检测ω‑3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的方法与流程

本发明涉及医药技术领域，具体而言，本发明涉及一种检测ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的方法。

背景技术：

ω-3酸乙酯软胶囊是葛兰素史克研发的一种特别的鱼油脂类调节剂，目前被美国食品药品监督管理局(fda)唯一批准为饮食辅助药物以降低成年患者的甘油三酯水平。在ω-3酸乙酯软胶囊的生产过程中使用了异丙醇，根据ich指南，异丙醇的每日允许接触量规定限度为5000ppm。ω-3酸乙酯软胶囊的内容物为脂溶性，胶皮为水溶性，检测ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量时需要找到合适的混合溶剂以溶解ω-3酸乙酯软胶囊。因而，检测ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的方法还有待进一步研究。

技术实现要素：

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种检测ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的方法。

在本发明的一个方面，本发明提出了一种检测ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：通过气相色谱法对所述ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇进行检测，其中，色谱条件为：色谱柱：agilentdb-624(固定相：6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷)；检测器：氢火焰离子化检测器(fid)；载气：氦气；进样口温度：140摄氏度；检测器温度：250摄氏度；载气流速：4.0毫升/分钟；分流比：10:1；升温程序：以40摄氏度保持5分钟，以40摄氏度/分钟的升温速度升温至210摄氏度，保持10分钟。由此，采用该方法可以准确检测ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量。

另外，根据本发明上述实施例的检测ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的方法还可以具有如下附加的技术特征：

在本发明的一些实施例中，所述气相色谱法的条件进一步包括：顶空进样器参数为：顶空瓶平衡温度：80摄氏度；定量环温度：90摄氏度；传输线温度：100摄氏度；气相循环时间：25分钟；顶空瓶加压时间：2分钟；顶空瓶平衡时间：10分钟；进样时间：0.05分钟；拔针时间：0.5分钟。由此，可以显著提高测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

在本发明的一些实施例中，基于下式确定所述ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇的含量：

其中，aspl表示气相色谱法检测图谱中待测异丙醇的峰面积；astd表示气相色谱法检测图谱中异丙醇对照品的峰面积；wspl表示待测ω-3酸乙酯软胶囊的称样量，单位为毫克；wstd表示异丙醇对照品的称样量，单位为毫克；p表示异丙醇对照品中异丙醇的纯度，单位为毫克/毫克。由此，可以进一步提高测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

在本发明的一些实施例中，所述ω-3酸乙酯软胶囊是通过下列混合溶剂溶解的：10体积份的0.1摩尔/升硫酸水溶液和90体积份的n,n-二甲基甲酰胺。由此，可以进一步提高测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1是根据本发明一个实施例的异丙醇对照品的气相色谱图；

图2是根据本发明一个实施例的待测ω-3酸乙酯软胶囊样品的气相色谱图；

图3是根据本发明一个实施例的稀释剂的气相色谱图；

图4是根据本发明一个实施例的异丙醇标准曲线图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

在本发明的一个方面，本发明提出了一种检测ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的方法。下面对根据本发明实施例的检测ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的方法进行详细描述。根据本发明的实施例，该方法包括：

步骤(1)：制备对照品溶液

在该步骤中，按照下列步骤制备异丙醇对照品溶液：(a)称取异丙醇对照品置于装有5ml稀释剂的100ml容量瓶中，(b)使用稀释剂将溶液定容至100ml，(c)精密量取2.0ml该溶液，置100ml容量瓶中，(d)使用稀释剂将溶液定容至100ml，(e)量取定容后溶液置于20ml顶空瓶中，立即加盖密封并混匀。

根据本发明的一个实施例，称取异丙醇对照品的重量并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的一个具体实施例，称取异丙醇对照品的重量可以为350mg，发明人通过实验意外地发现，称取该重量的异丙醇可以显著提高后续检测步骤中测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

根据本发明的再一个实施例，稀释剂的种类并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的一个具体实施例，稀释剂可以为10重量份0.1mol/l硫酸水溶液和90体积份的n,n-二甲基甲酰胺的混合溶液，发明人通过大量的实验意外地发现，采用该稀释剂可以进一步提高后续检测步骤中测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

根据本发明的又一个实施例，量取定容后溶液的体积量取定容后溶液的体积可以为2.0ml，由此，可以进一步提高后续检测步骤中测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

步骤(2)：制备待测样品溶液

在该步骤中，按照下列步骤制备待测样品溶液：(d)取ω-3酸乙酯软胶囊2粒，精确称定质量，置于200ml容量瓶中，(e)加入0.1mol/l硫酸水溶液使软胶囊外胶皮溶解，(f)加入n,n-二甲基甲酰胺定容至200ml，(g)量取定容后溶液置于20ml顶空瓶中，立即加盖密封并混匀。

根据本发明的一个实施例，加入0.1mol/l硫酸水溶液的体积并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，根据本发明的一个具体实施例，加入0.1mol/l硫酸水溶液的体积可以为20ml，由此，可以进一步提高后续检测步骤中测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

根据本发明的再一个实施例，加入0.1mol/l硫酸水溶液后须通过振摇使胶囊完全溶散，需要说明的是，发明人通过大量实验意外地发现振摇操作对后续检测步骤中测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度具有显著影响，发明人发现，在振摇操作中不能采用超声处理或加热处理，由此，可以进一步提高后续检测步骤中测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

步骤(4)：采集异丙醇特征峰

在该步骤中，通过气相色谱法采集异丙醇对照品和待测异丙醇的特征峰。具体的，所述气相色谱条件包括：色谱柱：agilentdb-624(固定相：6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷)；检测器：氢火焰离子化检测器(fid)；载气：氦气；进样口温度：140摄氏度；检测器温度：250摄氏度；载气流速：4.0毫升/分钟；分流比：10:1；升温程序：以40摄氏度保持5分钟，以40摄氏度/分钟的升温速度升温至210摄氏度，保持10分钟；以及，顶空进样器参数为：顶空瓶平衡温度：80摄氏度；定量环温度：90摄氏度；传输线温度：100摄氏度；气相循环时间：25分钟；顶空瓶加压时间：2分钟；顶空瓶平衡时间：10分钟；进样时间：0.05分钟；拔针时间：0.5分钟。由此，可以显著提高测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

发明人通过实验意外地发现，检测步骤中的色谱条件能够显著影响检测得到的ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确性。有鉴于此，发明人通过大量实验，从中确定了上述色谱条件，由此，可以显著提高测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

步骤(5)：确定异丙醇残留含量

在该步骤中，基于下式确定所述ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇的含量：

其中，aspl表示气相色谱法检测图谱中待测异丙醇的峰面积；astd表示气相色谱法检测图谱中异丙醇对照品的峰面积；wspl表示待测ω-3酸乙酯软胶囊的称样量，单位为毫克；wstd表示异丙醇对照品的称样量，单位为毫克；p表示异丙醇对照品中异丙醇的纯度，单位为毫克/毫克。由此，可以进一步提高测得ω-3酸乙酯软胶囊中异丙醇残留含量的准确度。

下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。

一般方法

除非特别说明，在后面的实施例中采用下列方法进行气相色谱检测：

气相色谱条件包括：色谱柱：agilentdb-624(固定相：6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷)；检测器：氢火焰离子化检测器(fid)；载气：氦气；进样口温度：140摄氏度；检测器温度：250摄氏度；载气流速：4.0毫升/分钟；分流比：10:1；升温程序：以40摄氏度保持5分钟，以40摄氏度/分钟的升温速度升温至210摄氏度，保持10分钟；以及，顶空进样器参数为：顶空瓶平衡温度：80摄氏度；定量环温度：90摄氏度；传输线温度：100摄氏度；气相循环时间：25分钟；顶空瓶加压时间：2分钟；顶空瓶平衡时间：10分钟；进样时间：0.05分钟；拔针时间：0.5分钟。异丙醇的保留时间为4.78min。

实施例1

在本实施例中，发明人制备了异丙醇对照品溶液并按照一般方法的描述测得了其气相色谱图。具体的，准确称取异丙醇对照品350mg置于装有5ml稀释剂的100ml容量瓶中，其中稀释剂为10体积份的0.1摩尔/升硫酸水溶液和90体积份的n,n-二甲基甲酰胺混合溶液，用稀释剂定容至100ml并混匀，准确量取2.0ml该溶液，置100ml容量瓶中，用稀释剂定容至100ml并混匀，准确量取2.0ml定容后溶液置于20ml顶空瓶中，立即加盖密封并混匀，其中异丙醇对照品的浓度为70μg/ml，异丙醇对照品溶液的气相色谱图如图1所示，此外，发明人按照一般方法的描述平行测定了6次异丙醇对照品溶液，相对标准偏差为2.6％，仪器精密度良好。

实施例2

在本实施例中，发明人制备了待测异丙醇样品溶液并按照一般方法的描述测得了其气相色谱图。具体的，取ω-3酸乙酯软胶囊2粒，精确称定质量，置于200ml容量瓶中，加入20毫升0.1mol/l硫酸水溶液使软胶囊外胶皮溶解，振摇使软胶囊完全溶散，加入n,n-二甲基甲酰胺定容至200ml并混匀，准确量取2.0ml定容后溶液置于20ml顶空瓶中，立即加盖密封并混匀，其中软胶囊内容物浓度约为14mg/ml。结果表明，参考图2，待测异丙醇样品溶液中的未知峰并不干扰异丙醇特征峰，经计算，异丙醇特征峰理论塔板数为16270，异丙醇特征峰拖尾因子为1.0。

实施例3

在本实施例中，发明人按照一般方法的描述测得了稀释剂的气相色谱图，其中稀释剂为10体积份的0.1摩尔/升硫酸水溶液和90体积份的n,n-二甲基甲酰胺混合溶液，结果表明，参考图3，稀释剂的色谱峰并不干扰异丙醇的特征峰。

实施例4

在本实施例中，发明人验证了一般方法的精密度和重复性。具体的，发明人采用待测100％水平回收样品溶液按照一般方法的描述重复测定6次，测得的结果之间相对标准偏差为1.6％，方法精密度良好。进而，发明人配制了6份待测异丙醇样品溶液，按照一般方法的描述分别平行测定了6份待测异丙醇样品峰面积，测得的结果之间相对标准偏差为2.1％，重复性良好。此外，发明人在不同时间采用同型号的不同色谱柱和不同批号的试剂配制了6份待测100％水平回收样品溶液，按照一般方法的描述分别平行测定了6份待测异丙醇样品峰面积，测得的结果之间相对标准偏差为1.1％，重现性良好。

实施例5

在本实施例中，发明人考察了异丙醇在1.49μg/ml～148.7μg/ml浓度范围内的线性。具体的，发明人配制了6份异丙醇待测溶液，浓度分别为1.49μg/ml、14.9μg/ml、44.6μg/ml、59.5μg/ml、74.4μg/ml、89.2μg/ml,148.7μg/ml，然后按照一般方法的描述分别测定待测液中异丙醇的峰面积，并用峰面积对浓度作图，得到标准曲线。结果表明，参考图4，异丙醇在1.49μg/ml～148.7μg/ml浓度范围内的线性良好。

实施例6

在本实施例中，发明人考察了一般方法的准确度。具体的，发明人在样品溶液中加入理论浓度(70μg/ml)的50％、100％和120％的异丙醇溶液，每个水平配制3份样品，按照一般方法的描述测定其异丙醇峰面积并计算平均回收率，50％水平样品的平均回收率为100.2％，100％水平样品的平均回收率为100.5％，120％水平样品的平均回收率为100.6％，9份不同水平结果之间的相对标准偏差为0.7％，准确度良好。

实施例7

在本实施例中，发明人考察了一般方法的耐用性。具体的，通过改变一般方法中的色谱柱起始温度为40±2摄氏度，改变载气流速为4.0±0.2毫升/分钟，改变进样口温度为140±10摄氏度，改变检测器温度为250±10摄氏度并采用不同厂牌色谱柱测定100％水平回收溶液，与一般方法描述中所测100％水平回收溶液的结果进行比较，回收率的绝对差值均在5％以内，结果显示一般方法的耐用性良好。

实施例8

在本实施例中，发明人考察了异丙醇对照品溶液和100％水平样品的回收溶液的稳定性。具体的，通过采用新配制的异丙醇对照品溶液，将异丙醇对照品溶液和100％水平样品的回收溶液放置至不同时间点，然后按照一般方法的描述分别测定异丙醇的峰面积得到异丙醇含量，并与0小时的异丙醇含量值比较，在72小时内其绝对差值均小于10.0％，结果显示对照品溶液和样品溶液在72小时内稳定。

实施例9

在本实施例中，发明人考察了异丙醇的检测限和定量限。具体的，通过进一步稀释异丙醇对照品溶液，获得一个色谱峰信号与基线噪音的比值，将信号与噪音的比值3-5条件下所能检测到的异丙醇的含量作为检测限，将信号与噪音比值8-12条件下所能检测到的异丙醇的含量作为定量限，结果显示，检测限为30ppm，定量限为100ppm，仪器的灵敏度良好。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。