一种补中益气合剂HPLC指纹图谱的建立方法与流程

本发明涉及中药制剂质量控制领域，具体属于一种高效液相色谱法对补中益气合剂指纹图谱的建立方法。

背景技术：

补中益气合剂收载于《中国药典》2015年版一部，由炙黄芪、党参、炙甘草、炒白术、当归、升麻、柴胡、陈皮等八味药材制备而成的制剂。补中益气合剂具有补中益气、升阳举陷的功效，用于脾胃虚弱、中气下陷所致的泄泻、脱肛、阴挺，症见体倦乏力、食少、腹胀、便溏久泻、肛门下坠或脱肛、子宫脱垂。随着现代中药的高速发展，尤其是在中药的有效成分绝大多数没有明确的现阶段，现行的补中益气合剂的质量控制标准已不能完全反映补中益气合剂的内在品质及批与批之间产品质量的一致性。

技术实现要素：

本发明的目的是针对上面所述的缺陷，提供一种补中益气合剂HPLC指纹图谱建立方法，该方法用高效液相色谱法对补中益气合剂的多种指标成分进行检测，获得指纹图谱，用于评价和控制补中益气合剂的质量，确保补中益气合剂的安全性和有效性。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的。

一种补中益气合剂HPLC指纹图谱建立方法，其特征在于，精密量取补中益气合剂样品1-3ml，置10ml容量瓶中，加甲醇3-7ml，超声处理[S1] ，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，置离心管中，以每分钟6000[S2] 转离心5分钟，取上清液，临用前用微孔滤膜滤过；照高效液相色谱法建立指纹图谱。

最佳的，一种补中益气合剂HPLC指纹图谱建立方法，其特征在于：

（a）供试品溶液制备：精密量取补中益气合剂样品2ml，置10ml容量瓶中，加甲醇5ml，超声处理10分钟，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，置离心管中，以每分钟5000转离心5分钟，取上清液，临用前用微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；

（b）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6mm × 250mm，5μm；流动相A为乙腈；流动相B为水；检测波长254nm；流速：1.0ml/min；洗脱程序为梯度洗脱程序；

测定：精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，即得补中益气合剂的指纹图谱。

所述微孔滤膜是用0.45μm的微孔滤膜。

所述梯度洗脱程序中流动相A与流动相B的体积比浓度为：

洗脱时间 流动相A的比例 流动相B的比例

0-5min 0% 100%

5-40min 0%→25% 100%→75%

40-80min 25%→40% 75%→60%

80-85min 100% 0%

85.01min 0% 100%

95min 0% 100%

所述补中益气合剂指纹图谱中有9个特征共有峰，图谱总长度为95min。

使用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统” 2004版对所述指纹图谱进行相似度评价，其相似度应大于0.9。

指纹图谱相似度计算参数设置为：时间宽度为0.5秒；校正方式采用多点校正，校正色谱峰的匹配点为共有峰。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

a.将前述方法建立的补中益气合剂指纹图谱与相应的对照谱进行相似度评价，其相似度应大于0.9，能有效的表征产品质量，更有利于监控产品的质量。

b.本发明采用高效液相建立标准指纹图谱，通过建立多指标成分特征图谱，从而增强标准的可控性，进而保障疗效的安全性和有效性。

c.本发明具有快捷、稳定、精密度高、重现性强及适用范围广等优点，有利于全方位的控制补中益气合剂的质量稳定性。

附图说明

图1为10批补中益气合剂指纹图谱叠加图。

图2为补中益气合剂对照指纹图谱图。

具体实施方式

实施例1。

仪器：戴安U3000型高效液相色谱仪。

试药：补中益气合剂由江西普正制药有限公司提供；流动相乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

供试品溶液制备：精密量取补中益气合剂样品2ml，置10ml容量瓶中，加甲醇5ml，超声处理10分钟，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取溶液适量，置离心管中，以每分钟5000转离心5分钟，取上清液，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。

色谱条件：月旭XBC₁₈色谱柱（4.6 mm ×250 mm 5μm）；流动相：流动相A为乙腈；流动相B为水；检测波长254nm；洗脱程序为梯度洗脱程序。

梯度洗脱程序的体积比浓度为：

测定：精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，即得补中益气合剂的指纹图谱。

实施例2。

采用实施例1的方法测定10个不同批次补中益气合剂供试品溶液进行测定（批号： 130501、130502、130601、130602、140101、140401、140402、140501、140601、140701）。

使用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统” 2004版对10批次的补中益气合剂进行相似度评价，得到10批次的补中益气合剂相似度计算结果与补中益气合剂对照指纹图谱。

10批次补中益气合剂指纹图谱相似度计算结果