灵芝二维甲硫氨酸胶囊的质量控制方法与流程

本发明属于药品质量控制
技术领域：
，尤其涉及一种灵芝二维甲硫氨酸胶囊的质量控制方法。
背景技术：
：灵芝二维甲硫氨酸胶囊为甲硫氨酸、灵芝浸膏、维生素b1、维生素b2及辅料组成的胶囊剂，主要用于病后虚弱，食欲不振，体重减轻，用脑过度，神经衰弱等症，并用于冠心病，慢性肝炎，支气管哮喘，贫血，风湿性关节炎，胃溃疡等慢性疾病的辅助治疗。该品种现行标准收载于《国家药品标准》化学药品地方标准上升国家标准第十五册，usp33版、bp2010版及jp15等国外药典均未见收载。现行标准中所包含的检验项目包括性状、四个理化鉴别、胶囊剂检查项以及甲硫氨酸的含量测定，但缺少灵芝的专属性鉴别，原标准中甲硫氨酸的含量测定项下规定的活性炭加入量对测定结果有影响，且未对维生素b1及b2进行含量测定。同时，本品为口服固体制剂，原标准中缺少对本品溶出度的测定。另外，由于甲硫氨酸含量为25mg/粒，维生素b1含量为2mg/粒，维生素b2含量为1mg/粒，根据《中国药典》规定，需进行含量均匀度测定。为此，现有方法难以有效控制生产中的成品质量，不同批次产品的质量没有合理准确的指标来进行衡量，无法确保产品疗效，对临床治疗影响巨大。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是提供一种设计合理、准确可靠、专属性强且操作简单的灵芝二维甲硫氨酸胶囊的质量控制方法，以帮助有效控制灵芝二维甲硫氨酸胶囊生产、流通、使用诸环节中的药品质量和提高其质量水平，确保临床使用疗效。为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：灵芝二维甲硫氨酸胶囊的质量控制方法，包括以下步骤：<1>灵芝的薄层鉴别；<2>含量均匀度检查；<3>溶出度检查；<4>hplc法含量测定。步骤<1>按以下操作进行：取本品内容物3g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以30～65℃石油醚-乙酸乙酯5∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。步骤<2>按以下操作进行：取本品1粒内容物，置乳钵中，加1ml甲酸和热水少许，研磨后，移至100ml量瓶中，用热水洗净乳钵，溶液移至上述量瓶中，置于65℃水浴中振摇20分钟，再超声5分钟使溶解后，取出放冷，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，照步骤<4>含量测定项下的方法测定各组分含量。步骤<3>按以下操作进行：取本品，照溶出度与释放度测定法，以盐酸溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟75转，依法操作，经30分钟时，取溶液约10ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另分别取甲硫氨酸对照品、维生素b1对照品适量，分别加溶出介质溶解并稀释成每1ml中含1mg、每1ml中含0.05mg的溶液，分别作为甲硫氨酸对照品储备液、维生素b1对照品储备液；另取维生素b2对照品适量，加溶出介质适量，置于65℃水浴中振摇20分钟，再超声5分钟使溶解后，加溶出介质稀释成每1ml中含0.01mg的溶液，作为维生素b2对照品储备液；分别取上述约三种对照品储备液0.75ml、1.0ml、2.5ml置于同一25ml量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含甲硫氨酸0.03mg、维生素b12μg、维生素b21μg的混合溶液，作为混合对照溶液；照步骤<4>含量测定项下的色谱条件，精密量取上述供试品溶液及混合对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算每粒的溶出量。步骤<4>按照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-1.0mol/l甲酸铵-甲酸990∶10∶1为流动相a，甲醇-1.0mol/l甲酸铵-甲酸990∶10∶1为流动相b，流速为每分钟1.0ml；按下表进行梯度洗脱；检测波长为212nm、260nm；表1梯度洗脱流动相时间min流动相a流动相b0～7100013～20604021～351000测定法取装量差异项下样品，研细，精密称定适量，置100ml量瓶中，加甲酸1ml和水适量，置于65℃水浴中振摇20分钟，再超声5分钟使溶解后，取出放冷，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；取维生素b1对照品适量，加水溶解并稀释成1mg/ml，作为维生素b1对照品储备液；另取维生素b2对照品约10mg置于25ml量瓶中，加甲酸2ml和水适量，置于65℃水浴中振摇20分钟，再超声5分钟使溶解后，加水稀释成0.4mg/ml，作为维生素b2对照品储备液；取甲硫氨酸对照品约10mg置于50ml量瓶中，精密加入维生素b1对照品储备液和维生素b2对照品储备液0.75ml和1ml，加65℃热水适量使溶解后，用水稀释至刻度，作为混合对照溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得。针对现有灵芝二维甲硫氨酸胶囊有关制剂质量检测方法存在的问题，发明人进行了改进，主要是增加了灵芝的薄层鉴别、含量均匀度检查、溶出度检查，以及采用hplc法进行了三个成分的含量测定。本发明的质量控制方法设计合理、准确可靠、专属性强且操作简单，据此建立灵芝二维甲硫氨酸胶囊新的质量控制标准，可帮助有效控制灵芝二维甲硫氨酸胶囊生产、流通、使用等环节中的药品质量和提高其质量水平，保证生产工艺可控，确保临床使用安全，为产品疗效稳定确切提供了可靠保障。附图说明图1是薄层鉴别图(烟台硅胶板g)。图2是薄层鉴别图(青岛硅胶板g)。图1和图2中，1、无灵芝浸膏的空白，2、维生素b2对照品溶液，3、灵芝对照药材提取物，4、c10005批，5、1101201批。具体实施方式灵芝二维甲硫氨酸胶囊的质量控制方法研究本次研究选取a公司(批号c10003、c10004、c10005、t50001)和b公司(批号1101211、1101201、1101171)的灵芝二维甲硫氨酸胶囊作为样品。<1>灵芝的薄层鉴别拟定方法如下：取本品内容物3g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚(30～65℃)-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱图中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。灵芝对照药材：中国食品药品检定研究院，批号0968-200203灵芝浸膏：广州白云山光华制药股份有限公司提供，药材浸出量为6&～8％，广西亿康药业股份有限公司，药材浸出量为5％～7％根据本品内容物中灵芝浸膏的含量(每粒含灵芝浸膏约为12.5mg)，以及上述生产厂家提供的灵芝浸膏的药材浸出量，确定方法中本品内容物的取用量为3g，灵芝对照药材的取用量为2g。甲醇：国药集团化学试剂，批号10014118石油醚(30～65℃)：国药集团化学试剂，批号10015218乙酸乙酯：国药集团化学试剂，批号10009418按拟定方法鉴别两厂家样品，结果如图1和图2。<2>含量均匀度检查拟定方法如下：取本品1粒内容物，置乳钵中，加1ml甲酸和热水少许，研磨后，移至100ml量瓶中，用热水洗净乳钵，溶液移至上述量瓶中，置于65℃水浴中振摇20分钟，再超声5分钟使溶解后，取出放冷，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，照步骤<4>含量测定项下的方法测定各组分含量，应符合规定(中国药典通则0941)。按拟定方法检测样品t50001，，结果如表2。表2灵芝二维甲硫氨酸胶囊含量均匀度测定结果结果显示，灵芝二维甲硫氨酸胶囊中，甲硫氨酸、维生素b1及维生素b2的含量均匀度结果a+2.2s均较大(按中国药典2015年版规定，当a+2.2s≤15.0时为符合规定)，说明在原来的质控方法药品均匀性不好，有必要增加含量均匀度的检测项以控制产品的质量。<3>溶出度检查初步研究表明，ph4.5醋酸盐缓冲液作为溶出介质时，溶剂在212nm波长处对甲硫氨酸出峰时间处有明显干扰，因此不宜选用ph4.5醋酸盐缓冲液作为溶出介质。考虑到维生素b2为水中难溶性物质，其对照品溶液的制备难以用水为溶剂进行制备。故不再考虑水作为溶出介质。0.1mol/l盐酸溶液和ph6.8磷酸盐缓冲液比较中，供试品在75rpm转速条件下，整体溶出行为略优于50rpm转速条件；同时对比两种溶出介质中各组分的溶出情况发现，甲硫氨酸及维生素b1在两种介质中溶出曲线无明显差异，维生素b2在0.1mol/l盐酸溶液中的溶出度较ph6.8磷酸盐缓冲液中的溶出度略低，但30分钟时的溶出度也达到了75％以上。考虑到维生素b2的溶出行为及溶出介质制备的难易程度，最终确定选用0.1mol/l盐酸溶液作为溶出介质，转速采用75rpm，溶出时间为30分钟。拟定方法如下：取本品，照溶出度与释放度测定法(中国药典通则0931第二法)，以盐酸溶液(9→1000)900ml为溶出介质，转速为每分钟75转，依法操作，经30分钟时，取溶液约10ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另分别取甲硫氨酸对照品、维生素b1对照品适量，分别加溶出介质溶解并稀释成每1ml中含1mg、每1ml中含0.05mg的溶液，分别作为甲硫氨酸对照品储备液、维生素b1对照品储备液；另取维生素b2对照品适量，加溶出介质适量，置于65℃水浴中振摇20分钟，再超声5分钟使溶解后，加溶出介质稀释成每1ml中含0.01mg的溶液，作为维生素b2对照品储备液；分别取上述约三种对照品储备液0.75ml、1.0ml、2.5ml置于同一25ml量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含甲硫氨酸0.03mg、维生素b12μg、维生素b21μg的混合溶液，作为混合对照溶液；照步骤<4>含量测定项下的色谱条件，精密量取上述供试品溶液及混合对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算每粒的溶出量；以维生素b2计，限度为标示量的75％，应符合规定。按拟定方法检测样品t50001，结果如表3。表3溶出度测定结果表<4>hplc法含量测定拟定方法如下：按照高效液相色谱法(中国药典通则0512)测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(watersatlantist3色谱柱，4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱)；以水-1.0mol/l甲酸铵-甲酸(990∶10∶1)为流动相a，甲醇-1.0mol/l甲酸铵-甲酸(990∶10∶1)为流动相b，流速为每分钟1.0ml；按下表进行梯度洗脱；检测波长为212nm(甲硫氨酸)、260nm(维生素b1、维生素b2)；理论板数按甲硫氨酸计算应不低于3000，甲硫氨酸与维生素b1的分离度应符合要求；表4时间(min)流动相a流动相b0～7100013～20604021～351000测定法取装量差异项下样品，研细，精密称定适量(约相当于甲硫氨酸20mg)，置100ml量瓶中，加甲酸1ml和水适量，置于65℃水浴中振摇20分钟，再超声5分钟使溶解后，取出放冷，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；取维生素b1对照品适量，加水溶解并稀释成1mg/ml，作为维生素b1对照品储备液；另取维生素b2对照品约10mg置于25ml量瓶中，加甲酸2ml和水适量，置于65℃水浴中振摇20分钟，再超声5分钟使溶解后，加水稀释成0.4mg/ml，作为维生素b2对照品储备液；取甲硫氨酸对照品约10mg置于50ml量瓶中，精密加入维生素b1对照品储备液和维生素b2对照品储备液0.75ml和1ml，加65℃热水适量使溶解后，用水稀释至刻度，作为混合对照溶液，同法测定；按外标法以峰面积计算，即得。取t50001进行方法学研究。在拟定色谱条件下，甲硫氨酸最大吸收波长約为212nm，维生素b1最大吸收波长为247nm，维生素b2最大吸收波长为224nm及269nm。为兼顾3组分的测定灵敏度，拟定于212nm处测定甲硫氨酸，于260nm同时测定维生素b1、维生素b2。线性关系考察结果：甲硫氨酸标准曲线：回归方程y＝1.040×108x+2.978×105(r＝0.9999)，结果表明，甲硫氨酸进样浓度在0.1068～0.3150mg/ml范围内线性关系良好。维生素b1标准曲线：回归方程：y＝4.850×108x-2.028×103(r＝0.9999)，结果表明，维生素b1进样浓度在7.831～23.49μg/ml范围内线性关系良好。维生素b2标准曲线：回归方程：y＝8.392×108x-8.239×103(r＝1.0000)，结果表明，维生素b2进样浓度在2.020～12.12μg/ml范围内线性关系良好。精密度试验、重复性试验、稳定性试验结果良好。回收率试验中，甲硫氨酸，维生素b1和维生素b2的回收率良好，平均回收率分别为98.26％、97.81％、99.24％，rsd分别为0.63％、0.93％和0.78％(n＝9)。信噪比约10∶1时，最低定量限分别为：甲硫氨酸为51.6ng，维生素b1为1.1ng，维生素b2为0.81ng。方法的耐受性研究中，取混合对照溶液，分别选用下表所示色谱柱(见表5)，按拟定色谱条件进样，结果显示，仅有atlantist3色谱柱(理论板数以甲硫氨酸峰计算为21784，维生素b1与甲硫氨酸分离度为3.70)及thermosyncronisaq色谱柱(理论板数以甲硫氨酸峰计算为18203，维生素b1与甲硫氨酸分离度为3.76)的分离效果符合要求，能较好分离溶剂峰、甲硫氨酸峰以及维生素b1峰，其余四根色谱柱分离度均不符合要求。表5色谱柱使用一览表序号色谱柱品牌型号规格1沃特世watersatlantist34.6×250mm，5μm2沃特世watersxselecthsst34.6×250mm，5μm3安捷伦agilentzorbaxsb-aq3.0×250mm，5μm4资生堂shiseidocapcellpakaqc184.6×250mm，5μm5菲罗门phenomenexlunahilic200a4.6×250mm，5μm6赛默飞thermothermosyncronisaq4.6×250mm，5μm按拟定方法检测样品t50001，结果如表6。表6含量测定结果表批号t50001甲硫氨酸85.7％维生素b187.0％维生素b2112.7％当前第1页12