一种中药连翘的非线性指纹图谱检测方法与流程

本发明涉及一种检测方法，具体涉及一种中药连翘的非线性指纹图谱检测方法。

背景技术：

连翘（Forsythia suspense）为木犀科灌木植物连翘的果实，主产于中国陕西、山西、河北等地；秋季当果实初熟、颜色商带绿色时采收；除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”；采收熟透的果实，晒干，除去杂质，习称“老翘”。连翘的化学成分：连翘酚（forsythol）,齐墩果酸，6，7-二甲氧基香豆精，甾醇类化合物，白桦脂醇酸（betulinic acid）,连翘苷（phillyrin）,连翘苷元（phillygenin）,松脂素（pinoresinol）,牛蒡子苷，牛蒡子苷元，黄酮醇苷，表连翘醇，芸香苷，白桦脂酸，蒎烯，香叶醛等，具有外可疏散风热，内可清热解毒之药，常用于温热病卫、气、营、血的多种症候。目前对化学成分和其药效之间的关联未见深入研究。国内已建立的连翘指纹图谱主要是高效液相色谱指纹图谱，其研究的指标性成分重点是连翘苷、有机酸类，未建立反映连翘所有化学成分特征和有效成分含量的检测方法，而非线性指纹图谱检测的对象是中药材中所有的化学成分。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术不足，提供一种简单、适用的检测连翘真伪并对其进行质量评价的非线性指纹图谱检测方法。

本发明以BrO³⁺—Mn²⁺—H⁺—CH₃COCH₃为振荡体系，以连翘为振荡底物，测定不同产地连翘的非线性指纹图谱，讨论连翘加入量对图谱的影响，通过对特征参数的研究并将其与柴胡、冬凌草等比较，达到对中药连翘进行鉴别和质量评价的目的。

本发明的技术方案是这样实现的，一种中药连翘的非线性指纹图谱检测方法包括以下步骤 ：

A、建立连翘化学成分的非线性指纹图谱：

将同一产地同一品牌的一种连翘作为标准样品，通过化学振荡反应建立其化学成分的非线性指纹法图谱。

B、检测样品：

取待检测的连翘样品，使用与标准样品相同的条件检测，得出检测样品的图谱，将两者的指纹图谱用直接观察并且以Origin 软件分析作为定性依据。

C、重现性考察

取待检测的连翘样品，测定其图谱，测得的非线性指纹图谱的各种特征参数的RSD＜3％，表明所述方法具有很好的重现性。

进一步，所述指纹法包括如下步骤：

A-1、标准样品选择：

同一产地同一品牌的一种连翘，以4-8 个批次为标准样品。

A-2、非线性电化学指纹法图谱分析条件：

检测仪器：瑞士万通204N型电化学工作站，HH-501型超级恒温水浴锅，85-2A型数显恒温磁力搅拌器，213型金属铂电极，217型甘汞电极；温度(310±0.05)K； 1.0g连翘粉末、10ml 0.2mol/L的KBr、10ml 4.0mol/L H₂SO₄、5ml0.04mol/LMnSO₄、5ml0.4mol/L CH₂(COOH)₂， 10ml 0.2mol/LKBrO₄溶液。

A-3、非线性指纹图谱信息参数分析：

用Origin软件绘制E-t曲线，即获得连翘非线性指纹图谱以及其特征参数。图谱参数包括：诱导时间(s) ：从加入试剂到振荡发生的时间，振荡寿命(s)：振荡开始到振荡结束的时间，振荡周期(s)：振荡过程中出现相邻峰的时间，最高电位 (v)；振荡曲线的电位最高值。测得的非线性指纹图谱的各种特征参数的RSD＜3％。

B、检测样品：

取待检测的连翘样品，使用与标准样品相同的条件检测，得出检测样品的指纹图谱，将两者的指纹图谱直接观察并且以Origin软件分析作为定性依据，如果两者的图谱特征参数的RSD＜10％，可认为是同一产品，若RSD＞10％则认为是非同一产品。

C、重现性考察：

取6份待测连翘样品，测定其图谱并进行考察。

本发明对连翘所用成分做成的指纹图谱具有方法重现性好、无需预处理、操作简便以及快捷经济等优点，能够为各类连翘品质的鉴别提供可靠信息，适于在连翘安全检测技术领域推广应用。

附图说明

图1为本发明连翘非线性指纹图谱示意图。

图 2为不同产地连翘非线性指纹图谱示意图。

具体实施方式

下面结合附图，对本发明进一步详细说明。

A、建立连翘化学成分的非线性指纹图谱：

以5个批次陕西连翘为标准样品建立其化学成分非线性指纹图谱。

使用仪器：瑞士万通204N型电化学工作站，HH-501型超级恒温水浴锅，85-2A型数显恒温磁力搅拌器，213型金属铂电极，217型甘汞电极；化学振荡反应在连续搅拌的带夹套的反应器中进行，开启超级恒温水浴锅，调节温度控制在(310±0.05)K，依次加入1.0g 连翘，10ml 0.2mol/L的KBr、10ml 4.0mol/L H₂SO₄、5ml0.04mol/LMnSO₄、5ml0.4mol/L CH₂(COOH)₂，溶液于带夹套的反应器中，盖好带温度计、213型金属铂电极和217型甘汞电极的反应器盖。开启通过数据采集装置相连计算机，以及磁力搅拌器（450r/min转速），恒温恒速搅拌10min时，通过注射器迅速加入10ml 0.2mol/LKBrO₄溶液，即刻点击菜单采集数据，记录E-t曲线至电位振荡消失为止，用 Origin 软件绘制 E-t曲线，即获得连翘非线性指纹图谱，如图1所示。获得7个连翘非线性指纹图谱以及其特征参数。测得的非线性指纹图谱的各种特征参数的 RSD ＜ 3％。

B、检测样品 ：

使用与上述测定标准样品相同的条件，分别测定不同产地的连翘，其非线性指纹图谱如图2所示。从整个指纹图谱来看，不同品种连翘的 E-t曲线存在明显区别，肉眼即可看出不同种类连翘的区别。测得的非线性指纹图谱的各种特征参数的 RSD＞10％。

C、重现性考察：

取6份待测连翘样品，测定其图谱，测得的非线性指纹图谱的各种特征参数的RSD＜3％，表明本发明方法具有很好的重现性。

本发明鉴别连翘的电化学指纹法对于特定样品的化学成分指纹图谱的各特征参数是稳定的。进行鉴别时只需将各产地、品牌连翘标准指纹图谱与被测样品图谱数据用Origin 软件导出，如果两者的图谱特征参数的 RSD＜10％，则为同一产品，RSD＞10％则为非同一产品。如表1所示，比较不同产地中药连翘的非线性图谱的诱导时间和振荡寿命，可用于不同连翘的鉴别及质量评价。

表1

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以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。