一种利用离子色谱法检测盐杜仲中盐含量的方法与流程

本发明属于中药检测
技术领域：
，涉及一种利用离子色谱法检测盐杜仲中盐含量的方法。
背景技术：
：杜仲为杜仲科植物杜仲EucommiaulmoidesOliv.的干燥树皮。刮去粗皮，堆置“发汗”至内皮呈紫褐色，晒干。饮片规格有杜仲与盐杜仲，其中盐杜仲炮制方法为盐炙法，即取杜仲块或丝，每100kg待炮制品用食盐2kg，用盐水将杜仲块或丝拌匀，闷透，置炒制容器内，以文火加热，炒至断丝、表面焦黑色。中医临床上主要使用盐杜仲，认为盐入肾经，有助于杜仲益肾作用，与临床疗效直接相关。具有补肝肾，强筋骨，安胎之功效。盐杜仲饮片中医临床使用极其广泛，突出问题为盐炙法时炒制不到位，胶丝仍富弹性如生品，不按古法炮制，严重影响了临床使用效果，迄今未有文献报道测定盐杜仲中含盐量的技术。技术实现要素：针对现有技术的不足，本发明提供一种利用离子色谱法检测盐杜仲中盐含量的方法。本发明所采用的技术方案是:一种利用离子色谱法检测盐杜仲中盐含量的方法，其特征在于：该方法具体通过以下步骤实现：(1)氯化钠对照品溶液的制备：利用离子色谱仪进样分析，并同时记录峰面积，采用外标法绘制氯离子的标准曲线，得出标准曲线的回归方程；(2)盐杜仲供试品溶液的制备:采用与上述相同的色谱条件，利用离子色谱仪进样分析，并同时记录峰面积，并根据步骤(1)的标准曲线回归方程计算得出供试品氯离子含量，进一步得出供试品中盐的含量。所述步骤(1)得出以单位为μg/ml的氯离子进样浓度与峰面积Y作标准曲线的回归方程为，Y＝0.176X+0.0741，r＝0.99997，式中r为线性相关系数，X为氯离子的浓度。所述的离子色谱仪为热电ISC-5000A型，所用的色谱柱为AG19+AS19色谱柱，所用的柱温20～40℃，抑制器电流为60～90mA，淋洗液为梯度淋洗。所用的柱温30℃、抑制器电流为75mA。淋洗液为梯度洗脱，具体为：0～10分钟10mmol的KOH，10～15分钟10mmol的KOH～30mmol的KOH，15～25分钟30mmol的KOH，25～26分钟30mmol的KOH～10mmol的KOH，26～31分钟10mmol的KOH。所述方法中每次进样的样品体积为25μl。本发明的有益效果是目前市场上盐杜仲在盐炙时存在未按标准炮制工艺加工的现象，且盐杜仲标准中也未规定含盐量的限度，加之盐杜仲的炮制程度在性状上不易区分，本发明采用离子色谱法检测盐杜仲饮片盐的含量，该方法精密度高、重现性好、准确度高、重复性好，能够实现对盐杜仲饮片盐的含量的检测，大大减少分析时间，并且方法简单易行，方便可靠，能够更好的控制盐杜仲的炮制工艺，保证临床用药。附图说明图1是氯化钠对照品离子色谱图；图2是盐杜仲供试品离子色谱图；图3是实验例3氯离子线性关系图。图中，横坐标代表时间，纵坐标代表离子强度。具体实施方式本发明所采用的仪器为热电ISC-5000A型离子色谱仪，AG19+AS19色谱柱，柱温30℃，梅特勒ME204电子分析天平、赛多利斯BP211D电子分析天平，为现有产品；采用的试药为氯化钠基准物质(批号20038661)，试验所用水均为高纯水。所采用的离子色谱条件为：AG19+AS19色谱柱；抑制器电流：75mA；淋洗液为梯度洗脱：0～10分钟10mmol的KOH，10～15分钟10mmol的KOH～30mmol的KOH，15～25分钟30mmol的KOH，25～26分钟30mmol的KOH～10mmol的KOH，26～31分钟10mmol的KOH；柱温30℃；进样体积25μl。已知盐杜仲饮片炮制工艺为取杜仲丝，每100kg待炮制品用食盐2kg，用盐水将杜仲丝拌匀，闷透，置炒制容器内，以文火加热，炒至断丝、表面焦黑色。一种利用离子色谱法检测盐杜仲中盐含量的方法，采用离子色谱仪进行检测、外标法定量分析，具体步骤包括：(1)氯化钠对照品溶液的制备：分别精密称取对照品10.81mg、10.05mg，置100ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，浓度分别为108.1μg/ml、201.1μg/ml，作为对照品储备液A、B备用；精密吸取上述浓度为108.1μg/ml的对照品储备液A各1ml，分别置25ml、10ml、5ml、2ml量瓶中，用水稀释至刻度，得到浓度分别为4.324μg/ml、10.81μg/ml、21.62μg/ml、54.05μg/ml的对照品溶液C、D、E、F。(2)盐杜仲供试品溶液的制备：取供试品适量，粉碎，精密称定供试品粉末0.5g，置离心管中，精密加入高纯水50ml，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液；(3)氯化钠对照品溶液和盐杜仲供试品溶液色谱图将对照品溶液A、B、C、D、E、F摇匀后，利用离子色谱仪上的25μl定量环自动进样分析，并同时记录峰面积，得出以氯离子进样浓度(μg/ml)与峰面积Y作标准曲线的回归方程为：Y＝0.176X+0.0741，r＝0.99997，r＞0.995，证明方程拟合度高，方程可用，式中r为线性相关系数，X为氯离子的浓度；将盐杜仲供试品溶液采用同样的色谱条件在离子色谱仪上以25μl定量环自动进样分析，并同时记录峰面积，读取盐含量结果。实施例1取10kg杜仲丝，用适量水溶解食盐100.17g，将杜仲丝杜仲丝拌匀，闷透，置炒制容器内，以文火加热，炒至断丝、表面焦黑色。按上述的色谱条件进行技术检测，结果为0.92％。计算公式：实施例2取10kg杜仲丝，用适量水溶解食盐200.07g，将杜仲丝杜仲丝拌匀，闷透，置炒制容器内，以文火加热，炒至断丝、表面焦黑色。按拟定的技术检测，结果为1.92％。计算公式同实施例1。实施例3取10kg杜仲丝，用适量水溶解食盐999.76g，将杜仲丝杜仲丝拌匀，闷透，置炒制容器内，以文火加热，炒至断丝、表面焦黑色。按拟定的技术检测，结果为9.83％。计算公式同实施例1。实验例所采用的供试品盐杜仲饮片的编号为2016G0598。1.提取溶剂的选择取供试品适量，粉碎，精密称定供试品粉末0.5g，置离心管中，精密加入80℃高纯水与高纯水各50ml，摇匀，超声30分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，测定，结果80℃高纯水与高纯水供试品中氯离子的含量无显著性差异，但高纯水取用方便，故确定高纯水为提取溶剂。表1提取溶剂的选择2.提取方式的选择取供试品适量，粉碎，精密称定供试品粉末0.5g，置离心管中，精密加入高纯水50ml，分别摇匀、超声10分钟、超声30分钟、超声60分钟，离心，取上清液作为供试品溶液，测定，结果摇匀、超声10分钟、超声30分钟、超声60分钟供试品中氯离子的含量无显著性差异，故确定提取方式简单的摇匀为提取方式。表2提取方式的选择3.线性关系考察3.1对照品溶液的制备精密吸取上述浓度为108.1μg/ml的对照品溶液各1ml，分别置25ml、10ml、5ml、2ml量瓶中，用水稀释至刻度，浓度分别为4.324μg/ml、10.81μg/ml、21.62μg/ml、54.05μg/ml的对照品溶液。将浓度为4.324μg/ml、10.81μg/ml、21.62μg/ml、54.05μg/ml、108.1μg/ml、201.1μg/ml的对照品溶液分别进样25μl，按上述色谱条件进行测定，以氯离子进样浓度(μg/ml)与峰面积(Y)作标准曲线，计算回归方程为Y＝0.176X+0.0741，r＝0.99997。结果表明氯离子进样浓度在4.324μg/ml～201μg/ml范围内，与峰面积呈良好的线性关系。3.2标准曲线绘制分别精密吸取上述制备好的对照品储备液A溶液1ml分别置25ml、10ml、5ml、2ml量瓶中，用高纯水定容至刻度，分别作为对照品溶液，再取对照品1溶液、对照品2溶液，自动进样25μl，按上述色谱条件进行测定，以氯离子进样浓度(μg/ml)与峰面积(Y)作标准曲线，计算回归方程为Y＝0.176X+0.0741，r＝0.99997。结果表明氯离子进样浓度在4.324μg/ml～201μg/ml范围内，与峰面积呈良好的线性关系。线性关系如图3。表3氯离子标准曲线测定结果进样浓度(μg/ml)峰面积4.3240.962510.811.97521.623.86954.059.4485108.119.085201.035.5064.精密度实验吸取对照品A溶液25ul，连续重复进样6次，测定，记录其峰面积值，结果氯离子峰面积的相对标准偏差为0.11％,表明精密度良好。表4精密度实验结果5.稳定性实验取同一批供试品，照供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，分别在0、3、5、9、16、18、24小时测定，计算其峰面积的RSD为0.42％，表明本品24小时内稳定性良好。表5稳定性试验结果6.重复性实验取同一批供试品样品6份，照文中供试品制备方法制成供试品溶液，同法测定，计算氯离子的含量，其RSD值为1.25％，结果表明重复性良好。表6重复性实验结果7.氯离子回收率实验采用加样回收法，向离心管中精密加入0.2588mg/ml的氯化钠对照品溶液10ml，平行6份，取重复性试验项下的样品约0.25g，氯离子含量10.4753mg/g，精密加入高纯水40ml，按供试品溶液同法制备，测定含量，平均回收率为98.15％，RSD为1.85％，表明回收率良好。表7氯离子回收率实验结果拟定限度的建立《2015年版中国药典四部》中盐炙法的规定为每100kg杜仲加食盐量为2kg。另外查阅北京、甘肃、上海、浙江等地的地方饮片炮制规范，基本同药典规定。故建立的限度为含盐量以氯离子计，为1.5％～2.5％。当前第1页1 2 3