本发明涉及一种c反应蛋白质量控制品制备方法，具体涉及一种用于poct的c反应蛋白质量控制品的制备方法。
背景技术：
1.c反应蛋白的临床意义
心肌标志物全称为心肌损伤早期标志物，是指心肌损伤后6小时内血中水平升高的标志物，是临床中诊断心肌梗死、心肌缺血、心衰等心脏疾病的重要检测指标。超敏c反应蛋白(hypersensitivec-reactiveprotein,hs-crp)是急性冠状动脉综合征(acutecoronarysyndrome,acs)系列炎症标志物，主要用于冠心病危险因素的筛查。
2.poct质控品的研究背景
即时检验(pointofcaretesting,poct)是指在患者身边进行采样、分析，快速取得诊断结果的一类方法。用此方式检测心肌标志物，能快速诊断心肌梗塞、心衰，对患者的临床早期诊断和早期治疗有重要意义。《体外诊断试剂校准品、质控品研究技术指导原则》中提到，质控品是用于体外诊断的质量控制物质(定值和非定值)，是一种旨在用于医学检测系统中使用的物质、材料等，其目的是评价或验证测量精密度或由于试剂或分析仪器的变化导致的分析偏差等，用于能力验证、实验室内质量控制等。目前，与poct配套的crp质控品严重缺乏，研制用于poct的crp质控品势在必行。
技术实现要素：
本发明针对现有技术的状况，提供一种用于poct的c反应蛋白质量控制品的制备方法，显著缩短poct质量控制的检定周期，解决了poct仪器无配套质控品的缺陷。由于poct质控品接近患者标本，所以对其进行测试分析是行之有效的质量控制手段。
本发明采用以下技术方案，所述用于poct的c反应蛋白质量控制品的制备方法包括以下步骤：
步骤一：起始原料来源于市售经无菌过滤后的马血清，将马血清添加防腐剂后，在4℃条件下，9000rpm离心30min，取上清液，用双层定性快速滤纸过滤去除脂类物质，再依次经过0.45μm或者0.22μm亲水膜无菌过滤后，形成基质物质；
步骤二：根据c反应蛋白母液浓度及添加回收率，以经过计量的移液枪在基质物质中添加c反应蛋白至目标浓度；所述的c反应蛋白再以经过计量的移液枪分装于经清洗干燥的冻存管中，每瓶1毫升，2-8℃液体储存，得到均一稳定、浓度水平为7-9mg/l马血清基质的c反应蛋白质量控制品。
根据上述技术方案，在基质物质中添加的c反应蛋白的目标浓度为7-9mg/l。
根据上述技术方案，所述c反应蛋白为人源性c反应蛋白。
本发明公开的用于poct的c反应蛋白质量控制品的制备方法，其有益效果在于，显著缩短poct质量控制的检定周期，解决了poct仪器无配套质控品的缺陷。由于poct质控品接近患者标本，所以对其进行测试分析是行之有效的质量控制手段。
具体实施方式
本发明公开了一种用于poct的c反应蛋白质量控制品的制备方法，下面结合优选实施例，对本发明的具体实施方式作进一步描述。
本发明所述的一种用于poct的c反应蛋白质量控制品的制备方法，该制备方法包括以下步骤：
步骤一：起始原料来源于市售经无菌过滤后的马血清，将马血清添加防腐剂后，在4℃条件下，9000rpm离心30min，取上清液，用双层定性快速滤纸过滤去除脂类物质，再依次经过0.45μm或者0.22μm亲水膜无菌过滤后，形成基质物质；
步骤二：根据c反应蛋白母液浓度及添加回收率，以经过计量的移液枪在基质物质中添加c反应蛋白至目标浓度；所述的c反应蛋白再以经过计量的移液枪分装于经清洗干燥的冻存管中，每瓶1毫升，2-8℃液体储存，得到均一稳定、浓度水平为7-9mg/l马血清基质的c反应蛋白质量控制品。
其中，在基质物质中添加的c反应蛋白的目标浓度为7-9mg/l。
其中，所述c反应蛋白为人源性c反应蛋白。
根据上述优选实施例，本发明用于poct的c反应蛋白质量控制品的制备方法具备以下特点：
一、互换性良好的基质物质制备
1.1基质物质处理：
c反应蛋白质控品基质物质处理方法如下：选择市售经无菌过滤后的健康马血清，作为基质物质制备的原料。在马血清中添加防腐剂后，将其在4℃条件下，9000rpm离心30min，取上清液，用双层定性快速滤纸过滤去除脂类物质。再依次经过0.45、0.22μm等亲水膜进行无菌过滤后，作为最后的基质物质。
1.2基质物质评估：
1.2.1基质物质中c反应蛋白初始值测试：经检测，c反应蛋白的值几乎为0，马血清可以作为合适的基质物质。
1.2.2质控品添加回收试验
添加回收实验(recoverytest)可对基体物质的基质效应进行初步分析。回收率接近100％表明分析方法对于分析物无论在溶液中还是在复杂的基体环境中，反应能力是一致的，分析基本不受基质影响。反之，明显偏离100％，说明处在不同基质环境中的分析物的反应能力存在明显差别。
将一定浓度的crp、基质物质、以及添加了相应浓度的crp的基质物质作为检测标本；用i-chroma免疫荧光分析仪进行测试。每个样品测定2次，并以其平均值计算回收率，结果见表1。
表1马血清基质物质添加crp的添加回收试验结果(单位：mg/l)
从表1的结果中可以得出，crp在马血清基质中的添加回收率接近100％。初步选定该基质作为crp质控品的基质物质。
二、c反应蛋白质控品的制备
根据crp母液浓度及添加回收率，精确计算添加量。在10万级洁净车间环境条件下，以经过计量的移液枪，在制备好的基质物质中，添加人源性c反应蛋白至目标浓度(7-9mg/l)。再以经过计量的移液枪进行定量分装，分装于经清洗干燥的冻存管中，每瓶1毫升，共500瓶，2-8℃液体储存。
三、均一性测定
分装完成后，依据《体外诊断试剂校准品、质控品研究技术指导原则》进行均一性检验。均一性检验标准如下：
同一批号的质控品中抽取5瓶，每瓶测试1次，按下面的公式计算测试结果的平均值
公式1
公式2
公式3
公式4
当s1<s2时，令cv瓶间＝0
式中：
s----标准差；
n----测量次数；
xi----指定参数第i次测量值。
依据《体外诊断试剂校准品、质控品研究技术指导原则》进行均一性检验。同一批号的质控品中抽取5瓶，每瓶测试1次，按下面的公式计算测试结果的平均值
表2c反应蛋白质控品均一性检验测量结果(单位：mg/l)
四、稳定性测定
为了评估c反应蛋白质量控制品的稳定性，本发明观察了该质控品的短期稳定性和长期稳定性。短期稳定性主要测试在模拟质控品运输条件下的稳定性，长期稳定性则是测试质控品在长期贮存条件下的稳定性。
c反应蛋白质量控制品稳定性评估测量数据结果及统计结果见表4～5，选用平均值一致性检验法进行稳定性分析。以不同保存时间的测试结果与第一次的测试结果进行比较分析。按照公式：
其中，
当t与显著性水平α，自由度为n1+n2-2时的t检验临界值tα(n1+n2-2)之间的关系为：t≤tα(n1+n2-2)时，认为该质控品的特性量值没有发生显著性变化，否则认为该质控品的特性量值已发生显著性变化。
4.1短期稳定性评估
短期稳定性实验关注的是在特定运输条件下质控品的稳定性。根据目前我国的运输条件，使用快递运输，货物2天内可以运送到我国主要城市。本实验的设计如下：模拟质控品发样及运输过程的环境，分析在此过程中c反应蛋白浓度的改变状况。具体包括以下几个步骤：首先将贮存于2-8℃环境中质控品迅速取出，进行运输前的内外包装，样本处于2-8度冰袋环境中。模拟运输条件，在室温下保存具有包装的样本,并对样品的活力进行测定，从而评估运输过程对样本活力的影响。取crp质控品，按照实际运输时的冰袋及包装，在贮存的0h，9h，24h，33h，48h，57h对其进行活力检测，结果如表3所示。
表3c反应蛋白质量控制品短期稳定性评估测量结果(单位：mg/l)
4.2长期稳定性评估
长期稳定性实验关注的是在特定贮存条件下质控品crp浓度的稳定性状况。本实验即是在2-8℃贮存条件下，对贮存的质控品进行取样分析，如表4所示。
表4c反应蛋白质量控制品长期稳定性评估测量结果(单位：mg/l)
对于本领域的技术人员而言，依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围。