一种用于从包含靶细胞的样本中采集/隔离细胞的装置的制作方法

本实用新型涉及一种用于从样本采集细胞的方法和装置。

背景技术：

对存在异常细胞的尿液筛查是已知的，所述异常细胞标明癌症的存在，所述癌症包括肾脏、输尿管、膀胱或尿道癌症。尿液样本通常在医院取得。通过样本的离心分离从尿液样本中获得细胞。然而，在繁忙的泌尿科，尿液样本经常在离心分离前被留置了很多小时。随着在这样的储存条件下的细胞溶解或退化，尿液中细胞的完整性受到破坏。存在与尿液中的细胞的半衰期取决于待检测的细胞，但可能低至一小时。此外，细菌生长与尿液样本相关。样本处理时机应当得到相应调整。

尿液样本中前列腺细胞的数量极其低，因此必须仔细采集这些前列腺细胞。除此之外，必须维持细胞的活性。尿液中的前列腺细胞的半衰期非常低(小于一小时)。尿液环境中膀胱上皮细胞的半衰期在大概4小时或稍微小于4小时。细胞的任何退化对可能要从中分析的细胞数量具有巨大的影响。这种退化可以由尿液环境下细胞溶解造成或通过细胞对过滤器的粘附所造成。

从如尿液的生物样本中过滤细胞是已知的，并且在 WO2009/087375中有描述。

US 2009/0188864描述了微滤装置和用于分离细胞同时对细胞施用机械性创伤最小化以及对膜损伤最小化的方法。

已知的过滤设备与高水平细胞粘附相关，使得所采集和所回收的细胞数量减少，并使得所采集细胞的活性降低。细胞会卡在已知膜的孔中并且难以移除，大大减小了其活性。

本实用新型提供了从流体样本有效且高效分离所关注细胞同时保持细胞活性的装置和方法。

技术实现要素：

根据本实用新型的一方面，提供一种用于从包含靶细胞的样本中采集/隔离细胞的装置，该装置包括：

膜，将其调整为在该膜上保留所述靶细胞，

第一端口，该第一端口与所述膜流体连通，朝向所述膜的第一侧设置，

第二端口，该第二端口与所述膜流体连通，朝向所述膜的第二侧设置，

样本容器，其具有至少一个壁，该壁限定适于存放样本的内部空间，所述样本容器朝向所述膜的第一侧设置，

细胞采集容器，朝向所述膜的第一侧设置，

滤液容器，朝向所述膜的第二侧设置，

反洗液容器，朝向所述膜的第二侧设置，

其中，第一端口可在其与所述样本容器流体连通的第一位置和其与所述细胞采集容器流体连通的第二位置之间移动；以及

其中，所述第二端口可在其与所述滤液容器流体连通的第一位置和其与所述反洗液容器流体连通的第二位置之间移动。

根据本实用新型的另一方面，提供一种用于从包含靶细胞的样本中采集/隔离细胞的装置，该装置包括：

容器，具有至少一个壁，该壁限定适于存放样本的内部空间，

膜，将其调整为在该膜上保留所述靶细胞，并与容器流体连通，

至少三个端口，其与所述膜流体连通，或者能够定位成与所述膜流体连通。

根据本实用新型的另一方面，提供一种用于从包含靶细胞的样本中采集/隔离细胞的装置，该装置包括：

容器，具有至少一个壁，该壁限定适于存放样本的内部空间，

膜，将其调整为在该膜上保留所述靶细胞，并与容器流体连通，

在膜两侧施加压差的机构(通常为泵机构)，

其特征在于，非水平地设置所述膜，并且穿过所述膜的样本的流体流路适当地为非竖直的。尤其是，穿过所述膜的样本的流体流路通常为水平的。

根据本实用新型的另一方面，提供一种用于从包含靶细胞的样本中采集/隔离细胞的方法，该方法包括：

设置如本文所述的装置；

允许样本开始穿过膜；

采集被保留在所述膜上的细胞。

根据本实用新型的另一方面，提供一种用于从包含靶细胞的样本中采集细胞的方法，该方法包括：

将所述样本放置在容器内，所述容器与膜流体连通，所述膜保留所述靶细胞，

在所述膜两侧施加初始压差，

允许所述样本穿过所述膜，

其中，非水平地设置所述膜，并且穿过所述膜的样本的流体流路适当地为非竖直的，尤其是，穿过所述膜的样本的流体流路通常是水平的。

根据本实用新型的另一方面，所述膜可以水平设置，并且所述样本的流体流路可以是反重力的，从而在所述膜的下侧捕获细胞。这促进了细胞被容易地从该处冲出。

根据本实用新型的另一方面，提供一种筛查生物样本的方法，以识别与增加的疾病风险相关的那些样本，所述方法包括：

1)根据本文所描述的方法从样本中采集细胞；

2)从膜上移出采集到的细胞，

3)测量步骤2)的所采集的细胞样本中一种或多种靶细胞的存在和/或浓度；

4)分析步骤3)的测量结果用于证明增加的疾病状态的风险，尤其是通过将步骤3)的测量结果与参考评分进行比较，并且通过用特殊的生物标记物/细胞存在和/或用与增加的疾病风险相关的生物标记物或细胞的增加水平来识别那些样本。

本实用新型的膜和过滤设备在针对特殊疾病的风险增加的筛查生物样本的方法中是有用的。对于这样的实施方式，对活性状态下的所采集细胞的回收是至关重要的。被回收细胞的数量上的微小差别以及细胞活性＝可能会影响样品是否标记为风险增加的。用于对特殊疾病的风险增加做判断的细胞数量非常小，因此被回收的可生存细胞的数量上的微小差别可能是非常重要的。

根据本实用新型的另一方面，提供了一种患者具有疾病或可能将来具有疾病的风险的诊断方法，该方法包括：

根据本文所描述的方法从样本中采集细胞，

在所述样本中测量靶细胞的水平，

为该患者计算风险评分，

使用该风险评分来识别该患者具有疾病或可能将来具有疾病的可能性。

根据另一实施方式，提供执行本文所公开的多个方法的系统。该系统可以包括本文所公开的、用于采集来自患者的靶细胞的装置，以及通常包括用于测量所述靶细胞的水平的分析仪器。所述系统也可以包括适当编程的计算机，用于执行多个所述方法的一个或多个步骤。例如，所述适当编程的计算机可以执行或辅助一个或多个对样本中靶细胞水平的测量；计算风险评分；使用该风险评分来识别患者患有疾病的可能性或具有将来患有疾病的增加的可能性；以及显示涉及该可能性的信息，如所测量的靶细胞水平、风险评分、患者患有疾病的可能性或具有将来患有疾病的增加的可能性、参考风险评分及其等同参量。

根据一种实施方式，所述系统还可以包括样本采集装置，该样本采集装置被调整用于从患者获得样本。

根据另一实施方式，提供了一种部件套装，包括本文所描述的用于从样本采集/隔离细胞的装置和使用说明。

贯穿该应用，当装置描述为具有、包含、或包括具体构件的情况下，或当过程为描述为具有、包含、或包括具体过程步骤的情况下，可以预计的是，本教导的装置也由所叙述的构件主要构成或构成，并且本教导的过程也由所叙述的过程步骤主要构成或构成。

在该应用中，当元件或构件称为被包含于所叙述的元件或构件列表和/或从所叙述的元件或构件列表中选择的情况下，应当理解的是，原件或构件可以是任何一个所叙述的元件或构件，或者元件或构件可以从所叙述的元件或构件的两个或更多个所构成的集合中选择的。进一步地，应当理解的是，本文所描述的组合、装置或方法的元件和/ 或特征可以以不同的方式合并，不论在此明示还是暗示都不脱离本教导的精神和范围。

除非另外特别声明，术语“包含”“具有”的使用通常应当理解为开放式的并且无限制的。

除非另外特别声明，本文单数的使用包含复数(反之亦然)。除此之外，除非另外特别声明，当术语“约”使用在数量值之前的情况时，本教导也包含了具体的数量值本身。如本文所用的，除非另外特别声明，术语“约”指的是从标称值的±10％的变化。

应当理解的是，只要本教导能够保持可运行，步骤顺序或执行一定动作的顺序是无关紧要的。另外，两个或更多个步骤或动作可以同时进行。

如本文所用的，“参考”或“控制”或“标准”分别可以指的是靶细胞在健康个体或控制人口中的靶细胞的量，或指的是从在健康个体或控制人口中的一种或多种生物标记物衍生而来的风险评分。所述靶细胞和/或生物指标的量可以由健康个体的样本确定，或可以由控制人口的样本确定。

结合本实用新型特定方面、实施方式或例子，所描述的特征、整体、特性、化合物、化学基团或集合被理解为，可适用于任何本文所描述的方面、实施方式或例子，除非不与之兼容。

具体描述

装置

本文提供一种用于从包含靶细胞的样本中采集/隔离细胞的装置，该装置包括：

膜，将其调整为在该膜上保留所述靶细胞，

第一端口，该第一端口与所述膜流体连通，朝向所述膜的第一侧设置，

第二端口，该第二端口与所述膜流体连通，朝向所述膜的第二侧设置，

样本容器，其具有至少一个壁，该壁限定适于存放样本的内部空间，朝向所述膜的第一侧设置，

细胞采集容器，朝向所述膜的第一侧设置，

滤液容器，朝向所述膜的第二侧设置，

反洗液容器，朝向所述膜的第二侧设置，

其中，所述第一端口可在第一位置和第二位置之间移动，其中所述第一端口在所述第一位置与所述样本容器流体连通，所述第一端口在所述第二位置与所述细胞采集容器流体连通；以及

其中，所述第二端口可在第一位置和第二位置之间移动，其中所述第二端口在所述第一位置与所述滤液容器流体连通，所述第二端口在所述第二位置与所述反洗液容器流体连通。

本实用新型的装置通常允许单一动作，其使流体路径从过滤动作改变为反冲洗动作。例如，本实用新型的装置通常包含单一杆的运动以控制两个运动，并因此将装置从过滤操作更改到反洗操作。本实用新型的装置提供了不论谁操作都一贯的结果。操作者不必决定使用哪个止动旋塞/阀在什么时候以及在什么方向上来进行(通过转、拧等) 更改。此外，本实用新型的装置通常包括比已知系统少的管道。

例如通过滑动或转动第一和第二端口，第一和第二端口可以在第一和第二位置之间移动；通常是通过转动。

通常，将膜存放于膜壳体内，并且所述膜壳体的运动使第一端口在第一位置和第二位置之间移动，并且使第二端口在第一位置和第二位置之间移动。

根据一种实施方式，所述膜壳体可以被转动、滑动或其它方式移动以使第一和第二端口在第一位置和第二位置之间移动。

通常在膜壳体运动(包括其转动或滑动)期间，膜本身不动。所述膜壳体通常可移动，以提供对不同容器(样本容器、细胞采集容器、滤液容器和反洗液容器)的接入，同时膜对不同容器的定向维持一致。

根据一种实施方式，第一端口可以包括通向样本容器和/或细胞采集容器的第一通道，第二端口可以包括通向滤液容器和/或反洗液容器的第二通道。所述通道可以在第一和第二位置之间移动并且膜壳体可以保持静止状态。

第一端口可以包括或由膜壳体中的孔隙构成；而第二端口可以包括或由膜壳体中的孔隙构成；其中第一和/或第二端口可以包含从膜壳体内壁通向膜的通道。在这种实施方式中，样本容器、细胞采集容器、滤液容器和反洗液容器在膜壳体外部设置。

通常，当第二端口位于第一位置时，第一端口在第一位置，且流体路径设置为从样本容器穿过膜到滤液容器。

适当地，当第一端口位于第二位置时，第二端口在第二位置，且流体路径设置为从反洗液容器穿过膜到细胞采集容器。

通常，第一端口或者向样本容器或者向细胞采集容器提供流体连通，并且第二端口或者向滤液容器或者向反洗液容器提供流体连通。当第一端口处于第一位置的情况下，所述膜壳体一般禁止流体接入膜和细胞采集容器之间，当第一端口处于第二位置的情况下，所述膜壳体一般禁止流体接入膜和样本容器之间。同样地，当第二端口处于第一位置的情况下，所述膜壳体一般禁止流体接入膜和反洗液容器之间，并且当第二端口处于第二位置的情况下，所述膜壳体一般禁止流体接入膜和滤液容器之间。

根据一种实施方式，第一端口可在第一位置、第二位置和闭合位置之间移动，并且在所述闭合位置，禁止流体从样本容器向膜的运动并且禁止流体从膜向细胞采集容器的运动。第二端口可在第一位置、第二位置和闭合位置之间移动，并且在所述闭合位置，禁止流体从膜向滤液容器的运动并且禁止流体从反洗液容器向膜的运动。当第一和第二端口设置在闭合位置的情况下，可以将压差施加在膜的两侧。

当第一和第二端口设置在闭合位置的情况下，可以在膜壳体内生成真空或正压。这种势能可以被维持在膜壳体内直到端口从闭合位置移到第一位置，从而强迫样本穿过膜。然后端口可以移到闭合位置以允许将压差施加在膜的两侧。然后端口从闭合位置移到第二位置，并且强迫反洗液穿过膜而朝向细胞采集容器。

尤其是在过滤过程中使用该装置期间，端口通常被调整为不可移除。

所述装置可以包括多于两个的与膜流体连通的端口，例如允许使用多于一个的反冲洗液。

根据一种实施方式，所述装置可以包括在第二端口和滤液容器之间的限流孔。第一端口的最窄宽度或直径通常是限流孔最窄宽度或直径的至少两倍大，一般至少四倍大。从样本容器向膜的流动的流体通常大于从膜向滤液容器的流动流体。这使得样本内的施加到细胞的力最小化，并减小了细胞损伤的风险。

限流孔通常位于第二端口和滤液容器之间，意味着反洗液向膜的流动不受限流孔的限制。

根据一种实施方式，第一端口的最窄直径约为1mm以上，通常为1至3mm，典型为1至2mm。限流孔的最窄直径通常多于0.45mm，典型约为0.5至0.6mm。

根据一种实施方式，样本容器可以包括样本容器一排空样本就自动堵住样本容器和膜之间通路的机械装置。这种机械装置通过堵住从样本容器到膜的出口来防止了空气从样本容器吸入到膜。通过包含这种机械装置，使作用于细胞的力最小化来减少细胞损伤风险。细胞不会被从样本容器吸过来的空气流强迫到达膜上或穿过膜。这使得细胞采集率和所采集细胞的生存能力最大化。此外，随着空气流会被最小化或被阻止，膜将保持湿润。与保持在溶液中的细胞相比，膜的干燥增加了对细胞损伤的风险。

样本容器一旦排空样本就自动堵住样本容器和膜之间通路的所述机械装置包括通常为浮动阀的阀，例如以浮在样本中的主体形式，并且样本容器一旦排空就该主体堵住样本容器和膜之间的通路。根据一种实施方式，所述机械装置包括浮球截流阀。当处于闭合位置时，该机械装置可以消除膜两侧的压差，从而当所述机械装置处于闭合位置时，样本可以停止穿过膜。尽管在样本容器一排空时，所述机械装置就可以移动至闭合位置，但一定比例的样本还没有穿过膜。

当所述机械装置处于闭合位置时，在膜两侧的压差通常减少了至少90％，适当消除了压差。

根据一种实施方式，样本的流体比例在消除膜两侧压差时保留在膜的第一侧，适当地在所述机械装置关闭时将样本容器和膜之间的通路堵住。通常在消除压差时，样本的5到20vol.％，适当约10vol.％，设置在膜的第一侧。

膜的第一侧通常与膜的第二侧呈约180°相面对。

每个容器都具有至少一个壁，该壁限定适于存放液体的内部空间。

通常，反洗液是人类细胞的保存剂，一般包括酒精。技术人员清楚地知道合适的流体。

根据本实用新型的另一方面，提供一种用于从包含靶细胞的样本中采集/隔离细胞的装置，该装置包括：

容器，具有至少一个壁，该壁限定适于存放样本的内部空间，

膜，将其调整为在该膜上保留所述靶细胞，并与容器流体连通，

至少三个端口，其与所述膜流体连通。

与所述膜流体连通的至少三个端口与只含两个端口的标准过滤装置相比具有显著优势。尤其是，膜不必在过滤和反冲洗过程期间重新定位。本实用新型的多端口系统允许流体在两个方向上穿透膜而不需替换容器(例如，用存放反冲洗流体的容器替换滤液采集壳体)。这简化了涉及该装置的过滤过程，并减少了样本的溢出风险或意外丢失风险。通过包含至少三个端口，防止了可能造成膜进一步堵塞的滤液和反冲洗流体之间的混合。

适当地，将膜存放在膜壳体内，并且所述装置包含进入膜外壳的三个不同端口。三个以上的端口提供了到膜的不同流体通路，通常至少三个不同流体通路进入该膜壳体内。

通常，端口的其中之一使膜和样本容器之间流体连通，端口的其中之一使膜和滤液采集壳体之间流体连通，并且端口的其中之一使膜和存放反冲洗流体(适当地，细胞保存液、洗涤液和缓冲剂的一种或多种)的容器之间流体连通。

端口的至少一个与膜面向样本容器的第一侧流体连通，并且端口中的至少一个(通常为端口的至少两个)与背离样本容器的膜的第二侧流体连通。

端口的至少一个提供样本容器和膜的第一侧之间的流体通路，并且通常端口的至少一个提供从膜的第二侧到滤液采集壳体的流体通路。一般来说，端口的至少一个提供存放反冲洗流体的容器和膜的第二侧之间的流体通路。

通常，尤其在过滤过程期间，将端口设计或调整为不可移除的。然而，各端口可以在打开位置和闭合位置之间独立地移动，在所述打开位置其能与膜流体连通，在所述闭合位置其不能与膜流体连通。

根据一种实施方式，所述装置包括与膜流体连通的至少四个端口。

通常，端口的至少两个与膜面向样本容器的第一侧流体连通，并且端口中的至少两个与膜背离样本容器的第二侧流体连通。

一般来说，在所述装置包括至少四个端口的情况下，所述端口的其中之一提供从膜的第一侧到容器的流体通路，所述容器适于采集细胞样本和反洗液。

通常，端口能够在任何过滤过程中提供对膜的接入。

适当地，本文所描述的装置用于执行本文所公开的方法。

根据本实用新型的另一方面，提供一种用于从包含靶细胞的样本中采集/隔离细胞的装置，该装置包括：

容器，具有至少一个壁，该壁限定适于存放样本的内部空间，

膜，将其调整为在该膜上保留所述靶细胞，并与容器流体连通，

在膜两侧施加压差的机构(通常为泵机构)，

其特征在于，非水平地设置所述膜，并且穿过所述膜的样本的流体流路适当地为非竖直的。尤其是，穿过所述膜的样本的流体流路通常为水平的。

通常，所述装置包括与膜流体连通的至少三个端口。

根据一种实施方式，将膜配置为相对于穿过膜的样本的流体流路成30到100°的角度，通常其中将所述膜大致成对角配置(约45°)，或大致垂直(约90°)于穿过膜的流体流路而配置。

本文所公开的装置通常是与在本文所公开的方法中使用，和/或用于执行本文所公开的方法。

所述装置通常包括用于减少或消除膜两侧的压差的控制机构。根据一种实施方式，所述装置包括在所有样本穿过膜之前消除压差的控制机构。所述控制机构可以包括在样本耗尽前移动以消除膜两侧压差的阀(例如浮动阀)。例如，控制机构可以移动以堵住从膜向真空的接入，或堵住正在建立压差的泵。

施加压差的机构通常能够在膜两侧以相反方向施加压差。

所述装置通常还包括滤液采集壳体，适于在该壳体中采集滤液。

为了确保尽可能高的细胞采集率，通常将样本保持在膜上的时间最大化。所述装置通常包括入口和出口，所述入口提供样本容器和膜之间流体通路，所述出口提供膜和滤液采集壳体之间的流体通路。为了实现这一点，从样本容器到膜的入口通道的大小可以大于从膜到用于采集滤液的壳体的出口通道。尤其是，从膜到滤液采集壳体的出口通道可以包括限流孔，所述限流孔缩窄所述出口通道。

从样本容器到膜的入口通道的尺寸、从膜到用于采集滤液的壳体的出口通道的尺寸和限流孔的尺寸，取决于装置的应用意图，包括样本类型、细胞类型和待过滤的容量。

根据一种实施方式，限流孔具有0.1到2mm，通常是0.1到1mm，典型为0.3到0.7mm，更合适地约0.5mm的最大宽度或直径。在样本具有30到100ml容量的情况下，具有约0.5mm的最小宽度或直径的限流孔与某些优势相关。尤其是，具有这种尺寸的限流孔很好地控制流速，并将样本和膜之间的接触最大化。

根据一种实施方式，从样本容器到膜的入口通道具有1到10mm, 通常是1到7mm,更合适地约1到2mm的最小宽度或直径。

膜的背离样本容器(且通常朝向滤液采集壳体)的一侧通常被第一膜支架支承。通常，第一膜支架是栅格或网格形式并且应当包括对膜以至少每5cm²进行支承的支架。一般来说，第一膜支架是具有1 至2mm网眼大小的网格。通常，孔的大小为0.5到2mm,典型约为 1mm，并且在每个孔之间具有0.5到2mm、典型约1mm的空间。

根据一种实施方式，膜的两侧以膜支架支承。

通常，第二膜支架的栅格或网格大小尽可能大，以允许尽可能大的膜面积，从而使样本和膜之间的接触最大化，以便在反冲洗期间将细胞采集率最大化。

膜的朝向样本容器(且通常背离滤液采集壳体)的一侧通常被第二膜支架支承。对于反冲洗步骤中从膜采集靶细胞期间的支承是有用的。通常，第二膜支架以比第一膜支架更大的单位面积支承所述膜。通常，第二膜支架是栅格形式并且通常提供对膜的至少每2cm²上的支承。一般来说，第一膜支架是栅格形式，其中栅格上相邻支架之间的间隔是10到20mm，典型约14到15mm。

根据一种实施方式，(过滤期间支承所述膜的)第一膜支架的栅格或网格大小比(过滤期间支承所述膜的)第二膜支架的栅格或网格大小至少小五倍。

在样本容器中适当具有气体释放出口以从样本容器释放任何空气或其它气体。这减小了在样本容器中积聚的任何压力并减小穿过膜的样本的任何湍流。通常，气体释放出口是一种阀。

所述装置通常被密封，尤其是装置从样本容器到膜、并且经过膜朝向滤液采集壳体的部分被密封，从而使得(气体和液体)流体无法逃逸。这使得在经过膜朝向滤液采集壳体的过程中建立完全或未尽真空(partial vacuum)，以使样本穿透膜而被吸入。技术人员会清楚地知道生成完全或未尽真空的若干种方法。可提及的方法包括使用注射器和真空采集管(vacutainers)。

此外，对装置这一部分的密封使得在样本容器和膜之间的完全或未尽真空的建立成为可能，这样的真空建立被证明在任何反冲洗步骤是有用的，允许细胞保存液穿过膜被吸回以从膜上采集过滤过程期间所采集的细胞。

本实用新型的装置通常包含容器，该容器包括细胞保存液、洗涤液或缓冲剂的一种或多种。在流体连通可以根据需要被堵住或控制的情况下，这种容器与膜流体连通通常是可控的。这种容器通常与膜的面向滤液采集壳体的表面流体连通。在细胞保存液、洗涤液或缓冲剂可以穿过膜或被泵迫使穿过过膜以采集含残余物的细胞的情况下，这种容器在上文提到的可选的反冲洗步骤期间是有用的。

根据一种实施方式，滤液采集壳体和包含细胞保存液、洗涤液或缓冲剂的一种或多种的容器均连接于膜，但在任何一次连接中，膜只与这些容器中的一个流体连通。

膜可以由合适的材料形成，特别提及的是尼龙、聚碳酸酯和聚酯膜。

通常，孔以穿过膜的深度延伸，提供样本穿过的通路或通道。

膜的孔通常从面向样本容器的表面延伸到背离样本容器并通常面向滤液采集壳体的表面。

适当地，所述孔的直径小于待采集的靶细胞的直径。所述靶细胞不能轻易地进入或穿过孔，并被膜保留。可以理解的是，孔的平均直径取决于待采集的细胞。通常，所述孔具有小于50μm，适当地0.1 到20μm；典型地1到10μm；优选地4到10μm；有利地4到9μm 的平均直径。

根据一种实施方式，膜的90％的孔具有0.1到20μm的直径。

根据一种实施方式，孔的平均大小为3到10μm，典型地3到8μm, 适当地5到8μm。适当地，90到99％的孔落入该孔大小范围内。

令人惊讶的是，具有远大于孔直径的直径的恶性癌前细胞，由于细胞挤压仍可以穿过该孔。本实用新型已经注意到，具有8到10μm 直径的细胞将它们自己挤压穿过具有1到2μm直径的孔。尽管本实用新型的膜的平均孔大小一般为4到10μm，非垂直流体流路和在膜两侧压差的控制在很大程度上禁止了靶细胞被挤压而穿过膜的孔。

根据一种实施方式，膜是尼龙的，孔的平均大小约为5μm。

根据另一实施方式，膜是聚碳酸酯(例如那些被销售的在商标之下聚碳酸酯)或聚酯，孔的平均大小约为8μm。

适当地，孔在膜的样本接触表面上的分布相对均衡，并且所述孔相当均匀地间隔。通常，所述膜包括每单位mm²100,000到300,000 个孔，一般为每单位mm²150,000到200,000个孔。孔之间的平均距离可以是20到50微米，典型地20到40微米，适当地25至35微米，更适当地约30微米。

本实用新型的膜可以包括在多于一个平面中的孔。

膜的尺寸取决于所述装置的应用，并且膜的尺寸取决于待过滤的流体样本。适当地，膜可以达到10cm²，典型地5cm²，通常3到 5cm²，通常0.5到2cm²。

应当理解的是，膜的形状由过滤设备确定，将膜的形状调整为用于该过滤设备。可以将膜形成为任意合适的形状。特别提及的是包含大致圆形、正方形、矩形和椭圆形过滤片的扁平形状。还可以提及的是3d形状，如锥形和管状形式。对于任何形状，过滤可以由在不只一个平面上的孔所提供。

膜的包括长度、宽度和厚度的尺寸取决于装置的应用意图，包括样本类型、样本和所关注靶细胞的容量。

适当地，所述膜为10到15μm厚。

根据一种实施方式，细胞采集容器和/或滤液容器可选地包括称为“空容器”的隔间，使得气体从空容器接入到细胞采集腔室，或者可替代地，从空腔室接入到滤液容器。这产生作用使得负压减少/允许产生未尽真空。可选地，具有一种单向阀，用于使空气从空腔室离开并在保存剂(或滤液)被采集到采集容器内之后发生压力均衡时再次密封，该单向阀用于防止保存剂(或滤液)泄漏到空腔室中。

空腔室的容量可以被更改为增加或减小未尽真空。一般来说，在保存剂细胞采集部分中，空腔室容量在8ml和12ml之间，在滤液采集容器中是20-40ml。

如本文所使用的，“样本”指的是从动物或人类(通常为人类)提取的任何生物样本，包括血液、血浆、脑脊液、胆汁酸、唾液、滑膜液、胸腔液、心包液、腹膜液、汗,粪便,鼻腔液体,眼液,胞内液,细胞间液,淋巴尿,组织,肝细胞,上皮细胞,内皮细胞,肾细胞,前列腺细胞,血细胞,肺细胞,脑细胞,脂肪细胞,肿瘤细胞,乳腺细胞,腔灌洗液(包括肺,大肠或鼻腔灌洗液)和精子。

通常，所述样本由以下流体构成、基本由以下流体构成或包括以下流体：从由血液,唾液,腔灌洗液(适当地，肺,口,大肠或鼻腔灌洗),精子,尿液或包括如粪便的生物量的悬浮液所构成的集合中选择的流体。一般来说，所述样本为尿液。

靶细胞可以是真核细胞,尤其是能够表明癌症的细胞,如泌尿系统骨盆、前列腺或肾上腺样瘤的癌症。特别提及的是，膀胱细胞、尤其是膀胱上皮细胞,前列腺细胞,循环肿瘤细胞(circulating tumour cells，CTC),干细胞。

采集方法

根据本实用新型的另一方面，提供一种用于从包含靶细胞的样本中采集/隔离细胞的方法，该方法包括：

设置如本文所述的装置；

允许样本开始穿过膜；

采集被保留在所述膜上的细胞。

给予样本的压力通常是标准化的，因此减小或消除了任何使用者的可变性。

通常，穿过膜的样本的流动在所有样本穿过膜之前停止，从而保证了样本的流体部分保留在膜上。

一般来说，初始压差施加在膜的两侧并且这使得样本开始穿过所述膜。可替代地，膜本身可以被拉动或推动穿过流体样本，以使样本穿过膜。

根据一种实施方式，在过滤过程之前，用液体预冲洗所述系统，以便在样本穿过之前，在空气被抽吸穿过膜的情况下减小或消除膜两侧压差的任何峰值。

通常，真空的应用是用来创造压差。然而，根据一种实施方式，磁体可以用来创造压差。

穿过膜的样本的流动通常在所有样本穿过膜之前停止，从而保证了样本的流体部分保留在膜上。样本流体部分保留在膜朝向容器的一侧上确保了保留在膜上的细胞上的力的降低，因此降低了细胞损伤风险。因此,细胞形态变化的风险降低。本实用新型在过滤过程中捕获的细胞更可能保留正常形态和正常特征。这在筛查所捕获的细胞样本时是非常重要的，因为从正常细胞分辨肿瘤细胞是部分地基于形态学和质地来进行。

通常，在所有样本穿过膜之前，内压差被减少了至少90％(通常是约100％)，从而保证了样本的流体部分保留在膜上。

一般来说，穿过膜的样本的流动通过消除膜两侧的压差来停止，以确保至少1vol.％的样本被保留在膜朝向容器的一侧，通常是1到 20vol.％,适当地约10vol.％。一般来说，样本的初始容量约为100ml 或更少。

这防止了膜变干燥，并且在过滤过程或紧跟该过滤的过程期间，允许或确保了靶细胞保留在液体介质中。这减小了细胞粘附在膜上的风险并减小了细胞损伤的风险，从而提升了未受损靶细胞的高采集率并保持了其完整性。

本实用新型方法的目的不仅仅是将靶细胞从样本分离，而且以可以采集和分析的形式将其隔离。从样本中采集靶细胞的采集率必须是比较高的，因为靶细胞通常以非常低的浓度存在于样本中。此外，必须保留细胞的形态以允许对其精确的分析。本实用新型的方法减小了所关注细胞的损伤风险并将采集率最大化。通常受关注的细胞具有易被破坏的形态。如果太多的压力施加在细胞上，细胞的形态可能会被破坏并且会被强迫穿过直径比细胞小的膜孔。这样所述细胞可能被拉入滤液中，减小采集率百分比。可替换地或除此之外，细胞可能被卡在所述孔内或粘附于膜的表面，这加剧减小了采集率百分比，并增加了细胞受损的风险。

一般来说，非水平地设置所述膜，并且穿过所述膜的样本的流体流路适当地为非竖直的。尤其是，穿过所述膜的样本的流体流路通常为水平的。

穿过膜的样本的、优选的非竖直流体流动被认为使细胞采集率最大化。在膜表面相撞之后，细胞可以在重力作用下被拉离或掉出膜表面。与竖直流动相关的膜的压力相比，这减少了将细胞拉进与非竖直流体流动相关的膜的孔中的压力。竖直流体流动可以与膜的高粘附性和低细胞采集率相关，因为施加于过滤过程的重力作用，相对多数量的细胞被拉动穿过膜而进入滤液。本实用新型中，细胞在膜表面上的粘附性较小，并且细胞被卡在膜的孔中的风险更小，或者将细胞拉动穿过膜而进入滤液的风险更小。

因此，在将本实用新型的膜以非水平配置的情况下，细胞采集率被最大化，并且靶细胞的细胞损伤率被降低。所述膜可以在样本流体流路方向上呈30到100°之间配置，适当地配置为对角(约45°)或相比于样本流体流路基本是垂直的(约90°)。根据一种实施方式，将膜基本竖直地配置。

根据一种实施方式，基本水平地配置所述膜，并且穿过所述膜的样本的流体流路是基本竖直的。

流体流动可以是抵抗重力的，细胞在膜的下侧被捕获。这样的实施方式也与膜相对低的粘附性以及细胞的高采集率相关。

根据本实用新型的另一方面，提供一种用于从包含靶细胞的样本中采集/隔离细胞的方法，该方法包括：

将样本放置在与膜流体连通的容器/壳体内，所述膜调整为适于在膜上保留靶细胞，

在所述膜两侧施加初始压差，

允许所述样本穿过所述膜，

其中，非水平地设置所述膜，并且穿过所述膜的样本的流体流路适当地为非竖直的，尤其是，穿过所述膜的样本的流体流路通常是水平的。

所述膜可以以至少20°的角度相对于穿过膜的样本流体流路配置。

根据一种实施方式，穿过膜的样本的流体流路基本是水平的，并且所述膜相对于该流体流路呈对角配置。可替代地，可以相对于流体流路基本垂直地配置所述膜，通常基本竖直地配置所述膜。

可以通过应用真空或未尽真空对膜面向滤液采集壳体且通常背离容器的一侧施加初始压差。一般来说，通过建立未尽真空来施加初始压差。

因此，适当地通过建立未尽或完全真空将样本抽吸穿过膜。这与许多涉及在膜的样本进料侧建立压力以推动穿过膜的样本的标准过滤过程不同。

可替换地，初始压差可以通过在样本上应用正压来施加，以推动样本穿过膜。

从样本采集靶细胞之后，可以将残余物与诸如细胞保存液、洗涤液和/或缓冲液的一种或多种的流体相混合。在将残余物与细胞保存液混合之后，合成的混合物可以经过长时间的储存期而不发生靶细胞数量的显著下降。对特定细胞的存在和/或浓度评估以及可选地对样本中所关注的生物标记物的评估可以推迟数天或数周，这在繁忙医院科室是有利的。如果混合物在冰箱储存，25至27天的储存期是可能的。

通常，本实用新型的方法涉及对具有固定液或细胞保存液的膜进行反冲洗以采集细胞。

该反冲洗步骤涉及在膜两侧建立与初始压差相反的二次压差，以及允许细胞保存液穿过膜。

所述二次压差通常涉及在朝向膜的面对容器的一侧建立较低压力。

所述二次压力可以与初始压力大小相同，或者大小不同。通常，二次压差在大小上大于初始压力。一般来说，通过建立真空(通常是相对于未尽真空的完全真空)施加所述二次压差。

(一般通过上述的反冲洗过程)从膜采集靶细胞之后，样本可以被直接分析，或可以发送给实验室做进一步处理。

根据本实用新型的一种实施方式，穿过膜的样本的流速主要通过控制膜两侧的压差得以优化，但也通过从膜到滤液采集壳体的出口相对于样本容器的大小进行限制得以优化。为了确保尽可能高的细胞采集率，通常将样本保留在膜上的时间最大化。根据一种实施方式，样本为30到100ml，并且过滤过程(步骤a.到e.)通常取0.5到5分钟，典型为1到3分钟，适当为1到2分钟。

通常，在样本产生(通常从人类或动物体将样本移除)后尽快从样本分离或采集细胞。细胞进行退化，尤其是通过长时间留在如尿液的流体中时溶解而进行退化，细胞从这种流体中分离得越快，样本中将检测到的细胞越多。细胞的退化率既取决于细胞种类又取决于流体种类。通常，应当在样本产生后不到一天内来执行分离方法，适当地应在六小时内，更适当地在两小时内；优选在样本产生的30分钟内。

前列腺细胞被估计在尿液中具有少于一小时的半衰期，并且在本实用新型的方法用于从尿液样本中分离前列腺细胞的情况下，该方法优选从样本产生的30分钟或以内来进行。膀胱上皮细胞被认为在尿液中具有约四小时的半衰期，并且在本实用新型的方法用于从尿液样本中分离膀胱上皮细胞的情况下，该方法优选从样本产生的3小时或以内来进行。

根据一种实施方式，本实用新型的方法采集到的细胞数量与按照离心分离方法采集的细胞数量近似一致；优选是细胞/生物标记物数量的至少90％；更适当为至少95％；优选至少99％；有利地是离心分离方法采集的细胞数量的100到110％。

除此之外，与通过过滤样本来回收细胞的已知方法相比，根据本实用新型方法所采集的细胞的活性增加。

根据本实用新型的一种实施方式，在步骤a.到e.的过滤过程之后采集的滤液可以通过采集滤液以及将其放在样本容器中来重复，以再次穿过膜。

样本可以从人之外的哺乳动物获得，(例如以测试目的或兽医治疗目的)，并且如果这样，在与上述基本相同的条件下进行本方法。本文所使用的患者，通常是哺乳动物，优选是人类，并且包括非人类的灵长类动物、马、猪、绵羊、骆驼、山羊、狗、猫或啮齿动物。

筛查或诊断方法

根据本实用新型的另一方面，提供一种筛查生物样本的方法，以识别与增加的疾病风险相关的那些样本，所述方法包括：

1.根据本文所描述的方法从样本中采集细胞，

2.从膜上移出采集到的细胞，

3.测量步骤2的所采集的细胞样本中一种或多种靶细胞的存在和/或浓度；

4.分析步骤3的测量结果用于证明增加的疾病状态的风险，尤其是通过将步骤3)的测量结果与参考评分进行比较，并且通过用特殊的生物标记物/细胞存在和/或用与增加的疾病风险相关的生物标记物或细胞的增加水平来识别那些样本。

为了识别增加的疾病风险，受关注的细胞或生物标记物应当是有活性的。对靶细胞的损伤可能与他们粘附于膜之后将它们从膜移除有关。在被卡在膜的内腔之前，细胞还可能进入膜孔，并且这与细胞活性的降低有关。比起已知过滤方法和装置，本实用新型的方法和装置与细胞较低粘附率有关。因此本实用新型的细胞损伤相关风险降低，并且所采集的细胞的生存率提高。本实用新型的方法，从而为特殊疾病的风险增加提供了更可靠精确的筛选方法。

本实用新型的装置通常提供了用于采集细胞、浓缩细胞和保存细胞的单一设备。

本实用新型的装置通常包括可拆卸的膜以及可选地可拆卸的膜壳体。所述膜(以及可选地膜壳体)可以是一次性的，并且所述装置可以用替换膜(可选地用壳体)来重新组装。

根据本实用新型的另一方面，提供了一种患者具有疾病或可能将来具有疾病的风险的诊断方法，该方法包括：

根据本文所描述的方法从样本中采集细胞，

在所述样本中测量靶细胞的水平，

为该患者计算风险评分，

使用该风险评分来识别该患者具有疾病或可能将来具有疾病的可能性。

可以使用本领域技术人员已知的任意合适的方法来确定所述靶细胞的存在和/或浓度，以及可选的一种或种生物标记物或细胞。特别提及的是，免疫化验，比色化验，比浊化验和流式细胞术。所述样本可以与结合靶细胞的标记物接触，以提供标记物信号的发射。合适的标记物包括放射性同位素，荧光团，酶，染料，配位体和纳米颗粒。

所采集的细胞样本可以与已知与特定细胞结合的生物标记物接触，并且可以评估生物标记物的存在和浓度。

所述方法可以包括测量多于一种细胞的存在和/或浓度的步骤以提供细胞浓度分布图(concentration profile)用于步骤4中的比较。这些测量结果都可以使用相同或不同的化验来测量。通常使用不同的化验来检测不同的靶分子。

细胞计数通常使用血球计来评估。

可基于其它因素以及样本中存在的靶细胞水平，例如标明疾病存在或可能性的其它生物标记物的水平，来计算风险评分。其他生物标记物的水平可以从样本或从取自患者的其他样本中评估。

风险评分可以通过加权所测量的靶细胞以及可选地其它生物标记物的水平来计算。

该风险评分可以与参考风险评分(或标准风险评分)作比较。参考风险评分可以是标准或阈值。该阈值可以是下阈值、上阈值或具有上限和下限的阈值。

阈值风险评分可以参考取自有疾病个体的样本中(多种)特定细胞的存在和浓度的平均测量结果来计算。所述方法可以包括，通过对特定样本中多于一个的细胞的浓度加权而计算阈值风险评分。

可替换地，参考评分可以是特定细胞的存在和/或浓度的平均分。

本实用新型的方法可以用于识别患者将来可能具有疾病的可能性。通常，将来可以理解为意味着紧接着样本取自该患者的时间的6 年以内，通常为2年以内，适当地为1年以内，更适当地为样本取自该患者的时间的3至6个月以内。

本实用新型的方法通常不提供疾病的明确诊断但通常为了进一步测试和/或为了受训人员的考虑而使具有增加了疾病的相关风险的样本进行突出。如果发现患者具有增加的疾病风险，则可以对他/她提供加强检测。

用于筛选的适当的疾病包括癌症前期或癌症状况，包括皮肤，口腔，喉，肺，膀胱，外阴，乳房，消化道，泌尿系统，骨盆，前列腺，肾上腺样瘤或任何其他器官的癌症前期或癌症状况。本实用新型的方法可以用于对包含头、颈、膀胱肿块的基底细胞癌、鳞状细胞癌的那些细胞癌高风险下的样本进行识别。

在本教导的各种实施方式中，诊断疾病或诊断疾病的增加的可能性的方法可以包括，向包括计算机可读介质的计算机输入靶细胞水平的测量结果，可选地，向计算机输入一种或多种额外生物标记物水平；以及通过对被测量的生物标记物水平加权使计算机为患者计算风险指数，由此确定疾病风险或患者对该疾病发展的风险。

套装

根据本实用新型的一方面，提供了一种部件套装，包括本文所描述的用于从样本采集/隔离细胞的装置和使用说明。

所述套装可以包括用于测量样本中靶细胞水平的试剂和材料，例如使用流式细胞术的适于检测细胞的试剂。

套装还可以包括对照，可以是对照样本、参考样本、内部标准或之前生成的经验数据。所述对照可以响应于正常的、健康的个体或具有已知疾病状态的个体。此外，对照可以提供用于靶细胞或者所述对照可以是参考风险评分。

套装可以进一步包括根据任何调控要求执行本文所述方法和/或解释结果的说明。此外，在套装中可以包括软件，用于分析所检测的靶细胞水平，计算风险评分和/或确定患者具有疾病的可能性或具有增加的发展疾病的风险的可能性。优选地，套装被包装在适于商业分销、销售和/或使用的容器中，包含适当的标记物，例如包括识别靶细胞的标记物。

附图说明

本实用新型现在将通过举例的方式仅参考下列附图进行说明，其中：

图1a至1c示出了使用本实用新型装置的本实用新型的方法的表示图；

图2a示出了包括第一膜支架、膜(未示出)和第二膜支架(未示出)的组件；

图2b示出了第一膜支架；

图2c示出了第二膜支架；

图3示出了根据本实用新型的装置的一种实施方式；

图4a和图4b示出了从经历了离心分离的样本的细胞回收图；

图5a和图5b示出了从经历了本实用新型方法的样本的细胞回收图；

图6a和6b示出了本实用新型的装置的另一实施方式；

图7示出了本实用新型的装置的另一实施方式；

图8示出了本实用新型的装置的一种实施方式；

图9示出了本实用新型的一种实施方式；

图10示出了本实用新型的装置的一种实施方式，该装置包括竖直设置的膜；

图11提供了一种表格，其显示包括不同支承栅格对膜在细胞回收和细胞损伤方面的影响；

图12示出了本实用新型的装置的另一实施方式；

图13示出了空容器，该空容器可以设置为与细胞采集容器和/或滤液容器气体连通。

具体实施方式

图1a至1c提供了细胞采集方法中装置1的实施方式的示意性表示图。样本容器2竖直设置。在(膜保持部6内设置的)膜5两侧设置压差，该压差通过应用吸入泵7造成的未尽真空来产生。样本经过膜5，进入滤液容器8。然后以相反的方向在膜5的两侧施加第二压差，并且固定剂从反洗液容器10穿过膜5到细胞采集容器10，使在膜的左手侧表面上采集的细胞残余物悬浮(如图所示)。

图2a示出了包括第一膜支架、膜(未示出)和第二膜支架(未示出)的组件。第一膜支架在图2b详细示出。这一支架意在用于从面向滤液收集容器的一侧支承膜，并且该支架显示为设置在图1a至 1c的膜的右手侧。可以注意的是，该第一膜支架的栅格大小显著小于第二膜支架的栅格大小。第二膜支架在图2c详细示出。这一支架意在用于从面向滤液收集容器的一侧支承膜，并且该支架显示为设置在图1a至1c的膜的左手侧。

图3示出了本实用新型的装置的实施方式30，该实施方式尤其适于用在尿液过滤中。使用中，关闭流体连接控制机构40，关闭了注射器42和(设置在膜保持部34中的)膜之间的流体连通通道。将(近似50ml)尿液样本添加至注射器42中。通过关闭流体连接控制机械装置32，关闭了(设置在膜保持部34中的)膜和注射器36之间的流体连通通道。通过伸展注射器36的柱塞38来建立未尽真空。通过打开流体连接控制机械装置32，打开了膜和注射器36之间的流体连通通道，并且在膜两侧提供了压差。通过打开流体连接控制机械装置40，打开了膜和注射器36之间的流体连通通道，并且尿液样本由于膜两侧的压差被拉动或抽吸穿过膜而进入注射器36。当尿液样本被拉入注射器36时，未尽真空被部分缓解，减小了膜两侧的压差。约为47.5ml 的尿液样本被允许流经膜。剩余的尿液样本通常在膜壳体34内。随后通过关闭流体连接控制机械装置32，关闭了膜和注射器36之间的流体连通通道，并且消除了在膜两侧的压差。

通过进行确保流体连接控制机械装置32和40是闭合的检查，确保了流体连通通道在膜和注射器44、48之间是闭合的。将细胞保存液添加到注射器48中。通过伸长注射器44的柱塞46来建立真空。通过打开流体连接控制机械装置40，打开了膜和注射器44之间的流体连通通道，并且在膜两侧提供了压差。通过打开流体连接控制机械装置32，打开了膜和注射器48之间的流体连通通道。细胞保存液由于膜两侧的压差被抽吸穿过膜，使细胞残余物和吸入注射器44中的剩余尿液样本悬浮。

图4a和4b示出了经历了离心分离的样本的细胞回收图，并且图 5a和5b示出了经历了本实用新型方法的样本的细胞回收图。所回收的细胞的数量大体相同。

图6a和6b示出了本实用新型的装置的另一实施方式。图6b示出了包括四个端口的膜壳体。

图7示出了一种装置的实施方式，该装置包括竖直配置的膜。在未尽真空的作用下，流体样本在水平流路中被拉动穿过膜。这里包括一种单向阀。

图8示出了一种实施方式，第一端口可在其与所述样本容器2流体连通的第一位置和其与所述细胞采集容器9流体连通的第二位置之间移动；以及

其中，所述第二端口可在其与所述滤液容器8流体连通的第一位置和其与所述反洗液容器10流体连通的第二位置之间移动。第一和第二端口可通过膜壳体6的转动在第一和第二位置之间移动。第一和第二端口还可以移动到闭合位置，在所述闭合位置流体从样本容器2 到膜的移动被禁止并且从膜到细胞采集容器9的移动被禁止。

通常，本实用新型的所述装置包括设置在第二端口和滤液采集容器之间的限流孔。限流孔的直径约为0.5mm，第一端口的最窄直径为1到2mm，第二端口的最窄直径为3mm。第一和第二端口和限流孔的相对直径用于限制从膜到滤液容器的流速，并减小对在膜上采集的细胞施加的力，从而减小细胞损伤的风险。已经发现的是，当限流孔小于约0.4mm的情况下，会与膜的某些堵塞相关。

图10示出了本实用新型的装置的一种实施方式，该装置包括竖直设置的膜5。该实施方式中的膜5和膜壳体6可以在重新安装前拆卸和清洁。可替换地，膜和膜壳体可以是一次性的，并且可以被拆卸和更换。

图11证明了不同类型的膜支架件在细胞回收率和细胞损伤率上的效果。可以看出，在过滤过程期间使用具有相对低数量的较大孔洞的膜支架件，与低细胞回收率和低细胞损伤率相关。相对照地，使用具有相对高数量的较小孔洞的栅格，与远远更高的细胞回收率和低细胞损伤率相关。与使用离心机的回收相关率相比，来自这种实施方式的结果是相当的，甚至更好。

流动路径在图12中示出。尿液样本经由样本入口被提供到样本容器中。通过在膜两侧施加负压将尿液拉动穿过膜而进入滤液容器(A)。在反洗液容器中提供保存液。通过在膜两侧施加负压将保存液拉动穿过膜，来将保留在膜上的细胞从膜上冲洗掉并冲入到细胞采集容器(B)中。膜壳体可以在第一端口与所述样本容器流体连通的第一位置和第一端口与所述细胞采集容器流体连通的第二位置之间转动或滑动。膜壳体的这种运动使所述第二端口在其与所述滤液容器流体连通的第一位置和其与所述反洗液容器流体连通的第二位置之间移动。

细胞采集容器和/或滤液容器可选地包括在下侧(空容器)上的隔间，所述隔间用于减小由采集器生成的负压/创造由采集器生成的未尽真空。可选地，具有一种单向阀(红色矩形)，用于使空气从空腔室离开并在保存剂(或滤液)被采集到采集容器内之后发生的压力均衡时再次密封，该单向阀用于防止保存剂(或滤液)泄漏到空腔室中。

空腔室的容量可以被更改为增加或减小未尽真空。一般来说，在保存剂细胞采集部分中，空腔室容量在8ml和12ml之间，在滤液采集容器中是20-40ml。