一种果蔬中2,4‑二氯苯氧乙酸残留检测方法与流程

本发明属于食品安全监测领域，具体涉及一种果蔬中2,4-二氯苯氧乙酸残留检测方法。

背景技术：

2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-d)按照我国农药毒性分级标准，属低毒农药，在我国部分蔬菜和粮食上已经获得登记。2,4-d对植物有很强的生物活性,是一类高效、内吸、具高度选择性的除草剂和植物生长调节剂。在高浓度时,2,4-d是广谱除草剂,被广泛用于水稻、玉米、小麦等禾本科作物、草坪、牧场中的阔叶杂草；低浓度时,2,4-d作为植物生长调节剂可以促进作物生长,提高座果率，增大果实等，此外，2,4-d作为食品添加剂，还是应用广泛的水果防腐保鲜剂,主要用于增强果实抗病力、延缓果实衰老、延长水果贮藏期等。2,4-d在自然界中难以降解，导致2,4-d易于淋溶迁移进入水体和土壤，进而在生物体内积累，对人类健康和自然生态环境都有较大危害。作为除草剂和保鲜剂使用,2,4-d会在作物和果疏中产生残留,对人畜有一定的毒副作用。一些国家和国际组织在粮食作物、果疏、饮用水和环境标准中对2,4-d农药的残留上限作了严格规定。因此,开发2,4-d残留的快速检测具有重要意义。

目前，2,4-d检测方法有衍生气相色谱法(gc)、衍生气相色谱-质谱法(gc-ms)、高效液相色谱法(hplc)、高效液相色谱-质谱法(hplc-ms)等。由于它含有强极性基团羧基，前两种方法直接检测时色谱峰拖尾，分析灵敏度低，为了提高弱酸的挥发性，需要在检测前将其衍生化为酯。衍生化的引入使操作变得繁琐，且耗费时间较长。液相色谱分析不需要衍生化，但前处理提纯要求严格，操作繁琐，不适宜大量样本的现场检测分析。

表面增强拉曼散射(sers)效应是指在特殊制备的一些纳米金属表面或溶胶中,在激发区域内,导致纳米金属表面或附近吸附分子的拉曼散射信号大大增强的现象。作为一种分子光谱指痕鉴定方法，与高效液相色谱法相比，sers具有检测速度快、操作简便、样品处理简单、便于携带等优点，是一种高灵敏度、高分辨率和方便快捷的检测技术。本发明采用sers方法检测2，4-d农药残留，简单、快速、便携、准确，适用于在食品安全现场实时、快速的筛查方法，为食品安全监测提高技术保障。

技术实现要素：

本发明提供了一种果蔬中2,4-二氯苯氧乙酸残留表面增强拉曼光谱快速检测方法。本发明的技术方案如下：

步骤一：纳米金溶胶的制备：采用柠檬酸三钠还原氯金酸的方法制备纳米金溶胶，将氯金酸水溶液加热至沸腾，迅速加入柠檬酸三钠溶液，继续搅拌加热，至颜色至酒红色得到合适粒径的纳米金溶胶；

步骤二：标准溶液的配置：用甲醇水溶液将2,4-二氯苯氧乙酸分别配置系列浓度梯度为20，15，10，5，2,1μg/ml，取上述溶液分别与步骤一中的金溶胶按1∶5的比例混合，进行拉曼光谱检测，得到各浓度梯度溶液的表面增强拉曼光谱图；根据2,4-二氯苯氧乙酸的定性特征峰进行定性；以浓度为横坐标，2,4-二氯苯氧乙酸的特征峰的峰高为纵坐标，制作对应的标准曲线用以定量分析；

步骤三：仪器条件的设置：便携式拉曼光谱仪检测参数设定为785nm激光波长，200-300mw激光功率，扫描波长为400-1800cm^-1，积分时间5-15s；

步骤四：实际样品的表面增强拉曼光谱检测：

取10.0g蔬菜或水果匀浆经过提取，离心，净化浓缩，定容至2ml，采用步骤三中的步骤，得到表面增强拉曼光谱图；根据对应的定性特征峰，判定实际样品中是否含有2,4-二氯苯氧乙酸；根据步骤二得到的标准曲线，确定果疏中2,4-二氯苯氧乙酸的含量。

根据上述一种果蔬中2,4-二氯苯氧乙酸残留检测方法，所述步骤一中浓度为0.01％-0.5％氯金酸的体积为50ml，1％柠檬酸三钠溶液的加入量为0.5-5.0ml；加热温度为100-160℃；加热时间为5-60min。

根据上述一种果蔬中2,4-二氯苯氧乙酸残留检测方法，所述步骤二中标准溶液的配置包括：称取2,4-二氯苯氧乙酸粉末0.0200g，用甲醇水溶液溶解定容至100ml，制得200μg/ml储备液，利用甲醇水溶液将200μg/ml上述储备液稀释至20μg/ml、15μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、2μg/ml、1μg/ml的标准系列浓度，绘制标准曲线。

根据上述一种果蔬中2,4-二氯苯氧乙酸残留检测方法，所述步骤四样品前处理包括：准确量取10.0g蔬菜,加入0.01mol/lnaoh10ml,均质匀浆,8000rpm离心5分钟，取上清，沉淀再加入0.01mol/lnaoh10ml，重复提取一次，合并提取液，调节ph值至3.0，过0.45μm微孔滤膜后，待样品净化；

根据上述一种果蔬中2,4-二氯苯氧乙酸残留检测方法，根据权利要求4所述的ph值调节剂为hcl。

根据上述一种果蔬中2,4-二氯苯氧乙酸残留检测方法，所述步骤四样品净化过程包括：将全部提取液以3ml/min的流速通过已活化的固相萃取小柱，上样后，再用3ml盐酸水溶液淋洗，淋洗后在固相萃取装置上真空抽水分至近干，然后用1mlch3oh洗脱,重复4次，合并洗脱液，氮吹至近干，用甲醇水溶液定溶至2.0ml。

根据上述一种果蔬中2,4-二氯苯氧乙酸残留检测方法，所述步骤四样品净化过程中所述固相萃取小柱的活化过程包括，ods-c18spe小柱或sep-pakc18小柱在使用前需要先活化，用3ml甲醇、3ml水依次通过柱子进行清洗处理。

根据上述一种果蔬中2,4-二氯苯氧乙酸残留检测方法，所述甲醇水定溶中，v(甲醇)∶v(水)＝5∶100。

附图说明

图1为2，4-d标准品的普通拉曼图(a)、2，4-d溶液的表面增强拉曼图谱(b)及纳米金溶胶的拉曼图谱(c)。

图2为2，4-d溶液的标准曲线，横坐标为2，4-d溶液浓度，纵坐标为归一化特征峰的峰强度。

有益效果

本发明公开的一种果蔬中2,4-二氯苯氧乙酸残留的表面增强拉曼光谱快速检测方法，样品前处理简单，检测速度快，是一种简单、快速、便携、准确的2，4-d残留检测分析方法，便于实现大规模的现场筛查。

具体实施方式

下面结合实例对本发明做进一步详细说明，但本发明并不仅仅局限于下述实施。

如下实例中，采用如下条件：

(1)金溶胶制备：采用柠檬酸三钠还原氯金酸的方法将50ml浓度为0.01％-0.5％氯金酸加热至沸腾后，加入浓度为1％的柠檬酸三钠溶液0.5-5.0ml，继续搅拌加热5-60min，至颜色稳定停止加热，得到合适粒径的金溶胶；

(2)设置激光拉曼光谱仪的扫描参数：激发光源为785nm，仪器激光功率为200-250mw，积分时间5-15s，扫描波长为400-1800cm^-1；

实施例1

配置浓度为20，15，10，5，2,1μg/ml的2，4-d甲醇水溶液，与步骤一中的金胶按1∶5的比例混合，进行拉曼光谱扫描，得到各浓度梯度溶液的表面增强拉曼光谱图；2，4-d特征峰为718，838，890，1159，1256、1308、1445、1591cm^-1；并以浓度为横坐标，以特征峰838cm^-1峰强为纵坐标，制作标准曲线用以定量；如图1、图2所示，得到标准曲线的线性方程为y＝(13.6±0.66)x+(176.0±7.39)，相关系数为0.9907，线性良好，可用于测定样品中的2，4-d含量。

实施例2

准确称量蔬菜样品10.0g，由样品捣碎机或均质器将样品充分破碎，然后将捣碎的蔬菜放入离心管中，加入10ml0.01mol/lnaoh溶液，震荡提取2-10min，8000r/min转速离心5min，取上清液，再加入naoh溶液，震荡提取2-10min，重复上述操作，合并提取液，用1mol/l盐酸调节ph至3.0，过0.45um滤膜后，将全部提取液以3ml/min的流速通过已活化的固相萃取小柱，上样后，再用3ml盐酸水溶液淋洗，淋洗后在固相萃取装置上真空抽水分至近干，然后用1mlch3oh洗脱,重复4次，合并洗脱液，氮吹至近干，用甲醇水溶液定溶至2ml，用于表面增强拉曼光谱检测，共做三个平行样，分析结果见表1；通过分析可知，平行样品的相对标准偏差为8.18％。

表1蔬菜样品中2，4-d含量的检测结果

以上所述，仅是本发明较佳的实施方式，并非对本发明的技术方案做任何形式上的限制。凡是依据本发明的技术实质对以上实施例做任何简单修改，形式变化和修饰，均落入本发明的保护范围。