一种尿酸生化分析干片及其制备方法和试剂盘与流程

本发明涉及医疗检测领域，特别涉及一种尿酸生化分析干片及其制备方法和试剂盘。
背景技术：
：对人的体液或血液的医疗检测手段，能够为临床上对疾病的诊断、治疗以及是否健康状态提供非常有利的信息依据。现有医疗场所例如医院、诊所等，对现有人体生化项目例如尿酸等项目的测定，通常采用例如比色法或间接法。比色法因其测量精度，准确度等与所要求的相差太大，此法在医学的早期实验室检查中使用，已经是属于淘汰的用法。而间接法中，为防检测仪器内部被堵塞，对样品的要求极为严格，需经常规分离再经稀释后方可测量，而一般稀释倍数大都在30倍左右，在如此大的稀释倍数下，对管路确是有益，但从数据统计处理角度来看，这样的测量，将会把误差同比例放大，那么这样测到的结果，准确度和精确度不能达到要求。另外，采用这种方式检测的仪器，由于对样品进行常规分离再经稀释后方可测量，需要包含纯水稀释部件，因而仪器体积较大，无法移动，只能由专业检测师在专业的实验室中完成，从取样、送样和检测过程来看，耗时较长，对于一些对检测时效性要求较高的场合，例如急救、家庭全科医生去患者家中问诊等场合等无法适用。技术实现要素：鉴于上述问题，提出了本发明以便提供一种克服上述问题或者至少部分地解决上述问题的一种尿酸生化分析干片及其制备方法和试剂盘。第一方面，本发明实施例提供一种尿酸生化分析干片，从上到下依次包括：分散层、反射层、衔接层、试剂层和支持层；其中：所述支持层为光学透明基材；所述试剂层主要由尿酸酶、过氧化物酶、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑、表面活性剂和固定剂构成；所述衔接层主要由聚n-异丙基稀酰胺构成；所述反射层主要由白色反光材料构成；所述分散层主要由粘合的多孔微粒以及表面活性剂构成。在一个实施例中，所述试剂层包括：尿酸酶、过氧化物酶、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑、表面活性剂和固定剂；所述衔接层为聚n-异丙基稀酰胺；所述反射层为白色反光材料；所述分散层为粘合的多孔微粒以及表面活性剂。在一个实施例中，所述试剂层中各组分的含量为：尿酸酶不小于0.018u/cm2、过氧化物酶不小于0.4u/cm2、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑不小于1×10-2mg/cm2、表面活性剂3.2～4.2×10-2mg/cm2和固定剂1.9～2.4mg/cm2。在一个实施例中，所述固定剂包括：明胶、亲水纤维素衍生物、葡聚糖、琼脂糖、聚乙烯醇和聚丙烯酰胺中的任一种或者上述任意多种组合。在一个实施例中，所述衔接层中聚n-异丙基稀酰胺的含量为2×10-2～5×10-2mg/cm2。在一个实施例中，所述反射层中白色反光材料包括：二氧化钛、硫酸钡或者二者混和物，所述反射层的厚度为10～500μm。在一个实施例中，所述分散层中的多孔微粒为二氧化钛、硫酸钡、氧化锌、氧化铅、硅藻土、微晶纤维素或其中任意几种混合物的微粒。在一个实施例中，所述微粒之间通过醋酸纤维粘合。在一个实施例中，所述微粒的直径为1-7μm，所述分散层的层厚30～500μm，孔隙率25％～95％。在一个实施例中，所述多孔微粒为二氧化钛时，所述二氧化钛和表面活性 剂的质量比为：200:1～30:1。在一个实施例中，所述光学透明基材为玻璃、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯或者聚酯。在一个实施例中，所述尿酸生化分析干片还包括：上外框和下外框，所述上外框位于所述分散层之上，所述下外框位于所述支持层之下，且所述上外框和下外框之间粘接。第二方面，本发明实施例提供一种试剂盘，该试剂盘上有至少一个前述尿酸生化分析干片。第三方面，本发明实施例提供一种尿酸生化分析干片的制备方法，包括：将尿酸酶、过氧化物酶、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑、表面活性剂和固定剂溶解于缓冲液之中，将生成的混合物涂覆于光学透明基材上，冷冻干燥后生成试剂层；将聚n-异丙基稀酰胺水溶液涂覆于所述试剂层上形成衔接层；在所述衔接层上涂覆白色反光材料形成反射层；将粘合剂和表面活性剂与二氧化钛、硫酸钡、氧化锌、氧化铅、硅藻土、微晶纤维素或其中任意几种混合物的微粒进行混合，并将混合后的微粒置于有机溶剂中，涂覆于反射层上，待有机溶剂挥发后形成分散层。在一个实施例中，上述尿酸生化分析干片的制备方法还包括：待所述试剂层、衔接层、反射层和分散层干燥后，将各层固定于上下外框之中；粘接上下外框。本发明实施例提供的上述技术方案的有益效果至少包括：本发明实施例提供的尿酸生化分析干片及其制备方法和试剂盘的技术方案中，尿酸生化分析干片为多层涂膜的干化学试剂，不含液体，全部试验所需的物品都包含在一片干性试剂中，环保且易于保存和携带，并且稳定时间较长，所需的标本量较少，同时，又保留了传统的生化反应方法，检测的化学反应与 传统的生化的模式或原理相同，提高了系统的溯源性，保证检测结果的准确性。同时，由于尿酸生化分析干片的上述特点，使得使用尿酸生化分析干片和安装有该尿酸生化分析干片的试剂盘的检测仪可以不用使用生物化学需要使用的纯水，简化了传统检测仪的检测过程，使得检测仪在保证检测结果精确性的同时可以小型化，便于携带，从而缩短从采样、送样和检测整个过程耗费的时间，可以实现在临床科室的病床旁检测、家庭全科医生在患者家中检测，急救等时间紧急度要求较高的场合。本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在所写的说明书、权利要求书、以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。附图说明附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：图1为本发明实施例中提供的标本浓度与检测仪检测到的反射响应电压值的回归线性图。图2为本发明实施例提供的光学检测机构与尿酸生化分析干片的结构示意图。具体实施方式下面将参照附图更详细地描述本公开的示例性实施例。虽然附图中显示了本公开的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。本发明实施例提供了一种尿酸生化分析干片，从上到下依次包括：分散层、反射层、衔接层、试剂层和支持层；其中：所述支持层为光学透明基材；所述试剂层主要由尿酸酶、过氧化物酶、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑、表面活性剂和固定剂构成；所述衔接层主要由聚n-异丙基稀酰胺构成；所述反射层主要由白色反光材料构成；所述分散层主要由粘合的多孔微粒以及表面活性剂构成。进一步地，上述试剂层包括：尿酸酶、过氧化物酶、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑、表面活性剂和固定剂；上述衔接层为聚n-异丙基稀酰胺；上述反射层为白色反光材料；上述分散层为粘合的多孔微粒以及表面活性剂。尿酸生化分析干片的检测原理为：当待检测的样本滴于尿酸生化分析干片上时，通过分散层均匀地分布到下一层，样本中的尿酸迁移到试剂层，在尿酸酶的作用下，被氧化形成尿囊素和过氧化氢，然后，过氧化氢在过氧化酶作用下氧化无色染剂，生成有色染料，通过对有色染料的反射光强进行检测，最终可以分析出尿酸生化浓度。试剂层反应原理如下：上述分散层主要作用是形成分子筛，让样品在重力的作用下均匀分布并下渗，对试验无关的干扰物也在本层被过滤掉。上述试剂层含有多种干性粉末试剂，由于样品是受到重力向下运动的，试剂层的结构可以有效地控制反应过程。试剂层含有干性染料，检测在这里最终发生颜色变化，并被固定在这一层，以便检测光路检测。上述衔接层是一层凝胶类的物质，其作用是阻止反应后的显色层试剂向其 他层扩散。上述支持层是一层光学透明基材，允许检测的光线通过，并起到支撑上述各层的作用。光学透明基材例如可以为玻璃、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯或者聚酯。在一个实施例中，试剂层中各组分的含量可以有多种，例如下述几种：尿酸酶0.022u/cm2、过氧化物酶0.4u/cm2、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑2×10-2mg/cm2、表面活性剂3.2×10-2×10-2mg/cm2和固定剂2.4mg/cm2。尿酸酶0.018u/cm2、过氧化物酶0.8u/cm2、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑1×10-2mg/cm2、表面活性剂4.2×10-2mg/cm2和固定剂1.9mg/cm2。尿酸酶0.022u/cm2、过氧化物酶0.8u/cm2、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑2×10-2mg/cm2、表面活性剂4.2×10-2mg/cm2和固定剂2.4mg/cm2。尿酸酶0.018u/cm2、过氧化物酶0.4u/cm2、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑1×10-2mg/cm2、表面活性剂3.2×10-2mg/cm2和固定剂1.9mg/cm2。尿酸酶0.02u/cm2、过氧化物酶0.6u/cm2、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑1.4×10-2mg/cm2、表面活性剂3.9×10-2mg/cm2和固定剂2.17mg/cm2。上述试剂层中各组分的含量并不限于上述例子，以上只是示例而已。在一个实施例中，上述固定剂包括：明胶、亲水纤维素衍生物、葡聚糖、琼脂糖、聚乙烯醇和聚丙烯酰胺中的任一种或者上述任意多种组合。表面活性剂在试剂层中可以起到润湿、乳化、分散等作用，促进样本充分、快速与反应物质发生化学反应。上述2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑为无 色染剂。样品进入试剂层后，发生显色反应，其颜色变化与样品中尿酸浓度成比例，从而通过显色反应能够最终检测到样品中的尿酸浓度。在一个实施例中，衔接层中聚n-异丙基稀酰胺的含量为2×10-2～5×10-2mg/cm2。较佳地，上述聚n-异丙基稀酰胺的含量为3×10-2mg/cm2。在一个实施例中，反射层上可以是任何具有高反射系数(例如反射系数在95％以上)的白色物质，上述白色反光材料包括：二氧化钛、硫酸钡或者二者混和物，反射层的厚度为10～500μm。较佳地，上述反射层的厚度为50～300μm。在一个实施例中，分散层中的多孔微粒为二氧化钛、硫酸钡、氧化锌、氧化铅、硅藻土、微晶纤维素或其中任意几种混合物的微粒。这些微粒形成的网状结构，可以帮助样本液体快速、均匀地分散到下层。分散层中的二氧化钛、硫酸钡、氧化锌等物质，一方面可以起到掩盖样品中有色物质的作用，使反射光的测定不受影响，另一方面，这些反光物质，也可以为反射层提供反射背景。分散层的各种微粒可以添加表面活性剂并通过适当量的粘和剂粘合，例如采用醋酸纤维粘合。分散层的微粒的直径为1-7μm，所述分散层的层厚30～500μm，孔隙率25％～95％。多孔微粒为二氧化钛时，二氧化钛和表面活性剂的质量比为：200:1～30:1。为了方便保存、运输，上述尿酸生化分析干片还可以包括：上外框和下外框，上外框位于分散层之上，下外框位于支持层之下，且上外框和下外框之间粘接。本发明实施例提供的尿酸生化分析干片在使用时可以固定安装于试剂盘上，该试剂盘可用于一种小型化的多功能的检测仪中，试剂盘安装于检测仪中之后，对尿酸生化分析干片进行加样，然后37℃下孵育时间大约5分钟，然后 在试剂盘的下方的光学检测机构会在试验要求的时间用相应波长滤镜(例如尿酸项目为波长670nm的滤镜)对试剂盘内尿酸生化分析干片显色层的颜色进行判读(读取反射光强度)，判读时进行一次或者多次读取，尿酸项目为终点法，最终得到反射光强度转换的反射响应电压值，根据该反射响应电压值经过检测仪的最终计算得到尿酸检测结果值。图2是尿酸生化分析干片与检测仪中光学检测机构的结构示意图，在光学检测开始时，发光部的灯泡201发出全波段的光透过第一汇聚透镜202，经过反射透镜203滤掉无用的红外波长光，反射后透过第二汇聚透镜204，汇聚在特定试剂盘的尿酸生化分析干片3上，尿酸生化分析干片3反射出的光线经过物镜205、滤光轮206得到特定波长的反射光，该反射光透过第三汇聚透镜207后投射到采光部(光电池等)208，采光部将光强信号转化为反射响应电压信号，通过一系列分析后，得出尿酸的浓度。之前需要对尿酸项目检测项目进行定标。定标过程如下：用已知浓度的定标液在检测仪上完成定标。定标液包含待测物质的3-5个水平的浓度，在设备上分别读出相应的反射光强度，每个水平读取3-5次取平均值。以尿酸项目为例如下：ln(检测仪电压值)＝k*ln(标本浓度)+b(检测仪电压值即反射响应电压值)标本浓度检测仪电压值ln(标本浓度)ln(检测仪电压值)29.72.20563.3911470460.7909995812232.10495.4071717710.74426796338.92.07565.8257050790.7302502695952.04596.3885614060.71583779959.92.02346.8668291120.704779265参照图1所示，定标后得到标本浓度与检测仪检测到的反射响应电压值的回归线性图。根据上述定标数据进行如下计算：0.79＝3.68k+b0.73＝5.83k+b0.70＝6.86k+b得到k＝-0.0279b＝0.8927该项目本批次的定标曲线为ln(反射响应电压值)＝-0.0279*ln(标本浓度)+0.8927定标成功后，检测仪根据具体试验标本得到的反射响应电压值，带入上述的定标曲线中运算，变可得到标本中的尿酸浓度值：例如：测量电压值r＝2.0628lnr＝0.7241ln(标本浓度)＝(0.7241-0.8927)/(-0.0279)标本浓度＝e^ln(标本浓度)＝422mmol/l。本发明实施例提供的尿酸生化分析干片，为多层涂膜的干化学试剂，不含液体，全部试验所需的物品都包含在一片干性试剂中，环保且易于保存和携带，并且稳定时间较长，所需的标本量较少，同时，又保留了传统的生化反应方法，检测的化学反应与传统的生化的模式或原理相同，提高了系统的溯源性，保证检测结果的准确性。本发明实施例还提供了一种试剂盘，该试剂盘上有至少一个上述尿酸生化分析干片。上述尿酸生化分析干片和安装有该尿酸生化分析干片的试剂盘，由于尿酸生化分析干片的上述特点，使得使用尿酸生化分析干片和安装有该尿酸生化分析干片的试剂盘的检测仪可以不用使用生物化学需要使用的纯水，简化了传统检测仪的检测过程，使得检测仪在保证检测结果精确性的同时可以小型化，便于携带，从而缩短从采样、送样和检测整个过程耗费的时间，可以实现在临床科室的病床旁检测、家庭全科医生在患者家中检测，急救等时间紧急度要求较高的场合。本发明实施例还提供了一种尿酸生化分析干片制备方法，包括下述步骤：s1、将尿酸酶、过氧化物酶、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二 甲基胺基苯基)咪唑、表面活性剂和固定剂溶解于缓冲液之中，将生成的混合物涂覆于光学透明基材上，冷冻干燥后生成试剂层；s2、将聚n-异丙基稀酰胺水溶液涂覆于试剂层上形成衔接层；s3、在衔接层上涂覆白色反光材料形成反射层；s4、将粘合剂和表面活性剂与二氧化钛、硫酸钡、氧化锌、氧化铅、硅藻土、微晶纤维素或其中任意几种混合物的微粒进行混合，并将混合后的微粒置于有机溶剂中，涂覆于反射层上，待有机溶剂挥发后形成分散层。上述尿酸生化分析干片的制备方法，在步骤s4之后，还可以执行下述步骤：s5、待所述试剂层、衔接层、反射层和分散层干燥后，将各层固定于上下外框之中；s6、粘接上下外框。以一个具体的例子说明上述尿酸生化分析干片的制备方法，该例子以100cm2尿酸生化分析干片为例，该制备方法包括下述各步骤：s1′、准备基材，基材可采用任何光学透明材料，比如玻璃、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚酯。s2′、制备混合物溶液：尿酸酶(candidautilis,e.c.1.7.3.3)2u、过氧化物酶(horseradishroot,e.c.1.11.1.7)60u、2-(3,5-二甲氧基-4-羟苯基)-4,5-对(4-二甲基胺基苯基)咪唑1.4mg、表面活性剂3.9mg、明胶217mg(或可在水中溶胀形成水凝胶的任何物质，如亲水纤维素衍生物、葡聚糖、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺)。以上混合物溶解于10～300ml的ph8.7的硼酸-硼酸钠缓冲液中。缓冲液采用其他类型的缓冲液也可。s3′、将上述混合物溶液涂覆(如直接涂布法、喷涂、刮涂)于基材上，冷冻干燥后形成试剂层。s4′、将3mg聚n-异丙基丙烯酰胺溶解于一定量的水中，形成0.1～0.8g/ml 的聚n-异丙基丙烯酰胺水溶液，涂敷于试剂层上升温至32℃以上形成衔接层。s5′、在衔接层上直接涂敷任何具有高反射系数(95％及以上)的白色物质(如二氧化钛、硫酸钡及二者混和物)形成反射层，厚度10～500μm。s6′、以二氧化钛、硫酸钡、氧化锌、氧化铅、硅藻土、微晶纤维素或其任意几种混合物制备直径1～7μm的微粒，层厚30～500μm，孔隙率25％～95％。加入醋酸纤维素(二氧化钛/醋酸纤维素比例为10:1～3:1，质量比m/m)、表面活性剂(二氧化钛/表面活性剂为200:1～30:1，质量比m/m)，与微粒混合后置于丙酮、二甲苯、二氯乙烷或四氢呋喃的混合溶剂中，涂敷于反射层上，溶剂挥发后即形成分散层。s7′、待上述各层干燥后，将其固定于上下外框中，并粘接，干燥后得到尿酸生化分析干片。外框可采用高分子材料，例如聚丙烯、聚氯乙烯、聚乙烯或聚酯等。显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。当前第1页12