本发明涉及一种生鲜乳新鲜度检测的方法，具体涉及一种检测牛奶生鲜乳新鲜度的方法。
背景技术：
鲜牛乳品质直接或间接影响着牛奶的安全性和产品质量，而新鲜榨取的牛奶温度一般在36℃左右，随之要及时冷却至4℃左右，以便保持奶品质。由于新鲜榨取的奶是最适宜微生物繁殖，如不及时冷却，会造成微生物的大量繁殖，导致奶成分发生变化，奶品质变差。因此，新鲜榨取的牛奶须迅速冷却才能在较长时间内保持生鲜乳的品质。但是，低温储存时间也会造成乳成分的变化，影响奶品质，其中乳清酸是嘧啶的合成的中间产物，其在加热条件下是稳定的，但在发酵酸奶中含量下降。此外，乳制品气味同样决定牛奶是否被消费者所接受的主要感官质量指标之一，尽管牛奶具有高质量的营养,如果其气味不佳,就会导致消费者对奶制品的抵制，给奶业发展造成阻力，然而在正常牛奶中三甲胺的含量低于2mg/L，不会影响牛奶的风味，但随着牛奶新鲜度下降，三甲胺代谢浓度的变化就会影响奶的品质。因此，开发一种检测准确、灵敏度高的生鲜乳新鲜度检测方法对牛乳品质进行精准的评估具有重要意义
目前现有测定牛奶新鲜度的方法有感官检查、化学检查和细菌检查，其中以滴定酸度法和奶滴形状法最为常见。在滴定酸度法中，牛奶酸度在18°T以内为新鲜牛奶，酸度大于20°T为不新鲜牛奶；而以奶滴形状进行初步判断时，奶滴呈球状为新鲜奶，奶滴流散为不新鲜奶。但这些方法只能较粗略的判定奶的新鲜度，不能准确、客观地让消费者知情生鲜乳的新鲜度。
技术实现要素：
针对现有技术在生鲜乳新鲜度判定上存在的问题，本发明提供了一种精准测定生鲜乳新鲜度的方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种生鲜乳新鲜度检测的方法，包括以下步骤：
(1)、将采集的牛奶在干净的环境中分装于无菌管中，分成若干份，在4℃冰箱中按照时间梯度增加分别保存，然后将不同时间梯度的牛奶样品进行冷冻储存；
(2)、牛奶样品在室温下解冻后经离心机离心，除去脂肪层后收集清液，清液与冰浴的甲醇以1:2-3体积混合，涡旋混合均匀，超声10-30s后再静置20s，共10个循环，冰浴静置5-20min后离心收集上清液，上清液用旋转蒸发仪将甲醇除去，再用冷冻干燥仪冷冻干燥得到粉末样品；
(3)、将粉末样品溶于600μL-1mL磷酸盐缓冲液，涡旋混匀后离心，取上清液至核磁管中，用核磁共振光谱仪检测各个样品的小分子代谢物；
(4)、多元变量统计分析小分子代谢物随时间的变化，寻找出差异代谢物，然后绘制差异代谢物与保存时间之间的关系，其中，差异代谢物为随着保存时间的变化而变化的小分子代谢物；
(5)、将待检测牛奶按照步骤(1)-(3)处理后，测出差异代谢物的值，然后根据关系曲线计算代谢物的相对变化量，以此来对牛奶新鲜度进行评判。
优选地，所述步骤(2)中解冻后离心处理条件为2500-4000×g离心15-40min；冰浴静置后离心处理条件为10000-15000×g离心10-30min；所述步骤(3)涡旋混匀后离心处理条件为12000-15000×g离心10-30min，所述步骤(2)和步骤(3)离心均在4-6℃环境下操作。
优选地，所述步骤(3)中磷酸盐缓冲液由0.1M NaH2PO4/K2HPO4、0.1％NaN3和100％D2O组成，其PH为7.4。
优选地，步骤(4)中差异代谢物为乳清酸或三甲胺。
优选地，当牛奶中体细胞数为20万以下时，乳清酸代谢物的含量随着时间的增加而显著下降，差异代谢物选择乳清酸；当牛奶中体细胞数为100万以上时，三甲胺代谢物的含量随着时间的增加而显著增加，差异代谢物选择三甲胺。
本发明的有益效果在于：本发明的牛奶生鲜乳新鲜度检测方法与现有生鲜乳新鲜度检测技术相比，本发明能够精准的对生鲜乳新鲜度进行测定，操作易于标准化，结果准确可靠，可为消费者精准的了解乳制品新鲜度提供知情权，对提升消费者对国产奶制品信心起到一定的作用。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员理解，下面对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种生鲜乳新鲜度检测的方法，具体步骤如下：
(1)、试验样品采集
选择体细胞数为20万以下的牛奶样品采集后在干净的环境中分装于无菌管中，在4℃冰箱中按照0、36、72和144h等多个时间条件下分别保存，待用；
(2)、牛奶粉末样品制备
将牛奶样品在室温下解冻，随后在低温(4℃)离心机2500-4000g离心15-40min，除去脂肪层，收集清液，取清液与冰浴的甲醇以1:2-3体积混合，涡旋混合均匀，超声10-30s静置20s，共10个循环，冰浴静置5-20min后离心(4-6℃，10000-15000g，10-30min)收集上清液。上清液用旋转蒸发仪将甲醇除去，再用冷冻干燥仪冷冻干燥至粉末样品；
(3)、将粉末样品溶于600μL-1mL磷酸盐缓冲液(优选地，磷酸盐缓冲液由0.1M NaH2PO4/K2HPO4、0.1％NaN3和100％D2O组成，其PH为7.4)，涡旋混匀后离心(4-6℃，12000-15000g，10-30min)，取上清液至5mm核磁管中，用核磁共振光谱仪检测各个样品的小分子代谢物表达模式；
(4)、多元变量统计分析小分子代谢物随生鲜乳保存时间的变化，确定差异代谢物，绘制出差异代谢物与保存时间之间的关系；
(5)、生鲜乳中乳清酸(化学位移6.19)代谢物含量随保存时间显著下降。与新鲜乳相比，生鲜乳保存至72-144h，乳清酸代谢物的比率显著的降低至0.64-0.66。所述乳清酸可作为生鲜乳新鲜度的评价指标。
实施例2
一种生鲜乳新鲜度检测的方法，具体步骤如下：
(1)、试验样品采集
选择体细胞数为100万以上的牛奶样品采集后在干净的环境中分装于无菌管中，在4℃冰箱中按照0、36、72和144h等多个时间条件下分别保存，待用；
(2)、牛奶粉末样品制备
将牛奶样品在室温下解冻，随后在低温(4℃)离心机2500-4 000g离心15-40min，除去脂肪层，收集清液，取清液与冰浴的甲醇以1:2-3体积混合，涡旋混合均匀，超声10-30s静置20s，共10个循环，冰浴静置5-20min后离心(4-6℃，10000-15000g，10-30min)收集上清液。上清液用旋转蒸发仪将甲醇除去，再用冷冻干燥仪冷冻干燥至粉末样品；
(3)、将粉末样品溶于600μL-1mL磷酸盐缓冲液(优选地，磷酸盐缓冲液由0.1M NaH2PO4/K2HPO4、0.1％NaN3和100％D2O组成，其PH为7.4)，涡旋混匀后离心(4-6℃，12000-15000g，10-30min)，取上清液至5mm核磁管中，用核磁共振光谱仪检测各个样品的小分子代谢物表达模式；
(4)、多元变量统计分析小分子代谢物随生鲜乳保存时间的变化，确定差异代谢物，绘制出差异代谢物与保存时间之间的关系；
(5)、生鲜乳中三甲胺(化学位移3.27)代谢物含量随保存时间显著增加。与新鲜乳相比，生鲜乳保存至72-144h，三甲胺代谢物比率显著的增加至1.71-1.87。所述三甲胺可作为生鲜乳新鲜度的评价指标。
以上内容仅仅是对本发明的构思所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做出的补充或修改或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。