扭肚藤中原儿茶酸的含量测定方法与流程

本发明涉及中药测量领域，特别涉及一种扭肚藤中原儿茶酸的含量测定方法。

背景技术：

扭肚藤收载于《广东省中药材标准》(第一册)，为木犀科植物扭肚藤的干燥茎叶。别名青藤仔花、左扭藤、谢三娘、毛毛茶、断骨草，又因为其花为白色，形似素馨花，故又名为白花茶、假素馨等。其生于山坡、河旁、灌木丛及混交林中，主要分布在广东、海南、广西、云南等地。

据文献报道，扭肚藤中含有原儿茶酸、咖啡酸、水杨酸、香草酸、阿魏酸、咖啡酸甲酯、咖啡碱、3,6-diisopropylpiperazin-2,5-dione、东莨菪内酯等成分；有文献采用HPLC法测定扭肚藤药材中东莨菪素的含量，也有人研究复方扭肚藤胶囊对实验性腹泻的影响，结果显示具有显著的镇痛和抗炎作用，相关研究较少。

扭肚藤具有清热解毒、利湿消滞之功效，主治湿热腹痛，肠炎、痢疾、四肢麻痹肿痛、瘰疬、疥疮等。

现代研究表明，原儿茶酸具有抗菌，抗病毒，抗氧化，降低心肌耗氧量，缓解心绞痛，抑制体外血小板聚集，增加冠脉流量，增强心肌耐缺氧，抗心肌缺血再灌注损伤等多种药理活性。

目前还没有比较好的扭肚藤中原儿茶酸的含量测定方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于，针对上述问题，提供一种扭肚藤中原儿茶酸的含量测定方法。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案为：

一种扭肚藤中原儿茶酸的含量测定方法，其包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：取原儿茶酸对照品适量，精密称定，置25ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得浓度为0.278mg·ml^-1的对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：取扭肚藤药材粉末2g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入20ml甲醇，精密称定，超声提取(功率100W，频率50Hz)30min，放冷，精密称定，用甲醇补足减少的重量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为扭肚藤药材供试品溶液；

(3)线性关系考察：精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml分别置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，即得质量浓度分别为0.00278、0.00556、0.01112、0.01668、0.02224mg·ml^-1的对照品溶液；按设定色谱条件进行测定，进样量5μl，以原儿茶酸进样量X(ng),对峰面积积分值Y进行线性回归，回归方程Y＝4086x+2816.5，r＝0.9998；

(4)精密度试验：分别精密吸取供试品溶液10ul，连续进样6次，按所述设定色谱条件进行测定，记录原儿茶酸峰面积。

所述设定色谱条件为：

色谱柱：Waters Xbridge^TM(4.6×250mm，5μm)；

流动相：乙腈-0.2％磷酸(8:92)；

检测波长：260nm；

流速：1.0ml·min^-1；

柱温：25℃；

进样量：10μl。

(5)重复性试验：取同一批扭肚藤样品，按步骤(2)方法平行制备6份供试品溶液，按所述设定色谱条件进行测定，记录色谱图，计算供试品中原儿茶酸的含量。

(6)加样回收率试验：取同一批已知原儿茶酸含量的扭肚藤药材粗粉1g，该扭肚藤药材粗粉中含原儿茶酸0.0512mg·g^-1，精密称定，平行9份，分别精密加入一定量的原儿茶酸对照品，按步骤(2)方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算回收率。

所述步骤(3)中，结果表明，原儿茶酸在13.9～111.2ng范围内，呈良好的线性关系。

所述步骤(4)中，结果显示，原儿茶酸的峰面积值RSD为1.75％，表明仪器精密度良好。

所述步骤(5)中，结果显示，原儿茶酸的平均含量为0.0512mg·g^-1，RSD为1.14％，表明测定方法重复性良好。

所述步骤(6)中，原儿茶酸的平均回收率为98.99％，RSD为1.74％，表明回收率良好，准确度高。

本发明的有益效果为：本发明方法简单易操作，能够快速、准确地对扭肚藤中原儿茶酸的含量进行测定，精密度、重复性好，准确度高，回收率良好。

下面结合附图与实施例，对本发明进一步说明。

附图说明

图1是原儿茶酸标准曲线；

图2是本发明中原儿茶酸对照品图；

图3是S1扭肚藤供试品图；

图4是S2扭肚藤供试品图。

具体实施方式

实施例：如图1至图4所示，本发明一种扭肚藤中原儿茶酸的含量测定方法，其包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：取原儿茶酸对照品适量，精密称定，置25ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得浓度为0.278mg·ml^-1的对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：取扭肚藤药材粉末2g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入20ml甲醇，精密称定，超声提取(功率100W，频率50Hz)30min，放冷，精密称定，用甲醇补足减少的重量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为扭肚藤药材供试品溶液；

(3)线性关系考察：精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml分别置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，即得质量浓度分别为0.00278、0.00556、0.01112、0.01668、0.02224mg·ml^-1的对照品溶液；按设定色谱条件进行测定，进样量5μl，以原儿茶酸进样量X(ng),对峰面积积分值Y进行线性回归，回归方程Y＝4086x+2816.5，r＝0.9998；

(4)精密度试验：分别精密吸取供试品溶液10ul，连续进样6次，按所述设定色谱条件进行测定，记录原儿茶酸峰面积。

所述设定色谱条件为：

色谱柱：Waters Xbridge^TM(4.6×250mm，5μm)；

流动相：乙腈-0.2％磷酸(8:92)；

检测波长：260nm；

流速：1.0ml·min^-1；

柱温：25℃；

进样量：10μl。

(5)重复性试验：取同一批扭肚藤样品，按步骤(2)方法平行制备6份供试品溶液，按所述设定色谱条件进行测定，记录色谱图，计算供试品中原儿茶酸的含量。

(6)加样回收率试验：取同一批已知原儿茶酸含量的扭肚藤药材粗粉1g，该扭肚藤药材粗粉中含原儿茶酸0.0512mg·g^-1，精密称定，平行9份，分别精密加入一定量的原儿茶酸对照品，按步骤(2)方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算回收率。

所述步骤(3)中，结果表明，原儿茶酸在13.9～111.2ng范围内，呈良好的线性关系。见表2，图1。

表2原儿茶酸线性关系考察结果

所述步骤(4)中，结果显示，原儿茶酸的峰面积值RSD为1.75％，表明仪器精密度良好。见表3。

表3精密度试验结果

所述步骤(5)中，结果显示，原儿茶酸的平均含量为0.0512mg·g^-1，RSD为1.14％，表明测定方法重复性良好。见表4。

表4重复性试验结果

所述步骤(6)中，原儿茶酸的平均回收率为98.99％，RSD为1.74％，表明回收率良好，准确度高。见表5。

表5加样回收率试验结果

在本实施例中，所采用的仪器为:Waters e2695-2489型高效液相色谱仪；PDA检测器，在线真空脱气系统，四元梯度泵，Empower2数据处理软件系统；Agilent 1200高效液相色谱仪(包括柱温箱，自动进样器，泵，紫外检测器)；Mettler Toledo XS205DU电子分析天平(瑞士)；KQ700DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；Milliporre Advantage A10超纯水系统(美国)；JP300A型高速多功能粉碎机(浙江永康市久品工贸有限公司)；TLE204型电子分析天平(梅特-托利多仪器(上海)有限公司)。

乙腈、甲醇(德国默克股份两合公司)均为色谱纯；水为超纯水(Millipore超纯水系统)；甲醇(广州化学试剂厂)、磷酸(赛默飞世尔科技有限公司)均为分析纯；原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号)；扭肚藤样品：见表1。

表1扭肚藤药材来源

不同产地及批次扭肚藤药材中原儿茶酸的含量测定，取各扭肚藤药材粗粉，按上述步骤(2)方法制备供试品溶液，按照所述设定色谱条件进行测定其峰面积，代入线性回归方程，计算原儿茶酸含量，结果见表6、图3、图4。

表6 2批扭肚藤原儿茶酸含量测定结果

本发明方法简单易操作，能够快速、准确地对扭肚藤中原儿茶酸的含量进行测定，精密度、重复性好，准确度高，回收率良好。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。故凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明之形状、构造及原理所作的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围内。