)。

表10

按损失严重程度分类的味觉和嗅觉损失患者的腮腺唾液中的环AMP和cGMP

括号中的数目表示受试者的数目。

相对于健康的受试者：*P＜.001，且^§P＜.01。

相对于III型嗅觉减退：^||P＜.005。

^a平均值±SEM。

表11

具有嗅觉丧失和嗅觉减退的男性和女性的腮腺唾液中的环AMP和cGMP浓度

括号中的数目表示受试者的数目。

相对于III型嗅觉减退：*P＜.001，^§P＜.05且^||P＜.01。

相对于III型嗅觉减退：且^#P＜.05。

^a平均值±SEM。

实施例7：茶碱的鼻内施用

目标：确定鼻内茶碱对羟基苯甲酸甲基丙基酯是否能够纠正嗅觉减退和味觉减退。

设计：我们在以下3种情况下，在具有嗅觉减退和味觉减退的患者中进行了标签公开的先导研究：(1)治疗前；(2)口服茶碱治疗后，以及(3)鼻内茶碱治疗后。在每种情况下，我们进行了味觉或嗅觉功能的主观评价、味觉(味觉测量法)和嗅觉(嗅觉测量法)的定量测量，以及血清茶碱水平和体重的测量。

患者：选择了十名具有在临床上与病毒疾病、变应性鼻炎、外伤性脑损伤、先天性嗅觉减退和其他慢性疾病过程的影响有关的嗅觉减退和味觉减退的患者。

干预：向每个患者施用200至800mg/d的口服茶碱对羟基苯甲酸甲基丙基酯，持续2至12个月。当鼻内茶碱对羟基苯甲酸甲基丙基酯(每个鼻孔中20pg/d)施用4周时，中断该治疗3周至4个月。

主要结果评价：在每种情况结束时，通过血清茶碱水平和体重的测量，经由味觉测量法和嗅觉测量法主观地确定了味觉或嗅觉功能。

结果：在2至12个月的治疗后，口服茶碱治疗改善了6名患者的味觉或嗅觉敏锐度。4周后，鼻内茶碱治疗改善了8名患者的味觉或嗅觉敏锐度，其改善比口服施用后更大。鼻内药物使用没有伴随的副作用。体重随每种治疗增加，但鼻内施用后比口服施用后增加得更多。

结论：与口服茶碱治疗相比，鼻内茶碱治疗在改善嗅觉减退和味觉减退方面更安全且更有效。

如若干研究者所报道的，嗅觉损失(嗅觉减退)和味觉损失(味觉减退)是影响美国数千名患者的常见症状。这些症状的有效治疗仅在最近才得到展示，并且没有被正式确立。

在可以确定用来纠正味觉和嗅觉损失的有效治疗之前，需要了解这些病状的原因的生化基础。为实现这一点，我们确定，这些症状通常由唾液和鼻粘液中若干种生长因子分泌的减少导致。这些生长因子作用于味蕾中的干细胞和嗅觉上皮细胞以在这些感觉器官中生成细胞组分的优良组库(elegant repertoire)。生长因子对这些传感器官的刺激被认为维持正常味觉或嗅觉功能。如果若干种疾病和病理学状况中的任一种减少了这些生长因子，则发生嗅觉减退和味觉减退。这些状况和疾病可以包括微量金属缺乏；维生素缺乏；肝病；糖尿病；其他代谢性、耳鼻喉科和神经变性病症，包括多发性硬化症、帕金森病和阿尔茨海默病；及其他神经失调。因此，如几项之前的研究所证明的，需要有效治疗来增加这些生长因子的分泌，从而改善味觉减退和嗅觉减退并使味觉或嗅觉功能恢复正常。

为了更多地了解这些过程，对许多具有嗅觉和味觉损失的患者的综合研究确定，唾液和鼻粘液生长因子环腺苷一磷酸(cAMP)和环鸟苷一磷酸(cGMP)的水平比健康的受试者低，并且是许多这些患者中嗅觉减退和味觉减退发作的原因。的确，当嗅觉减退的严重程度增加时，这些唾液和鼻粘液生长因子的水平以一致的方式降低。

为增加唾液和鼻粘液cAMP和cGMP水平并由此纠正味觉减退和嗅觉减退，我们假设用磷酸二酯酶抑制剂治疗将会是有用的。为验证该假设，我们机构以前的一项研究在标签公开、带对照的临床试验中向321名嗅觉减退和味觉减退患者施用了口服茶碱。此研究的结果表明，口服茶碱治疗成功地纠正了超过50％的这些患者中的嗅觉减退。后来的研究者使用了其他口服磷酸二酯酶抑制剂来纠正嗅觉减退。一项标签公开的研究也证明，随着鼻粘液cAMP和cGMP水平增加，嗅觉减退得到纠正，而在这些部分没有增加的患者中，嗅觉减退未得到纠正。这些结果提示，一些患者可能对口服茶碱的治疗有抗性。

但是，提高cAMP和cGMP的鼻粘液水平的使用口服茶碱的成功治疗需要升高的茶碱剂量，有时需要延长的治疗期限，以及对包括不安、胃肠道不适、睡眠困难、心动过速和其他不利症状在内的不良反应的耐受性。茶碱治疗还需要定期测定血液茶碱水平，以保证充分的药物吸收和不存在毒性作用。这些工作限制了此口服施用药物的使用。

由于这些不良反应，我们希望更多地了解茶碱给药的药理学。在用口服茶碱治疗后，以剂量依赖性的方式在血液、鼻粘液和唾液中发现该药物。如在先前临床试验中在嗅觉减退患者中显示的，这些结果与嗅觉功能的改善一致。用来改善治疗效力和减少口服茶碱给药的不良反应的这些研究和工作的结果导致了该药物的鼻内施用。以这种方式，该药物可以更直接地影响嗅觉感受器，而不引起与口服疗法有关的全身性不良反应。

为实现这一点，在已建立的医疗器械公司的帮助下，开发了鼻内递送装置。在已建立的制药公司的帮助下，将该药物封装以供无菌鼻内递送。使用该设备，在10名腮腺唾液和鼻粘液cAMP和cGMP水平低于参考范围的嗅觉减退和味觉减退患者中进行了标签公开、单一来源、带对照的先导研究，以确定安全性并将鼻内茶碱治疗后的嗅觉和味觉反应与任何治疗之前和口服茶碱治疗之后的患者反应进行比较。

方法

患者

我们从312名参加了先前的标签公开、带对照的临床试验的患者中选择了10名嗅觉减退和味觉减退患者以进行该先导研究。每名患者均在任何药物治疗之前经历预先评估，随后用口服茶碱治疗。这些患者具有嗅觉减退和味觉减退，并且在茶碱治疗之前，在唾液和鼻粘液中展现出低于其各自参考范围的cAMP和cGMP水平。从经历先前的评估和治疗的组中选择这10名患者进行鼻内试验是因为(1)他们对口服茶碱的反应在主观上是次于最大的；(2)在尝试增加药物剂量以获得更大的临床反应时，他们发生不良反应，因此限制了所施用的药物剂量；并且(3)他们居住在紧邻诊所的区域，这使得他们频繁回访诊所以进行任何额外的临床试验更加实际。

这10名患者包括7名年龄为37至77岁(平均年龄[SEM]，64[6])的男性和3名年龄为47至77岁(62[11])的女性。患者具有以下5种不同的感觉功能障碍临床病因中的1种：变应性鼻炎(n＝3)、类似流感后嗅觉减退和味觉减退(n＝3)、头部损伤(n＝2)、先天性嗅觉减退49(n＝1)以及其他病症(n＝1)。在此研究的每种情况下，患者充当其自身的对照。这些情况包括无治疗(在进入口服茶碱研究之前)、口服茶碱治疗和鼻内茶碱治疗。

程序

在嗅觉或味觉功能测量之前，通过问卷调查测量每种研究情况下嗅觉和味觉功能的主观变化。将反应以1至100的等级分级，其中0表示总体感觉功能没有主观反应；100，恢复正常感觉功能；0至100之间的值为中间的反应。总体感觉功能被定义为闻到所有气味并且识别所有促味剂的能力，尽管反应强度是不同的。

通过标准化的心理物理学感觉测试技术测量了每种研究情况下的嗅觉和味觉功能。测量包括确定对4种气味(即，吡啶[死鱼味]、硝基苯[苦杏仁味]、噻吩[石油味]和乙酸戊酯[香蕉油味])(嗅觉测量法)和对4种促味剂(即，氯化钠[咸味]、蔗糖[甜味]、盐酸[酸味]和尿素[苦味])(味觉测量法)的检测阈值(DT)、识别阈值(RT)、量值估计(ME)以及愉悦反应(HR)。这些技术之前已经与在先前带对照的双盲临床试验中确认的嗅觉测量法一起描述。每次测量的进行均不依赖对反应的事先知晓。

在每种治疗条件下通过荧光偏振来测量血清茶碱水平。在每种研究条件期间用经校准的临床秤测量体重，并在每种研究条件下的最终测量时报告。

研究方案

患者均在诊所经历初始的临床评价，以确定所表现出的嗅觉减退和味觉减退的原因、程度和特征。在其进入口服茶碱的公开试验之前确定的血液、尿液、红细胞、唾液和鼻粘液的测量确定了其嗅觉减退和味觉减退的生化原因与其唾液和鼻粘液cAMP和cGMP的水平低于参考范围有关。然后，在先前提到的实验室和临床标准的基础上选择这10名患者用于此研究。

按照由乔治城大学医学中心机构审查委员会批准的方案，此鼻内先导研究中的10名患者进入预先的口服茶碱研究。在这一先导试验中，每日以200、400、600或800mg的2次分开剂量(早餐和午餐时)施用口服茶碱，持续2至12月的治疗。将治疗分成2至4个月的时期，期间患者返回诊所以测量主观的感觉反应、嗅觉测量、味觉测量、血清茶碱水平和体重。如果口服茶碱治疗在给定剂量下未能纠正嗅觉减退，则将茶碱剂量增加200mg，并且患者以2至4个月的间隔进行重新评价，直到800mg的剂量。如先前提到的，研究患者未获得对口服茶碱的最大临床反应，或在服用给定剂量的口服茶碱时，表现出一定的临床改善却经历了明显的不良反应，这限制了在必要时增大口服剂量以获得最大临床益处。在为鼻内先导研究选择的10名患者中，在开始鼻内药物试验之前，中止口服茶碱治疗3周至4周。在此时，任何患者中的平均(SEM)血清茶碱水平均是测量不到的(0[0]mg/L)。

然后，在这10名患者中开始鼻内茶碱治疗的先导研究。此试验是研究者发起的1期、标签公开、单一来源、带对照的先导研究。鼻内药物疗法反映了一种可能比口服茶碱更有用的改善嗅觉减退(和味觉减退)的治疗方法的同情性(compassionate)试验。在鼻内试验之前，解释了风险和益处，并且患者签署了知情同意书。

鼻内给药装置为校准的1mL注射器，其装配有舒适地配合至前鼻孔内的喷嘴(Wolfe Tory Medical,Inc.)并且在无菌条件下装载有在0.4-mL盐水溶液中的20pg茶碱对羟基苯甲酸甲基丙基酯(Foundation Care)。指示患者将喷雾向上引入鼻腔中，但不要向后进入鼻咽中。在研究开始前，用无菌盐水练习该技术。在药物施用之前，每名患者均容易且如所示的使用该技术。

在整个研究中，每名患者均每天一次在每个鼻孔中递送茶碱剂量。在药物施用期间的1、2和4周，通过口服研究所用的相同测量对患者进行评价。

口服试验的值取自在中止口服药物治疗之前以及在开始鼻内试验之前进行的最后一次测量。此时间段在口服治疗开始后的2至12个月之间变化，并且反映了每名患者所经历的感觉功能的最大改善。鼻内先导研究的值取自在4周鼻内治疗完成后获得的测量值。

将在每种研究条件下获得的所有值的平均值和平均值的标准误差进行比较。如果通过非配对t检验得到P<.05，则认为差异是显著的。如果通过t检验得到P<.05，则还对被认为是显著的差异使用配对比较检验。

结果

通过口服茶碱施用，味觉减退在2至12个月的治疗之后改善，但在鼻内治疗的1至4周内味觉减退得到进一步改善。治疗前，蔗糖、盐酸和尿素(不太灵敏)的DT和所有促味剂的RT都升高(不太灵敏)至高于参考水平。所有促味剂的量值估计都低于(不太灵敏)参考水平。对氯化钠、盐酸和尿素的愉悦反应都低于(不太讨厌)参考水平。在口服茶碱治疗后，蔗糖和盐酸的DT以及氯化钠、盐酸和尿素的RT降低(更加灵敏)。如先前报道的，所有促味剂的量值估计都增加(更加灵敏)，并且盐酸和尿素的HR增加(更加讨厌)。在鼻内茶碱治疗后，所有促味剂的DT和RT都低于(更加灵敏)治疗前或口服茶碱治疗后。鼻内茶碱治疗后，所有促味剂的量值估计都高于(更加强烈)任何治疗前或口服茶碱治疗后。对氯化钠、盐酸和尿素的愉悦反应更加负面(更加讨厌)，对蔗糖的HR比任何治疗前或口服茶碱治疗后更加正面(更加喜欢)。

在口服茶碱治疗后，嗅觉减退通过2至12个月的治疗得到改善，但在鼻内茶碱1至4周的治疗后改善得更多。治疗前，与参考水平相比，所有促味剂的DT和RT都是升高的(不太灵敏)；所有促味剂的ME都是降低的(不太灵敏)；对吡啶和噻吩的HR是降低的(不太讨厌)；并且对硝基苯和乙酸戊酯的HR是降低的(不太讨厌)。在口服茶碱治疗后，如先前报道的，所有促味剂的DT和RT均降低(更加灵敏)；所有促味剂的ME均升高(更加灵敏)；并且对所有促味剂的HR均升高(对吡啶和噻吩，更加讨厌；对硝基苯和乙酸戊酯，更加喜欢)。在鼻内茶碱治疗后，每种气味的DT和RT都低于(更加灵敏)治疗前或口服茶碱治疗后。每种气味的量值估计都高于(更加强烈)治疗前或口服茶碱治疗后。与治疗前或口服茶碱治疗后相比，对噻吩的愉悦反应更加负面(更加讨厌)且对硝基苯更加正面(更加喜欢)。

据报告，通过口服茶碱治疗，嗅觉和味觉敏锐度得到主观改善，但在4周的鼻内茶碱治疗后报告了更大的改善。在口服茶碱治疗后，6名患者报告了总体增加的味觉或嗅觉功能，而4名患者报告没有改善。在鼻内茶碱治疗后，10名患者中的8名报告了味觉或嗅觉功能的总体改善，而2名患者报告没有改善。此反应频率高于用口服茶碱治疗的嗅觉减退患者先前报告的频率，先前报告中略微超过50％的患者报告了改善。

口服茶碱治疗后，测得嗅觉或味觉敏锐度得到主观改善，但在4周的鼻内茶碱治疗后，测得此改善是增加的。在鼻内茶碱治疗后，与口服治疗相比，测得了嗅觉或味觉功能的2倍改善。配对t检验结果显示，鼻内茶碱后的反应显著高于口服茶碱治疗后的反应(味觉，P<.05；嗅觉，P<.025)。

口服茶碱治疗后，体重比治疗前的水平增加，但在鼻内茶碱治疗后，体重增加得更多。口服茶碱治疗后，平均(SME)体重从治疗前的值增加了1.5(0.4)kg，而在鼻内茶碱治疗后，体重从治疗前的值增加了2.5(0.5)kg。患者认为此变化与由于鼻内茶碱治疗后的嗅觉功能改善获得的食物味道增加有关，这增加了食欲和食物享受，导致随后的体重增加。这些变化在每个患者组中均测到，尽管在口服茶碱治疗后有4名患者没有感觉改善，并且在鼻内茶碱治疗后有2名患者没有改善。

在口服茶碱治疗期间，这10名患者在最大改善时的平均(SEM)血清茶碱水平为6.4(2.0)mg/L(要转化为微摩尔/升的话，乘以5.55)。在鼻内茶碱治疗期间，平均血清茶碱水平为0.0(0.0)。鼻内茶碱治疗的中止在2名患者中在1周内导致嗅觉和味觉功能损失，并且在2名患者中在6周之后导致该损失。四名患者在10周后报告了改善的一定的持续性。

评论

这项标签公开、单一来源、带对照的先导试验的结果表明，如先前报道的，口服茶碱有效地改善了嗅觉减退。这种改善最早在治疗2个月后测得，但最大改善在4至12个月不等。这些结果还表明，口服茶碱在与嗅觉敏锐度改善相同的时间框架内有效改善味觉减退。

此外，鼻内茶碱被证明是安全的，并且在纠正嗅觉减退和味觉减退方面比口服茶碱更加有效。在早至开始治疗后1周时测量到这种改善，但最大改善在1至4周不等。

尚未明确确定鼻内茶比口服茶碱更加有效的机制。鼻内药物递送避免了口服药物的肝脏首过效应，绕过了初始细胞色素P450代谢，因此减少了口服施用药物的代谢，由此使得更低的鼻内施用药物剂量是临床有效的。药物剂量从口服200至800mg范围向鼻内40pg的这一降低对进一步避免全身性不良反应的产生是充分且足够特异的。此递送机制还可避免发展出已经随口服茶碱出现的耐药性。此外，因为与口服茶碱相比，鼻内茶碱可能使更多药物接触嗅上皮，所以直接鼻部施用可以比口服施用激活更多的嗅觉感受器。

然而，鼻内茶碱的其他作用可能增强其治疗效力。茶碱已经显示出抑制变应性鼻炎的症状，变应性鼻炎影响了该鼻内试验中的3名患者。导致嗅觉减退和味觉减退的许多疾病和状况具有相关的炎性组分，其可以被磷酸二酯酶抑制剂的抗炎作用抑制。此外，鼻内引入的药物可通过以下方式被递送至大脑：(1)通过经由沿嗅球的筛板的吸收直接递送，(2)通过经由血脑屏障受体的吸收间接递送，或(3)通过这两种方法的组合。虽然尚未进行茶碱从鼻粘液向大脑中的吸收的研究，但胰岛素、神经生长因子、若干种神经递质及其他部分的研究表明了这些鼻内引入的部分向大脑中的摄入。

不管其作用机制如何，此先导研究中的鼻内茶碱在具有若干临床诊断的10名患者的8名中相对快速地纠正了嗅觉减退和味觉减退。2名未得到改善的患者是女性，一名患有变应性鼻炎而另一名具有病毒疾病的影响。

这些结果与之前的研究一致，之前的研究中若干种鼻内药物比口服药物更加有效。针对哮喘治疗，吸入的肾上腺皮质类固醇比口服的肾上腺皮质类固醇更加有效，且不良反应更少，并且吸入的肾上腺皮质类固醇在哮喘治疗时比口服的醋酸泼尼松龙更加有效。鼻内佐米曲坦实现了比口服施用的药物更快的偏头痛控制，且副作用更少。鸡II型胶原的鼻部施用比口服施用更有效地抑制大鼠中的佐剂性关节炎。

然而，也有报道称，鼻内施用的药物仅仅与这些相同药物口服给予一样有效。在减轻绝经后症状方面，鼻内戊酸雌二醇与口服给药一样有效，但其产生的乳腺痛和子宫出血更少。对于夜遗尿，鼻内醋酸去氨加压素与口服药物一样有效，但其剂量为口服药物剂量的十分之一。鼻内去氨加压素是控制中枢性尿崩症的优选途径。

实施例8.采用IL-6的抗体抑制剂的治疗

在此实施例中，通过施用有效量的针对IL-6或IL-6受体的抑制性抗体治疗具有味觉减退或味觉丧失的受试者。该抑制性抗体可以为tociluzumab、sarilumab、艾西莫单抗(elsilimomab)、司妥昔单抗、sirukumab、BMS-945429、CDP6038、VX30、ARGX-109或FM101。该施用为经由鼻内施用。通过在抗体施用之前和之后实施标准化的心理物理学感觉测试技术来评估治疗效力。根据效力测试数据，按需要重复该施用。根据标准化的心理物理学感觉测试，接受者的品尝味道或闻嗅的能力得到改善。

实施例9.嗅觉减退中的SHH。

目标：确定正常受试者和嗅觉损失(嗅觉减退)患者中人鼻粘液中SHH的存在。

方法：使用灵敏的分光光度ELISA测定，对14名正常受试者和44名未经治疗的具有若干原因的嗅觉损失(嗅觉减退)的患者以及使用口服茶碱治疗后的这些患者中的30名测量了SHH。

结果：SHH存在于正常受试者和嗅觉减退患者的鼻粘液中。但是，嗅觉减退患者中的SHH水平显著低于正常受试者。在用口服茶碱治疗后，鼻粘液中的SHH水平显著增加至超过相关的未治疗状态中SHH水平的300倍。60％的患者表现出改善的嗅觉功能。

结论：SHH可充当刺激嗅上皮中的干细胞的细胞信号传导部分；与正常者相比，其在嗅觉减退患者中的减少提示，SHH充当嗅觉损失的生化标志物并且充当维持正常嗅觉功能的生长因子。

引言

刺猬信号途径的成员属于细胞外信号分子家族，其参与包括无脊椎动物和脊椎动物胚胎发育在内的多种生理学过程的调控。脊椎动物生物体表达多种形式的刺猬蛋白；哺乳动物中存在三种已知的刺猬蛋白——音猬蛋白(SHH)、印度刺猬蛋白(IHH)和沙漠刺猬蛋白(DHH)。SHH在涉及多巴胺能神经元和胆碱能神经元诱导的若干发育过程中起着重要作用。

SHH被合成为45-kD前体蛋白，该前体蛋白被自催化地切割以产生20-kD的N-末端片段(具有共价附接于C-末端甘氨酸的胆固醇分子)和25-kD的C-末端片段。其晶体结构已被确定，并且其与若干种锌依赖性水解酶在结构上同源。SHH的晶体结构揭示了被两个组氨酸和谷氨酸残基配位的一个锌原子。锌从SHH的去除抑制其活性。cAMP依赖性蛋白激酶A活性的增加拮抗SHH信号传导。

方法

受试者：四十四名年龄为10-88岁(56±3岁(平均值±SEM))的患者参与此研究。患者为24名年龄为12-88岁(54±4岁)的男性，和20名年龄为10-84岁(51±5岁)的女性。如先前所述，如通过主观陈述和嗅觉测量法测量的，所有患者都表现出嗅觉损失。嗅觉测量法可包括确定对四种气味(吡啶、硝基苯、噻吩和乙酸戊酯)的检测阈值(DT)和识别阈值(RT)以及量值估计(ME)。嗅觉功能的异常包括对存在的一种或多种气味高于正常值的DT或RT增加(灵敏性降低)和/或ME降低(灵敏性降低)。患者表现出与其嗅觉损失有关的六种病因：类似流感后嗅觉减退[(PIHH)，10名患者]、变应性鼻炎[15名患者]、先天性嗅觉损失[9名患者]、头部损伤[8名患者]、全身麻醉后[1名患者]以及味觉障碍和口灼痛(oropyrosis)[1名患者]。

通过经2-10个月服用的200-800mg剂量范围的口服茶碱治疗了三十名嗅觉减退患者。这些患者为17名年龄为12-78岁(62±5岁)的男性，其中六名患有PIHH，九名患有变应性鼻炎，一名患有先天性嗅觉损失，一名在麻醉后；以及13名年龄为12-67岁(42±6岁)的女性，其中四名患有PIHH，一名患有变应性鼻炎，8名患有先天性嗅觉损失。嗅觉功能的改善包括对假定的一种或多种气味的DT或RT降低(灵敏性提高)和/或ME增加(灵敏性提高)。

正常受试者：为了评估与嗅觉损失无关的症状而去往华盛顿特区的味觉或嗅觉诊所的十四名受试者及其他志愿者是此研究的一部分。正常受试者以连续的方式选择并且包括所有未表现出感觉异常的受试者。

研究方案事先由乔治城大学医学中心机构审查委员会批准。该研究的每个参与者均自愿地同意并签署知情同意参与表格。

程序：指示患者和受试者将其在1-4天的时间内自发产生的所有鼻粘液存放至50ml塑料管中。所有样品均冷藏过夜，并且收集时间超过24小时。

将每个样品转移至12ml塑料管，并在制冷的RC2B SpinCo离心机中在18,400rpm下离心45-55min。将上清液转移至PCR管中，并保存在-20℃下直至分析。

通过使用从Abcam Inc.(Cambridge,MA)获得的特异性分光光度ELISA技术对每个样品进行分析。重复样品的分析的一致性在5％以内。所有分析的进行均不依赖于对任何受试者的状态的知晓。只有在所有样品都得到分析且将结果制成表格后，才与临床诊断相关地整理(codified)样品。对结果进行分析，以获得每个类别的平均值±SEM水平，并且使用Student t检验比较结果，p<0.05被认为是显著的。

结果

在所有参与者的鼻粘液中测量了SHH(表12)。患者中的SHH水平低于在正常受试者中发现的SHH水平的2％(表12)。

女性中的平均SHH水平为男性的1.5倍(表13)。

其嗅觉损失的原因具有许多病因的患者中的平均SHH水平广泛地变化(表14)。全身麻醉的患者在任意患者组中表现为最低水平，排名其后的是患有变应性鼻炎、先天性嗅觉损失的患者、患有味觉障碍和口灼痛、头部损伤和PIHH的患者。每个患者组中的平均SHH水平显著低于正常受试者。

在患者中，口服茶碱治疗使SHH水平显著增加超过330倍(表14)。在男性和女性中，茶碱水平均显著增加至高于正常水平，其中男性中增加320倍，但在女性中仅增加17倍(表14)。然而，在茶碱治疗前，女性中的SHH水平显著高于男性(p<0.001)。

按照病因学分类，所研究的每个患者组均展现出鼻粘液SHH的显著增加(表15)。变应性鼻炎患者增加的量最大(超过未治疗状态的719倍)，接下来是麻醉后的患者(48倍)，接下来是PIHH患者(46倍)，而最少的是患有先天性嗅觉损失的患者(超过21倍)。

PIHH患者中的口服茶碱治疗使SHH增加至显著高于茶碱治疗前全部患者中的水平的水平。然而，经治疗的患有变应性鼻炎和先天性嗅觉损失以及全身麻醉后的患者中的水平未展现出同样多的SHH水平变化，并且低于所有经治疗的患者的平均值。

口服茶碱治疗后的嗅觉功能的改善在31名患者中的19名中出现，或者以61％的总体改善出现。

讨论

此研究表明，SHH存在于正常受试者和未治疗的嗅觉减退患者的鼻粘液中。然而，未治疗的嗅觉减退患者中的水平显著低于正常受试者中的水平，这与先前针对鼻粘液cAMP和cGMP水平展示的结果相似，该水平也显著低于正常受试者中的水平。口服茶碱治疗使嗅觉减退患者的鼻粘液中的SHH水平显著增加，超过在未治疗的状态中测得的水平，这与先前针对鼻粘液cAMP和cGMP水平展示的结果一致。在先前的嗅觉减退患者中采用口服茶碱的先前治疗在略微超过50％的患者中导致嗅觉改善，而在此研究中，60％的患者展现出嗅觉功能的改善。在先前茶碱治疗的嗅觉减退患者中，一些患者展现出对口服茶碱治疗的抗性，该结果也可能已在此研究中的患者中出现。

表12

在正常受试者和嗅觉减退患者的鼻粘液中的音猬蛋白

受试者音猬蛋白*

患者(44) 149±2^+,a

正常者(14) 7538±1105

()受试者数目

*单位为pg/ml

+平均值±SEM

相对于正常者

a p<0.001

表13

按嗅觉损失的病因分类的嗅觉减退患者的鼻粘液中的音猬蛋白

()受试者数目

*单位为pg/ml

+平均值±SEM

相对于正常者

a p<0.001

表14

未治疗的和经口服茶碱治疗后的嗅觉减退患者中的音猬蛋白

()受试者数目

+音猬蛋白浓度(pg/ml)的平均值±SEM

口服茶碱(每天400-800mg，持续2-10个月)

相对于未治疗的患者

a p<0.001

相对于正常者

a1 p<0.001

表15

在未治疗的和经口服茶碱治疗的按病因分类的患者鼻粘液中的音猬蛋白

()患者数目

*音猬蛋白浓度(pg/ml)

+平均值±SEM

相对于未治疗的患者

a p<0.001

相对于经治疗的患者

a1 p<0.001

相对于未治疗的患者

a2 p<0.001

实施例10：嗅觉减退患者在口服茶碱治疗后与鼻粘液中的音猬蛋白增加有关的嗅觉功能改善

目的：证明嗅觉减退患者在口服茶碱治疗后的嗅觉功能改善与音猬蛋白(SHH)的鼻粘液水平增加有关。

方法：通过嗅觉测量法和鼻粘液中SHH的测量评估了四十四名嗅觉减退患者。将这些患者中的三十一名用剂量为200-800mg的口服茶碱治疗，为期2-10个月，之后通过主观测量、嗅觉测量法和鼻粘液中的SHH测量(通过使用灵敏的分光光度ELISA测定)评估其嗅觉功能。

结果：在茶碱治疗的患者中，嗅觉功能的主观反应、嗅觉测量和鼻粘液SHH存在一致且显著的改善。

结论：在用口服茶碱治疗后，嗅觉功能和鼻粘液中SHH水平的改善是以剂量-反应的关系正相关的。这些结果表明了茶碱在成功治疗各种病因的嗅觉减退患者的嗅觉功能中的作用，以及SHH作为嗅觉功能的生化标志物的作用。不受理论的约束，茶碱充当嗅上皮干细胞生长和发育的刺激物是可能的。

本研究的目的在于评价在若干种病因的嗅觉减退患者中，在口服茶碱治疗之前和之后，嗅觉功能和鼻粘液中的SHH水平二者的变化。

方法

受试者

正常受试者。研究了十四名具有正常嗅觉和味觉功能的志愿者。这些受试者要么是为了评估与嗅觉损失无关的症状而去往华盛顿特区的味觉和嗅觉诊所的患者，要么是自愿参与该研究的味觉和嗅觉诊所的雇员。受试者以连续的方式选择并且包括所有自愿参与该研究的受试者。

患者。为了评估和治疗嗅觉损失而去往华盛顿特区的味觉和嗅觉诊所的四十四名年龄为10-88岁(56±3岁(平均值±SEM))的患者也是该研究的受试者。从2012年至2013年，从在该诊所评估的患者中连续地选择患者。患者为24名年龄为12-88岁(54±4岁)的男性，和20名年龄为10-84岁(51±5岁)的女性。如通过主观陈述和嗅觉测量法测量的，所有患者都表现出嗅觉损失。嗅觉测量法通过确定对四种气味(吡啶、硝基苯、噻吩和乙酸戊酯)的检测阈值(DT)和识别阈值(RT)、量值估计(ME)以及愉悦性评价(H)而进行。嗅觉功能的异常包括对存在的一种或多种气味的高于正常值的DT和/或RT增加(灵敏性降低)和/或ME降低(灵敏性降低)，或对吡啶和噻吩气味讨厌程度的减低，或对硝基苯或乙酸戊酯气味的讨厌程度的增加。

患者表现出与其嗅觉损失有关的六种病因：类似流感后嗅觉减退[(PIHH)，10名患者]、变应性鼻炎[15名患者]、先天性嗅觉损失[9名患者]、头部损伤[8名患者]、全身麻醉后[1名患者]以及味觉障碍和口灼痛[1名患者]。

通过经2-10个月服用的200-800mg剂量范围的口服茶碱治疗了其中三十一名嗅觉减退患者。这些患者为18名年龄为12-78岁(62±5岁)的男性，其中六名患有PIHH，十名患有变应性鼻炎，一名患有先天性嗅觉损失，一名在麻醉后；以及十三名年龄为12-67岁(42±6岁)的女性，其中四名患有PIHH，一名患有变应性鼻炎，八名患有先天性嗅觉损失。嗅觉功能的改善包括对口服茶碱的主观反应和嗅觉测量的改善。嗅觉功能的主观改善包括基于1-100的等级，对于所有外界气味的感知改善的测量值，其中100表示完全恢复正常的嗅觉功能，其中响应在1-100内适当地定级。风味感知的改善按照1-100等级的响应来测量，其中100表示食物的所有风味均被认为是正常的，而<100的响应总是给予较低的等级。味觉功能的主观改善也可以采用以相同的1-100等级测量的对于咸、甜、酸和苦味促味剂的味觉变化来测量，其中100表示对于所考虑的四种促味剂中的每一种均恢复正常，而<100的响应总是给予较低的等级。通过嗅觉测量法测得的改善由DT或RT降低(灵敏性增加)、ME增加(灵敏性增加)和与失真减少一致的H变化指示。

嗅觉测量改善反映了感觉功能的特定变化。茶碱治疗后的DT降低反映了嗅觉检测功能的增加，感受器灵敏性增加。此治疗后的RT降低反映了改善，其中嗅觉感受器-大脑联系的灵敏性增加。ME的增加反映了嗅觉感受器数目的增加。H的变化反映了与嗅觉失真的感知降低有关的大脑功能的变化。

研究方案与之前由乔治城大学医学中心机构审查委员会批准的研究一致。每名患者和受试者同意参与该研究并签署了知情同意参与表格。

方法

患者和志愿者将其在1-4天的时间内自发产生的所有鼻粘液收集至50ml塑料管中。所有样品均冷藏过夜，收集时间超过24小时。

将每个样品转移至12ml塑料管，并在制冷的RC5C Plus Sorvall离心机中在18,000rpm下离心45-55min。将上清液转移至PCR管中，并保存在-20℃下直至分析。

通过使用从Abcam Inc.(Cambridge,MA)获得的灵敏的分光光度ELISA技术对每个样品进行分析。重复样品的分析的一致性在5％以内。所有分析的进行均不依赖于对任何受试者的状态的知晓。只有在所有样品都得到分析后，才将结果制成表格，并与受试者状态相关地将样品分类。

对结果进行分析，以获得每个类别的平均值±SEM水平，并且使用Student t检验比较结果，p<0.05被认为是显著的。还通过使用Pearson积相关分析了关于口服茶碱的SHH水平的结果比较，其中p<0.05被认为是测得统计学显著的改善。

结果

口服茶碱之前和之后，与鼻粘液中的SHH水平相关的嗅觉减退患者的嗅觉功能在表16中示出。相对于正常受试者，就对吡啶、噻吩和乙酸戊酯的DT和RT以及对硝基苯的DT而言，未治疗的嗅觉减退患者的嗅觉功能显著受损。在用口服茶碱治疗后，嗅觉功能有显著的改善。相对于未治疗的状态，对吡啶、硝基苯、噻吩和乙酸戊酯的DT和对硝基苯的RT有显著的降低。除噻吩之外对所有气味的ME增加，并且对吡啶的H的讨厌程度增加，并且对乙酸戊酯的喜爱程度增加。这些变化与经治疗的患者中SHH的显著增加有关。

在用口服茶碱治疗后，嗅觉功能的主观变化在表17中示出。在31名经治疗的患者中，19名(61％)改善了2-100％，其平均改善为34±6％。在这些改善的患者中，11名为男性，其平均改善为27±9％，八名为女性，其平均改善为43％±17％。

19名患者(61％)的风味感知改善，与其嗅觉功能的改善一致。20名患者(64％)的味觉功能改善。

嗅觉功能和鼻粘液SHH水平在口服茶碱治疗之前和之后(使用四种剂量的口服茶碱的每一种治疗之前和之后)的变化在表18中示出。随着每次口服剂量的增加，SHH一致且显著地增加[(r＝0.91)(p<0.001)]，并且除400mg时的噻吩的RT之外，对存在的每种气味的DT和RT都降低(灵敏性增加)。对于口服茶碱的所有600mg和800mg剂量都有ME的增加，对吡啶和噻吩的讨厌程度的H相似地增加，对硝基苯和乙酸戊酯的喜爱程度提高。

在未治疗的男性和女性中，与鼻粘液中SHH的变化相关的嗅觉功能的变化在表19中示出。治疗前，尽管女性对于硝基苯、噻吩和乙酸戊酯的DT和RT更低(更加灵敏)，但男性与女性之间嗅觉功能的任何方面均没有显著的差异。对于这些相同的气味，未治疗的女性的ME值比未治疗的男性更高(更加灵敏)。治疗后，男性中对吡啶和硝基苯的DT和RT显著低于女性(更加灵敏)，并且男性对噻吩和乙酸戊酯的DT和RT低于女性(更加灵敏)，但不那么显著。然而，治疗后对吡啶和噻吩的讨厌程度的测量值(H值)被判断为女性比男性更加讨厌，并且喜爱程度的测量值(H值)被判断为女性比男性更加喜欢，虽然变化不显著。在未治疗的状态中，女性鼻粘液中的SHH水平显著高于男性，而在治疗后，男性中的SHH显著高于女性。

讨论

这些结果表明，鼻粘液中的SHH水平不仅充当未治疗的嗅觉减退患者中嗅觉功能损失的指标，还充当用口服茶碱治疗后的改善的指标。这些结果确认了收集和测量作为重要生物流体的鼻粘液中的变化对于评估嗅觉减退患者的有用性和重要性。

这些结果还提示，SHH充当促进嗅上皮成熟和持续(perpetuation)中以及味蕾的生长发育中的感受器功能的生长因子。

这些研究的结果表明，口服茶碱使嗅觉减退患者中SHH的鼻粘液水平升高，并且此治疗改善了嗅觉功能。

记录嗅觉功能对于口服茶碱治疗的剂量反应改善以及鼻粘液SHH的增加是有用的。这些结果与嗅觉改善和鼻粘液SHH浓度升高之间的关系一致。

对于嗅觉功能和鼻粘液中的SHH变化，在正常受试者与嗅觉减退患者之间发现了显著差异。

表16

经口服茶碱治疗前后，嗅觉功能和鼻粘液中音猬蛋白(Shh)水平的变化

*平均值±SEM

()患者数目

DT，检测阈值(按BU计)

RT，识别阈值(按BU计)

ME，量值估计(按％计)

H，愉悦值(按％计)

Shh(按pg/ml计)

表16续

经口服茶碱治疗前后，嗅觉功能和鼻粘液中音猬蛋白(Shh)水平的变化

*平均值±SEM

()患者数目

DT，检测阈值(按BU计)

RT，识别阈值(按BU计)

ME，量值估计(按％计)

H，愉悦值(按％计)

Shh(按pg/ml计)

表17

在经口服茶碱治疗的嗅觉减退患者中对口服茶碱治疗的主观反应

[]研究的患者的％

()患者数目

相对于未改善的

d p<0.05,X²(2.45)

b p<0.01,X²(4.00)

表18

经若干剂量的口服茶碱治疗前后，嗅觉功能和鼻粘液音猬蛋白的变化

*平均值±SEM

()患者数目

DT，检测阈值(按BU计)

RT，识别阈值(按BU计)

ME，量值估计(按％计)

H，愉悦值(按％计)

相对于未治疗的

a p<0.001

b p<0.005

c p<0.02

d p<0.05

表18续

经若干剂量的口服茶碱治疗前后，嗅觉功能和鼻粘液音猬蛋白的变化

*平均值±SEM

()患者数目

DT，检测阈值(按BU计)

RT，识别阈值(按BU计)

ME，量值估计(按％计)

H，愉悦值(按％计)

表19

经口服茶碱治疗前后，嗅觉减退的男性和女性的嗅觉功能和鼻粘液中音猬蛋白的变化

*平均值±SEM

()患者数目

DT，检测阈值(按BU计)

RT，识别阈值(按BU计)

ME，量值估计(按％计)

H，愉悦值(按％计)

相对于未治疗的状态

a p<0.001

b p<0.005

c p<0.01

表19续

经口服茶碱治疗前后，嗅觉减退的男性和女性的嗅觉功能和鼻粘液中音猬蛋白的变化

*平均值±SEM

DT，检测阈值(按BU计)

RT，识别阈值(按BU计)

ME，量值估计(按％计)

H，愉悦值(按％计)

实施例11.人味觉功能中的音猬蛋白

目的：确定人味觉功能中音猬蛋白(Shh)的作用。

背景：Shh是一种20kD的NH₂末端蛋白，其戌多种细胞系统中的信号传导。我们假设应该在唾液中发现Shh。因此，我们尝试测量正常受试者和具有味觉功能障碍的患者的唾液中的Shh。

方法：通过使用灵敏的分光光度ELISA测定，测量了正常受试者和具有多种病因的味觉功能障碍的患者的腮腺唾液中的Shh。味觉功能障碍在临床上通过味觉功能的主观抑制(包括敏锐度损失)和受损的味觉测量值来定义。

结果：在每名正常受试者的腮腺唾液中均发现了Shh。在每名具有味觉功能障碍的患者中也发现了Shh，但其水平显著低于正常受试者中的水平。患者表达了主观的味觉功能损失。还测量了受损的味觉测量值。

方法

受试者

正常受试者。对二十六名年龄为22-84岁(54±5岁(平均值±SEM))、具有正常味觉功能的志愿者进行了研究。这些志愿者要么是为了评估与味觉损失无关的症状而去往华盛顿特区的味觉和嗅觉诊所的患者，要么是自愿参与该研究的味觉和嗅觉诊所的雇员。受试者以连续的方式选择并且包括所有自愿参与该研究的受试者。

患者。还对为了评估和治疗味觉及嗅觉损失而去往华盛顿特区的味觉和嗅觉诊所的六十四名年龄为10-88岁(56±3岁)的患者进行了研究。从2012年至2013年，从在该诊所评估的患者中连续地选择患者。患者为12名年龄为12-88岁(54±4岁)的男性，和14名年龄为10-84岁(51±5岁)的女性。味觉功能障碍由七种病理学事件导致，其包括类似流感后味觉减退[(PIHH)，17名患者]、变应性鼻炎[26名患者]、与味觉减退有关的先天性嗅觉损失[10名患者]、头部损伤[12名患者]、全身麻醉后[2名患者]、味觉障碍和口灼痛[1名患者]以及全身辐射后[1名患者]。如通过敏锐度损失的主观陈述和受损的味觉测量值所测量的，所有患者都表现出味觉功能障碍。

通过使用0-100的等级对敏锐度损失的主观陈述进行定量，其中100反映味觉功能的完全丧失，0反映没有损失，而0至100之间的数字反映适度的损失程度。在所有患者和引发味觉功能障碍的每种病理学中测量了损失程度的平均值±SEM。

味觉测量法的测量值包括对四种促味剂[NaCl(咸)、蔗糖(甜)、HCl(酸)和尿素(苦)]的检测阈值(DT)和识别阈值(RT)以及量值估计(ME)的测量值。通过对存在的一种或多种促味剂的DT或RT增加高于正常值(灵敏性降低)和/或ME降低(灵敏性降低)来衡量味觉功能的异常。

研究方案与之前由乔治城大学医学中心机构审查委员会批准的研究一致。每名患者和受试者都同意参与该研究并签署了知情同意参与表格。

方法

患者和志愿者通过将Lashley杯放置在一个腮腺的Stensen导管上并通过舌部放置浓缩柠檬汁以刺激唾液来收集唾液。如先前所述，经8-10min的一段时间将唾液收集在冰中的塑料管中。如先前所述，通过在四分钟时间段内的平均流动来测量流速。将样品保存在-20℃下直至分析。

通过使用从Abcam Inc.(Cambridge,MA)获得的灵敏的分光光度ELISA技术对每个样品进行分析。重复样品的分析的一致性在5％以内。所有分析的进行均不依赖于对任何受试者的状态的知晓。只有在所有样品都得到分析后，才将结果制成表格，并与受试者状态相关地将样品分类。

对结果进行分析，以获得每个类别的平均值±SEM水平，并且使用Student t检验比较结果，p<0.05被认为是显著的。

结果

研究的每个正常志愿者和患者的唾液中均存在平均Shh(表20)。患者中的水平显著低于在正常受试者中测得的水平(表20)。

男性或女性患者的唾液中的Shh没有不同(表21)。

唾液中的Shh显示了随年龄增加的模式，其中最高水平出现在所研究的最老的患者中(表22)。

具有与其味觉功能障碍的原因有关的各种病因的患者中的平均Shh水平变化很大(表23)。最低水平出现在具有味觉功能障碍和口灼痛的患者中，最高水平出现在PIHH患者中(表23)。虽然所有患者中的平均水平都显著低于正常受试者中的水平，但是具有头部损伤的患者中的水平显著低于PIHH患者。

味觉敏锐度的主观损失存在于具有味觉功能障碍的每名患者中，其平均损失为41±3％。味道感知的主观损失存在于每名患者中，其损失为28±3％。根据与正常受试者中的类似结果相比DT增加(灵敏性降低)、RT增加(灵敏性降低)和ME降低(灵敏性降低)的测量值，在患者中显示了受损的味觉测量值(表24)。

讨论

此研究的结果表明，Shh存在于正常受试者和具有味觉功能障碍的患者中。本文第一次报道了其在人唾液中的存在。

随着患者年龄变大，唾液Shh增加，其中最高水平出现在最老的患者中。

未经治疗的具有味觉功能障碍的患者中的Shh水平显著低于正常受试者中的水平，这与先前针对唾液cAMP水平展现的结果相似，先前已证明该cAMP水平显著低于正常受试者中的水平。

在研究的所有诊断类别的患者中的唾液Shh水平均低于正常值。此结果提示，低于正常值的唾液Shh水平可以在具有这些症状的患者中充当味觉功能障碍的通用诊断值。

表20

正常受试者和具有味觉功能障碍的患者的唾液中的音猬蛋白

受试者音猬蛋白*

正常者(26) 215±7⁺

患者(64) 63±6^a

()受试者数目

*单位为pmol/ml

+平均值±SEM

相对于正常者

a p<0.001

表21

按性别表征的具有味觉功能障碍的患者的唾液中的音猬蛋白

()受试者数目

*单位为pmol/ml

+平均值±SEM

表22

按年龄表征的具有味觉功能障碍的患者的唾液中的音猬蛋白

()受试者数目

*单位为pmol/ml

+平均值±SEM

表23

具有味觉功能障碍的患者的唾液中的音猬蛋白

()受试者数目

*单位为pmol/ml

+平均值±SEM

相对于PIHH

b p<0.005

表24

与正常受试者相比，患者的味觉功能

RT，识别阈值

DT，检测阈值

ME，量值估计

()受试者数目

+平均值±SEM

相对于正常者

a p<0.001

b p<0.005

c p<0.01

d p<0.02

e p<0.05

检查了其他受试者，并且基于新数据重新分析该数据。

方法：通过使用灵敏的分光光度ELISA测定，测量了正常受试者和具有多种病因的味觉功能障碍的患者的腮腺唾液中的Shh。味觉功能障碍在临床上通过味觉敏锐度和味道感知的主观变化以及受损的味觉测量值来定义。用口服茶碱治疗患者，每日200-800mg持续2-10个月，其中以2-8个月的间隔测量唾液Shh和味觉功能。

结果：在正常受试者和具有味觉功能障碍的患者的腮腺唾液中发现了Shh，但患者中的水平显著低于正常受试者中的水平。测量了每名患者中味觉敏锐度和味道感知的主观损失以及受损的味觉测量值。茶碱治疗增加了唾液Shh，并同时改善了主观味觉功能和味觉测量值。

结论：这是唾液中Shh的第一次证实。唾液Shh的减少可被认为是具有多种病因的患者中味觉功能障碍的标志物。茶碱用来增加唾液中的Shh，由此改善人味觉功能障碍，因为它在鼻粘液中的增加改善了人类嗅觉功能障碍。

方法

受试者

正常受试者。对二十六名年龄为22-84岁(54±5岁(平均值±SEM))、具有正常味觉功能的志愿者进行了研究。这些志愿者要么是为了评估与味觉损失无关的症状而去往华盛顿特区的味觉和嗅觉诊所的患者，要么是自愿参与该研究的味觉和嗅觉诊所的雇员。受试者以连续的方式选择并且包括所有自愿参与该研究的受试者。

患者。还对为了评估和治疗味觉及嗅觉损失而去往华盛顿特区的味觉和嗅觉诊所的八十一名年龄为10-88岁(56±3岁)的患者进行了研究。从2012年至2013年，从在该诊所评估的患者中连续地选择患者。患者为58名年龄为12-88岁(54±4岁)的男性，和56名年龄为10-84岁(51±5岁)的女性。味觉功能障碍由七种病理学事件导致，其包括类似流感后味觉减退[(PIHH)，20名患者]、变应性鼻炎[31名患者]、与味觉减退有关的先天性嗅觉损失[9名患者]、头部损伤[14名患者]、全身麻醉后[3名患者]、味觉障碍伴口灼痛[1名患者]和全身辐射后[1名患者]。如通过味觉敏锐度损失和味道感知损失的主观陈述以及受损的味觉测量值所测量的，所有患者都表现出味觉功能障碍。

通过使用0至100的等级对味觉敏锐度损失和味道感知损失的主观陈述进行定量，其中100反映味觉敏锐度或味道感知的完全丧失，0反映没有损失，而0至100之间的数字反映适度的损失程度。这些患者中的一些还表现出味觉失真，但这些结果不是此研究的主题，因此未被包含在此研究中。在所有患者和引发味觉功能障碍的每种病理中测量了损失程度的平均值±SEM。

味觉测量法的测量值包括对四种促味剂[NaCl(咸)、蔗糖(甜)、HCl(酸)和尿素(苦)]的检测阈值(DT)和识别阈值(RT)以及量值估计(ME)的测量值。通过对存在的一种或多种促味剂的DT或RT增加高于正常(灵敏性降低)和/或ME降低(灵敏性降低)来衡量味觉功能的异常。

以200-1000mg的剂量向这些患者中的79名(年龄为12-86岁，41名男性和38名女性)施用了口服茶碱的治疗，为期2-10个月。以2-6个月的间隔在这些患者中测量了唾液Shh和通过使用敏锐度和味道感知的主观反应以及嗅觉测量法中的味觉功能测量值。

研究方案与之前由乔治城大学医学中心机构审查委员会批准的研究一致。每名患者和受试者同意参与该研究并签署了知情同意参与表格。所有18岁以下的受试者都在父母给出知情同意书后加入本研究。

方法

通过将Lashley杯放置在一个腮腺的Stensen导管上，并通过舌部、定时放置浓缩柠檬汁来刺激唾液，以此收集患者和正常志愿者的腮腺唾液。如先前所述，将唾液收集在冰中的塑料管中，持续8-10min的定时周期。如先前所述，通过在四分钟时间段内的平均流动来测量流速。将样品保存在-20℃下直至分析。

通过使用从Abcam Inc.(Cambridge,MA)获得的灵敏的分光光度ELISA技术对每个样品进行分析。重复样品的分析的一致性在5％以内。所有分析的进行均不依赖于对任何受试者的状态的知晓。只有在所有样品都得到分析后，才将结果制成表格，并与受试者状态相关地将样品分类。

对结果进行分析，以获得每个类别的平均值±SEM水平，并且使用Student t检验比较结果，p<0.05被认为是显著的。

结果

每个正常志愿者和每个未经治疗的味觉减退患者的腮腺唾液中均存在Shh(表25)。患者中的水平显著低于在正常受试者中测得的水平(表25)。

未经治疗的男性或女性患者的唾液中的Shh没有不同(表26)。

唾液中的Shh展现出随年龄增长而变化的模式(表27)。

具有与其味觉功能障碍的原因有关的各种病因的患者中的平均Shh水平变化很大(表28)。最低水平存在于一名患有味觉障碍(味觉感受失真)和口灼痛的患者中，最高水平出现在麻醉后的患者中(表28)。每个患者类别中的平均水平显著低于正常受试者中的平均水平。

在用口服茶碱治疗之前，每名患者中存在味觉敏锐度和味道感知的主观损失。根据与正常受试者中的类似结果相比DT增加(灵敏性降低)、RT增加(灵敏性降低)和ME降低(灵敏性降低)的测量值，在患者中显示了受损的味觉测量值(表29)。

在用口服茶碱治疗后，腮腺唾液中的Shh增加至高于正常受试者或未经治疗的患者中的水平的水平(表30)。约60％的患者的主观味觉敏锐度和味道感知得到改善(表31)。女性的急性敏锐度和味道感知的回复程度高于男性。还发生了嗅觉测量值的改善(数据未示出)。

讨论

此研究的结果表明，Shh存在于正常受试者和具有味觉功能障碍的患者的唾液中。本文第一次报道了其在人类唾液中的存在。

在所研究的所有诊断类别的患者中的唾液Shh水平均低于正常值。此结果提示，低于正常值的唾液Shh水平可以在具有这些症状的患者中充当味觉功能障碍的通用诊断标志物。

表25

正常受试者和具有味觉功能障碍的患者的腮腺唾液中的音猬蛋白

受试者音猬蛋白*

正常者(26) 184±12⁺

患者(81) 64±6^a

()受试者数目

*单位为pmol/ml

+平均值±SEM

相对于正常者

a p<0.001

表26

按性别表征的正常受试者和未治疗的具有味觉功能障碍的患者的腮腺唾液中的音猬蛋白

()受试者数目

*单位为pmol/ml

+平均值±SEM

表27

按年龄表征的具有味觉功能障碍的患者的唾液中的音猬蛋白

年龄(岁)

()患者数目

*单位为pmol/ml

+平均值±SEM

表28

未治疗的具有味觉功能障碍的患者的唾液中的音猬蛋白

()患者数目

*单位为pmol/ml

+平均值±SEM

相对于正常者

a p<0.001

表29

通过使用味觉测量法，与正常受试者相比，未治疗的味觉减退患者中的味觉功能

RT，识别阈值

DT，检测阈值

ME，量值估计

()受试者数目

+平均值±SEM

相对于正常者

a p<0.001

b p<0.005

c p<0.01

d p<0.02

e p<0.05

表30

经口服茶碱治疗前后，味觉减退患者中的唾液音猬蛋白

()患者数目

*单位为pmol/ml

+平均值±SEM

相对于治疗前

a p<0.001

表31

经口服茶碱治疗后，味觉减退患者中的味觉功能的变化

()改善的百分比

+平均值±SEM

实施例12.具有味觉功能障碍的患者中的音猬蛋白：用口服茶碱治疗之前和之后

方法：在用口服茶碱治疗后，通过使用灵敏的分光光度ELISA测定，测量了具有多种病因的味觉功能障碍的患者的腮腺唾液中的Shh。味觉功能障碍在临床上通过受损的味觉测量值来定义。

结果：在每名受试者的腮腺唾液中均发现了Shh，但其在具有味觉功能障碍的患者中明显更低。表20、25和32。用口服茶碱治疗的患者在味觉功能上得到主观改善。

方法

受试者

正常受试者。将四十三名患者用剂量为200-800mg的口服茶碱治疗，为期2-10个月，之后通过嗅觉测量法和鼻粘液中的SHH测量(通过使用灵敏的分光光度ELISA测定)评估了其嗅觉功能。

这些志愿者要么是为了评估与味觉损失无关的症状而去往华盛顿特区的味觉和嗅觉诊所的患者，要么是自愿参与该研究的味觉和嗅觉诊所的雇员。受试者以连续的方式选择并且包括所有自愿参与该研究的受试者。

患者。四十三名患者为了评估和治疗味觉及嗅觉损失而去往华盛顿特区的味觉和嗅觉诊所。味觉功能障碍由七种病理学事件导致，其包括类似流感后味觉减退[(PIHH)，13名患者]、变应性鼻炎[15名患者]、伴有味觉减退的先天性嗅觉损失[8名患者]、头部损伤[4名患者]、全身麻醉后[2名患者]以及全身辐射后[1名患者]。所有患者都展现出降低的Shh水平。

味觉测量法的测量值包括对四种促味剂[NaCl(咸)、蔗糖(甜)、HCl(酸)和尿素(苦)]的检测阈值(DT)和识别阈值(RT)以及量值估计(ME)的测量值。通过对存在的一种或多种促味剂的DT或RT增加高于正常(灵敏性降低)和/或ME降低(灵敏性降低)来衡量味觉功能的异常。

研究方案与之前由乔治城大学医学中心机构审查委员会批准的研究一致。每名患者和受试者同意参与该研究并签署了知情同意参与表格。

方法

患者和志愿者通过将Lashley杯放置在一个腮腺的Stensen导管上并通过舌部放置浓缩柠檬汁以刺激唾液来收集唾液。如先前所述，将唾液收集在冰中的塑料管中，持续8-10min的定时周期。如先前所述，通过在四分钟时间段内的平均流动来测量流速。将样品保存在-20℃下直至分析。

通过使用从Abcam Inc.(Cambridge,MA)获得的灵敏的分光光度ELISA技术对每个样品进行分析。重复样品的分析的一致性在5％以内。所有分析的进行均不依赖于对任何受试者的状态的知晓。只有在所有样品都得到分析后，才将结果制成表格，并与受试者状态相关地将样品分类。

对结果进行分析，以获得每个类别的平均值±SEM水平，并且使用Student t检验比较结果，p<0.05被认为是显著的。

结果

Shh存在于所研究的每名患者的唾液中，然而与其味觉功能障碍的原因有关的各种病因变化很大(表32)。患者中的水平显著低于在正常受试者中测得的水平(表20和25)。

最低水平出现在具有先天性的患者中，最高水平出现在麻醉诱发的患者中(表32)。

根据与正常受试者中的类似结果相比DT增加(灵敏性降低)、RT增加(灵敏性降低)和ME降低(灵敏性降低)的测量值，在患者中显示了受损的味觉测量值(表20、25和33)。令人惊讶的是，用茶碱治疗在改善味觉功能的同时使Shh的水平提高几乎2倍(表33)。

讨论

此研究的结果表明，由于茶碱治疗，在具有味觉功能障碍的患者的唾液中Shh增加。茶碱还改善了经治疗的患者的味觉测量功能。

表32

口服茶碱后患者中的唾液音猬蛋白

()患者数目

+平均值±SEM

表33

用茶碱治疗前后，具有味觉功能障碍的患者的味觉功能和唾液中的音猬蛋白

RT，识别阈值

DT，检测阈值

ME，量值估计

()患者数目

+平均值±SEM

实施例13.诊断具有味觉或嗅觉的损失和/或失真的患者

将使用体液测量刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。例如，在一个实例中，从患者提取唾液样品或粘液样品并准备用于如全文所述的分析。然后，通过基于抗体的方法如ELISA测定来测量SHH、DHH和IHH的水平。

在表现出味觉或嗅觉的损失和/或失真(例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失)的患者中刺猬信号途径成员的水平将低于正常对照。例如，在罹患味觉或嗅觉的损失和/或失真的患者中，在一些情况下，SHH的水平将为或约为：0pg/mL、大于0pg/mL至小于1pg/mL、1pg/mL至25pg/mL、15pg/mL至30pg/mL、20pg/mL至40pg/mL；35pg/mL至50pg/mL；45pg/mL至100pg/mL；75pg/mL至150pg/mL、125pg/mL至1000pg/mL、900pg/mL至2500pg/mL、2000pg/mL至5000pg/mL、4000pg/mL至7500pg/mL、6000pg/mL至10,000pg/mL；(b)IHH的水平可以为或约为：0pg/mL、大于0pg/mL至0.1pg/mL、0.05pg/mL至0.15pg/mL、0.125pg/mL至0.2pg/mL、0.15pg/mL至0.30pg/mL、0.25pg/mL至0.5pg/mL、0.4pg/mL至0.7pg/mL、0.6pg/mL至0.75pg/mL、0.725pg/mL至0.9pg/mL、0.8pg/mL至1.0pg/mL、小于1.0pg/mL、小于0.05ng/mL、小于0.15ng/mL、小于0.2ng/mL、小于0.3ng/mL、小于0.5ng/mL、小于0.7ng/mL、小于0.75ng/mL、小于0.9ng/mL、小于1.0ng/mL、小于1.1ng/mL、小于1.5ng/mL、小于1.75ng/mL、小于2.0ng/mL、小于2.25ng/mL、小于5.0ng/mL、小于6.0ng/mL、小于7.0ng/mL、小于10.0ng/mL或小于100.0ng/mL；(c)DHH的水平可以为或约为：0pg/mL、大于0pg/mL至0.1pg/mL、0.05pg/mL至0.15pg/mL、0.125pg/mL至0.2pg/mL、0.15pg/mL至0.30pg/mL、0.25pg/mL至0.5pg/mL、0.4pg/mL至0.7pg/mL、0.6pg/mL至0.75pg/mL、0.725pg/mL至0.9pg/mL、0.8pg/mL至1.0pg/mL、0.9pg/mL至1.1pg/mL、1.0pg/mL至1.3pg/mL、1.2pg/mL至1.5pg/mL、1.4pg/mL至2.0pg/mL、1.9pg/mL至2.5pg/mL、2.4pg/mL至3.0pg/mL、2.9pg/mL至3.5pg/mL、3.4pg/mL至3.8pg/mL、3.7pg/mL至3.9pg/mL、3.85pg/mL至5.0pg/mL、小于5.0pg/mL、小于0.05ng/mL、小于0.15ng/mL、小于0.2ng/mL、小于0.3ng/mL、小于0.5ng/mL、小于0.7ng/mL、小于0.75ng/mL、小于0.9ng/mL、小于1.0ng/mL、小于1.1ng/mL、小于1.5ng/mL、小于1.75ng/mL、小于2.0ng/mL、小于2.25ng/mL、小于5.0ng/mL、小于6.0ng/mL、小于7.0ng/mL、小于10.0ng/mL或小于100.0ng/mL。然而，因为刺猬信号途径的不同成员的水平根据人的不同而变化，所以可以存在一定的患者间变化。

在正常对照中，SHH、IHH和DHH的水平将高于(在一些情况下可显著高于)具有味觉或嗅觉的损失和/或失真的患者的水平。在大多数情况下，如在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测量的，该阈值水平可以是刺猬信号途径的一个或多个成员的平均水平。

在一些情况下，如在表现出味觉或嗅觉的损失和/或失真之前在相同受试者中测量的，该阈值水平可以是刺猬信号途径的一个或多个成员的平均水平。例如，随着个性化医学的来临，可以在受试者被诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真之前知道刺猬信号途径的一个或多个成员的基础水平。

在另一个实例中，刺猬信号途径的一个或多个成员的水平比所述阈值水平低至少一个数量级。例如，比所述阈值水平低2个或更多个数量级。

将从获自具有味觉或嗅觉的损失和/或失真的患者的生物样品中测量其他标志物。例如，可以如先前所述测量促炎性细胞因子(例如，IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α或其任意组合)。可以测量另外的标志物，包括但不限于抗炎性细胞因子(例如，IL-1ra、IL-10、IFN-γ、IFN-β或其任意组合)、免疫球蛋白E(IgE)、嗜酸性粒细胞、环腺苷一磷酸(cAMP)、环鸟苷一磷酸(cGMP)、一氧化氮(NO)、IL-1RII、IL-2R，或其任意组合。这些另外的标志物可用来评价患者是否具有味觉或嗅觉的损失和/或失真。

此外，所述标志物的任意组合可用来评价患者的味觉或嗅觉的损失和/或失真的严重程度。例如，如果患者几乎没有或没有可测量的一种或多种标志物的水平，则可将该患者诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真的严重情况。如在包括具有正常嗅觉和/或味觉功能的受试者的对照群体中测量的，该阈值水平可以是一种或多种标志物的平均水平。在一些情况下，如在表现出味觉或嗅觉的损失和/或失真之前在相同受试者中测量的，该阈值水平可以是一种或多种标志物的平均水平。在另一个实例中，一种或多种标志物的水平比所述阈值水平低至少一个数量级，例如，比所述阈值水平低2个或更多个数量级。

对于所有患者，可通过使用一种或多种嗅觉测试化合物经由强迫选择、三刺激物、逐步阶梯技术检测阈值(DT)得分、识别阈值(RT)得分、量值估计(ME)得分或其任意组合，来确定测试受试者的味觉和/或嗅觉功能。

在一些情况下，诊断的结果，例如味觉或嗅觉的损失和/或失真，可经由通信媒介传输。示例性的通信媒介类型可包括但不限于手写、打印和电子类型的媒介。

在其他情况下，计算机可以执行味觉或嗅觉的损失和/或失真的诊断。该计算机可以是专门为手头的任务而设计的特制计算机。

实施例14：治疗具有味觉或嗅觉的损失和/或失真的患者

将使用多种方法治疗被诊断为具有味觉或嗅觉的损失和/或失真的患者。例如，可以用非选择性PDE抑制剂、PDE-1选择性抑制剂、PDE-2选择性抑制剂、PDE-3选择性抑制剂、PDE-4选择性抑制剂、PDE-5选择性抑制剂、PDE-10选择性抑制剂或其任意组合来治疗患者。

为治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真，可以向接受非选择性PDE抑制剂的某些患者给予甲基黄嘌呤衍生物，包括但不限于咖啡因、茶碱、多索茶碱、西潘茶碱、甘油茶碱、己酮可可碱或二羟丙茶碱。可以向接受PDE 1抑制剂的某些患者给予长春西汀、化合物KS505a、bepril、氟桂利嗪、胺碘酮、扎普司特、8-甲氧基甲基IPMX、SCH 51866、尼莫地平或IC224。可以向接受PDE 2抑制剂的某些患者给予EHNA。可以向接受PDE 3抑制剂的某些患者给予依诺昔酮、米力农(Primacor)、氨力农(amrinone)、西洛酰胺、西洛他唑(Pletal)、曲喹辛、氨力农(inamrinone)、阿那格雷、匹莫苯旦、利沙齐农或二氢哒嗪酮。可以向接受PDE 4抑制剂的某些患者给予松叶菊碱、咯利普兰、异丁司特、罗氟司特(Daxas)、西洛司特(Airflo)、吡拉米司特、木犀草素、屈他维林或登布茶碱。可以向接受PDE 5抑制剂的某些患者给予西地那非、他达拉非、伐地那非、乌地那非和阿伐那非、双嘧达莫、淫羊藿苷、4-甲基哌嗪、吡唑并嘧啶-7-1、西洛司特或扎普司特。可以向接受PDE 6抑制剂的某些患者给予扎普司特、双嘧达莫、伐地那非或他达拉非。可以向接受PDE 7抑制剂的某些患者给予喹唑啉型PDE7抑制剂、双嘧达莫或噻二唑。可以向接受PDE 8抑制剂的某些患者给予双嘧达莫。可以向接受PDE 9抑制剂的某些患者给予扎普司特。可以向接受PDE 10抑制剂的某些患者给予罂粟碱、OMS824(来自Omeros Corporation)和/或PF-2545920(来自Pfizer)。可以向接受PDE 11抑制剂的某些患者给予他达拉非、扎普司特或双嘧达莫。

在一些情况下，可以给予患者毛喉素以治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真。在其他情况下，可以给予患者茶碱以治疗味觉或嗅觉的损失和/或失真。因为不同患者对毛喉素和/或茶碱有不同的反应，所以可以给予患者最佳量的相应药物。例如，毛喉素可以以小于500mg至大于0mg的量或之间的任何量来给予和/或存在。在其他情况下，茶碱可以以小于45mg或约20μg的量或之间的任何量来给予和/或存在。

在某些情况下，可以给予患者利奥西呱。在许多情况下，可以给予患者低水平的利奥西呱。例如，利奥西呱可以以大于0.0μg至小于250μg的量或之间的任何量来给予和/或存在。

还可以给予患者多种其他的治疗剂。例如，可以给予患者细胞色素p450抑制剂。

还可以给予患者β-肾上腺素能激动剂，包括但不限于β₁-肾上腺素能激动剂、β₂-肾上腺素能激动剂和未表征的β-肾上腺素能激动剂。例如，可以给予患者选自多巴酚丁胺、异丙肾上腺素、扎莫特罗和肾上腺素的β₁-肾上腺素能激动剂；选自沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇、非诺特罗、福莫特罗、异丙肾上腺素(β₁和β₂)、奥西那林、沙美特罗、特布他林、克伦特罗、异他林、吡布特罗、丙卡特罗、利托君和肾上腺素的β₂-肾上腺素能激动剂；和/或选自阿布他明、苯呋洛尔、溴乙酰基阿普洛尔薄荷烷、溴沙特罗、西马特罗、西拉唑啉、地诺帕明、多培沙明、依替福林、海索那林、去甲乌药碱、异克舒令、马布特罗、甲氧那明、布酚宁、奥昔非君、普瑞特罗、雷托巴胺、瑞普特罗、利米特罗、曲托喹酚、妥洛特罗、齐帕特罗和净特罗的未表征的β-肾上腺素能激动剂。

还可以给予患者抗炎性细胞因子，包括但不限于IL-1ra、IL-10、IFN-γ、IFN-β或其任意组合。

还可以给予患者可抑制一种或多种促炎性细胞因子的抗体、抗体片段或抗体模拟物。例如，可以给予患者的抗体片段可以是FAB片段、FAB2片段、Fv片段、ScFv片段、抗体轻链或抗体重链。给予患者的抗体模拟物可包括亲和体(affibody)分子、affilin、affitin、anticalin、高亲和多聚体(avimers)、DARPin、fynomer、Kunitz域肽或单体(monobody)。

在许多情况下，给予患者的治疗剂可以是无类固醇的。

可通过改变刺猬信号途径成员的水平来治疗一些患者的味觉或嗅觉的损失和/或失真，例如，嗅觉减退、嗅觉障碍、嗅觉丧失、幻嗅觉、味觉减退、味觉障碍、幻味觉和/或味觉丧失。例如，可以给予患者有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员。在一些情况下，可以给予患者有效量的刺猬信号途径的一个或多个外来成员。这些成员(例如，RNA或蛋白质)可以通过已知的方法在体外或体内制备。

或者，可通过激活有效量的刺猬信号途径的一个或多个成员的表达，来治疗患者的味觉或嗅觉的损失和/或失真。在一些情况下，可以在体外或体内进行负责刺猬信号途径的一个或多个成员的表达的遗传操作。例如，可以激活启动子区以提高刺猬信号途径的一个或多个成员的表达。这可以包括但不限于诸如基因疗法等方法。在其他情况下，激活的表达可通过治疗剂来实现。此外，该治疗可直接或间接地影响刺猬信号途径的一个或多个成员的水平。

在许多情况下，可以给予患者任意的联合治疗。先前提到的任何治疗剂和/或方法可以两两地或更多地组合给予。在一些情况下，这将产生协同效应。

实施例15：用cGMP激活剂和/或cAMP激活剂治疗疾病

为改善有需要的患者的味觉或嗅觉的损失和/或失真，可以给予患者一种或多种cGMP激活剂、一种或多种cAMP激活剂或其任意组合。

可以给予患者选自下组的cGMP激活剂：3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、YC-1衍生物、邻氨基苯甲酸衍生物、阿他西呱(HMR1766)、苄达明类似物、CFM1517、A-350619、硝基血管扩张剂、吗多明、硝酰基(HNO)、BAY 41-2272、BAY 41-8543、BAY 58-2667、西那西呱(BAY 58-2667)和利奥西呱(BAY 63-2521)。

有时可以给予患者选自下组的cAMP激活剂：3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1-苄基吲唑(YC-1)、胰高血糖素、PDE抑制剂、前列腺素E1(PGE1；药学上称为前列地尔)、毛喉素和β-肾上腺素能激动剂。

在许多情况下，给予患者一种或多种cAMP激活剂和/或一种或多种cAMP激活剂将会改善如此诊断的患者的味觉或嗅觉的损失和/或失真。

在许多情况下，可以给予患者任意的联合治疗。先前提到的任何治疗剂和/或方法可以两种或更多种的组合给予。在某些情况下，这产生协同效应。

实施例16：备选的制剂

可以单独或组合地配制上述治疗剂，使其可以适于通过选自下组的方法来施用：口服施用、跨粘膜施用、口腔施用、吸入施用、鼻内施用、肠胃外施用、静脉内施用、皮下施用、肌肉内施用、舌下施用、透皮施用和直肠施用。在这种情况下，为了方便向目标部位递送，可将治疗剂配制为适于鼻内和口服施用。

可将不同的赋形剂用于不同的制剂。例如，甜味赋形剂可用于掩盖苦味，而粘结料则可用于形成片剂。

可以给予患者适于鼻内和口服施用的液体形式的治疗剂。因为pH可以在功效中发挥作用，所以可以调整该液体治疗剂的pH。例如，该pH可以为约6.0至约8.0，或之间的任意量。

实施例17：用低水平的利奥西呱治疗疾病

表现出肺性高血压例如血栓栓塞性肺动脉高压和肺动脉高压的患者可以用利奥西呱的鼻内制剂来治疗。患有其他疾病如骨相关病症、味觉或嗅觉的损失和/或失真的患者也可以通过利奥西呱的鼻内制剂来治疗。

所述鼻内制剂含有更低量且有时显著低量的利奥西呱。例如，可以给予患者利奥西呱的鼻内制剂，其中利奥西呱可以以大于0.0μg至小于约250μg的量或之间的任何量存在。可以给予其他患者利奥西呱的鼻内制剂，其中利奥西呱可以以约小于250μg至大于0μg的量或之间的任何量存在。

因为用于吸入和/或静脉内制剂的利奥西呱的有效剂量需要显著低量的利奥西呱，所以还可以用利奥西呱的非鼻内的吸入和/或静脉内制剂来治疗某些患者。

在许多情况下，可以给予患者任意的联合治疗。任何上述治疗剂和/或方法可以两种或更多种的组合来给予。在某些情况下，这可以产生协同效应。

实施例18：西洛他唑和罗氟司特治疗期间的音猬蛋白水平

将口服剂量的单独的罗氟司特给予患者，并分离患者的鼻粘液并测量音猬蛋白水平。例如，ID号为11的患者口服给予500微克的daliresp(罗氟司特)，每日一次持续4个月。音猬蛋白水平以6665ng/mol存在，其在采用单独的茶碱治疗所测得的水平之内。

还将口服剂量的单独的西洛他唑给予患者，之后测量鼻粘液音猬蛋白水平。例如，口服给予ID号为7的患者100mg西洛他唑，每日一次，持续4个月。音猬蛋白水平以769ng/mol的平均值存在，其也在先前针对单独的茶碱治疗所测得的水平之内。

同时用口服茶碱和西洛他唑水平的治疗显示了平均值为520ng/mol的音猬蛋白水平。使用口服茶碱和罗氟司特则测得相似的值。虽然就口服茶碱而言，值变化很大，但其全部都显著高于药物施用前。

表34提供了来自这些研究的原始数据。对于以下数据中的术语，“AR”可以指变应性鼻炎。“PIHH”可以指类似流感后嗅觉减退和味觉减退。“C”可以指先天性的。“HI”可以指头部损伤。“A”可以指麻醉诱发的。“I”可以指特发性的。为了保护隐私，遮住患者的姓名。

表34

实施例19：治疗食欲不振

用一种或多种治疗剂治疗表现出食欲不振的患者。例如，采用PDE抑制剂来治疗食欲不振。所述一种或多种PDE抑制剂可以为非选择性PDE抑制剂、PDE-1选择性抑制剂、PDE-2选择性抑制剂、PDE-3选择性抑制剂、PDE-4选择性抑制剂、PDE-5选择性抑制剂、PDE-10选择性抑制剂，或其任意组合。特别地，可以用非选择性PDE抑制剂例如茶碱来治疗患者。

为本研究所选择的受试者是正经历与患有以下疾病有关的食欲不振的受试者：阿狄森病、淀粉样变性、哮喘、癌症、猫抓病、急性淋巴母细胞性白血病、柯萨奇病毒、痴呆、抑郁症、大便失禁、胃食管反流性疾病、胃酸反流、传染性单核细胞增多症、肾功能衰竭、军团病、利氏病、消化性溃疡、产后抑郁症、精神病、类风湿性关节炎、落矶山斑疹热、应激、炭疽病、神经性厌食、恶性贫血、戒酒、偏头痛、维生素B12缺乏、急性高山病、中风、甲状腺疾病、黄热病、肝病、慢性阻塞性肺病、心力衰竭、肝炎、HIV、妊娠、肠病、胃肠道疾病(例如，胆囊疾病、克罗恩病、肠易激综合征、阑尾炎)、脑损伤(例如，创伤导致)、激素(内分泌)疾病、炎症(例如，由慢性感染性或慢性炎性疾病导致)或味觉丧失。作为治疗组的一部分的其他受试者是正经历与服用药物或药品(例如，包括但不限于地高辛、可卡因、可待因、杜冷丁、吗啡、抗生素、苯丙胺类、甲基苯丙胺、化疗剂、常用感冒药和咳嗽及鼻塞减充血剂)有关的食欲不振的受试者。在本研究中所包括的其他受试者是正经历与感染有关的食欲不振的那些受试者，该感染例如是流感、流行性腮腺炎、梅毒、血管炎、贾第虫病、李斯特菌病、AIDS/HIV、肺炎、水痘、脓毒性咽喉炎、黄热病、伤寒、利什曼病、胃肠炎、单核细胞增多症、血吸虫病、猫抓热、柯萨奇病、钩虫病、落矶山斑疹热以及食物中毒～大肠杆菌肠炎。

治疗将根据需要治疗的受试者的疾病和病况严重程度而变化。医师将确定PDE抑制剂或其他可有效治疗食欲不振的药物的合适剂量。

在使用一种或多种治疗剂治疗例如PDE抑制剂治疗(如通过茶碱治疗)后，治疗后的体重将从治疗前水平增加。

虽然本文已经示出和描述了本发明的优选实施方案，但对本领域技术人员而言将明显的是，这样的实施方案可以仅以实例的方式提供。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员现将想到多种变化、改变和替代。应当理解，本文所述的本发明实施方案的各个替代方案均可用于实施本发明。