脱落细胞在冰冻切片中的制备方法与流程

本发明属于医疗检测方法技术领域，具体涉及一种脱落细胞在冰冻切片中的制备方法。

背景技术：

多年来胸腹水脱落细胞采集收取诊断率低，是困扰在病理工作者眼前一道难题，虽然，有多种的新型的“液基”等脱落细胞采集设备，但大多都不尽人意。在早在二十多年前河南省肿瘤医院陈森林、何志鼎等人对脱落细胞在冰冻切片技术方面做了研究探讨和运用。他们是将送检体液标本，置入塑料试管，离心沉淀后，弃去上清液，加0.5mpbs洗涤，离心多次，然后加入50-100ml5%甲基纤维素备用。再取琼脂1.2克加热溶解于20mlpbs液中配制成6%的琼脂胶，在琼脂胶中插入小号移液头，待琼脂冷却后取出。将制备好的细胞包埋液注入小孔中切片前用刀片围绕小孔切成小方块以待用。切片时在冷冻头上滴上5%甲基纤维素，再将含有细胞包埋液胶囊块面朝上平放在冷冻头上，迅速做成冷冻切片。因材料制备繁复，程序过多未能得到同仁的应用。目前，我省各个医院有采用离心机，离心后涂片，染色制片，而大多数医院用沉降式或吸浮式液基细胞制片机，制备涂片后染色，阅片。我院“三甲”医院，每天均有2-3例胸腹水，用常规离心及“液基”但采集细胞还是散在偏少，因如送来了500ml胸水，离心多次，最终涂在载玻片上可能只是1微升，可谓是“弱水三千，只取一瓢”经染色镜下还是寥寥可数几个细胞。致使临床对病理脱落细胞送检颇有微词。所以目前探索出一个简便的把脱落细胞用在冰冻切片的方法是非常迫切的需求。

目前南株洲市二院余合林、余晗等医师，也做了脱落细胞在冰冻切片中临床应用，采用的是：在送检液离心沉淀后加饱和苦味酸明胶液，混匀，再次离心，弃去上清液，再加饱和苦味酸明胶液，再弃去上清液，用镊子将沉淀物置于冰冻切片支持器上制片。此方法，要加多次饱和苦味酸明胶和离心后，才能获取沉淀物，程序过于繁复。因而，申请人经过多年在病理技术工作中对临床送检液，进行离心沉淀后运用以下制备方法于冰冻切片中，解决了脱落细胞制备成病理切片的一种有利于快速诊断的简便方法。并能有效有收集送检液体中的脱落细胞和微小组织，提高了阳性检出率。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中的缺点而提供一种简便，切片制出后细胞量多、集中，经he染色后细胞清晰的脱落细胞在冰冻切片中的制备方法。

为解决本发明的技术问题采用如下技术方案：

一种脱落细胞在冰冻切片中的制备方法，具体步骤如下：

a、收集临床送检固定后的胸腹水；

b、用塑料试管，取胸腹水25-100ml入离心机离心；

c、取出塑料试管后弃去上清液，然后剪去塑料试管上部，留下部1.5-2cm；

d、用石蜡做蜡模，蜡模中间做一凹槽用于放入剪去上部的塑料试管；

e、将剪去上部的塑料试管置入蜡模凹槽内，在剪去上部的塑料试管内注入胶水致溢，然后盖上冰冻切片标本托；

f、将盖上冰冻切片标本托的蜡模放置负25度的冰冻切片机内，冷冻20-60分钟；

g、冷冻后将盖上冰冻切片标本托的蜡模取出后，保留蜡模，去掉塑料试管，置于冰冻切片机上，切成5-7微米切片后，染色待检。

上述脱落细胞在冰冻切片中的制备方法，具体步骤如下：

a、收集临床送检固定后的胸腹水；

b、用塑料试管，取胸腹水25-100ml入离心机离心；

c、取出塑料试管后弃去上清液，然后剪去塑料试管上部，留下部1.5-2cm，将剪去上部的塑料试管边缘剪一道裂口；

d、用石蜡做蜡模，蜡模中间做一凹槽用于放入剪去上部的塑料试管；

e、将剪去上部的塑料试管置入蜡模凹槽内，在剪去上部的塑料试管内注入胶水致溢，然后盖上冰冻切片标本托；

f、将盖上冰冻切片标本托的蜡模放置负25度的冰冻切片机内，冷冻20-60分钟；

g、冷冻后将盖上冰冻切片标本托的蜡模取出后，用钳子夹住塑料试管裂口，保留蜡模，去掉塑料试管，置于冰冻切片机上，切成5-7微米切片后，染色待检。

所述步骤e中凹槽深度为0.2-0.4cm。

所述步骤b中离心速率为2800-3500转/分，离心时间为5-10分钟。

所述步骤c中剪去上部的塑料试管边缘的裂口长度为1.2-1.4cm。

本发明制备的脱落细胞的冰冻切片通过阅片，观察到，比常规离心涂片、液基制片细胞多，并集中（图1、图2所示），有足够证据可作为病理诊断依据，可给临床提供较好鉴别诊断。本发明此方法简便，只需要离心后将沉淀物上部剪去，注入胶水，盖上标本托置入冷冰切片中，冷冻20-60分钟，除去试管，即可制片，切片制出后，细胞量多、集中，经he染色后细胞清晰。同时具有冰冻切片机病理科都能使用，适用范围广。

附图说明

图1为本发明实施例1阅片图；

图2为本发明实施例2阅片图；

图3为本发明实施例3阅片图。

具体实施方式

实施例1

一种脱落细胞在冰冻切片中的制备方法，具体步骤如下：

a、收集某某1临床送检固定后的胸腹水；

b、用塑料试管，取胸腹水100ml入离心机离心，离心速率为2800转/分，离心时间为10分钟；

c、取出塑料试管后弃去上清液，然后剪去塑料试管上部，留下部2cm，将剪去上部的塑料试管边缘剪一道裂口，裂口长度为1.2cm；

d、用石蜡做蜡模，蜡模中间做一凹槽用于放入剪去上部的塑料试管，其中凹槽深度为0.2cm；

e、将剪去上部的塑料试管置入蜡模凹槽内，在剪去上部的塑料试管内注入胶水致溢，然后盖上冰冻切片标本托；

f、将盖上冰冻切片标本托的蜡模放置负25度的冰冻切片机内，冷冻60分钟；

g、冷冻后将盖上冰冻切片标本托的蜡模取出后，用钳子夹住塑料试管裂口，保留蜡模，去掉塑料试管，置于冰冻切片机上，切成5微米切片后，染色待检，阅片图结果如图1所示。

实施例2

一种脱落细胞在冰冻切片中的制备方法，具体步骤如下：

a、收集某某2临床送检固定后的胸腹水；

b、用塑料试管，取胸腹水25ml入离心机离心，离心速率为3500转/分，离心时间为5分钟；

c、取出塑料试管后弃去上清液，然后剪去塑料试管上部，留下部1.5cm，将剪去上部的塑料试管边缘剪一道裂口，裂口长度为1.4cm；

d、用石蜡做蜡模，蜡模中间做一凹槽用于放入剪去上部的塑料试管，其中凹槽深度为0.4cm；

e、将剪去上部的塑料试管置入蜡模凹槽内，在剪去上部的塑料试管内注入胶水致溢，然后盖上冰冻切片标本托；

f、将盖上冰冻切片标本托的蜡模放置负25度的冰冻切片机内，冷冻60分钟；

g、冷冻后将盖上冰冻切片标本托的蜡模取出后，用钳子夹住塑料试管裂口，保留蜡模，去掉塑料试管，置于冰冻切片机上，切成7微米切片后，染色待检，阅片图结果如图2所示。

实施例3

目前使用的常规离心涂片、液基制片方法如下：

将送检液在离心机内离心后，倾去上清液，留于少量的底部液体，置入一次性液基细胞采集瓶中，将采集瓶放入液基细胞制片仪，起动仪器制片，6分钟后打开仪器护罩，取出涂有细胞的一次性载玻片，固定、染色、封片，显微镜下阅片，阅片图结果如图3所示。