本发明涉及生物检测领域，特别是指植物病理生物学测定方法。
背景技术：
近年来，广东省部分烟草生产地区出现烟草畸形生长现象，大田表现为整块田发生，却畸形症状整齐一致。广东烟区、湖南烟区及江西烟区相继出现烟叶畸形现象，且有进一步扩展蔓延的趋势，严重影响烤烟的产量和质量以及烟农的经济收入。
解决烟草畸形生长的问题，首先要解决的，即是了解导致烟草畸形的原因，这需要科学，准确，可靠的研究分析方法进行确定，在现有的一些测定方法中，由于一般为囊括范围较大的统一性的测定方法，虽然具有一定的指导意义，但在对具体的种类操作中，则可能会出现一定的差异，导致测定结果不准确，甚至不可行，而测定结果的不准，直接对治理烟草畸形将产生非常大的影响，因此，如何针对烟草进一步提高检测的准确度，如何根据烟草的特性进行测定方法的优化，成为解决问题的关键。
技术实现要素：
本发明提出一种植物病理生物学测定方法，解决现有技术中，针对烟草畸形的病因测定方法中，生物学测定针对性不强，导致结果不准的问题。
本发明的技术方案是这样实现的：植物病理生物学测定方法，包括以下步骤：
(1)从田间采回的烟草畸形叶，取1.0g叶加上10mL 0.02mol/L磷酸缓冲液在研钵中完全碾碎，通过机械摩擦接种法，接种温室培育的4～6叶期幼苗的顶部平展叶的若干种鉴别寄主各15株；
(2)以0.02mol/L磷酸缓冲液接种烟草为阴性对照，接种烟草花叶病毒(TMV)为阳性对照。
(3)观察植株的畸形、不良症状并判定。
根据上述的方法与参数的设定，进行接种后的观察，并判定结果，其中，结合发明人多年的烟草种植经验，在参数的设置上，针对烟草的接种量，以及接种时间上，均进行了优化，保证了接种的有效性。
进一步，步骤(1)中，鉴别寄主包括普通烟(G-28和K326)、心叶烟、苋色黎(学名)、黄瓜(学名)、西葫芦(学名)，这些鉴别寄主的选取，也是针对当地的生长特性，精心选定而成。
进一步，为进一步提高接种的有效性，以及判定的准确性，在过程控制上，进行更加精确的限定，包括：接种的植株置于网室内，保持温度20～27℃；接种后72h内经常洒水保持叶面湿润；5d后第二次接种；从接种第7d起，每天观察植株表现；第10d仍未显症者，再接种一次；观察植株一直到开花才结束。
本发明相比于传统的通用性的生物学测定技术而言，针对烟草的生长特性，结果多年的烟草种植经验，对测定的参数控制，接种优化，鉴别寄主的选取上，均进行了调整，极大的提高了烟草生物学测定的可靠性，在烟草畸形的检测中，更加有效。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例的实施地点为五华烟区的周江烟田。
从田间采回的烟草畸形叶，通过机械摩擦接种法接种普通烟(G-28和K326)、心叶烟、苋色黎、黄瓜、西葫芦等鉴别寄主。结果显示，在接种5d后，其作为阳性对照(接种TMV)的烟草出现明显的花叶症状，而阴性对照在观察结束时都无任何症状，这表明本次实验的接种方法是可行的。而用田间采回的烟草畸形叶接种烟草、以及其它任何病毒鉴别寄主，直至接种的所有植株开花，任何植株都没有畸形或任何其它不良症状出现。这表明，这些畸形烟草叶标样不能使这些鉴别寄主发病或致畸，这些畸形叶可能不是由植物病毒引起的。
实施例2
本实施例的实施地点为五华烟区的平南烟田。
从田间采回的烟草畸形叶，通过机械摩擦接种法接种普通烟(G-28和K326)、心叶烟、苋色黎、黄瓜、西葫芦等鉴别寄主。结果显示，在接种5d后，其作为阳性对照(接种TMV)的烟草出现明显的花叶症状，而阴性对照在观察结束时都无任何症状，这表明本次实验的接种方法是可行的。用田间采回的烟草畸形叶接种烟草、以及其它病毒鉴别寄主，接种的植株开花超过50％有畸形或其它不良症状出现。这表明，这些畸形烟草叶标样使这些鉴别寄主发病或致畸，这些畸形叶可能是由植物病毒引起的。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。