一种注射用干乳剂中油酸钠含量的测定方法与流程

本发明涉及药物分析领域，特别涉及一种注射用干乳剂中油酸钠含量的测定方法。

背景技术：

注射用干乳剂中常用辅料油酸钠，属于一种混合物，成分复杂多样，其主要成分是油酸钠，油酸钠在干乳剂中主要是调节制剂的ph值，使其与人体的生理ph值相近。

《中国药典》(2015版)中收载的油酸钠辅料标准及进口注册标准中检测含量的方法均采用气相色谱法(面积归一化法)，油酸钠辅料与油酸钠对照品均应经过甲酯化前处理，操作步骤繁琐，而且面积归一化法定量也比较粗略。

注射用干乳剂中的油酸钠辅料作为ph值调节剂，使用量较少，并且干乳剂中其他原辅料成分较多，干扰较大，不宜采用气相色谱法。

目前采用hplc法对油酸钠含量的测定还未曾有报道，尤其是含油酸钠辅料成分的干乳剂中的油酸钠的含量分析与测定。油酸钠中脂肪酸钠组成多样，并且碳链长度相近，并以油酸钠为主要成分，采用现有的油酸、亚油酸含量的检测方法来测定干乳剂中油酸钠含量，难以达到分离检测的要求。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种注射用干乳剂中油酸钠含量的测定方法，采用hplc法，分离油酸与其他组分，按外标法来测定油酸含量，依据油酸和油酸钠分子量的关系，换算出干乳剂中油酸钠的含量，测定方法灵敏、准确、专属、高效、便捷、低成本。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种注射用干乳剂中油酸钠含量的测定方法，包括如下步骤：

(1)注射用干乳剂样品溶液的制备

精密称取注射用干乳剂样品250mg，加水2.0ml，使其完全复乳，再加入乙醇定容至5.0ml，振摇2.0min，超声2.0min，使其完全破乳，室温静置30min，摇匀，取2ml溶液离心，取上清液，得供试品溶液；采用本发明这样的前处理方法，能够使得样品中的油酸钠完全溶解，同时能排除其它油性组分中可能带入油酸成分带来的干扰，保证后续检测的准确性。

(2)油酸对照品溶液的制备

取油酸对照品，用60％乙醇水溶液溶解并定容，配制成油酸浓度为0.06mg/ml的对照品溶液，对照品溶液平行配制2份，分别为对照品溶液a、对照品溶液b。

(3)高效液相色谱检测

分别取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，按照设定的检测条件测定并记录色谱图，其中对照品溶液a重复进样5次，供试品溶液和对照品溶液b均重复进样2次，所得峰面积按外标法计算供试品中油酸的含量，再根据油酸的含量换算获得油酸钠的含量。

作为优选，步骤(3)中高效液相色谱检测条件为：

填料选用辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱，长度为150-250mm，以0.02m磷酸盐-乙腈为流动相进行梯度洗脱，检测波长为210nm，uv或pda检测器，柱温40℃，进样量60μl，流速1.0ml/min；

0.02m磷酸盐-乙腈梯度洗脱的体积比为：

90％：10％，0min；90％：10％，3min；20％：80％，5min；20％：80％，40min；90％：10％，42min；90％：10％，50min。

作为优选，所述磷酸盐为磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠中的一种，0.02m磷酸盐配制完成后加磷酸调节ph＝2.0。

作为优选，步骤(1)中的乙醇为色谱纯级别，浓度95％。

作为优选，步骤(1)中离心的参数为：15000rpm，15min。

本发明的有益效果是：本发明的测定方法灵敏、准确、专属、高效、便捷、低成本。本发明空白溶剂、空白辅料均不干扰油酸的测定，基本能达到基线分离。

附图说明

图1是油酸对照品溶液的色谱图。

图2是油酸钠辅料溶液的色谱图。

图3是注射用前列地尔干乳剂样品溶液的色谱图。

图4是注射用前列地尔空白干乳剂样品溶液的色谱图。

图5是注射用前列地尔空白干乳剂加油酸钠辅料样品溶液的色谱图。

图1-图5的横坐标单位为分钟。

具体实施方式

下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。

本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

实施例1本方法的建立过程

实验材料、仪器与色谱条件

油酸钠辅料，购自西安力邦制药有限公司，coa中油酸含量为82.8％(气相色谱法)，油酸对照品，购自中国食品药品检定研究院，含量为99.6％。

高效液相色谱仪waterse2695，检测器为uv检测器；色谱柱为zorbaxsbc8，4.6mm*150mm，5μm；柱温：40℃；检测波长为210nm；进样量：60μl；流速：1.0ml/min；流动相：0.02m磷酸二氢钾缓冲液(ph＝2.0)-乙腈梯度洗脱；mpa：0.02m磷酸二氢钾缓冲液(ph＝2.0)，mpb：乙腈，mpa-mpb梯度洗脱：

洗脱条件：

实验步骤

取油酸钠辅料适量，精密称定，用60％乙醇水溶液溶解并定容，配制成油酸钠辅料溶液浓度为0.08mg/ml的供试品溶液，平行配制2份，即供试品溶液a、b。

取油酸对照品适量，精密称定，用60％乙醇水溶液溶解并定容，配制成油酸浓度为0.06mg/ml的对照品溶液，平行配制2份，即对照品溶液a、b。

分别取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，按照本发明条件测定并记录色谱图，其中对照品溶液a重复进样5次，供试品溶液a、b和对照品溶液b均重复进样2次，所得峰面积按外标法计算供试品中油酸的含量。

图1为油酸对照品溶液的色谱图，图2为油酸钠辅料溶液的色谱图，油酸的保留时间为8.821min，其与溶剂峰分离良好，对照品溶液a样重复进样5次，所得响应因子的rsd为0.3％，进样精密度良好，按外标法计算油酸钠辅料中油酸的含量为76.13％，对照品b样中油酸的含量为99.68％，回收率达到100.08％，表明本发明公开的油酸含量检测方法准确、可靠。

实施例2

实验材料、仪器与色谱条件

注射用前列地尔干乳剂，其中油酸钠辅料的投入量为0.2mg/250mg，油酸钠辅料购自西安力邦制药有限公司，油酸对照品购自中国食品药品检定研究院，含量为99.6％。

色谱条件与实施例1相同

实验步骤

取注射用前列地尔干乳剂粉末约250mg，精密称定，置于容量瓶内，加入2.0ml水，复乳，再加乙醇定容至5.0ml，振摇2min，超声2.0min，室温静置30min，取适量(2ml)溶液离心(15000rpm，15min)，取上清液进样。取油酸对照品适量，用60％乙醇水溶液溶解并定容，配制成油酸浓度为0.06mg/ml的对照品溶液，对照品溶液平行配制2份a、b，分别取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，按照本发明条件测定并记录色谱图，其中对照品a样重复进样5次，供试品溶液和对照品溶液b均重复进样2次，所得峰面积按外标法计算供试品中油酸的含量。

图3为注射用前列地尔干乳剂样品溶液的色谱图，油酸的保留时间为8.696min，其与溶剂峰、其他未知峰分离良好，对照品溶液a重复进样5次，所得响应因子的rsd为0.2％，进样精密度良好，按外标法计算干乳剂中油酸的含量为0.06％，按照油酸钠辅料中油酸含量折算，油酸钠辅料含量为0.19mg/250mg，工艺回收率为95％，对照品溶液b中油酸的含量为99.5％，回收率达到99.9％，表明本发明公开的油酸含量检测方法准确、可靠。

实施例3

实验材料、仪器与色谱条件

注射用前列地尔空白干乳剂(不含油酸钠辅料，其他组分均按照制剂处方比例投量)，油酸对照品购自中国食品药品检定研究院，含量为99.6％。

色谱条件与实施例1相同

实验步骤

取注射用前列地尔空白干乳剂粉末约250mg，精密陈定，置于容量瓶内，加入2.0ml水，复乳，再加乙醇定容至5.0ml，振摇2min，超声2.0min，室温静置30min，取适量(2ml)溶液离心(15000rpm，15min)，取上清液得注射用前列地尔空白干乳剂样品溶液。

取油酸对照品适量，精密称定，用60％乙醇水溶液溶解并定容，配制成油酸浓度为0.06mg/ml的对照品溶液，对照品溶液平行配制2份，即对照品溶液a、b。

另取油酸钠辅料适量，用乙醇溶解并定容，配制成溶液浓度为0.15mg/ml的油酸钠辅料溶液。

取注射用前列地尔空白干乳剂粉末约250mg，精密陈定，置于容量瓶内，加入2.0ml水，复乳，再精密加入油酸钠辅料溶液(浓度为0.15mg/ml)2.0ml，再用乙醇定容至5.0ml，振摇2min，超声2.0min，室温静置30min，取适量溶液离心(15000rpm，15min)，取上清液得注射用前列地尔空白干乳剂加油酸钠辅料样品溶液。

分别取注射用前列地尔空白干乳剂样品溶液、注射用前列地尔空白干乳剂加油酸钠辅料样品溶液以及油酸对照品溶液，注入液相色谱仪，按照本发明条件测定并记录色谱图，其中对照品溶液a重复进样5次，供试品溶液和对照品溶液b均重复进样2次，所得峰面积按外标法计算供试品中油酸的含量。

图4为注射用前列地尔空白干乳剂样品溶液的色谱图，图5为注射用前列地尔空白干乳剂加油酸钠辅料样品溶液的色谱图，图4中油酸的保留位置没有吸收峰，空白辅料对油酸不干扰，图5中油酸的保留时间为8.698min，其与溶剂峰、其他未知峰分离良好，油酸对照品溶液a重复进样5次，所得响应因子的rsd为0.3％，进样精密度良好，按外标法计算注射用前列地尔空白干乳剂加油酸钠辅料样品中油酸的含量为76.16％，按照油酸钠辅料中油酸测定含量为76.13％，加样回收率达到100.04％，表明本发明公开的油酸含量检测方法准确、可靠，并且专属性良好。

以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。