一种层析成像方法与流程

文档序号:12118578阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种层析成像方法,其特征在于,通过控制成像样品中荧光发色基团的结构变化,实现荧光的淬灭或激活,使得成像时只有样品表层的荧光基团能够被激发,从而实现仅对样品的表层成像。

2.如权利要求1所述的层析成像方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)激活:将不发荧光的原始生物组织样本或只发特定波段荧光的原始生物组织样本的表层荧光激活,得到已激活的表层生物组织样本;所述原始生物组织样本为蛋白或荧光染料标记的生物组织样本;

(2)成像:对步骤(1)获得的已激活的表层生物组织样本进行荧光激发并进行荧光成像,获得所述已激活的表层生物组织样本的荧光图像。

3.如权利要求2所述的层析成像方法,其特征在于,所述层析成像方法还包括:

(3)削除所述已激活的表层生物组织样本,露出未激活的新表层,得到新的生物组织样本,并以该新的生物组织样本作为所述原始生物组织样本;

(4)跳转执行所述步骤(1),直至所述原始生物组织样本厚度小于所述表层生物组织样本厚度;

(5)将获得的各个所述表层生物组织样本的荧光图像进行叠加处理,获得所述原始生物组织样本的完整三维图像。

4.如权利要求2所述的层析成像方法,其特征在于,所述不发荧光的原始生物组织样本包括1)本身不发荧光的蛋白标记或荧光染料标记的生物组织样本或2)荧光可逆性淬灭的蛋白标记或荧光染料标记的生物组织样本。

5.如权利要求1~4任意一项所述的层析成像方法,其特征在于,所述层析成像方法获得的生物组织样本的荧光图像的轴向分辨率为亚微米量级。

6.如权利要求2所述的层析成像方法,其特征在于,所述蛋白包括荧光蛋白和/或结合配体能够激发出荧光的蛋白。

7.如权利要求4所述的层析成像方法,其特征在于,所述荧光可逆性淬灭的方法包括使用化学试剂浸泡使所述荧光蛋白或荧光染料的荧光基团可逆性淬灭的方法;所述荧光可逆性淬灭的方法优选为利用酸性化学试剂淬灭处理、利用过渡态金属离子化合物溶液淬灭处理或氢离子与过渡态金属离子的协同淬灭处理。

8.如权利要求2所述的层析成像方法,其特征在于,所述激活处理方法包括化学试剂处理或光化学处理,使所述生物组织样本表层的蛋白或荧光染料被激活,而样本表层以下的蛋白或荧光染料不被激活。

9.如权利要求8所述的层析成像方法,其特征在于,所述化学试剂处理方法包括将蛋白或荧光染料标记的生物组织样本浸泡在化学试剂中,只有样本的表层被化学试剂渗透,从而只有样本的表层荧光被激活,所述化学试剂处理方法优选为碱液激活处理、金属离子螯合剂激活处理或碱液与金属离子螯合剂的协同激活处理。

10.如权利要求8所述的层析成像方法,其特征在于,所述光化学处理方法包括使用特定波长的光进行激活,该激活光只能穿透所述蛋白或荧光染料标记的生物组织样本的表层,从而只有样本表层荧光被激活。

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