一种阿力甜标准物质制备方法与流程

本发明涉及阿力甜标准物质制备方法，属于化合物提取纯化领域。

背景技术：
甜味剂是食品工业的重要原料,也是制药工业的辅料。蔗糖、葡萄糖是常用的天然甜味剂。然而,由于糖分所蕴含的热量较高,易使食者发胖,容易诱发许多疾病,如心血管病和糖尿病；也易发酵产酸,损坏牙齿,故不论是儿童、成年人或老年人均不宜多吃。为此,各种合成甜味剂便得以开发,主要针对低热量、高甜度、对人体安全、稳定性好、便于食品加工等特点,更已成为人们生活中不可缺少的食品添加剂。阿力甜是一种二肽类甜味剂，甜度为蔗糖的2000倍以上，在酸、热等条件下均十分稳定，甜味清爽、耐热耐酸耐碱(在酸、热等条件下均十分稳定)，具有优越的贮存和加工稳定性，可广泛用于食品工业。目前国内尚没有该化合物的标准物质，为了满足相关产品的分析检测、质量控制工作的需求，保证检测结果的准确性、可比性和溯源性，急需制备阿力甜标准物质。阿力甜(Alitame)是一种以L-天冬氨酸与D-丙氨酸化合物组成的二肽酰胺。其化学名称为L-α-天冬氨酸-N-(2,2,4,4-四甲基-3硫化三亚甲基)-D-丙氨酰胺，属新一代高强度低热量甜味剂。它具有蔗糖的甜味和风味,还具有甜度高、稳定性好、热量低、溶解度高、物理性能好和安全性高的特点。从物理方面来看,它是一种白色、无臭的结晶性粉末,带有强力甜味。其熔融点为100℃(慢速加热),再凝固点为102℃,熔融分解温度则是136-137℃；而且溶解性高,易溶于水(l3％w/v)、乙醇(61％w/v)、5％水溶液,其PH值约为5.6。截至目前，国内尚未有研究机构能够提供阿力甜标准物质及其制备方法，而进口国外生产的阿力甜标准物质存在费用高昂、手续繁琐、到货周期长等问题，因此为阿力甜含量测定制备相应标准物质尤为必要。

技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种阿力甜标准物质制备方法，制备工艺简单、制备速度快、能够获得高纯度。为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：一种阿力甜标准物质制备方法，其特征在于：包括以下各步骤：(1)供试品溶液的制备：将阿力甜原料溶于水并采用超声溶解，然后经0.22μm或0.45μm滤膜过滤，得供试品溶液；(2)液相色谱制备：将供试品溶液注入制备色谱分离纯馏分，其中色谱条件：色谱柱为PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm,5μm)，或WatersXTerraRP18(250mm×20mm,5μm)；流动相：40％(v/v)甲醇水溶液；流速：5～15mL/min；柱温：30℃；运行时间：15min；检测波长：210nm，进样量0.1～1mL，收集4.5～9min的馏分；(3)收集：馏分接收于预先氮气填充的外壁包裹锡箔纸的棕色瓶中，然后加入少量盐酸中和至pH7，干燥后得阿力甜标准物质。优选地，步骤(1)中所述阿力甜原料为工业级阿力甜染料。更优选地，步骤(2)中流速：10mL/min，进样量0.1-1mL，收集7.5～9min的馏分。更优选地，步骤(3)中的干燥为采用减压蒸馏的方法吹去全部液态水，然后置于冻干机-60～-40℃中冻干20～30小时，冻干后的阿力甜固体碾磨粉碎后，再次冻干20～30小时，得阿力甜标准物质。更优选地，步骤(3)中的干燥为采用减压蒸馏的方法吹去全部液态水，然后置于冻干机-50℃中冻干24小时，冻干后的阿力甜固体碾磨粉碎后，再次冻干24小时，得阿力甜标准物质。更优选地，阿力甜固体采用棕色样品瓶进行分装，用带有聚四氟乙烯内衬的黑色瓶盖加封，并采用塑料袋独立真空塑封，放在-18℃冰箱中保存。有效期为1年。阿力甜标准物质可用于食品中非法色素添加的定性定量检测。本发明的有益效果：本发明旨在提供一种经济、快速、有效的阿力甜标准物质制备方法，能够弥补我国在阿力甜标准物质研制方面的技术空白；同时本发明将解决进行食品中阿力甜定量检测研究时缺少标准物质的难题。本发明采用半制备型液相色谱系统，制备分离出的阿力甜标准样品，纯度高，工艺简单，制备速度快，产品质量稳定，均匀性好，能够获得高纯度(99％以上)，明显优于现有技术中采用重结晶获得产物的纯度为95％，所涉及的溶剂无污染，可实现清洁生产。附图说明图1为阿力甜的红外光谱图；图2为阿力甜正离子模式下质谱图；图3为阿力甜负离子模式下质谱图；图4为阿力甜紫外光谱图；图5为阿力甜的1H-NMR图谱；图6为阿力甜的13C-NMR图谱。具体实施方式以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。实施例1一种阿力甜标准物质制备方法，包括以下各步骤：(1)阿力甜溶液的制备：制备阿力甜标准物质的原料为工业级阿力甜，将阿力甜原料溶于水并采用超声溶解，然后经0.22μm滤膜过滤，得阿力甜溶液；(2)液相色谱制备：将阿力甜溶液注入制备色谱分离纯馏分，其色谱条件为色谱柱为PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm,5μm)；流动相：40％(v/v)甲醇水溶液；流速：10mL/min；柱温：30℃；运行时间：15min；检测波长：210nm，进样量0.2mL，收集7.5-9min之内的馏分；(3)馏分收集：馏分接收于预先氮气填充的外壁包裹锡箔纸的棕色瓶中,然后加入少量盐酸中和至pH7；(4)干燥：馏分置于旋转蒸发仪采用减压蒸馏的方法于55℃-75℃下，然后置于冻干机-50℃中冻干24小时，冻干后的阿力甜固体碾磨粉碎后，再次冻干24小时已尽量去除游离水，得阿力甜标准物质；经测定，该标准物质纯度为99.4％。(5)保存：在相对独立和洁净手套箱内对制备的纯阿力甜固体采用2mL棕色样品瓶进行分装，用带有聚四氟乙烯内衬的黑色瓶盖加封，并采用塑料袋独立真空塑封。本实施例制备的阿力甜红外光谱见图1，正离子模式下质谱见图2，负离子模式下质谱见图3，紫外光谱见图4，1H-NMR图谱见图5，13C-NMR图谱见图6.实施例2一种阿力甜标准物质制备方法，包括以下各步骤：(1)供试品溶液的制备：制备阿力甜标准物质的原料为工业级阿力甜，将阿力甜原料溶于水并采用超声溶解，然后经0.22μm滤膜过滤，得供试品溶液；(2)液相色谱制备：将阿力甜初提液注入制备色谱分离纯馏分，其色谱条件为色谱柱为WatersXTerraRP18(250mm×20mm,5μm)；流动相：40％(v/v)甲醇水溶液；流速：10mL/min；柱温：30℃；运行时间：15min；检测波长：210nm，进样量0.5mL收集4.5-5.5min之内的馏分；(3)收集：馏分接收于预先氮气填充的外壁包裹锡箔纸的棕色瓶中,然后加入少量盐酸中和至pH7；(4)干燥：馏分置于旋转蒸发仪采用减压蒸馏的方法于55℃-75℃下，去除全部液态水，然后置于冻干机-50℃中冻干24小时，冻干后的阿力甜固体碾磨粉碎后，再次冻干24小时已尽量去除游离水，得阿力甜标准物质；经测定，该标准物质纯度为99.2％。(5)保存：在相对独立和洁净手套箱内对制备的纯阿力甜固体采用2mL棕色样品瓶进行分装，用带有聚四氟乙烯内衬的黑色瓶盖加封，并采用塑料袋独立真空塑封。实施例3一种阿力甜标准物质制备方法，包括以下各步骤：(1)供试品溶液的制备：制备阿力甜标准物质的原料为工业级阿力甜，将阿力甜原料溶于水并采用超声溶解，然后经0.22μm滤膜过滤，得供试品溶液；(2)液相色谱制备：将阿力甜初提液注入制备色谱分离纯馏分，其色谱条件为色谱柱为PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm,5μm)；流动相：60％(v/v)甲醇水溶液；流速：10mL/min；柱温：30℃；运行时间：15min；检测波长：210nm，进样量0.5mL收集7.5-9min之内的馏分；(3)收集：馏分接收于预先氮气填充的外壁包裹锡箔纸的棕色瓶中,然后加入少量盐酸中和至pH7；(4)干燥：馏分置于旋转蒸发仪采用减压蒸馏的方法于55℃-75℃下，去除全部液态水，然后置于冻干机-50℃中冻干24小时，冻干后的阿力甜固体碾磨粉碎后，再次冻干24小时已尽量去除游离水，得阿力甜标准物质；经测定，该标准物质纯度为99.3％。(5)保存：在相对独立和洁净手套箱内对制备的纯阿力甜固体采用2mL棕色样品瓶进行分装，用带有聚四氟乙烯内衬的黑色瓶盖加封，并采用塑料袋独立真空塑封。实施例4本实施例与实施例1的不同之处为：流速：5mL/min，收集14.8-16.5min之内的馏分；；获得标准物质纯度为98.7％。实施例5本实施例与实施例1的不同之处为：流速：15mL/min，收集5.4-6.6min之内的馏分。获得标准物质纯度为99.2％。最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。