3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛纯度的检测方法与流程

本发明涉及物质纯度分析
技术领域：
，具体涉及3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛的纯度、已知杂质、未知杂质的检测，更具体地涉及采用液相色谱法检测3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛的纯度、已知杂质、未知杂质。
背景技术：
：3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛的化学式为c10h12o3，其cas号为1131-52-8，是生产阿普斯特的重要中间体。3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛的杂质含量是衡量其质量的重要指标，如果其杂质含量过高，会影响制备的阿普斯特的药效和质量，因为其纯度、杂质直接影响阿普斯特的纯度、杂质的大小。高效液相色谱法具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用等优点，因而其被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。目前还未发现3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛的纯度高效液相色谱法检测的相关报道，为了准确。快速地分析3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛的纯度，加强3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛的质量控制，有必要建议一种简便、准确、快速、可靠、重复性高、稳定的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛纯度的液相色谱检测法。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种简便、准确、快速、可靠、重复性高、稳定的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛纯度的检测法，该检测方法采用菲罗门色谱柱，能使3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛及其已知杂质实现有效分离，经紫外检测器检测，从而快速和准确地测定3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛的纯度。本发明采用的技术方案是：一种3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛纯度的检测方法，包括以下步骤：1)系统适应性溶液配制：取适量的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛、异香兰素和乙基香兰素置于同一容量瓶中，用稀释液溶解，配置成每毫升各含1mg的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛、异香兰素和乙基香兰素的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液配制：取适量的供试品，用稀释液溶解，配置成浓度为0.5-1mg/ml的溶液，得到供试品溶液；3)空白试验:精密量取稀释液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；4)系统适应性试验：精密量取系统适应性溶液5-20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；5)供试品溶液试验：精密量取供试品溶液5-20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，从供试品溶液的色谱图中扣除空白试验色谱峰，按面积归一化法计算供试品的浓度。优选的，所述稀释液为乙腈。优选的，供试品溶液配制方法为：取适量的供试品3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛，用乙腈溶解并配置成浓度为0.5-1mg/ml的溶液，得到供试品溶液。优选的，步骤3)-5)中，液相色谱仪的测试条件设定为：色谱柱为菲罗门phenomenexluna5uc18(2)100a色谱柱，柱温为室温；采用双流动相进行梯度洗脱，流动相a为kh2po4缓冲液，流动相b为乙腈，流动相流速为0.7-1.2ml/min；检测器为紫外检测器。优选的，步骤4)中进行系统适应性试验时，理论板数按3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛计算不低于5000，主峰与任意杂质峰之间的分离度应不小于1.5。优选的，kh2po4缓冲液的浓度为0.01-0.05mol/l，用磷酸调ph至2.8-3.2。将磷酸二氢钾缓冲液调ph至3.0，有利于改善主峰及杂质峰的峰型。优选的，紫外检测器的检测波长为220-240nm。优选的，梯度洗脱的条件为：优选的，菲罗门phenomenexluna5uc18(2)100a色谱柱的规格为4.6*250mm*5μm。采用菲罗门色谱柱，能使3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛及其已知杂质实现有效分离，经紫外检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。本发明的有益效果是：本发明采用液相色谱法检测3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛的纯度、已知杂质、未知杂质，该检测方法简便、准确、快速、可靠、重复性高、稳定，能使3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛及其已知杂质均能实现有效分离，为3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛工业化生产提供简便、准确、快速、可靠的检测方法；采用乙腈和磷酸二氢钾缓冲液作为流动相进行一定比例的梯度洗脱，改善了分离效果；将磷酸二氢钾缓冲液调ph至3.0改善了主峰及杂质峰的峰型。附图说明图1为实施例1中系统适应性溶液的高效液相色图谱；图2为实施例1中供试品溶液的高效液相色图谱；图3为实施例2中供试品溶液的高效液相色图谱；图4为实施例3中供试品溶液的高效液相色图谱；图5为实施例4中供试品溶液的高效液相色图谱；其中，1为异香兰素：3-羟基-4-甲氧基苯甲醛，2为乙基香兰素：3-乙氧基-4-羟基苯甲醛，3为bma：3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛。具体实施方式取四批同一生产规格指令生产的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛产品，按照实施例1-3的检测方法进行检测，采用面积归一化法进行纯度及其杂质计算，检测结果如下。实施例1一种3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛纯度的检测方法，包括以下步骤：1)系统适应性溶液配制：取适量的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛、异香兰素和乙基香兰素置于同一容量瓶中，用乙腈溶解，配置成每毫升各含1mg的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛、异香兰素和乙基香兰素的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液配制：取适量的供试品3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛，用乙腈溶解，配置成浓度为0.5mg/ml的溶液，得到供试品溶液；3)空白试验:精密量取乙腈20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；4)系统适应性试验：精密量取系统适应性溶液5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，其中，理论板数按3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛计算不低于5000，主峰与任意杂质峰之间的分离度应不小于1.5；5)供试品溶液试验：精密量取供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，从供试品溶液的色谱图中扣除空白试验色谱峰，按面积归一化法计算供试品的浓度；其中，液相色谱仪的测试条件设定为：色谱柱为规格为4.6*250mm*5μm的菲罗门phenomenexluna5uc18(2)100a色谱柱，柱温为室温；采用双流动相进行梯度洗脱，流动相a为浓度为0.01mol/l的kh2po4缓冲液(用磷酸调ph至2.8)，流动相b为乙腈，流动相流速为0.7ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为220nm；梯度洗脱的条件如表1所示。表1实施例1-4的洗脱条件所得检测结果如表2-4和图1-2所示，其中，表2为系统适应性溶液的色谱图中的峰表，表3为供试品溶液的色谱图中的峰表，表4为供试品溶液的检测结果，图1为系统适应性溶液的高效液相色图谱，图2供试品溶液的高效液相色图谱。表2系统适应性溶液的色谱图中的峰表表3供试品溶液的色谱图中的峰表表4为供试品溶液的检测结果杂质出峰时间(min)峰面积峰面积占比(％)主峰分离度主峰理论塔板数异香兰素16.036.30.01//乙基香兰素19.8440.01//bma22.753734699.9813.27175451最大单杂/00//总杂/800.02//实施例2一种3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛纯度的检测方法，包括以下步骤：1)系统适应性溶液配制：取适量的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛、异香兰素和乙基香兰素置于同一容量瓶中，用乙腈溶解，配置成每毫升各含1mg的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛、异香兰素和乙基香兰素的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液配制：取适量的供试品3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛，用乙腈溶解，配置成浓度为0.6mg/ml的溶液，得到供试品溶液；3)空白试验:精密量取乙腈20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；4)系统适应性试验：精密量取系统适应性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，其中，理论板数按3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛计算不低于5000，主峰与任意杂质峰之间的分离度应不小于1.5；5)供试品溶液试验：精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，从供试品溶液的色谱图中扣除空白试验色谱峰，按面积归一化法计算供试品的浓度；其中，液相色谱仪的测试条件设定为：色谱柱为规格为4.6*250mm*5μm的菲罗门phenomenexluna5uc18(2)100a色谱柱，柱温为室温；采用双流动相进行梯度洗脱，流动相a为浓度为0.02mol/l的kh2po4缓冲液(用磷酸调ph至3)，流动相b为乙腈，流动相流速为0.8ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为220nm；梯度洗脱的条件如表1所示。所得检测结果如表5-6和图3所示，其中，表5为供试品溶液的色谱图中的峰表，表6为供试品溶液的检测结果，图3为实施例2中供试品溶液的高效液相色图谱。表5为供试品溶液的色谱图中的峰表表6为供试品溶液的检测结果杂质出峰时间(min)峰面积峰面积占比(％)主峰分离度主峰理论塔板数异香兰素16.02670.07//乙基香兰素19.81620.04//bma22.742267299.8310.34142296最大单杂20.52220.06//总杂/7090.17//实施例3一种3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛纯度的检测方法，包括以下步骤：1)系统适应性溶液配制：取适量的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛、异香兰素和乙基香兰素置于同一容量瓶中，用乙腈溶解，配置成每毫升各含1mg的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛、异香兰素和乙基香兰素的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液配制：取适量的供试品3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛，用乙腈溶解，配置成浓度为0.5-1mg/ml的溶液，得到供试品溶液；3)空白试验:精密量取乙腈20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；4)系统适应性试验：精密量取系统适应性溶液15μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，其中，理论板数按3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛计算不低于5000，主峰与任意杂质峰之间的分离度应不小于1.5；5)供试品溶液试验：精密量取供试品溶液15μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，从供试品溶液的色谱图中扣除空白试验色谱峰，按面积归一化法计算供试品的浓度；其中，液相色谱仪的测试条件设定为：色谱柱为规格为4.6*250mm*5μm的菲罗门phenomenexluna5uc18(2)100a色谱柱，柱温为室温；采用双流动相进行梯度洗脱，流动相a为浓度为0.03mol/l的kh2po4缓冲液(用磷酸调ph至3)，流动相b为乙腈，流动相流速为1ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为230nm；梯度洗脱的条件如表1所示。所得检测结果如表7-8和图4所示，其中，表7为供试品溶液的色谱图中的峰表，表8为供试品溶液的检测结果，图4为供试品溶液的高效液相色图谱。表7供试品溶液的色谱图中的峰表表8供试品溶液的检测结果杂质出峰时间(min)峰面积峰面积占比(％)主峰分离度主峰理论塔板数异香兰素16.04060.06//乙基香兰素19.82430.03//bma22.773251999.8810.32184403最大单杂20.51850.03//总杂/8350.12//实施例4一种3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛纯度的检测方法，包括以下步骤：1)系统适应性溶液配制：取适量的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛、异香兰素和乙基香兰素置于同一容量瓶中，用乙腈溶解，配置成每毫升各含1mg的3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛、异香兰素和乙基香兰素的溶液，得到系统适用性溶液；2)供试品溶液配制：取适量的供试品3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛，用乙腈溶解，配置成浓度为0.5-1mg/ml的溶液，得到供试品溶液；3)空白试验:精密量取乙腈20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；4)系统适应性试验：精密量取系统适应性溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，其中，理论板数按3-乙氧基-4-甲氧基苯甲醛计算不低于5000，主峰与任意杂质峰之间的分离度应不小于1.5；5)供试品溶液试验：精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，从供试品溶液的色谱图中扣除空白试验色谱峰，按面积归一化法计算供试品的浓度；其中，液相色谱仪的测试条件设定为：色谱柱为规格为4.6*250mm*5μm的菲罗门phenomenexluna5uc18(2)100a色谱柱，柱温为室温；采用双流动相进行梯度洗脱，流动相a为浓度为0.05mol/l的kh2po4缓冲液(用磷酸调ph至3.2)，流动相b为乙腈，流动相流速为1.2ml/min；检测器为紫外检测器，检测波长为240nm；梯度洗脱的条件如表1所示。所得检测结果如表9-10和图5所示，其中，表9为供试品溶液的色谱图中的峰表，表10为供试品溶液的检测结果，图5为供试品溶液的高效液相色图谱。表9供试品溶液的色谱图中的峰表表10供试品溶液的检测结果当前第1页12