本发明属于水产品质量安全技术领域，具体涉及一种鉴别虾体中外来胶体-琼胶的方法。
背景技术：
早在2000年左右，中国水产市场上出现了疑似“注胶”的冰鲜和冷冻大虾，十多年来，这种注胶虾已在沿海、内地十多个城市被消费者以微博或地方新闻媒体曝光，引起人们对食品安全问题的广泛关注。但是，虾中的“胶状物质”到底是什么？对人体有无危害？成为困扰执法部门和消费者的主要难题。由于检测机构需要有可依据的检测方法标准才能做出检测判断。但是，“注胶”虾中的“胶体物质”为未知样品，对于检测机构来说属于“盲样”，无明确的检测项目和检测目的，因此检测机构难以对“胶体物质”进行定性检测、鉴定。这也是十多年来，食品监管部门无执法依据而难以打击“注胶虾”行为的主要原因。
2017年1月，广东省出现“注胶”虾事件报导，广东省食品药品监督管理局委托本发明申请人对疑似“注胶”的虾样品进行应急鉴定研究，经过1个多月的研究，摸清了“注胶”虾中胶体物质的理化性质、食用安全性、可能来源及胶体结构和胶体品种，找到了一套精确鉴定、定量检测“注胶”虾中胶体物质-琼胶的技术方法，突破了十多年来一直困扰食品检测机构和食品监督管理部门对“注胶”虾中外来“胶体”-琼胶无法检测的技术难题。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种鉴别虾体中外来胶体-琼胶的方法，该方法能鉴别虾体中是否含有外来胶体，以及该外来胶体的品种是否为琼胶的情况。
本发明的上述技术问题是通过如下技术方案来实现的：一种鉴别虾体中外来胶体-琼胶的方法，包括以下步骤：
(一)、试验过程
(1)选取冰鲜虾的虾体组织，加入水，制备虾体组织溶液；
(2)将步骤(1)中的虾体组织溶液冷却至室温，观察溶液凝胶情况；
(3)若步骤(2)中的溶液能够自然形成凝胶，则将凝胶缓慢加热至85℃以上，观察凝胶融化情况；
(4)若步骤(3)中的凝胶能再次融化成溶液，则进一步将溶液冷却，并冷冻成全部结冰，并加入酒精，静置后除去酒精，收集胶体，胶体同凝胶同样条件下重复处理一次，得胶体，将胶体烘干；
(5)取步骤(4)中的烘干胶体，加入水，加热至胶体完全溶解成胶体溶液，再加入盐酸进行沸水浴，接着再分别加入naoh溶液和碱性酒石酸铜溶液，水浴加热，观察溶液颜色变化；
(6)取步骤(4)中的烘干胶体，浸入i2溶液中浸染后，观察胶体的染色情况，然后取出胶体，加水浸渍，观察胶体颜色变化；
(二)试验结果判定
(1)若步骤(一)的步骤(2)中的溶液能够自然形成凝胶，则将凝胶缓慢加热至85℃以上，若凝胶在85℃以上才开始融化成溶液，则判定虾体中含有外来胶体-琼胶物质；
若步骤(一)的步骤(2)中的溶液无凝胶或无凝胶复融现象，则加大虾体组织取样量重复试验，若试验结果仍无凝胶或凝胶复融现象，则判定虾体中不含琼胶物质；
(2)若步骤(一)的步骤(5)中溶液颜色有砖红色沉淀生成，则判定虾体中的胶体为多糖类物质；
(3)如步骤(一)的步骤(6)中胶体浸入i2溶液中浸染后，若先染成紫黑色，加水浸渍后又渐渐退为紫色，则判断虾体中胶体为琼胶。
其中步骤(二)的步骤(1)中能判断虾体中“含有琼胶物质”，但仅凭此现象不能排除“胶体”中还混有“明胶”物质。因为明胶也具有“凝胶—热融化”这种热可逆性质，只不过凝胶温度和融化温度与琼胶有所不同。
步骤(二)的步骤(2)中能确定胶体为多糖类物质，琼胶属于多糖类物质，而明胶属于蛋白肽类物质，不具备这一显色化学现象，这一步是为了排除步骤(二)的步骤(1)中的胶体是“明胶”或胶体中含有“明胶”的可能性。
本发明方法综合步骤(一)中的步骤(2)、(3)、(5)和(6)的试验理化现象，可以判断虾体中是否含有外来胶体物质，以及该外来胶体物质是否为多糖类物质琼胶。
在上述鉴别虾体中外来胶体的方法中：
步骤(一)的步骤(1)中制备虾体组织溶液的具体过程为：选取冰鲜虾的虾体组织，加入水，在搅拌下煮沸，过滤，收集滤液，将滤液离心，取上清液过滤，收集滤液，将滤液再重复离心、过滤，收集滤液，蒸发掉部分水分，得虾体组织溶液备用。
所述的虾体组织优选为除去肌肉的虾头、虾壳和胸腺体液；所述的虾体组织和水的用量关系优选为10～20g:100～200ml。
在搅拌下优选煮沸5～10min(更佳为5min)，过滤优选采用180～300目(更佳为200目)滤布，离心转速优选为4500～10000r/m(更佳为5000r/m)，离心时间优选为5～10min(更佳为10min)，取上清液过滤时采用优选中速滤纸过滤。
蒸发掉部分水分优选至保留虾体组织溶液为10～15ml，虾体组织液需要浓度较高，才有可能显示凝胶现象，因此蒸发残留的液体需要保留较少体积，蒸发后保留溶液体积约为10～15ml较为合适，下一步脱水时也节约酒精用量。
步骤(一)的步骤(4)中所述酒精的体积百分含量优选为95％以上，加入酒精的量优选为溶液体积的3～5倍，静置时间为2h以上，加入酒精是为了冰冻凝胶脱水，同时溶解去除部分虾体组织液，达到纯化琼胶的目的，保留的虾体组织液是10～15ml，加入3～5倍量的酒精处理2次，可以达到脱水、纯化目的，也可以节约酒精消耗。
步骤(一)的步骤(4)中胶体烘干温度优选为45～70℃(更佳为50℃)，烘干是为了去除水分，为了防止琼胶高温降解，采用了中温烘干法。
步骤(一)的步骤(5)中所述烘干胶体与水的用量关系优选为0.005～0.02g：1ml(更佳为0.005～0.02g：1ml)，胶体溶液与盐酸的体积份配比优选为1:0.075～0.15(更佳为1:0.125)，所述沸水浴时间优选为30～45min(更佳为30min)，所述胶体溶液与所述naoh溶液的体积份配比优选为1:0.5～1(更佳为1:0.75)，所述naoh溶液的质量百分含量优选为3～5％(更佳为4.3％)。
步骤(一)的步骤(5)中所述胶体溶液与所述碱性酒石酸铜溶液的体积份配比优选为1:0.5～1.5，所述碱性酒石酸铜溶液是由等体积的硫酸铜溶液与碱性酒石酸钾钠的临时混合液，所述硫酸铜溶液的浓度优选为2～5g/100ml，所述碱性酒石酸钾钠溶液包括浓度为5～10g/100ml的naoh溶液和浓度为12～25g/100ml的酒石酸钾钠溶液。
步骤(一)的步骤(6)中所述i2溶液的浓度优选为0.02～0.05mol/l，用量以染色浸没为宜。
步骤(二)的步骤(2)中加大虾体组织取样量重复试验，虾体组织取样量优选为原取样量的1.5～2倍，复检一般增加1倍取样量即可。
本发明具有以下优点：本发明用于鉴别虾体中外来胶体的方法，可以充分利用琼胶的特有理化性质对疑似注胶虾中的外来胶体物质进行定性鉴别，该方法无需特殊的分析仪器设备，鉴定操作简单，适用于快速鉴定，易于推广应用，且该方法为食品监督管理部门提供了“注胶虾”中掺杂外来异物的鉴定、检测技术，为其执法定性起到关键技术支撑作用。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供的鉴别虾体中外来胶体-琼胶的方法，包括以下步骤：
1、试验方法：
(1)将市场出售的冻虾先解冻、再剥壳去除肌肉，收集虾头、虾壳和胸腺体液等肌肉以外的所有虾体组织；取虾体组织10g置烧杯中，加入蒸馏水100ml，搅拌下煮沸5min，再用200目滤布趁热过滤、收集滤液；滤液再经4500r/m离心10min，上清液经中速滤纸过滤、收集滤液；将滤液再重复离心、过滤1次，收集滤液于烧杯；将烧杯缓慢加热蒸发部分水分，至烧杯中剩余溶液约10ml；
(2)将步骤(1)烧杯中的溶液冷却至室温，观察溶液凝胶情况；
(3)若步骤(2)中，溶液能够自然形成“凝胶”，则进一步将“凝胶”再缓慢加热至85℃以上，观察“凝胶”的融化情况；
(4)若步骤(3)的“凝胶”能再次融化成溶液，则进一步将溶液冷却凝胶后，将烧杯置冰箱冷冻至全部结冰；取出烧杯，立即加入95％酒精30ml，静置2h，倾去酒精、收集胶体，胶体再用酒精同样条件下重复处理1次，将胶体置50℃烘干；
(5)称取步骤(4)烘干的胶体0.02g，置试管中，加4ml水，将试管加热至胶体完全溶解，用水补充试管蒸发掉的水分；再加盐酸0.5ml、沸水浴30分钟，再分别加入3ml4％naoh溶液和6ml碱性酒石酸铜溶液(3ml4.5％cuso4溶液与3ml含10％naoh和25％酒石酸钾钠的混合溶液)，置水浴中加热，观察溶液颜色变化；
(6)取步骤(4)烘干的胶体，浸入0.02mol/l的i2溶液中浸染数分钟，观察“胶体”的染色情况，取出胶体，加蒸馏水浸渍，观察“胶体”颜色变化。
2、试验结果判定
(1)试验(2)中，溶液在自然条件下能够形成明显的凝胶，试验(3)中“凝胶”在85℃左右开始逐渐融化成溶液，则判定虾体中含有“琼胶”物质。
(2)进一步试验(5)中，试管底部明显发现有“砖红色”沉淀生成，则判定虾体中的“胶体”为多糖类物质；
(3)进一步试验(6)中，“胶体”在i2溶液中浸染几分钟后，发现胶体被染成紫黑色，将胶体再用水浸渍后又渐渐退为紫色，则判断虾体中胶体为“琼胶”。
综合(2)、(3)、(5)和(6)试验理化现象，则判断虾体中含有外来“胶体”物质，并且该“胶体”物质是多糖类化合物“琼胶”。
实施例2
本实施例提供的鉴别虾体中外来胶体-琼胶的方法，包括以下步骤：
1、试验方法：
(1)选取市场出售的冰鲜虾样品，剥壳去除虾肌肉组织，收集虾头、虾壳和胸腺体液等除肌肉以外的所有虾体组织；取虾体组织约15g置烧杯中，加入蒸馏水150ml，搅拌下煮沸约10min，用240目滤布趁热过滤、收集滤液；滤液再经10000r/m离心5min，上清液经中速滤纸过滤、收集滤液；将滤液再重复离心、过滤1次，收集滤液于烧杯；将烧杯缓慢加热蒸发部分发水分至烧杯中剩余溶液约15ml；
(2)将步骤(1)烧杯中的溶液自然冷却至室温，观察溶液的凝胶情况；
(3)若步骤(2)能自然形成凝胶，则将“凝胶”再缓慢加热至85℃以上，观察“凝胶”的融化情况；
(4)若步骤(3)的“凝胶”能融化成溶液，则将溶液冷却凝胶、并将烧杯置冰箱冷冻过夜至完全结冰冻透，取出烧杯，立即加入95％的酒精50ml，静置3h，倾去酒精、收集胶体，胶体再用酒精同样条件下重复处理1次，将胶体置60℃烘干；
(5)称取步骤(4)烘干的胶体0.04g，置试管中，加4ml水，将试管加热至胶体完全溶解，用水补充试管蒸发的水分，再加盐酸0.6ml、沸水浴40分钟，再分别加入3ml5％naoh溶液和5ml碱性酒石酸铜溶液(2.5ml4.0％cuso4溶液与2.5ml含5％naoh和20％酒石酸钾钠的混合溶液)，置水浴中加热，观察溶液颜色变化；
(6)取步骤(4)烘干的胶体，浸入0.03mol/l的i2溶液中浸染数分钟，观察“胶体”的染色情况，取出胶体，加蒸馏水浸渍，观察“胶体”颜色变化。
(二)、试验结果判定
(1)在试验步骤(2)中，烧杯中的溶液放置室温后，发现溶液形成凝胶；试验步骤(3)中，凝胶加热至85℃以上逐渐融化成溶液，则判定虾体中含有“琼胶”；
(2)进一步试验(5)中，试管中的溶液经加试剂后水浴，发现试管底部有“砖红色沉淀”生成，则判定虾体中的“胶体”为多糖类物质；
(3)进一步试验(6)中，“胶体”经i2溶液染色后呈紫黑色，再经水浸渍，胶体渐渐变为紫色，则判断虾中胶体为琼胶。
综合步骤(一)的步骤(2)、(3)、(5)和(6)中的试验理化现象，则可以判断试验虾体中含有外来“胶体”物质，并且该“胶体”物质为多糖类化合物“琼胶”。
实施例3
本实施例提供的鉴别虾体中外来胶体-琼胶的方法，包括以下步骤：
(1)选取市售的冻虾，冻虾样品先用流水解冻，剥壳去除虾肌肉组织，收集虾头、虾壳和胸腺体液等除肌肉以外的所有虾体组织；取虾体组织约15g置烧杯中，加入蒸馏水150ml，搅拌下煮沸10min，用180目滤布趁热过滤、收集滤液；滤液再经10000r/m离心5min，上清液经中速滤纸过滤、收集滤液；将滤液再重复离心、过滤1次，收集滤液于烧杯；将烧杯缓慢加热蒸发部分发水分至烧杯中剩余溶液约15ml；
(2)将步骤(1)烧杯中的溶液自然冷却至室温，观察溶液的凝胶情况，结果表明，无凝胶现象；重新取虾体组织30g，加入蒸馏水300ml，重复试验，最后蒸发浓缩至剩余溶液约10ml，试验结果仍无凝胶现象，则判定该虾体中不含琼胶物质。
以上实施例仅用于阐述本发明，而本发明的保护范围并非仅仅局限于以上实施例。所述技术领域的普通技术人员依据以上本发明公开的内容和各参数所取范围，均可实现本发明的目的。