一种基于单分子定位法的超分辨光学成像方法与流程

文档序号:13175412阅读:来源:国知局
技术特征:
1.一种基于单分子定位法的超分辨光学成像方法,用以观察肿瘤细胞外泌体与正常细胞的相互作用过程,其特征在于:包括如下步骤:(1)利用试剂盒提取肿瘤细胞外泌体;(2)使用第一荧光分子和第二荧光分子分别标记肿瘤细胞外泌体膜和肿瘤细胞外泌体膜表面受体,同时使用第三荧光分子染色正常细胞膜;所述肿瘤细胞外泌体膜表面受体为肿瘤细胞外泌体膜表面的一种特异性肿瘤标志物;(3)通过基于单分子定位法的超分辨光学显微镜观察肿瘤细胞外泌体与正常细胞的相互作用过程;其中,肿瘤细胞外泌体膜和正常细胞膜通过全内反射显微成像,肿瘤细胞外泌体膜表面受体通过超分辨光学显微成像。2.根据权利要求1所述的基于单分子定位法的超分辨光学成像方法,其特征在于:所述第一荧光分子、第二荧光分子和第三荧光分子均为具有荧光闪烁效应的、适用于单分子定位超分辨光学成像的荧光分子,且第一荧光分子、第二荧光分子和第三荧光分子的荧光发射光谱重叠率低于设定阈值;第一荧光分子为亲脂性荧光染料,第二荧光分子通过间接免疫荧光法标记在肿瘤细胞外泌体膜表面受体上,第三荧光分子为膜染料。3.根据权利要求1所述的基于单分子定位法的超分辨光学成像方法,其特征在于:所述步骤(2)具体包括如下步骤:(21)在提取出的肿瘤细胞外泌体溶液中,加入与肿瘤细胞外泌体膜表面受体特异性的一抗并进行免疫识别反应,超滤提纯去除过量的一抗;(22)在连接了一抗并超滤提纯后的肿瘤细胞外泌体溶液中,加入能特异性识别所述一抗的二抗并进行免疫识别反应,超滤提纯去除过量的二抗,所述二抗偶联了第二荧光分子;(23)使用第一荧光分子标记肿瘤细胞外泌体膜;(24)使用第三荧光分子染色正常细胞膜。4.根据权利要求1所述的基于单分子定位法的超分辨光学成像方法,其特征在于:所述步骤(3)具体包括如下步骤:(31)将使用第一荧光分子和第二荧光分子标记完成的肿瘤细胞外泌体与使用第三荧光分子染色好的正常细胞共同培养一段时间,确保肿瘤细胞外泌体与正常细胞发生相互作用;(32)将发生相互作用的肿瘤细胞外泌体与正常细胞作为观测样品,固定观测样品;(33)在固定好的观测样品中加入单分子定位成像所需的成像缓冲液,进行超分辨光学成像,并分析肿瘤细胞外泌体与正常细胞相互作用的过程。
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