一种快速检测畜产品中兽药残留的方法与流程

本发明涉及兽药残留检测方法技术领域，尤其涉及一种快速检测畜产品中兽药残留的方法。

背景技术：

近年来，随着农牧业的发展，兽药、农药和添加剂的滥用造成畜产品有害物质残留严重超标，不仅给消费者身体健康带来潜在危害，还影响畜牧业发展，兽药残留的检测技术也越来越受到关注。其中，喹乙醇有中度至明显的蓄积毒性，对大多数动物有明显的致畸作用，对人也有潜在的三致性，即致畸形，致突变，致癌，因此喹乙醇在美国和欧盟都被禁止用作饲料添加剂，但很多养殖者仍再使用，行业潜规则伏击每一个人，要唤醒行业人的良知，就必须内部揭发，外部监管，把那些危害生命的行业秘密一一暴露于阳光底下，让那些伤天害理的行为无处逃遁，目前，国内外多采用液相、液质联用等技术来检测兽药残留，但是这些技术存在操作复杂、时间长、检测成本较高等不足，而且不适宜在线检测。因此，在兽药检测方面需要开发研究前处理简单、成本低廉并且对有毒害物质可实现快速检测的方法，为此，我们提出一种快速检测畜产品中兽药残留的方法。

技术实现要素：

本发明的目的是为了解决现有技术中技术存在操作复杂、时间长、检测成本较高等不足，而且不适宜在线检测等缺点，而提出的一种快速检测畜产品中兽药残留的方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种快速检测畜产品中兽药残留的方法，该快速检测畜产品中兽药残留的方法包括如下步骤：

s1：备料：选取材料：选取全价饲料和市场上的猪肉，做备用；选取试剂：依次选取喹乙醇标准品、乙腈、甲醇、氢氧化钠、磷酸二氢钾、硫酸铵和乙酸乙酯，做备用；选取仪器：分别选取微型高速万能试样粉碎机、t-1000和t-10000型电子天平各一台、高速组织捣碎机、调速式高速分散器、旋涡混合器、台式高速离心机、高效液相色谱和氮吹仪作为实验仪器；

s2：制备喹乙醇标准溶液：分别用t-10000型电子天平准确称取步骤s1中选取的喹乙醇标准品0mg、5mg、10mg、15mg和20mg，用甲醇溶解并定容至100ml的容量瓶中，然后依次制成浓度为每毫升0ug、5ug、10ug、15ug和20ug的标准溶液，以备后用；

s3：检测饲料喹乙醇含量：取六只50ml的离心管，在六只离心管上做好1～6号标号，将步骤s1中选取的饲料用微型高速万能式样粉碎机粉碎，然后用t-1000型电子天平分别称取五份粉碎后的饲料2g，将称取后的饲料分别加入到1～5号离心管中，6号离心管中不添加饲料，在1～5号离心管中分别加入10ml浓度为5ppm、10ppm、15ppm、20ppm和0ppm喹乙醇标准溶液，在6号离心管加入10ml浓度为10ppm喹乙醇标准溶液，分别向1～6号离心管中加入50％甲醇-水溶液作为提取剂，将1～6号离心管分别放在旋涡混合器上振荡10min，再放入台式高速离心机中以4000转/min的转速离心5min，取上清液过0.45um微孔滤膜，同时做平行试验，上机；

s4：检测猪肉喹乙醇含量：取一定量的猪肉，经高速组织捣碎机粉碎，放置待用，取八只50ml的离心管，在八只离心管上依次做好a～h号标号，用t-1000型电子天平称取2g猪肉样品于a～c号离心管中，向a～d号管中分别加入102.18ug/ml喹乙醇标准溶液4ml、6ml、0l、4ml，再向a～d号离心管中分别加入甲醇2ml、0ml、6ml、2ml，然后向a～d号离心管中分别加入饱和硫酸铵2ml，将a～d号离心管分别放在旋涡混合器上振荡8min，向各管中加入1mol/l的磷酸二氢钾2ml,再向各管中加入10ml乙腈：乙酸乙酯(v/v＝3/2)，将a～d号离心管继续振荡8min，然后放入台式高速离心机中以4000转/min离心5min，吸出有机相于e、f、g、h四只离心管中，用10ml乙腈：乙酸乙酯(v/v＝3/2)重新提取，将a-d号离心管分别放在旋涡混合器上振荡8min,再将a-d号离心管放入台式高速离心机中以4000转/min离心5min，合并有机相于e、f、g、h管中，向e、f、g、h管中各加入2ml0.2mol/l的氢氧化钠，将e～h号离心管分别放在旋涡混合器上振荡8min，静置10min，60摄氏度水浴上通过氮吹仪氮气吹干，再分别向e～h号离心管中加入5ml甲醇，将e～h号离心管分别放在旋涡混合器上振荡15min，再将e～h号离心管放入台式高速离心机中以4000转/min离心8min，取上清液过0.45um微孔滤膜，上机。

本发明提供的一种快速检测畜产品中兽药残留的方法，本发明的检测结果完全能够满足对肉类等畜牧产品的兽药残留检测，该方法前处理简单、成本低廉且可对兽药等物质实现快速检。

附图说明

图1为本发明操作步骤流程图；

图2为本发明饲料样品中喹乙醇回收率结果图；

图3为本发明猪肉样品中喹乙醇回收率结果图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例一

一种快速检测畜产品中兽药残留的方法，其特征在于：该快速检测畜产品中兽药残留的方法包括如下步骤：

s1：备料：选取材料：选取全价饲料和市场上的猪肉，做备用；选取试剂：依次选取喹乙醇标准品、乙腈、甲醇、氢氧化钠、磷酸二氢钾、硫酸铵和乙酸乙酯，做备用；选取仪器：分别选取微型高速万能试样粉碎机、t-1000和t-10000型电子天平各一台、高速组织捣碎机、调速式高速分散器、旋涡混合器、台式高速离心机、高效液相色谱和氮吹仪作为实验仪器；

s2：制备喹乙醇标准溶液：分别用t-10000型电子天平准确称取步骤s1中选取的喹乙醇标准品0mg、5mg、10mg、15mg和20mg，用甲醇溶解并定容至100ml的容量瓶中，然后依次制成浓度为每毫升0ug、5ug、10ug、15ug和20ug的标准溶液，以备后用；

s3：检测饲料喹乙醇含量：取六只50ml的离心管，在六只离心管上做好1～6号标号，将步骤s1中选取的饲料用微型高速万能式样粉碎机粉碎，然后用t-1000型电子天平分别称取五份粉碎后的饲料2g，将称取后的饲料分别加入到1～5号离心管中，6号离心管中不添加饲料，在1～5号离心管中分别加入10ml浓度为5ppm、10ppm、15ppm、20ppm和0ppm喹乙醇标准溶液，在6号离心管加入10ml浓度为10ppm喹乙醇标准溶液，分别向1～6号离心管中加入50％甲醇-水溶液作为提取剂，将1～6号离心管分别放在旋涡混合器上振荡10min，再放入台式高速离心机中以4000转/min的转速离心5min，取上清液过0.45um微孔滤膜，同时做平行试验，上机；

s4：检测猪肉喹乙醇含量：取一定量的猪肉，经高速组织捣碎机粉碎，放置待用，取八只50ml的离心管，在八只离心管上依次做好a～h号标号，用t-1000型电子天平称取2g猪肉样品于a～c号离心管中，向a～d号管中分别加入102.18ug/ml喹乙醇标准溶液4ml、6ml、0l、4ml，再向a～d号离心管中分别加入甲醇2ml、0ml、6ml、2ml，然后向a～d号离心管中分别加入饱和硫酸铵2ml，将a～d号离心管分别放在旋涡混合器上振荡8min，向各管中加入1mol/l的磷酸二氢钾2ml,再向各管中加入10ml乙腈：乙酸乙酯(v/v＝3/2)，将a～d号离心管继续振荡8min，然后放入台式高速离心机中以4000转/min离心5min，吸出有机相于e、f、g、h四只离心管中，用10ml乙腈：乙酸乙酯(v/v＝3/2)重新提取，将a-d号离心管分别放在旋涡混合器上振荡8min,再将a-d号离心管放入台式高速离心机中以4000转/min离心5min，合并有机相于e、f、g、h管中，向e、f、g、h管中各加入2ml0.2mol/l的氢氧化钠，将e～h号离心管分别放在旋涡混合器上振荡8min，静置10min，60摄氏度水浴上通过氮吹仪氮气吹干，再分别向e～h号离心管中加入5ml甲醇，将e～h号离心管分别放在旋涡混合器上振荡15min，再将e～h号离心管放入台式高速离心机中以4000转/min离心8min，取上清液过0.45um微孔滤膜，上机。

根据高效液相色谱仪得出的结论：通过对喹乙醇浓度为5ppm饲料样品在各波长的出峰图谱比较，在可见光区，无明显杂峰干扰，在375nm波长处响应值较高，所以选择375nm的波长图谱进行实验分析，通过加入5～20ppm的标样，在色谱仪上进行分析，在10min左右开始出峰，饲料样品中喹乙醇的回收率从75.20％逐渐上升至89.6％，通过与10ppm喹乙醇回收率的阳性对照实验比较，可以看到饲料组分对回收率有一定的影响，而阴性对照实验在10min～12min时段未有峰出现；由于猪肉成分比较复杂，采用375nm左右的波长检测，避免杂峰干扰，猪肉中未测出喹乙醇含量，而对照回收实验可得，可能该样品猪肉准守农业部规定，在宰杀前35天已经开始停药，因为猪摄入喹乙醇后，经过消化道代谢，80％左右的喹乙醇已分解或转化为代谢体，经过对比可以看出本发明的检测结果完全能够满足对肉类等畜牧产品的兽药残留检测，该方法前处理简单、成本低廉且可对兽药等物质实现快速检。