一种甘草制雪胆的薄层色谱鉴别方法与流程

本发明涉及药材检测领域，具体涉及一种甘草制雪胆的薄层色谱鉴别方法。

背景技术：

雪胆为葫芦科雪胆属植物长果雪胆hemsleyadolichocarpaw.j.chang、峨眉雪胆hemsleyaomeiensisl.t.shenetw.j.chang或巨花雪胆hemsleyagiganthaw.j.chang的干燥块根。

甘草制雪胆为用质量比0.4倍量的甘草汁闷润7.5h后，80℃烘干12h后晾干的雪胆制品。甘草制雪胆具有清热解毒，消炎止痛的功效，用于治疗菌痢，肠炎，支气管炎，急性扁桃体炎，虚火牙痛，胃痛等疾病。

现代研究表明，雪胆主要含雪胆甲素及少量雪胆乙素和皂苷成分，主要用于治疗菌痢、肠炎、支气管炎及急性扁桃体炎等疾病。其中雪胆素甲含量较高，为其主要有效成分。

但是，目前尚没有一种可以简便、快速监控甘草制雪胆质量的方法。

技术实现要素：

为解决上述问题，本发明提供了一种甘草制雪胆的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：

取待检药材粉末，加入甲醇提取，过滤，蒸干，甲醇溶解残渣得到供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：

以雪胆素甲为对照品制备对照品溶液；

(3)薄层鉴别：

分别将对照品溶液和供试品溶液在薄层板上点样，以氯仿-丙酮-乙酸乙酯体积比＝7:5:1为展开剂展开，显色，检视，比对即可。

进一步地，步骤(1)中，所述提取是超声或回流提取。

进一步地，步骤(1)中，所述提取是超声提取，超声提取的时间为1小时。

进一步地，所述步骤(1)的甲醇提取中，甲醇与待检药材的体积重量比为10ml:1g。

进一步地，所述步骤(1)的甲醇溶解残渣中，甲醇与待检药材的体积重量比为1.5ml:1g。

进一步地，所述步骤(2)的对照品溶液为雪胆素甲的甲醇溶液；优选的，雪胆素甲的浓度为1mg/ml。

进一步地，步骤(3)中，所述展开的温度为25℃

进一步地，步骤(3)中，所述展开的相对湿度为32％～72％。

进一步地，步骤(3)中，所述显色是以5％的磷钼酸乙醇溶液为显色剂，105℃下加热显色。

进一步地，所述甘草制雪胆是通过下述方法制备得到的：

取雪胆饮片，加入甘草汁，拌匀，闷润7.5h，在80℃下烘12h，放凉即得；所述雪胆饮片与甘草的重量比为5:2。

试验结果证明，本发明成功建立了甘草制雪胆的薄层色谱鉴别方法，可以有效将甘草制雪胆中的各成分分离检测出来，尤其是其中的活性成分雪胆素甲，从而可以准确、简单、快速地监控甘草制雪胆的质量，为甘草制雪胆的质量控制提供了有效保障。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

图2为提取方法考察项下，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2、甲醇超声提取；3、甲醇加热回流；4、乙醇加热回流；5、乙醇超声提取。

图3为展开剂氯仿-乙醇体积比19:1时，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

图4为展开剂氯仿-甲醇体积比＝19:1时，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

图5为展开剂氯仿-丙酮-乙酸乙酯体积比＝5:3:1时，待检药材和对照品的薄层色谱图：2、雪胆素甲对照品；1、3、4、制雪胆样品。

图6为展开剂氯仿-丙酮-乙酸乙酯体积比＝7:5:1时，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

图7为温度30℃展开时，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

图8为25℃展开时，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

图9为相对湿度32％时，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

图10为相对湿度42％时，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

图11为相对湿度47％时，待检药材和对照品的薄层色谱图：2、雪胆素甲对照品；1、3、4、制雪胆样品。

图12为相对湿度58％时，待检药材和对照品的薄层色谱图：2、雪胆素甲对照品；1、3、4、制雪胆样品。

图13为相对湿度65％时，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

图14为相对湿度72％时，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

图15为相对湿度88％时，待检药材和对照品的薄层色谱图：1、雪胆素甲对照品；2～4、制雪胆样品。

具体实施方式

下述实施例所用实验材料如下：

1仪器与试药

仪器：双槽展开缸；超声波清洗机(型号：sb-3200dt，宁波新艺超声波设备有限公司)；真空干燥箱(dzf-6051，上海将任实验设备有限公司)；bp211d电子天平(感量0.00001g，德国sartorius公司)；硅胶gf254板(10×20cm，青岛海洋化工厂)；硅胶g板为自制板。

试药：雪胆甲素对照品(批号：111518-201103，纯度为99.6％，中国食品药品检定研究院)。水为蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

雪胆购于荷花池市场，经成都中医药大学药学院生药教研室卢先明教授鉴定为葫芦科植物雪胆hemsleyaomeiensisl.t.shenetw.j.chang的干燥块根。

雪胆饮片：取上述雪胆，除去杂质，洗净，润透。切厚片，干燥

2薄层板制备

配制0.3％cmc-na溶液静置过夜，与硅胶g(配比约为3:1)混合，搅拌至粘度合适备用。将其均匀铺在洗净的玻璃板上，静置12h，待板阴干后于110℃下活化0.5～1h，置于干燥器中备用。

实施例1本发明的薄层色谱鉴别方法

取本品粉末2g,加甲醇20ml，超声提取1h,滤过，滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇3ml溶解，作为供试品溶液。取雪胆素甲对照品，加甲醇溶解制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶g薄层板上，以氯仿-丙酮-乙酸乙酯(7:5:1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以5％的磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果如图1所示。

实施例2本发明方法工艺条件的考察

在实施例1的薄层条件下，采用单因素考察法对提取方法、展开剂、展开温度和展开湿度进行考察。

1、不同提取溶剂、不同提取方法对制雪胆薄层色谱的影响

以甲醇、乙醇为提取溶媒，考察加热回流提取法、超声提取法不同提取方法且同时考察不同提取溶剂对制雪胆薄层色谱的影响。

称取制雪胆粉末2g4份，按表1操作。

表1制雪胆的不同提取溶剂和不同提取方法

滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣分别用甲醇、乙醇溶解，作为供试品溶液。取雪胆素甲对照品，加甲醇溶解制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以氯仿-丙酮-乙酸乙酯(7:5:1)为展开剂展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果如图2所示。

由图2可知，甲醇超声提取的斑点能分开，且更清晰，并且超声提取方法简便，易操作，故选择提取溶剂和提取方法为甲醇超声提取。

2、展开系统的考察

以选择了氯仿-乙醇(19:1)、氯仿-甲醇(19:1)、氯仿-丙酮-乙酸乙酯(5:3:1、7:5:1)等几种展开系统进行考察。结果如图3～6所示。

由图3-6可知，展开系统氯仿-丙酮-乙酸乙酯(7:5:1)展开时，薄层色谱中斑点形状较佳，分离度较好，rf值适中，故选其作为展开剂，对制雪胆进行薄层色谱鉴别。

3、温度对制雪胆薄层色谱的影响

考察室25℃和30℃对雪胆薄层色谱的影响。当温度为30℃时，雪胆薄层色谱的分离度较差，rf值较大，故选择25℃展开。结果如图7和图8所示。

4、相对湿度对制雪胆薄层色谱的影响

控制相对湿度的方法为：在展开缸一端加入不同比例的硫酸，密闭放置15～30min，再加入展开剂展开。参考表2配制不同比例的硫酸。结果如图9-15所示。

表2不同湿度所需的硫酸比例(v/v)

结果显示，相对湿度在32％～72％时，对雪胆薄层色谱的影响不明显，当相对湿度为88％时，对雪胆薄层色谱有显著影响，分离度降低，斑点无法辨认，故相对湿度控制在32％～72％。

综上所述，本发明成功建立了甘草制雪胆的薄层色谱鉴别方法，可以有效将甘草制雪胆中的各成分分离检测出来，尤其是其中的活性成分雪胆素甲，从而可以准确、简单、快速地监控甘草制雪胆的质量，为甘草制雪胆的质量控制提供了有效保障。