一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法与流程

文档序号:12784706阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)标准工作溶液的配制:称取吉非替尼,加入甲醇,配制成浓度为2.00~3.00 mg•mL-1的吉非替尼储备液,将所述吉非替尼储备液用体积比1:1的甲醇-水溶液稀释成梯度浓度为0.100~100 μg•mL-1的吉非替尼工作溶液;按上述步骤重复一次,配置成梯度浓度为0.100~850 μg•mL-1的吉非替尼平行工作溶液;称取盐酸吉非替尼-d3,加入甲醇,配制成浓度为0.450~0.550mg•mL-1的内标储备液,再用体积比1:1的甲醇-水溶液稀释成0.1~5.00 μg•mL-1的内标工作溶液;所有储备液及工作溶液在0~10℃下保存,备用;

取空白人正常血浆,分别加入所述吉非替尼工作溶液,混匀,配置成相应梯度的校正标样,其梯度浓度范围为5.00~5000 ng•mL-1;取空白人正常血浆,分别加入所述吉非替尼平行工作溶液,混匀,配置成相应梯度的质控样品,其梯度浓度范围为15.0~42500 ng•mL-1

(2)样品处理:取等体积的校正标样、质控样品、试验样品、空白人血浆和水,往校正标样、质控样品、试验样品中分别加入所述内标工作溶液,往空白人血浆和水中分别加入体积比1:1的甲醇-水溶液;向上述每个混合液中加入乙腈,混匀,离心,转移上清液,将各提取物保存;

(3)标准曲线制作:将步骤(2)得到校正标样、质控样品的提取物进行LC-MS/MS分析测定,以吉非替尼和内标吉非替尼-d3的色谱峰面积比为纵坐标,以人血浆中吉非替尼的浓度为横坐标制作标准曲线;

(4)定量分析:取试验样品按照步骤(3)的方法处理,并按步骤(3)所得的标准曲线方程计算,得到待测样品中吉非替尼的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法,其特征在于,步骤(3)中所述LC-MS/MS分析测定过程的工作条件为:

a.色谱条件:色谱柱为UItimateXB C18;流动相A:0.1%甲酸和10mM甲酸铵的水溶液;流动相B:0.1%甲酸的乙腈溶液;柱温箱温度:30℃;流速:1.20 mL/min;色谱柱平衡状态时的柱压:17.5~18.5 MPa;洗脱方式为梯度洗脱;

b.质谱条件:离子源为ESI源,采用正离子模式、多反应监测模式;电喷雾电压:5500V;涡旋离子喷雾温度:550℃;气帘气种类:30 psi;碰撞池气体种类:中级;雾化气种类Gas1:50 psi;辅助气Gas 2:60 psi;数据收集时间:2.70 min。

3.根据权利要求1所述的一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法,其特征在于:步骤(1)中所述吉非替尼储备液的浓度为2.50 mg•mL-1,所述内标储备液的浓度为0.500 mg•mL-1,所述吉非替尼工作溶液的梯度浓度分别为0.100、0.200、1.00、4.00、10.0、50.0、90.0、100 μg•mL-1,所述吉非替尼平行工作溶液的浓度梯度为0.100、0.300、4.50、75.0、850 μg•mL-1,所述内标工作溶液的浓度分别为5.00 μg•mL-1 、100 ng•mL-1

4.根据权利要求1所述的一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法,其特征在于,步骤(1)所述质控样品的梯度浓度分别为15.0、225、3750、42500 ng•mL-1;所述质控样品于-60~ -90 ℃储存;所述校正标样的梯度浓度分别为5.00、10.0、50.0、200、500、2500、4500、5000 ng•mL-1;所述校正标样为新鲜配制。

5.根据权利要求1所述的一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法,其特征在于,步骤(2)所述离心的条件为在4℃、以1700×g的速度离心15min。

6.根据权利要求1所述的一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法,其特征在于,步骤(1)还往所述内标工作溶液中加入体积比为1:1的甲醇-水溶液进行稀释,配制得到准确度/稳定性评价溶液。

7.根据权利要求2所述的一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法,其特征在于,步骤(3)所述色谱条件还包括:进样体积2.00μL;自动进样器清洗溶液为甲醇;自动进样器洗针体积:400 μL;压脚提升量:48 mm;自动进样针清洗时浸泡时间1 s;自动进样器清洗模式:进样前清洗和进样后清洗;自动进样器温度:4.0℃。

8.根据权利要求2所述的一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法,其特征在于,步骤(3)所述LC-MS/MS分析测定过程中吉非替尼的监测离子对为447.3/128.0,每次扫描一个离子对时所停留的时间150 ms,去簇电压105 V,碰撞能量41 eV,质谱保留时间0.60~0.62 min。

9.根据权利要求2所述的一种人血浆中吉非替尼含量的检测方法,其特征在于,步骤(3)所述LC-MS/MS分析测定过程中内标吉非替尼-d3的监测离子对为450.1/128.0;每次扫描一个离子对时所停留的时间150 ms,去簇电压92 V,碰撞能量44.00 eV,质谱保留时间0.60~0.62 min。

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