本发明涉及一种检测方法，具体是一种展青霉素的快速检测方法。
背景技术：
展青霉素(Patulin，PAT)主要是由水分含量较高、营养丰富的水果及蔬菜在保存温度较高、通风不良的贮存条件下，由部分真菌(扩张青霉、展青霉、棒型青霉等)产生的一种次级代谢产物。分子式为C7H6O4，熔点100℃，分子量为154，为无色针状结晶，能溶于水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和氯仿。Glister于1941年在牛津大学首先发现并分离纯化的。早期，展青霉素被认为是一种广谱抗生素，可用于人感冒的治疗，但随后动物实验发现，它对实验动物具有较强的急性和亚急性毒性、免疫毒性、致畸、致突变作用，从此对展青霉素的研究重点转移到其毒性及对食品和饲料的污染上。展青霉素主要污染苹果、山楂及其果汁制品，并且已成为判断苹果汁质量的一个重要指标。因此，中国和欧盟等国家规定苹果、山楂制品中展青霉素最高允许量为50μg/kg。展青霉素的检测方法主要包括薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱法(GC)等，但上述方法均难以实现对批量样品的快速检测。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种展青霉素的快速检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种展青霉素的快速检测方法，包括如下步骤：1)将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；2)将展青霉素溶于水配置一系列不同浓度的展青霉素水溶液，制得标准溶液；3)将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；4)将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤3)所建立的曲线进行比对，利用C18色谱柱实施分离，并利用蒸发光散射检测器实施检测，计算样品的展青霉素含量。
作为本发明进一步的方案：有机溶剂由pH8.0、浓度0.1mol/L的乙酸铵溶液与乙腈组成，其中乙腈占流动相总量的60～80％(v/v)。
作为本发明进一步的方案：所述化学荧光探针为9,10-菲醌。
作为本发明进一步的方案：所述标准溶液为8种不同浓度的展青霉素水溶液；优选地，所述标准溶液的浓度范围在0ppm-100ppm之间；优选地，所述标准溶液的浓度分别为0ppm、0.01ppm、0.05ppm、0.2ppm、1ppm、5ppm、25ppm和100ppm。
作为本发明进一步的方案：所述水为去离子水。
作为本发明再进一步的方案：所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同，优选体积比为5:1:4。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明具有快速、灵敏高效、高效便捷、成本低等特点，适用于食品中展青霉素的快速筛查，是食品安全分析技术领域的发展方向，同时可大幅度提高分析效率。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
本发明实施例中，一种展青霉素的快速检测方法，包括如下步骤：1)将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；2)将展青霉素溶于水配置一系列不同浓度的展青霉素水溶液，制得标准溶液；3)将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；4)将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤3)所建立的曲线进行比对，利用C18色谱柱实施分离，并利用蒸发光散射检测器实施检测，计算样品的展青霉素含量。有机溶剂由pH8.0、浓度0.1mol/L的乙酸铵溶液与乙腈组成，其中乙腈占流动相总量的60～80％(v/v)。所述化学荧光探针为9,10-菲醌。所述标准溶液为8种不同浓度的展青霉素水溶液；优选地，所述标准溶液的浓度范围在0ppm-100ppm之间；优选地，所述标准溶液的浓度分别为0ppm、0.01ppm、0.05ppm、0.2ppm、1ppm、5ppm、25ppm和100ppm。所述水为去离子水。所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同，优选体积比为5:1:4。
实施例1：
本发明展青霉素的快速检测方法，包括如下步骤：1)将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；2)将展青霉素溶于水配置一系列不同浓度的展青霉素水溶液，制得标准溶液；3)将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；4)将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤3)所建立的曲线进行比对，利用C18色谱柱实施分离，并利用蒸发光散射检测器实施检测，计算样品的展青霉素含量。有机溶剂由pH8.0、浓度0.1mol/L的乙酸铵溶液与乙腈组成，其中乙腈占流动相总量的60％(v/v)。所述化学荧光探针为9,10-菲醌。所述标准溶液为8种不同浓度的展青霉素水溶液；优选地，所述标准溶液的浓度为0ppm。所述水为去离子水。所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同，优选体积比为5:1:4。
实施例2：
本发明展青霉素的快速检测方法，包括如下步骤：1)将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；2)将展青霉素溶于水配置一系列不同浓度的展青霉素水溶液，制得标准溶液；3)将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；4)将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤3)所建立的曲线进行比对，利用C18色谱柱实施分离，并利用蒸发光散射检测器实施检测，计算样品的展青霉素含量。有机溶剂由pH8.0、浓度0.1mol/L的乙酸铵溶液与乙腈组成，其中乙腈占流动相总量的80％(v/v)。所述化学荧光探针为9,10-菲醌。所述标准溶液为8种不同浓度的展青霉素水溶液；优选地，所述标准溶液的浓度为0.01ppm。所述水为去离子水。所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同，优选体积比为5:1:4。
实施例3：
本发明展青霉素的快速检测方法，包括如下步骤：1)将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；2)将展青霉素溶于水配置一系列不同浓度的展青霉素水溶液，制得标准溶液；3)将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；4)将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤3)所建立的曲线进行比对，利用C18色谱柱实施分离，并利用蒸发光散射检测器实施检测，计算样品的展青霉素含量。有机溶剂由pH8.0、浓度0.1mol/L的乙酸铵溶液与乙腈组成，其中乙腈占流动相总量的70％(v/v)。所述化学荧光探针为9,10-菲醌。所述标准溶液为8种不同浓度的展青霉素水溶液；优选地，所述标准溶液的浓度为0.05ppm。所述水为去离子水。所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同，优选体积比为5:1:4。
实施例4：
本发明展青霉素的快速检测方法，包括如下步骤：1)将化学荧光探针溶于有机溶剂制得溶液A，碱溶于水制得溶液B；2)将展青霉素溶于水配置一系列不同浓度的展青霉素水溶液，制得标准溶液；3)将溶液A和溶液B分别与不同浓度的标准溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，建立荧光强度与标准溶液浓度间的相关曲线；4)将溶液A和溶液B与待测样品溶液混合、振荡，静置分层后移取水层，测量荧光强度，与步骤3)所建立的曲线进行比对，利用C18色谱柱实施分离，并利用蒸发光散射检测器实施检测，计算样品的展青霉素含量。有机溶剂由pH8.0、浓度0.1mol/L的乙酸铵溶液与乙腈组成，其中乙腈占流动相总量的65％(v/v)。所述化学荧光探针为9,10-菲醌。所述标准溶液为8种不同浓度的展青霉素水溶液；优选地，所述标准溶液的浓度为100ppm。所述水为去离子水。所述溶液A、溶液B和标准溶液的体积比与所述溶液A、溶液B和所述待测样品溶液的体积比相同，优选体积比为5:1:4。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。