本发明涉及一种检测光合色素含量的方法，具体涉及一种检测油菜角果皮光合色素含量的方法。
背景技术：
光合色素在植物光合作用中参与光能的吸收、传递并引起原初光化学反应。高等植物光合色素主要有三大类：叶绿素a,b和类胡萝卜素。叶绿素在红光区和蓝光区、类胡萝素在蓝光区有最大吸收。叶绿素a、b在红光区最大吸收峰分别在663nm、645nm附近,在蓝紫光区分别在429nm、453nm附近。
根据光合色素对光的吸收，植物光合色素含量的测定方法主要有紫外-可见分光光度法(分光光度法)、高效液相色谱法、近红外法、叶绿素测定仪法(SPAD法)等。其中分光光度法最常用；并且分光光度法、高效液相色谱法必须对样品进行研磨和有机溶剂浸提等前处理；高效液相色谱法、近红外仪测定法对仪器要求较高，这些仪器价格昂贵。SPAD法所用仪器简单、便宜，但缺点是每次测量的面积很小，结果受植物光合器官被测部位及测量点组织厚度影响很大，代表性较差。例如：SPAD502叶绿素仪的测量面积只有2mm×3mm(厚度不超过1.2mm)。
油菜终花后，大部分叶片脱落，叶片光合作用衰退，此时油菜光合主要依靠角果。角果皮光合色素含量高低与其光合效率显著正相关，直接影响籽粒产量及籽粒含油量等。目前用传统的分光光度法测定油菜角果皮光合色素含量时，由于角果皮纤维素含量较高，增加了样品研磨难度，费时费力；并采用乙醇或丙酮提取色素，由于乙醇、丙酮容易挥发且对人体有害，测定过程造成环境污染。另外，油菜角果皮表面不平整、厚度不均匀，因而采取SPAD法测定油菜角果皮色素含量时，误差较大，代表性差。
综上，研究一种设备简单、操作简便快捷，结果准确的油菜角果皮光合色素含量的测定方法，对研究油菜角果光合特性及提高油菜籽粒产量，都具有重要意义。
本发明所涉及的Yaxin-1241叶面积仪由北京雅欣理仪科技有限公司生产，是一种用于快速测量植物叶片的面积、周长、长度等数据的仪器，仪器设计原理简单，无复杂机械部件，便于携带，易于维护。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是，提供一种检测油菜角果皮光合色素含量的方法。
本发明解决其技术问题采用的技术方案是，一种检测油菜角果皮光合色素含量的方法，包括以下步骤：
(1)选择油菜绿色角果，去掉籽粒及隔膜，展平，裁成长方形样品块，准确测量该角果皮样品外表面的面积和称量重量；
(2)用Yaxin-1241叶面积仪扫描(1)中角果皮样品表面积，得到扫描值，根据步骤(1)中测定的角果皮表面积和称量的角果皮重量，换算为单位面积的扫描值I(单位：扫描值/cm2)和单位重量的扫描值F(单位：扫描值/g)；然后按照分光光度法测定该角果皮光合色素总量Cabx、叶绿素总量Cab及叶绿素a、b含量Ca、Cb，单位为mg/m2或mg/g FW；接着设C＝Ki·I或C＝Qi·F，其中，C为色素含量，代表Cabx、Cab、Ca及Cb，Ki和Qi为系数，则Ki＝C/I,Qi＝C/F；根据分光光度法测定的色素含量C和扫描测得的I、F值，确定系数Ki、Qi；(3)按照步骤(1)的方法测量待测的油菜角果皮样品外表面的面积和称量重量，并用Yaxin-1241叶面积仪扫描该待测角果皮样品表面积，得到扫描值，换算为Ii值(单位面积的扫描值，单位：扫描值/cm2)或Fi值(单位重量的扫描值，单位：扫描值/g)；然后根据Ii、Fi值及步骤(2)得到的系数Ki、Qi，依据C＝Ki·Ii或C＝Qi·Fi，计算待测角果皮光合色素含量、包括光合色素总量Cabx、叶绿素总量Cab及叶绿素a、b含量Ca、Cb，单位：mg/m2或mg/g FW。
进一步，步骤(1)中，将油菜绿色角果，从果柄处摘下，沿开裂线剥开，去掉籽粒及隔膜，展平，裁成2.50×0.50cm2长方形方块，用精密刻度尺准确测量待测角果皮外表面的面积，并用千分之一精度的天平称量角果皮重量。
本发明采用叶面积仪扫描角果皮表面积并换算成角果皮色素含量，结果准确、可靠；且增加了样品量，减少了取样误差，便于操作，环境安全，并节省检测成本。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
(1)选择油菜绿色角果，从果柄处摘下，沿开裂线剥开，去掉籽粒及隔膜，展平，裁成2.50×0.50cm2长方形样品块，用精密刻度尺准确测量该角果皮样品外表面的面积，并用千分之一天平称量该角果皮样品块的重量；
(2)用Yaxin-1241叶面积仪扫描(1)中角果皮表面积，得到扫描值，并换算为I值(单位：扫描值/cm2)和F值(单位：扫描值/g)；然后按照分光光度法测定该角果皮样品光合色素含量C(代表Cabx、Cab及Ca、Cb)，单位为mg/m2或mg/g FW；接着设C＝Ki·I或C＝Qi·F,则Ki＝C/I,Qi＝C/F；最后根据以上分光光度法测定的色素含量C和扫描测得的I、F值，确定系数Ki、Qi；
(3)按照实施例1步骤(1)的方法测量待测的油菜角果皮样品外表面的面积和称量重量，并用Yaxin-1241叶面积仪扫描该待测角果皮样品的表面积,得到扫描值，换算为Ii、Fi值(Ii、Fi值定义同上),然后根据Ii、Fi值及步骤(2)中得到的系数Ki、Qi，按照C＝Ki·Ii或C＝Qi·Fi，计算待测角果皮光合色素的含量，包括总量Cabx、叶绿素总量Cab及叶绿素a、b含量Ca、Cb，单位：mg/m2或mg/g FW。
统计分析结果显示，单位面积扫描值Ii及单位重量扫描值Fi与分光光度法测定的角果皮色素含量(包括色素总量Cabx、叶绿素总量Cab及叶绿素a、b含量Ca、Cb)绝对值间的相关系数均大于0.01水平临界值，极显著正相关。根据Ii、Fi值及系数Ki、Qi计算的油菜角果皮光合色素总量、叶绿素总量及叶绿素a、b含量，与分光光度法测定的含量间无显著差异(个别结果除外)；按照以上两种不同方法测定的角果皮色素含量大小排列待测油菜品种，则油菜品种排列顺序一致，且品种间色素含量差异显著性一致。