一种用液相色谱法分离测定盐酸鲁拉西酮及其有关物质的方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定盐酸鲁拉西酮及其有关物质的方法。
背景技术：
：盐酸鲁拉西酮是一种非典型抗精神病药物，可以阻断谷氨酸浓度病理性升高导致的神经元损伤，临床主要用于中重度阿尔茨海默症的治疗。盐酸鲁拉西酮化学名为(3ar,4s,7r,7as)-2-[[(1r,2r)-2-[[4-(1,2-benzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride，分子式为c28h36n4o2s·hcl。分子量为492.26，盐酸鲁拉西酮结构式为：。在合成盐酸鲁拉西酮的过程中，有几个重要的起始物料以及中间体可能由于去除不完全而影响药物的纯度，这些影响药物纯度的杂质称为工艺杂质；而降解杂质是在药物生产或贮藏过程中产生的。上述有关物质皆无治疗作用，还可能影响药物的稳定性和疗效，甚至危害人体健康，对于盐酸鲁拉西酮合成主要控制的有关物质有8个，分别是：有关物质1：(1r,2r)-1,2-bis(methanesulfonyloxymethyl)cyclohexane；有关物质2：3-piperazinobenzisothiazole；有关物质3：4-(1,2-benzothiazol-3-yl)-1-[(3ar,7ar)-octahydro-2h-isoindol-2-yl]piperazin-1-ium-1-sulfonate；有关物质4：(3ar,4s,7r,7as)-2-[[(1r,2r)-2-[[4-(1-dioxidobenzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride；有关物质5：(3ar,4r,7s,7as)-2-[[(1r,2r)-2-[[4-(1,2-benzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride；有关物质6：(3ar,4s,7r,7as)-2-[[(1r,2s)-2-[[4-(1,2-benzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride；有关物质7：(3ar,4r,7s,7as)-2-[[(1r,2s)-2-[[4-(1,2-benzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride；有关物质8：(3ar,4s,7r,7as)-2-[[(1r,2r)-2-[[4-(1-oxidobenzisothiazol-3-yl)-1-piperazinyl]methyl]cyclohexyl]methyl]hexahydro-4,7-methano-1h-isoindole-1,3(2h)-dionehydrochloride；结构式分别为：、、有关物质1有关物质2、、有关物质3有关物质4、有关物质5、有关物质6、有关物质7有关物质8。对于合成盐酸鲁拉西酮中引入的工艺杂质和贮藏过程中产生的降解杂质，在原料药中是需要进行质量控制的。因此，实现盐酸鲁拉西酮及其有关物质的分离，在盐酸鲁拉西酮的质量控制方面具有重要的现实意义。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种分析盐酸鲁拉西酮纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现盐酸鲁拉西酮与其有关物质的分离和测定，保证盐酸鲁拉西酮的质量。本发明所述的用液相色谱法分析盐酸鲁拉西酮纯度以及分离其有关物质的方法，是采用辛烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的弱酸水溶液-有机相为流动相。上述所说的色谱柱以辛烷基硅烷键合硅胶为填料，选自phenomenex、inertsil或apollo等品牌。上述所说的有机相选自以下化合物中的一种或几种：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃等，优选乙腈。上述所说的方法，其流动相弱酸水溶液-有机相采用浓度梯度洗脱。上述所说的方法中，弱酸水溶液中包含的酸选自磷酸、甲酸、乙酸、高氯酸或三氟乙酸，优选三氟乙酸。其中酸水溶液中包含的酸浓度为0.01%～3%，优选浓度为0.05%。本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：1)取盐酸鲁拉西酮及各有关物质适量，用乙腈水溶液溶解样品，配制成每1ml含盐酸鲁拉西酮及其各有关物质0.1～1.5mg的样品溶液；2)设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，流动相流速优选1.0ml/min，检测波长为200～250nm，检测波长优选230nm，柱温箱温度为10～40℃，柱温箱温度优选30℃；3)取1)的样品溶液10～50μl，注入液相色谱仪，完成盐酸鲁拉西酮与其有关物质的分离测定。其中：高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津高效液相色谱仪：lc-20at泵，spd-m20a检测器，sil-20ac自动进样器，cbm-20a控制器，cto-10as柱温箱，lcsolution工作站色谱柱：c8（phenomenex，250×4.6mm，5μm）流动相：a：0.05%三氟乙酸水溶液（1000ml水中加入0.5ml三氟乙酸）；b：乙腈；按以下浓度梯度进行洗脱：流速：1.0ml/min检测波长：230nm柱温：30℃进样体积：10μl本发明采用c8（phenomenex，250×4.6mm，5μm）色谱柱，能够有效的分离盐酸鲁拉西酮及其有关物质。本发明解决了盐酸鲁拉西酮及其有关物质的分离测定问题，从而确保了盐酸鲁拉西酮的质量可控。附图说明图1为实施例1时的盐酸鲁拉西酮及其有关物质hplc图；图2为实施例1时的盐酸鲁拉西酮hplc图；图3为实施例2时的盐酸鲁拉西酮及其有关物质hplc图；图4为实施例2时的盐酸鲁拉西酮的hplc图；图5为实施例3时的溶剂hplc图；图6为实施例3时的盐酸鲁拉西酮及其有关物质hplc图；图7为实施例3时的盐酸鲁拉西酮的hplc图。具体实施方式：以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。实施例1仪器与条件高效液相色谱仪：岛津：lc-20at，cbm-20a，sil-20ac，spd-m20a，cto-10asvp；色谱柱：c8（inertsil，250×4.6mm，5μm）；流动相：a：0.05%三氟乙酸水溶液（1000ml水中加入0.5ml三氟乙酸）；b：乙腈；按以下浓度梯度进行洗脱流速：1.0ml/min检测波长：230nm柱温：30℃进样体积：10μl实验步骤取盐酸鲁拉西酮适量，用乙腈水溶解样品，配制成含盐酸鲁拉西酮约1mg/ml的盐酸鲁拉西酮溶液；分别取盐酸鲁拉西酮的各有关物质适量，用乙腈水溶解，分别配制成浓度约为0.5mg/ml的各有关物质溶液；取各有关物质溶液及盐酸鲁拉西酮溶液适量，用乙腈水稀释，配制成系统适用性溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1~2，图1为系统适用性溶液色谱图，图中保留时间49.324min的色谱峰为盐酸鲁拉西酮，其余为各有关物质色谱峰；图2为盐酸鲁拉西酮色谱图，图中保留时间49.553min的色谱峰为盐酸鲁拉西酮。实施例2仪器与条件高效液相色谱仪：岛津：lc-20at，cbm-20a，sil-20ac，spd-m20a，cto-10asvp；色谱柱：c8（phenomenex，250×4.6mm，5μm）；流动相：a：0.05%三氟乙酸水溶液（1000ml水中加入0.5ml三氟乙酸）；b：乙腈；按以下浓度梯度进行洗脱流速：1.0ml/min检测波长：230nm柱温：30℃进样体积：10μl实验步骤取盐酸鲁拉西酮适量，用乙腈水溶解样品，配制成含盐酸鲁拉西酮约1mg/ml的盐酸鲁拉西酮溶液；分别取盐酸鲁拉西酮的各有关物质适量，用乙腈水溶解，分别配制成浓度约为0.5mg/ml的各有关物质溶液；取各有关物质溶液及盐酸鲁拉西酮溶液适量，用乙腈水稀释，配制成系统适用性溶液；按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3~4，图3为系统适用性溶液色谱图，图中保留时间58.674min的色谱峰为盐酸鲁拉西酮，其余为各有关物质色谱峰；图4为盐酸鲁拉西酮色谱图，图中保留时间58.812min的色谱峰为盐酸鲁拉西酮。实施例3仪器与条件高效液相色谱仪：岛津：lc-20at，cbm-20a，sil-20ac，spd-m20a，cto-10asvp；色谱柱：c8（phenomenex，250×4.6mm，5μm）；流动相：a：0.05%三氟乙酸水溶液（1000ml水中加入0.5ml三氟乙酸）；b：乙腈；按以下浓度梯度进行洗脱时间（min）流动相a流动相b0901010901060505070307090307090.0190101009010流速：1.0ml/min检测波长：230nm柱温：30℃进样体积：10μl实验步骤取盐酸鲁拉西酮适量，用乙腈水溶解样品，配制成含盐酸鲁拉西酮约1mg/ml的盐酸鲁拉西酮溶液；分别取盐酸鲁拉西酮的各有关物质适量，用乙腈水溶解，分别配制成浓度约为0.5mg/ml的各有关物质溶液；取各有关物质溶液及盐酸鲁拉西酮溶液适量，用乙腈水稀释，配制成系统适用性溶液；另取乙腈水适量作为空白溶剂。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图5~7，图5为溶剂色谱图；图6为系统适用性溶液色谱图，图中保留时间57.796min的色谱峰为盐酸鲁拉西酮，其余为各有关物质色谱峰；图7为盐酸鲁拉西酮色谱图，图中保留时间57.886min的色谱峰为盐酸鲁拉西酮。对上述盐酸鲁拉西酮终产品有关物质分析方法的以下项目进行了验证：系统适用性试验根据上述实施例3确定的色谱条件，分别用盐酸鲁拉西酮终产品和各有关物质的混合物来分析此色谱条件是否符合要求。由图6可见此条件下各个有关物质与主峰之间分离度符合要求，峰纯度和单点阀值均符合要求。耐用性由于本品的色谱条件为梯度洗脱，并规定了相应的色谱柱型号、柱温、流速、ph值等，故我们将这些条件作相应的微调，考察方法的耐用性。结果发现，该方法对不同品牌的色谱柱、柱温变化±5℃、流速变化±0.1ml/min、ph值变化±0.2等条件下耐用性良好。在不同品牌色谱柱、不同柱温、流速、ph值等条件下，盐酸鲁拉西酮及其有关物质保留时间无显著变化，且均能达到有效分离。当前第1页12