本发明涉及一种用于检测泽兰酮化合物的超高效液相色谱质谱联用方法，可用于检测草粉和饲料中泽兰酮化合物的种类和含量。
背景技术：
9-羰基-10Hβ泽兰酮和9-羰基-10，11去氢泽兰酮是从紫茎泽兰植株中获得的两种泽兰酮化合物，它们都含有一个杜松烷倍半萜母体。研究证明它们是紫茎泽兰植株的主要毒性成分，可造成大鼠肝中毒和胆汁淤滞，是紫茎泽兰加工成草粉和饲料的工艺环节中必须严格控制的成分。目前，检测这两种泽兰酮化合物的方法仅有高效液相色谱法，该方法完成一次色谱分析需要30min，而本法仅需5min，大大提高了工作效率，同时检测的灵敏度和准确度方面也优于高效液相色谱法。本法的建立对今后检测紫茎泽兰草粉原料及产品的质量和评价其毒性具有重要意义。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种简便、准确、快速、可靠的泽兰酮化合物的检测方法。该方法准确、灵敏、简便、前处理简单、分析速度快，能满足紫茎泽兰草粉和饲料中两种泽兰酮化合物的定性和定量检测。
根据本发明中用于检测泽兰酮化合物的方法，该方法包括以下步骤：
获取超高效液相色谱中泽兰酮化合物标准品的保留时间和质谱中泽兰酮化合物标准品的特征碎片离子峰、以及泽兰酮化合物标准品的特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程。
制备样品溶液，进行超高效液相色谱检测，得到样品中各组分的保留时间，对各个组分进行质谱检测，得到各个组分的特征碎片离子峰及特征碎片离子峰面积。
将各个组分的保留时间和特征碎片离子峰与所述泽兰酮化合物标准品的保留时间和特征离子峰进行对比，从而确定所述样品中含有的泽兰酮化合物的种类，并根据所述特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程进行计算，从而确定所述样品中含有的泽兰酮化合物的含量。
其特征在于，所述泽兰酮化合物为9-羰基-10Hβ泽兰酮和9-羰基-10，11去氢泽兰酮中的一种或两种。
所述液相色谱为超高效液相色谱，所述质谱检测是通过串联质谱法进行。
根据本发明的用于检测泽兰酮化合物的方法不仅具有分析速度快，还具有精密度和检测灵敏度高的特点。具体地，根据该法可以在5分钟内完成两种泽兰酮化合物的分析检测，并且检出限为0.005-0.022mg/L，在1.4-2.1mg/g的3个添加水平范围内的平均回收率为88.85％-109.35％，精密度均小于12％。
附图说明
图1两种泽兰酮化合物的液质分析图谱。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
实施例1
(1)泽兰酮化合物标准品溶液的制备
分别准确称取适量泽兰酮化合物标准品，用甲醇溶解并定容至100mL作为母液，使用时，用甲醇逐级稀释作为标准工作液，9-羰基-10Hβ泽兰酮浓度为0.87，1.392，1.74，2.61，3.48mg/L，9-羰基-10，11去氢泽兰酮浓度为0.33，0.66，1.32，2.64，3.96mg/L。
(2)泽兰酮化合物标准品溶液的超高效液相色谱和串联质谱检测
检测仪器为ACQUITY UPLC-TQD超高效液相色谱质谱联用系统。
超高效液相色谱分析的条件包括：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1mmx100mm，填料粒径为1.7μm)；流动相为甲醇和水；梯度洗脱程序为：0-0.5min，甲醇和水的体积比为10∶90；0.5-2.6min，甲醇和水的体积比为90∶10；2.6-5min，甲醇和水的体积比为10∶90；流动相的流速为0.3mL/min，柱温为40℃，样品室的温度为18℃，进样量3μL。
质谱检测条件为：电喷雾正离子电离，毛细管电压为3.5kv，离子源温度为150℃，去溶剂气温度为350℃，去溶剂气流量为650L/h，锥孔气流量为50L/h，碰撞气体为氩气，多离子反应监测(MRM)。
泽兰酮化合物标准品在超高效液相色谱中的保留时间，在串联质谱中的准分子离子峰以及特征碎片离子峰如下表1所示。
表1
*：定量特征碎片离子；Δ：定性特征碎片离子
表1中，每种泽兰酮化合物标准品都给出了两个特征碎片离子，其中定量特征碎片离子的离子峰面积用于与浓度作图，从而得出特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程，定性特征碎片离子用于辅助定量特征碎片离子来确定泽兰酮化合物的种类。
在上述超高效液相色谱条件和串联质谱条件下，对具有不同浓度的泽兰酮化合物标准品溶液进行检测，确定特征碎片离子峰面积与浓度之间的线性方程，得到的线性方程、线性范围和相关系数如表2所示。按3倍信噪比估算检出限，10倍信噪比估算定量限。
表2
*：上述线性方程中的x对应于浓度，Y对应于特征碎片离子峰面积。
(3)方法的回收率和精密度
紫茎泽兰草粉中分别添加1.4，1.7，2.1mg/g泽兰酮化合物标准品，每个添加浓度设置4个平行样，用本发明的用于检测泽兰酮化合物的方法进行测定，确定方法的回收率和精密度。泽兰酮化合物的添加量、回收率和精密度结果见表3。
表3
表3中的数据表明，在高中低3个添加水平范围内，泽兰酮化合物的平均回收率为88.85％-109.35％，RSD小于11.83％，说明该方法的重现性良好，仪器稳定。
实施例2
供试溶液的制备：准确称取紫茎泽兰草粉(叶片)0.100g，加入40mL甲醇进行超声提取2次，每次30min，合并两次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液过0.22μm微孔滤膜后，进行定性定量检测。
按照实施例1中超高效液相色谱条件和串联质谱条件进行检测，并根据检测结果确定该草粉含有9-羰基-10Hβ泽兰酮和9-羰基-10，11去氢泽兰酮，它们的含量分别为5.15mg/g和2.21mg/g。
实施例3
供试溶液的制备：准确称取紫茎泽兰草粉(茎)0.500g，加入40mL甲醇进行超声提取2次，每次30min，合并两次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液过0.22μm微孔滤膜后，进行定性定量检测。
按照实施例1中超高效液相色谱条件和串联质谱条件进行检测，并根据检测结果确定该草粉含有9-羰基-10，11去氢泽兰酮，其含量为0.10mg/g，未检测出9-羰基-10Hβ泽兰酮。
实施例4
供试溶液的制备：准确称取紫茎泽兰草粉(根)0.500g，加入40mL甲醇进行超声提取2次，每次30min，合并两次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液过0.22μm微孔滤膜后，进行定性定量检测。
按照实施例1中超高效液相色谱条件和串联质谱条件进行检测，并根据检测结果确定该草粉含有9-羰基-10，11去氢泽兰酮，其含量为0.28mg/g。
实施例5
供试溶液的制备：准确称取紫茎泽兰草粉(叶片粉碎后经微生物发酵脱毒)1.000g，加入40mL甲醇进行超声提取2次，每次30min，合并两次提取的上清液，甲醇定容至100mL，溶液过0.22μm微孔滤膜后，进行定性定量检测。
按照实施例1中超高效液相色谱条件和串联质谱条件进行检测，并根据检测结果确定该草粉含有9-羰基-10，11去氢泽兰酮，其含量为0.25mg/g。
以上公开的仅为本发明的具体实施例，但是，本发明并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。