7‑氟‑4‑羟基喹唑啉的分析检测方法与流程

本发明涉及一种高效液相色谱分析方法，尤其是7-氟-4-羟基喹唑啉的分析检测方法。

背景技术：

阿法替尼为苯胺奎那唑啉化合物，是一种不可逆的egfr-her2双重酪氨酸激酶受体抑制剂，它能不可逆的与egfr-her2酪氨酸激酶结合，抑制其酪氨酸激酶活性，进而阻断egfr-her2主导的肿瘤细胞信号传导，抑制肿瘤细胞的转移与增殖，促进肿瘤细胞的凋亡。

7-氟-4-羟基喹唑啉是合成阿法替尼的重要中间体之一，其化学式为c8h5fn2o，结构式为：

文献中尚未记载该中间体的分析检测方法，但该中间体的分析检测对反应控制和收率提高有着重要的作用，同时也直接影响着终产品阿法替尼的质量，所以建立一种稳定有效的分析检测方法对该中间体进行质量控制是非常必要的。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种7-氟-4-羟基喹唑啉的分析检测方法，用于7-氟-4-羟基喹唑啉的质量控制。

为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验，最终获得如下技术方案：

7-氟-4-羟基喹唑啉的分析检测方法，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以0.05～0.15％磷酸水溶液(体积比)为流动相a，以乙腈为流动相b，进行梯度洗脱，包括以下步骤：

a、取7-氟-4-羟基喹唑啉适量，加溶剂溶解，配制成每1ml含7-氟-4-羟基喹唑啉0.041～0.311mg的样品溶液；

b、设置流动相流速为0.7～1.1ml/min，检测波长247nm，柱温为25～35℃；

c、取a的样品溶液10μl注入液相色谱仪，执行梯度洗脱程序，完成7-氟-4-羟基喹唑啉的分析检测；

所述色谱柱的规格为c18，4.6×250mm，3μm。

以体积比计，所述的梯度洗脱设置如下：

进一步的，梯度洗脱的设置优选为：

所述的流动相a优选为0.1％磷酸水溶液。

所述的溶剂是由0.1％磷酸水溶液：乙腈按体积比90:10组成。

所述的样品溶液浓度优选为0.2mg/ml。

所述流动相的流速优选为1.0ml/min，柱温优选为30℃。

实施例中对本发明的方法进行了详细说明，并对本发明的方法进行了方法验证，结果证明：本发明涉及的分析检测方法，可以有效的将7-氟-4-羟基喹唑啉及其杂质分开，而且该方法分离度及灵敏度高，重复性及耐用性好，分析时间短，操作简单，结果稳定可靠，从而可用于7-氟-4-羟基喹唑啉的质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。

附图说明

图1实施例1的7-氟-4-羟基喹唑啉hplc图谱。

图2实施例2的7-氟-4-羟基喹唑啉hplc图谱。

图3实施例3的7-氟-4-羟基喹唑啉hplc图谱。

图4实施例8的7-氟-4-羟基喹唑啉线性工作曲线。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步的描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

实施例1

仪器与条件：agilent1260液相色谱系统，色谱柱：welchultimatexb-c18(4.6×250mm，3μm)，检测波长247nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，以0.1％磷酸水溶液(体积比)为流动相a，以乙腈为流动相b，以体积比计，梯度洗脱的设置为：

实验步骤：将7-氟-4-羟基喹唑啉用体积比90:10的0.1％磷酸水溶液和乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中含7-氟-4-羟基喹唑啉0.2mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1。

附图1表明，在该色谱条件下，7-氟-4-羟基喹唑啉峰和杂质峰可以完全分离，且峰形较好，分离度较高，7-氟-4-羟基喹唑啉峰的保留时间在13.839min，分离度3.55。

实施例2

仪器与条件：agilent1260液相色谱系统，色谱柱：welchultimatexb-c18(4.6×250mm，3μm)，检测波长247nm，柱温30℃，流速0.7ml/min，以0.05％磷酸水溶液(体积比)为流动相a，以乙腈为流动相b，以体积比计，梯度洗脱的设置为：

实验步骤：将7-氟-4-羟基喹唑啉用体积比90:10的0.1％磷酸水溶液和乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中含7-氟-4-羟基喹唑啉0.2mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2。

附图2表明，在该色谱条件下，7-氟-4-羟基喹唑啉峰和杂质峰可以完全分离，且峰形较好，分离度较高，7-氟-4-羟基喹唑啉峰的保留时间在14.389min，分离度2.87。

实施例3

仪器与条件：agilent1260液相色谱系统，色谱柱：welchultimatexb-c18(4.6×250mm，3μm)，检测波长247nm，柱温30℃，流速1.1ml/min，以0.15％磷酸水溶液(体积比)为流动相a，以乙腈为流动相b，以体积比计，梯度洗脱的设置为：

实验步骤：将7-氟-4-羟基喹唑啉用体积比90:10的0.1％磷酸水溶液和乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中含7-氟-4-羟基喹唑啉0.2mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图3。

附图3表明，在该色谱条件下，7-氟-4-羟基喹唑啉峰和杂质峰可以完全分离，且峰形较好，分离度较高，7-氟-4-羟基喹唑啉峰的保留时间在12.995min，分离度3.53。

实施例4

系统适用性实验

仪器与条件：同实施例1。

实验步骤：取本品适量，精密称定，用体积比90:10的0.1％磷酸水溶液和乙腈溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，连续进样六次，分别计算7-氟-4-羟基喹唑啉峰峰面积以及保留时间的相对标准偏差，实验结果见表1。

表17-氟-4-羟基喹唑啉系统适用性实验结果

由表1可知，7-氟-4-羟基喹唑啉峰的对称因子均小于1.5，理论板数均高于3000，峰面积的相对标准偏差为0.073％(限度2.0％)，保留时间的相对标准偏差为0.142％(限度1.0％)。可见，该色谱条件下，7-氟-4-羟基喹唑啉峰峰形较好，而且相对标准偏差较小，所得结果稳定可靠。

实施例5

重复性实验

仪器与条件：同实施例1。

实验步骤：取本品适量，精密称定，用体积比90:10的0.1％磷酸水溶液和乙腈溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液，同法配制6份供试品溶液。取供试品溶液，依本方法测定，按面积归一化法计算7-氟-4-羟基喹唑啉含量，并计算其相对标准偏差，实验结果见表2。

表27-氟-4-羟基喹唑啉重复性实验结果

由表2可知，各供试品溶液中7-氟-4-羟基喹唑啉的含量没有明显差异，相对标准偏差为0.001％，可见本分析检测方法的重复性良好。

实施例6

耐用性实验

仪器与条件：agilent1260液相色谱系统，色谱柱：welchultimatexb-c18(4.6×250mm，3μm)，检测波长247nm，流动相同实施例1。

实验步骤：取本品适量，精密称定，用体积比90:10的0.1％磷酸水溶液和乙腈溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液。分别通过改变柱温、流速和柱子批次，记录7-氟-4-羟基喹唑啉含量的变化情况(按面积归一化法计算)，实验结果见表3。

表37-氟-4-羟基喹唑啉耐用性实验结果

由表3可知，改变柱温、流速和柱子批次后，7-氟-4-羟基喹唑啉含量的测定结果没有明显差异，可见本发明分析检测方法的耐用性良好。

实施例7

检测限

仪器与条件：同实施例1。

取7-氟-4-羟基喹唑啉约10mg，精密称定，置50ml量瓶中作为储备液。加体积比90:10的0.1％磷酸水溶液和乙腈溶解，采用逐步稀释法，以s/n≈3时的浓度作为检测限浓度，此时7-氟-4-羟基喹唑啉的浓度为0.01773μg/ml，检测限为0.1773ng。可见本方法及仪器的灵敏度较高。

实施例8

线性与范围

仪器与条件：同实施例1。

实验步骤：取7-氟-4-羟基喹唑啉41.4mg，精密称定，置100ml量瓶中，加体积比90:10的0.1％磷酸水溶液和乙腈溶解并稀释至刻度，即得线性储备液。精密量取线性储备液1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，6.0ml，7.5ml分别置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，依法测定。以供试品溶液的浓度为横坐标，以7-氟-4-羟基喹唑啉峰峰面积为纵坐标进行线性回归，得线性回归方程为y＝16673x+19.747，结果见表4和附图4。

表47-氟-4-羟基喹唑啉线性试验结果

由表4和附图4可知，线性回归方程的相关系数r²＝0.9999，可见在该色谱条件下，7-氟-4-羟基喹唑啉在0.041～0.311mg/ml的浓度范围内线性关系良好。